Mẫu Khối lƣợng (g/1kg mẫu
ban đầu) %
Cao ethanol 200,5 20,05%
Cao c-hexan 70 7%
Cao Chloroform 55,34 5,5%
Cao ethylacetate 80 8%
Phƣơng pháp chiết có một ảnh hƣởng đến quan trọng đến việc phân lập các hợp chất. từ bảng có thấy với 1 kg mẫu ngâm chiết rút 4 lần với hỗn hợp EtOH: H2O 90% ở nhiệt độ phòng và chất loại dung môi với áp suất giảm trên máy cô quay chân không, đƣợc 200,5g cao EtOH , 70g cao h-hexan, 55,34g cao CHCl3, 80g cao EtOAc. Đây là hệ dung mỗi có hiệu suất chiết rút tốt, có khả năng chiết rút phần lớn thành phần hữu cơ có trong mẫu thực vật. Điều này đã đƣợc kiểm chứng qua các công trinh nghiên cứu thực nghiệm của nhiều tác giả khác nhau [10, 17, 22]. Với phƣơng pháp chiết này, chúng ta thu đƣợc các lớp chất có độ phân cực từ thấp đến cao. Điều này góp phần thuận lợi cho q trình phân lập các hợp chất. Sau đó tiến hành chạy sắc ký lớp mỏng trên silicagel với hệ dung môi TEAF: 5 : 3 : 1 : 1 ( Toluen: EthylacetatL: Aceton: Formic acid). Ảnh sắc ký đồ đƣợc trình bày trên hình 11.
Hình 11. Sắc ký đồ các phân đoạn dịch chiết của cây Trâm lý
Cột 1: cao cồng tổng số
Cột 2: phân đoạn dịch chiết n- hexan Cột 3: phân đoạn dịch chiết chloroform Cột 4: phân đoạn dịch chiết Ethylacetat
Nhìn trên bản sắc ký đồ thấy xuất hiện rất nhiều các băng vạch khác nhau có màu sắc đặc trƣng của các hợp chất polyphenol ( màu vàng – flavonoid, màu tím-
terpen, màu xanh-chlorophyl) và Ff khác nhau. Về mặt lý thuyết, mỗi vạch tƣơng ứng có một chất nhất định song về thực tế, có rất nhiều chất có cùng Rf, thậm chí chúng cịn có màu sắc với nhau và nằm gối lên nhau ( Chẳng hạn các chất là đồng phân của nhau nhƣ: đồng phân quang học, đồng phân lập thể…). Do đố mỗi vạch chỉ có thể coi là có ít nhất mỗi chất trong nó.
Trong sắc ký lớp mỏng, các chất có độ phân cực yếu hơn và có khối lƣợng phận tử lớn hơn sẽ chạy chậm hơn và có Rf nhỏ hơn, ngƣợc lại các chất có độ phân cực mạnh và khối lƣợng phân tử nhỏ sẽ chạy nhanh hơn và có Rf lớn hơn. Thậm chí có nhiều chất cịn khơng tách đƣợc nếu hệ dung mơi khơng thích hợp, và khơng hiện màu nếu chất nhuộm màu khơng thích hợp. Trong những trƣờng hợp nhƣ vậy, chúng ta phải tìm hiểu thăm dò điều chỉnh độ phân cực của hệ dung mơi chạy để tìm đƣợc hệ thích hợp. Một vấn đề nữa có thể đánh giá đƣợc đó là: đối với những vạch càng đậm thì chất có nồng độ càng lớn, cịn vạch càng nhạt thì chất có nồng độ càng nhỏ. Từ bản sắcc ký ta có thể tính đƣợc các băng có các Rf. Kết quả Rf trình bày trong bảng 6