CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.2. Nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp của Cytokynin và auxin đến chất lượng chồi của cây hoa Đồng Tiền
Trong thí nghiệm trước chúng tôi đã nghiên cứu tác động riêng rẽ của chất điều tiết sinh trưởng thuộc nhóm Cytokynin đến khả năng hình thành chồi cây đồng tiền nuôi cấy mô và thu được kết quả khả quan. Sau khi hình thành cụm chồi, để duy trì hệ số nhân nhanh và nâng cao chất lượng chồi, đảm bảo đủ lượng cây chất lượng tốt, các chất điều tiết sinh trưởng cần được bổ sung thêm vào môi trường nuôi cấy. Do vậy chúng tôi tiếp tục tiến hành các thí nghiệm nghiên cứu tác động phố hợp của các chất điều tiết sinh trưởng, nhằm tìm ra các công thức tối ưu nhất đối với khả năng nhân nhanh và chất lượng chồi của cây đồng tiền nuôi cấy mô.
* Thí nhiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của BAP, Ki ở các nồng độ khác nhau kết hợp với IAA (0.2mg/l) đến hệ số nhân chồi và chất lượng chồi của cây hoa Đồng Tiền.
BAP và Ki là 2 chất điều hoà sinh trưởng thuộc nhóm cytokynin và auxin.
Về nguyên tắc tỷ lệ Cytokynin/ Auxin sẽ kích thích mẫu cấy phát sinh theo hướng tạo chồi. Tuy nhiên với mỗi loại cây khác nhau phản ứng trước sự thay đổi tỷ lệ này khác nhau. Trong kĩ thuật nuôi cấy mô, việc tìm tỷ lệ thích hợp giữa cytokynin và auxin phục vụ cho mục đích nuôi cấy nó đóng vai trò quan trọng đối với sự thành công của thí nghiệm trên.
Trong thí nghiệm này để tìm ra môi trường tối ưu và môi trường nhân nhanh chất lượng chồi, chúng tôi đã nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BAP, Ki và IAA, IAA là một chất điều tiết sinh trưởng thông dụng thuộc nhóm auxin có ác dụng hình thành rễ. Chất này được bổ sung vào môi trường nuôi cấy và hàm lượng 1- 3 mg/l. Để nghiên cứu ảnh hưởng của cytokynin đến tốc độ nhân nhanh chúng tôi đã cấy các cụm chồi trên môi trường có nồng độ 0,2mg/l IAA và thay đổi nồng độ của BAP và Ki từ 1 -3 mg/l. Sau 21 ngày kết quả thu được như sau:
Bảng 3: Ảnh hưởng của BAP, Ki ở các nồng độ khác nhau kết hợp với IAA (0.2mg/l) đến hệ số nhân chồi và chất lượng chồi của cây hoa Đồng Tiền.
CT Chất điêu tiết sinh trưởng
Số mẫu
Hệ số nhân nhanh
Chiều cao tb/chồi
Số lá tb/
chồi(lá)
Hình thái IAA chồi
(mg/l)
BAP (mg/l)
Ki (mg/l)
1 Đ/C Đ/C Đ/C 30 1,10 3,21 3,00 +
2 0,2 1 0 30 4,30 2,93 3,00 +++
3 0,2 2 0 30 4.03 2,41 2,56 +++
4 0,2 3 0 30 3,33 2,33 2,22 ++
5 0,2 0 1 30 5,06 3,05 3,00 +++
6 0,2 0 2 30 4,43 2,66 2,34 +++
7 0,2 0 3 30 3,53 2,53 2,30 ++
CV 2,4
LS 0,15
D 0,05
Ghi chú: + Kém: Chồi mảnh yếu, chồi cao, xanh bóng.
++ Trung bình: Chồi khoẻ, mập, xanh
+++ Tốt: Chiều cao giảm, hệ số tăng, chồi to, xốp mập, xuất hiện thể sùi, lá xoăn.
Biểu đồ 3: Biểu hiện ảnh hưởng của BAP, Ki ở các nồng độ khác nhau kết hợp với IAA (0.2mg/l) đến hệ số nhân chồi và chất lượng chồi của cây hoa Đồng Tiền.
Từ kết quả trên cho thấy. Trong 2 chất thuộc nhóm cytokynin BAP hay Ki đều ảnh hưởng đến sự nhân nhanh của cây hoa đồng tiền in vitro. Khi sử dụng 2 chất này thì hệ số nhân đạt 4,1 còn khi ở nồng độ Ki 0,1mg/l thì hệ số nhân đạt 3,9 nhưng khi nồng độ Ki 1,5mg/l hệ số nhân đạt 4,43 trong đó nồng độ BAP 1,5mg/l thì hệ số nhân lại giảm mạnh chỉ còn 3,13 chứng tỏ rằng hoạt tính của Ki mạnh hơn BAP, nhưng chỉ sử dụng với nồng độ vừa phải nếu cao lại gây ra hiện tượng ức chế.
Khi bổ sung tổ hợp BA và Kinetin vào môi trường nuôi cấy đã có tác dụng rõ rệt đến việc kích thích sự tạo chồi của cây đồng tiền. So với thí
nghiệm 1 và 2 khi sử dụng riêng rẽ các chất kích thích sinh trưởng (BA hoặc Kỉnetin ) hệ số nhân chồi không cao lắm, ở thí nghiệm 3 này khi sử dụng kết hợp các chất kích thích sinh trưởng (BA và Kinetin) hệ số nhân chồi vượt trội hơn hẳn .Vượt trội nhất là CT5 với hệ số nhân đạt là 5,06, sau đó là 4,43 (CT6), thấp nhất là 1,10 (CT4). Như vậy hệ số nhân chồi thấp nhất của thí nghiệm này là 1,10 vẫn lớn hơn so với hệ số nhân của Ki ở thí nghiệm 2 ( không bổ sung BA).
Ở nồng độ IAA cố định 0,2mg/l khi nồng độ BAP tăng từ 1 -3 mg/l thì hệ số nhân chồi giảm dần từ 4,30 – 3,33 rất rõ rệt . Số lá giảm dần theo mức độ tăng của hệ số nhân, từ 300 lá (CT1) xuống còn 2,22 lá (CT4) .
Do hệ số nhân cao nên cây ít tăng trưởng về chiều cao ,chiều cao cây giảm dần theo chiều cao cụ thể là 3,21cm (CT1), 2,93cm(CT2), 2,41cm(CT3) 2,33cm (CT4). Như vậy ở CT5 hệ số nhân chồi cao nhất tương ứng với số lá và chiều cao thấp.
Ở tất cả các công thức có bổ sung BA và Kinetin đều không có hiện tượng tạo rễ như ở công thức đối chứng.
So sánh tác động của BAP và Kinetin đến hệ số nhân chồi
Môi trường có hiệu quả cao cho nhân nhanh chồi hoa đồng tiền invitro là:
MS+ 1mg/l IAA+ 1.5mg/l Kinetin
Hình ảnh4: Ảnh hưởng Ki so sánh với
BAP khi tác động đến chất lượng cụm chồi sau 2 tuần.
Kinetin BAP
Kết luận chung: Khi sử dụng tổ hựp BA và Kinetin bổ sung vào môi trường nhân cây đồng tiền thì hệ số nhân tăng vượt trội hơn so với khi sử dụng riêng rẽ từng chất, đạt cao nhất với nồng độ 0,2 mg/l IAA đã cho hệ số nhân đạt 5,06 ở nồng độ 1mg/lKi. Môi trường có hiệu quả cao cho nhân nhanh chồi cây hoa đồng tiền in vitro là: MS + 0,2mg/lIAA + 1mg/lKi