BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ✯ NGUYỄN THỊ HƯƠNG TRANG NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN NUÔI ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LUỸ ASTAXANTHIN Ở TẢO LỤC HAEMATOCOCCUS LACUSTRIS LUẬN VĂN THẠ[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG -✯ - BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG -✯ - NGUYỄN THỊ HƯƠNG TRANG NGUYỄN THỊ HƯƠNG TRANG NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN NI ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LUỸ ASTAXANTHIN Ở TẢO LỤC HAEMATOCOCCUS LACUSTRIS NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN NUÔI ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LUỸ ASTAXANTHIN Ở TẢO LỤC HAEMATOCOCCUS LACUSTRIS LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Đà Nẵng, 2021 Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! 16990037746801000000 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG -✯ - NGUYỄN THỊ HƯƠNG TRANG NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN NUÔI ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG VÀ TÍCH LUỸ ASTAXANTHIN Ở TẢO LỤC HAEMATOCOCCUS LACUSTRIS Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Người hướng dẫn khoa học: TS Trịnh Đăng Mậu Đà Nẵng, 2021 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT SKK Sinh khối khô TLK Trọng lượng khô TB Tế bào OD Optical Density ROS Reactive oxygen species LED Light-emitting diode UV Ultraviolet BBM Bold’s Basal Medium C Closterium medium RSM Phương pháp bề mặt đáp ứng DANH MỤC BẢNG Số hiệu Tên bảng Trang 1.1 Thành phần dinh dưỡng tảo H lacustris giai đoạn sinh trưởng khác 3.1 Tốc độ sinh trưởng vi tảo H lacustris nghiệm thức thí nghiệm 25 3.2 Các hệ số hồi quy ước tính cho mơ hình đa thức bậc hai tốc độ sinh trưởng vi tảo H lacustris 26 DANH MỤC HÌNH Số hiệu Tên hình Trang 1.1 Hình thái hiển vi tế bào vi tảo H lacustris từng giai đoạn 1.2 Sự thay đổi hình thái tế bào vi tảo Haematococcus lacustris 1.3 Cấu trúc Chlorophyll 10 1.4 Cấu trúc astaxanthin 13 3.1 Mơ hình phản ứng bề mặt 2D 3D tốc độ sinh trưởng bị ảnh hưởng biến độc lập: Nồng độ N P phương pháp đáp ứng bề mặt 28 3.2 Mật độ tế bào nghiệm thức dinh dưỡng vào lúc bắt đầu kết thúc thí nghiệm 29 3.3 Đường kính tế bào nghiệm thức dinh dưỡng vào lúc bắt đầu kết thúc thí nghiệm 30 3.4 Sự thay đổi hàm lượng chlorophyll a,b; carotenoids 1ml (mg/ml) nghiệm thức dinh dưỡng vào lúc bắt đầu kết thúc thí nghiệm 32 3.5 Sự thay đổi hàm lượng chlorophyll a,b; carotenoids tế bào (μg/tb) nghiệm thức dinh dưỡng vào lúc bắt đầu kết thúc thí nghiệm 34 3.6 Mật độ vi tảo nghiệm thức phổ ánh sáng vào lúc bắt đầu kết thúc thí nghiệm 36 3.7 Kích thước tế bào vi tảo nghiệm thức phổ ánh sáng vào lúc bắt đầu kết thúc thí nghiệm 37 3.8 Hàm lượng Chlorophyll a, b Carotenoid ml phổ ánh sáng khác 38 3.9 Hàm lượng Chlorophyll a, b Carotenoid tb phổ ánh sáng khác 39 3.10 Phổ hấp thụ ánh sáng sắc tố phổ phát xạ ánh sáng loại đèn LED 40 3.11 Ảnh hưởng axetat Fe2+ đến mật độ tế bào vi tảo H lacustris pha tích lũy 41 3.12 Ảnh hưởng axetat Fe2+ đến kích thước tế bào vi tảo H lacustris pha tích lũy 43 3.13 Sự thay đổi hình thái nghiệm thức theo thời gian 45 MỤC LỤC MỞ ĐẦU .1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa đề tài Nội dung nghiên cứu .2 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Giới thiệu chung vi tảo Haematococcus lacustris 1.1.1 Vị trí phân loại phân bố Haematococcus lacustris 1.1.2 Đặc điểm sinh học đặc điểm hình thái 1.1.3 Ảnh hưởng yếu tố môi trường đến sinh trưởng H lacustris 1.2 Sắc tố quang hợp tảo Haematococcus lacustris 1.2.1 Đặc điểm chung .8 1.2.2 Chlorophyll .8 1.2.3 Carotenoids .9 1.2.4 Astaxanthin vi tảo Haematococcus lacustris 10 1.3 Tình hình nghiên cứu vi tảo Haematococcus lacustris tổng hợp astaxanthin giới Việt Nam 13 1.3.1 Trên giới 13 1.3.2 Ở Việt Nam .17 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng nghiên cứu .19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Bố trí thí nghiệm .19 2.2.3 Phương pháp xác định khối lượng 21 2.2.4 Phương pháp xác định hàm lượng sắc tố 22 2.4.5 Phương pháp đếm tế bào đo kích thước tự động 23 2.4.6 Phương pháp xử lý số liệu .23 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 Tối ưu hóa mơi trường dinh dưỡng phương pháp bề mặt đáp ứng (RSM) 24 3.2 Ảnh hưởng thiếu hụt dinh dưỡng đến vi tảo H lacustris pha tích lũy astaxanthin 28 3.1.1 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến sinh trưởng phát triển vi tảo H.lacustris 28 3.1.2 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến hàm lượng sắc tố tảo H.lacustris 30 3.3 Ảnh hưởng phổ ánh sáng đến vi tảo H lacustris pha tích lũy 35 3.3.1 Ảnh hưởng phổ ánh sáng đến mật độ kích thước vi tảo H.lacustris 35 3.2.2 Ảnh hưởng phổ ánh sáng đến tích lũy sắc tố vi tảo H.lacutris .37 3.4 Ảnh hưởng axetat sắt đến vi tảo H lacustris pha tích lũy 40 3.4.1 Ảnh hưởng axetat sắt đến mật độ kích thước vi tảo H lacustris 40 3.4.2 Ảnh hưởng axetat sắt đến thay đổi hình thái vi tảo H lacustris 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 KẾT LUẬN .45 KIẾN NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 , DAI HOC DA NANG TRUONGD~IHQCSUPH~M s6:M1IQD-DHSP CONG HoA xA HOI cnu NGHiA ~T NAM DQc l~p - T\I' - H~nh philc Da Nimg, ng ay 15thang1J ndm 202 J QUYETDINH v~vi~c l~p HQi dang chim lu~n van thac si HI~U TRUONG TRUONG D~I HQC SU PH~M - D~I HQC DA NANG Can CtCNghi dinh s6 321CP 041411994 cua Chinh phu v~ viec ldp D(ti h9C Da Nfmg; Can CtCQuyet dinh s6 2762IQD-HDDN J 41812020cua Chu tich Hoi dong D(ti hoc Da Niing v~ viec Ban hanh Quy chi t6 chuc va hoat dong D(ti h9C Da Nimg; Can CLI: Thong tu s6 J 512014ITT-BGDDT 151512014 cua BI) Giao due va Dao tao v~ viec ban hanh Quy chi Dao tao trinh thac S1; Can CLCQuyet dinh s6 1060IQD-DHSP 0111112016 cua Hieu truong Truong Dai h9C Sir pham - Dai h9C Da Nang v~ viec ban hanh Quy dinh dao tao trinh al) thac S1; Xet a~nghi cua Truong phong Phong Dao tao QUYETDINH: Di~u Thanh l~p Hoi d6ng ch~rn lu~n van th~c sI clla hQc vien Nguy~n Thi HU'O'ngTrang, lap K36.SHTN, nganh Sinh hQc th\fc nghi~m v~ d~ tai Nghien crru anh hU'o-ngcua mQt sBdi~u ki~n nuoi d~n S\l' sinh trU'o-ngva tich loy astaxanthin 0tao I\lC Heamatococus lacustris, g6rn dic vien co ten danh sach kern theo Di~u Hoi d6ng co trach nhi~rn danh gia lu~n van th;;tcsI theo dung quy dinh CllaBo Giao dl,lcva Dao t~o Sau hoan nhi~rnVl,l,Hoi d6ng W giai th~ Di~u Thll trucmg cac dan vi lien quan; cac vien co ten danh sach Hoi d6ng can cu Quyet dinh thi hanh.lllNO'i nh(in: - Nhu f)i~L13 (d~ tlwc hi~n); - BGH (d~ bi~t); - LUll: VT, f)T.~ PGS TS Ltfu Trang DAI HOC DA NANG TRUONG D~I HQC SU PH~M CQNG HOA xA HQI cnu NGHiA ~T NAM DQc I~p - T._.,do - H~nh p h u c DANH SACH THANH VnlN H(>I DONG CHAM LU~N VAN TH~C (Thea Quyet dinh lap Hoi dong s6 fjg1/QD-DHSP st is thang -6 nam 2021 cua Hieu trirang Truong Dai hoc Sirpham- DHDN) - H9C vien thuc hien: Nguy~n Th] Hurrng Trang - Ten d~ tai: Nghien cuu anh huong cua mQt sf; di~u ki~n nuoi d~n su sinh trurrng va tich loy astaxanthin 0' tao luc Heamatococus lacustris - Ngiroi huang dftn: TS Trinh Dang M~u TRAcHNHI~M STT HQ vA TEN, NOI CONG TAc TRONGH 0.05) silc t6 Chlorophyll b kh' g gIam ,xuong ' ? ' r A, • A " • • ? ° ? : ' ? ? ' • • • dOl nhieu sau thai gian tich lily (y hc1uh~t cac nghiem " ".ong thay , thu'c ,nenga mOl truang OP, ham luqng cao han mg/ml so vai ban dc1u - K~t qua nghien Clm cho th~y anh sang va tr~ng thich hgp cho Sl,f ? sinh xuang cua vi tao han anh sang xanh Mcfttd9 t~ bao d?t cao nh~t tao dugc nuoi c~y duai ph6 anh sang tr~ng (43658±6494 tb/ml) ti~p theo la anh sang (46069±10326 tb/ml), anh simg xanh cho mcfttd9 th~p nh~t (34515±5492 b/ml) Kich thuac, duang kinh cua t~ bao giam a ca nghi~m thuc, giam m?nh h~t a nghi~m thuc anh sang xanh va tr~ng (giam tir 20,2±0,26~lm xu6ng 17,4±0,8Ilm a anh s~ng xanh va giam tir 19,5±0,19Ilm xu6ng 16,77±0,69Ilm anh sang tr~ng) Ham lUQ'ngs~c t6 1m1dich tao dSu tang len ca nghi~m thuc, nhien t?i nghi~m thuc anh sang tr~ng tang m?nh nh~t (chlorophyll a tang 4,07± 1,3 mg/ml, chlorophyll b tang 6,3±0,5 mg/ml va ham lUQ'ngcarotenoics tang 4,3±0,23 mg/ml (p>0,05) _6 m6i ph6 anh sang khac se co S\I thay dbi vS ham lUQ'ngcac nhom s~c t6 la khac nhau, k~t qua tren don vi t~ bao cho th~y: anh sang tr~ng co kha nang kich thich tich lily carotenoids anh sang xanh thuc d~y Sl!' tbng hgp chlorophyll b, anh sang I(\i lam giiun dang k~ chlorophyll a - Viec b6 sung axetat, axetat+Fe2+, Fe2+ moi tnrong nuoi co anh huang ro r~t d~n m~t dQt~ bao tao H lacustris, cao nhat F 2+ d - e , at hon 3,OxI0) tb/ml sau 52 gio nuoi c~y, a nghiem a nghiern thirc b6 sung thirc b6 sung axetat va axetat+Fe2+ thi mat dQtS bao lai co xu huang giarn dan, giarn l~n hrot khoang 1,2x 105 tb/mI va 1,6x 105 tb/ml so voi Iuc bat d~u thi nghiem Kich thuoc tS bao dat cao nh~t tai nghiem thuc b6 sung Fe2+ (27,36 ± 0,87~m) - Quan sat hinh thai tao duoi kinh hi~n vi cho thay kich thiroc tS bao tang dang kS va co mau hon nghiem tlurc b6 sung them Fe2+ cung voi axetat Trong do, a thi nghiem chi b6 sung Fe2+, SlJchuyen trang thai cua tao diSn voi t6c dQ cham hon nhimg Iai r5 ret hon, sau 54h, da s6 tS bao moi chuyen sang trang thai nghi va khong chi tang manh vS kich thtroc rna phan chia tang vS s6 luqng t~ bao - Tu nhung kSt qua tren, co th~ nh~n dinh r~ng axetat thuc d§y qua trinh chuySn tr?ng thai Fe2+ co nhung tac d