2. NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.4.7. Phương pháp HA, H
- Phương pháp HA (theo quy trình OIE): tiến hành phản ứng trên ñĩa microtiter 96 giếng ñáy V (tổng lượng hỗn dịch phản ứng là 75 µl/giếng).
+ Cho 25 µl dung dịch PBS 7,2 vào các giếng của ñĩa phản ứng
+ Cho 25 µl dung dịch chứa vi rút (nước trứng) vào giếng thứ nhất và bắt đầu pha lỗng kháng nguyên vi rút theo cơ số 2 từ giếng thứ 1-11
+ Nhỏ 25 µl dung dịch PBS vào các giếng từ 1-12
+ Nhỏ 25 µl dung dịch hồng cầu gà 1% vào các giếng từ giếng 1-12. ðể 15-30 phút ở nhiệt độ phịng và ñọc kết quả ngưng kết.
+ Hiệu giá ngưng kết hồng cầu gà (HA) là nồng độ pha lỗng cao nhất của hỗn dịch vi rút cịn có hiện tượng ngưng kết tồn phần. Hiệu giá này được tính là 1 đơn vị HA
- Phương pháp HI: cũng ñược tiến hành trên ñĩa microtiter 96 giếng ñáy V. Sau khi ñã biết hiệu giá HA của vi rút, vi rút ñược pha thành dung dịch kháng ngun có 4 đơn vị HẠ
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 36 + Cho 25 µl Kháng huyết thanh chuẩn A/H5N1 đã biết được pha lỗng với PBS theo cơ số 2 từ giếng 1-11
+ Sau đó nhỏ vào mỗi giếng 25 µl dung dịch kháng ngun có 4 đơn vị HA, để ở nhiệt độ phịng 30 phút,
+ Tiếp tục nhỏ 25 µl dung dịch hồng cầu gà 1% vào các giếng, ñể 15-30 phút và ñọc kết quả.
+ Hiệu giá ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) là độ pha lỗng cao nhất của huyết thanh cịn có hiện tượng ức chế hồn tồn ngưng kết hồng cầụ