- Phịng thí nghiệm chuyên sâu, Trường Đại học Cần thơ Viện kiểm nghiệm TP HCM.
B ảng 3.8 Ảnh hưởng của nguồn nitơ lên quá trình lên men thu C
3.1.1.3. Nghiên cứu chết ạo màng BC tinh chế sử dụng tạo màng trị bỏng
Màng trị bỏng được chế tạo từ màng BC tinh chế, hoạt chất tái sinh mơ từ dầu mù u và tinh dầu tràm trà Úc. Màng BC tinh chế phải cĩ một số đặc tính thích hợp
78
như: độ tinh khiết và độ bền cơ học cao, cĩ khả năng cản khuẩn, độ ẩm và độ dày thích hợp. Các khảo sát nhằm mục đích tìm các thơng số thích hợp trên của màng BC tinh chếđể từđĩ sử dụng chế tạo màng trị bỏng đạt các tiêu chuẩn như: cĩ thể chất mềm mại, bám dính và che phủ tốt đồng thời cĩ tính hút ẩm và HCTSM tốt. Để cĩ lớp màng BC thích hợp như vậy, cần phải khảo sát:
- Xây dựng qui trình tinh chế màng BC thơ.
- Khảo sát độ dày của lớp màng BC thơ thích hợp dùng để tạo màng BC tinh chế. - Kiểm sốt độ tinh khiết màng BC tinh chế.
- Khảo sát khả năng hút ẩm của màng ở những độ dày và độ ẩm khác nhau. - Khảo sát độ dày thích hợp của màng và khả năng thấm hút HCTSM. - Khảo sát các đặc tính của màng BC tinh chếđạt tiêu chuẩn.
Tinh chế màng BC thơ
Màng BC thơ chứa nhiều vi khuẩn A. xylinum và mơi trường nuơi cấy cùng những chất chuyển hĩa trong quá trình lên men. Quá trình tinh chế nhằm loại bỏ các tạp chất như pepton, đường cịn lại trong mơi trường nuơi cấy và vi khuẩn cịn nằm trong màng để thu màng BC tinh chế.
Hiệu quả của quá trình tinh chếđược đánh giá dựa vào các phản ứng hĩa học xác định sự hiện diện của đường, protein và quan sát dưới kính hiển vi quang học và kính hiển vi điện tử cho thấy khơng cịn sự hiện diện của vi khuẩn trong màng. Màng BC tinh chế phải cĩ màu trắng trong và khơng bị biến đổi màu khi xử lý bằng nhiệt độ cao.
Thửđộ tinh khiết của màng BC tinh chế
Hình 3.5. Màng BC tinh chế Hình 3.4. Màng BC thơ
79
Màng BC sau khi tinh chế ở tất cả các lơ thử nghiệm đều được kiểm nghiệm độ tinh khiết bằng cách kiểm tra sự hiện diện của glucose và protein là hai chất cĩ nồng độ cao trong mơi trường nuơi cấy. Sự hiện diện của đường và protein sẽảnh hưởng đến chất lượng của màng.
Tìm sự hiện diện của glucose trong màng BC tinh chế
Lấy mẫu: lấy màng từ mỗi lơ tinh chế theo tỷ lệ 5 % số màng ở các lơ.
Màng BC tinh chế 10 cm x 10 cm được cắt nhỏ, cho vào 50 ml nước cất, lắc kỹ với máy lắc trong 3 giờ. Dùng thuốc thử Fehling mới pha để phát hiện sự hiện diện của đường glucose trong dịch chiết màng. Mẫu chứng âm là nước cất và mẫu chứng dương là dung dịch D - glucose. Phản ứng dương tính với sự xuất hiện tủa nâu đỏ trong ống nghiệm.
Kết quả: khơng phát hiện glucose hiện diện trong tất cả màng thử nghiệm .
Hình 3.6. Kết quả tìm sự hiện diện của glucose trong dịch chiết màng BC
Tìm sự hiện diện của protein trong màng BC tinh chế.
Lấy mẫu: lấy màng từ mỗi lơ tinh chế theo tỷ lệ 5 % số màng ở các lơ. Protein trong dịch chiết màng được phát hiện bằng phản ứng kết tủa protein với acid triclor acetic. 3 4 5 1 2 1.Ống chứng cĩ chứa glucose. 2.Ống chứng nước cất. 3. Dịch thử của màng số 1. 4. Dịch thử của màng số 2; 5. Dịch thử màng số 3
80
Kết quả: phản ứng tủa âm tính, khơng phát hiện được protein trong dịch chiết của tất cả màng BC tinh chế.
Hình 3.7. Kết quả tìm sự hiện diện của protein trong dịch chiết màng BC
Quan sát màng BC dưới kính hiển vi điện tử quét( SEM )
Khảo sát cấu trúc của lớp màng BC tinh chế dưới kính hiển vi điện tử quét SEM JOEL-JSM 5500. Quan sát sự tạo thành các sợi cellulose từ tế bào vi khuẩn, sợi cellulose trong màng BC thơ sau khi nuơi cấy và màng BC đã qua xử lý.
Hình 3.8.Hình chụp A. xylinum tạo sợi cellulose dưới KHV điện tử quét
( x 10 000 lần )
Nhận xét: kết quả khảo sát màng BC dưới kính hiển vi điện tử quét cho thấy: • Sợi cellulse được hình thành từ các tế bào vi khuẩn A. xylinum. (hình 3.8) • Mạng lưới sợi cellulose ở màng BC thơ cĩ nhiều vi khuẩn A.xylinum.(hình 3.9) • Mạng lưới sợi cellulose ở màng BC tinh chế khơng cịn chứa vi khuẩn.(hình 3.10) • Các cấu trúc sợi trên bề mặt màng đồng nhất. (hình 3.11) 1 2 1. Dịch chiết từ màng BC tinh chế. 2. Dịch chiết từ màng BC thơ.
81
Hình 3.9. Hình chụp màng BC thơ dưới KHV điện tử quét
Tạo màng BC cĩ độ dày khác nhau
Tạo màng BC cĩ độ dày khác nhau bằng cách sử dụng lớp mơi trường nuơi cấy tĩnh cĩ độ dày khác nhau. Mơi trường được cho vào các hộp nuơi cấy với độ dày lớp mơi trường như Bảng 3.11.
Sau khi lên men, màng BC thơ thu được từ các lơ được tinh chế và làm khơ để tạo màng ở những độ ẩm khác nhau, cắt màng với kích thước 10 cm x 10 cm sau đĩ thử nghiệm khả năng hút nước và HCTSM của màng tinh chế.
Bảng 3.11. Tạo màng BC cĩ độ dày khác nhau Lơ Ký hiệu Bề dày mơi trường nuơi