Mở đầu Lý chọn đề tài Thực hành nội dung giúp sinh viên tự nghiên cøu khoa häc, kiĨm nghiƯm lý thut, liªn hƯ thùc tế rèn luyện kỹ làm thí nghiệm Trong ngµnh Sinh häc néi dung nµy rÊt quan träng vµ đ-ợc thực hầu hết môn học, có Di truyền học Để đáp ứng đ-ợc yêu cầu ngày cao xà hội ngành sinh học nói riêng, sinh viên bên cạnh việc nắm vững kiến thức lý thuyết cần phải có đ-ợc kỹ làm việc thực tế Chính vậy, thực hành ngày đóng vai trò quan trọng việc nâng cao chất l-ợng, hiệu thực hành cần thiết, đồng thời thực hành có hiệu tạo đ-ợc hứng thú học tập, nâng cao khả tự nghiên cứu cho sinh viên Phân bào nguyên phân thực hành quan trọng ch-ơng trình thực hành di truyền học đại c-ơng khoa sinh học Tr-ờng Đại học Vinh Thực hành tốt sinh viên quan sát đ-ợc rõ kỳ nguyên phân, hiểu đ-ợc chế trình nguyên phân thân làm thí nghiệm nghiên cứu đối t-ợng khác Tuy nhiên hiệu thực hành th-ờng ch-a cao, nguyên nhân dụng cụ, thiết bị, hoá chất ch-a đáp ứng đ-ợc yêu cầu thực hành; kỹ làm tiêu khả sử dụng kính hiĨn vi cđa sinh viªn ch-a tèt; mÉu vËt ch-a đạt tiêu chuẩn; thời gian thực hành hạn hẹp Hiện nay, phân bào nguyên phân thực hành bắt buộc ch-ơng trình Sinh học phổ thông Vì vậy, việc nâng cao hiệu thực hành việc làm cấp thiết, sinh viên ngành cử nhân s- phạm Với mong muốn hiệu thực hành ngày cao, nhằm nâng cao chất l-ợng giáo dục đào tạo, đà chọn đề tài Góp phần nâng cao hiệu thực hành Phân bào nguyên phân ch-ơng trình thực hành Di truyền học đại c-ơng khoa Sinh học - Tr-ờng Đại học Vinh Mục đích đề tài Đề tài thực nhằm mục đích góp phần nâng cao hiệu thực hành phân bào nguyên phân ch-ơng trình thực hành di truyền học đại c-ơng khoa sinh học - Tr-ờng đại học Vinh Nhiệm vụ nghiên cứu - Nghiên cứu ph-ơng pháp nhằm rút ngắn thời gian nhuộm màu nhiễm sắc thể, cho kết quan sát kỳ nguyên phân rõ - Xác định hoạt tính nguyên phân thời điểm - Thử nghiệm sử dụng ph-ơng pháp xử lý tiền cố định cho phép quan sát trình phân bào rõ xác Địa điểm thời gian nghiên cứu Điạ điểm: Phòng thí nghiệm di truyền - ph-ơng pháp - Vi sinh khoa sinh học tr-ờng đại học Vinh Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 10/2007 đến tháng 4/2008 Ch-ơng Tổng quan tài liệu 1.1 Nhiễm sắc thể Nhiễm sắc thể cấu trúc hiển vi nằm nhân tế bào có khả tự nhân đôi, bắt màu giữ đ-ợc màu bazơ, nhìn thấy đ-ợc qua kính hiển vi th-ờng trình tế bào phân chia, bao gồm ADN phân tử khác nằm tổ chức phức tạp, chứa gen cá thể sinh vật [6] Ngày ph-ơng pháp nuôi cấy tế bào thể phân tích tế bào học tổ hợp nhiễm sắc thể đà cho phép xác định nhiễm sắc thể mang tính chất đặc tr-ng cho loài sinh vật, mặt số l-ợng, cấu trúc, hình thái Đây kết trình tiến hoá lâu đời loài [6] Tất tế bào loài nói chung có số l-ợng nhiễm sắc thể cố định, đặc tr-ng cho loài đó, ví dụ: Tế bào l-ỡng bội Ruồi giấm có nhiễm sắc thể, tế bào l-ỡng bội Ngô có 20 nhiễm sắc thể, tế bào l-ỡng bội Ng-ời có 46 nhiễm sắc thể, đặc tr-ng cho nhiễm sắc thể, số l-ợng 2n nhiễm sắc thể tế bào xôma đ-ợc gọi l-ỡng bội, nhiễm sắc thể có cặp giống hình thái kích th-ớc đ-ợc gọi nhiễm sắc thể t-ơng đồng hay đồng đẳng (homologous); số l-ợng n nhiễm sắc thể tế bào sinh dục đ-ợc gọi đơn bội, nhiƠm s¾c thĨ chØ cã mét chiÕc; bé nhiƠm s¾c thể đa bội, số l-ợng nhiễm sắc thể lớn 2n Hình thái nhiễm sắc thể đặc tr-ng cho loài nhiễm sắc thể có hình dạng đặc tr-ng rõ kỳ (metaphase) nguyên phân nhiễm sắc thể co ngắn, mập phân bố mặt phẳng xích đạo Tâm động (centrome) điểm thắt eo chia nhiễm sắc thể thành vai với chiều dài khác Theo quy -ớc chung vai ngắn đ-ợc gọi vai p vai q dài Dựa vào vị trí tâm động, phân biệt hình thái nhiễm sắc thể: Tâm (metacentric) vai nhau, tâm đầu (acrocentric) vai không nhau, tâm mút (telocentric) tâm động nằm gần cuối.Trên nhiễm sắc thể thấy vệt đậm hơn, gọi chromomere (vƯt nhiƠm s¾c) [9] Mét sè nhiƠm s¾c thĨ đầu tận có mang thể kèm, phần nhiễm sắc thể dạng tròn, có kích th-ớc bé đ-ờng kính nhiễm sắc thể Thể kèm đ-ợc nối với nhiễm sắc thể eo thø cÊp, vÝ dơ: ë ng-êi cã nhiƠm s¾c thể mang thể kèm eo thứ cấp nhiễm sắc thể số 13, 14, 15, 21, 22 Mỗi loài đ-ợc đặc tr-ng kiểu nhân (karyotype) riêng Kiểu nhân khái niệm đồng nghĩa phần nhiễm sắc thể nh-ng kiểu nhân số l-ợng có hình dạng, kích th-ớc nhiễm sắc thể Hình vẽ hay hình chụp nhiễm sắc thể xếp lại theo thứ tự cặp hay chiếc, đà đuợc duỗi thẳng, xếp thứ tự từ dài đến ngắn đ-ợc gọi sơ đồ nhiễm sắc thể (idiogram) Nhân đồ (karyogram) ảnh hay hình vẽ biểu nhiễm sắc thể theo số l-ợng, kích th-ớc hình dạng [6] Bằng kỹ thuật tế bào học đại, mặt chức năng, cấu trúc, hình thái đặc thù hoạt động ng-ời ta đà phân biệt loại nhiễm sắc thể nh- sau: - NhiƠm s¾c thĨ th-êng, tøc nhiƠm s¾c thĨ A (Autosome) giống giới đực, - Nhiễm sắc thể giới tính (sex chromosome) khác giống đực giống - Nhiễm sắc thể B gọi nhiễm sắc thể bổ sung nhiễm sắc thể phụ đ-ợc phát môt số loài thực vật nh- Ngô, Mạch đen, số nhiễm sắc thể A bình th-ờng Những loài có nhiễm sắc thể B yếu hữu thụ khác - Ngoài số tổ chức, quan số loài, có dạng nhiễm sắc thể đặc biệt nh-: Nhiễm sắc thể khổng lồ (polytene chromosome) nhiễm sắc thể chổi bóng đèn (lam.brush chromosome) [6] CÊu tróc hiĨn vi cđa nhiƠm s¾c thĨ: ë prokaryota nhiễm sắc thể phân tử ADN trần, mạch kép, vòng, tập chung vùng định gọi vùng nhân ch-a có màng ngăn cách với tế bào chất eukaryota nhiễm sắc thể hợp phần ADN prôtêin, ADN đ-ợc cuộn xoắn, co ngắn lại 100 lần, có nhiều mức độ cuộn vòng, co xoắn khác nhau: Sợi có đ-ờng kính khoảng 100 A0, sợi giống nh- chuỗi hạt c-ờm, hạt c-ờm nuclêôxôm Nếu gỡ rối hoàn toàn ta thấy nuclêôxôm gồm lõi phân tử prôtêin histon gồm phân tử H3, phân tử H4 liên kết vùng trung tâm phân tử H2A, phân tử H2B liên kết phía ngoài, đ-ợc quấn quanh vòng sợi ADN có chiều dài 140 cặp nuclêotit, nuclêôxôm đ-ợc nối với đoạn ADN nối dài khoảng 15 - 100 cặp nuclêôtit Sợi đ-ợc xoắn mức xoắn bậc tạo nên sợi nhiễm sắc có đ-ờng kính 250 A0 B-ớc cuộn xoắn có liên quan đến loại prôtêin histon H1, có vai trò đặc biệt quan trọng tạo bền vững liên kết nuclêôxôm để hình thành nên cuộn xoắn bậc 2, đ-ợc gọi sợi solenoit Trong nhiễm sắc thể kỳ trung gian, sợi solenoit đ-ợc cuộn xoắn lần tạo nên ống rỗng đ-ờng kính khoảng 2000 A0 Cuối lần cuộn xoắn tiếp ống 2000 A0 thành cuộn xoắn lớn có đ-ờng kính 6000 A0, chrômatit kỳ Đặc thù hoạt động nhiễm sắc thể có vùng đồng nhiễm sắc có khả tháo xoắn đóng xoắn bình th-ờng, mang gen biểu chức phiên mÃ, tái bình th-ờng, nhuộm màu nhạt chậm Còn vùng dị nhiễm sắc có cấu trúc siêu xoắn ổn định nên mang gen biểu mặt chức năng, ADN không đ-ợc phiên mà trình tái diễn muộn, bao gồm: Dị nhiễm sắc không ổn định tức chuyển thành đồng nhiễm sắc thời điểm định dị nhiễm sắc ổn định chuyển thành đồng nhiễm sắc [6] Nhiễm sắc thể đảm bảo chức di truyền quan trọng, quan nhân mang ADN chứa thông tin di truyền đặc tr-ng loài Nhiễm sắc thể phải có tổ chức, kiểu xếp đặc biệt tạo điều kiện thuận lợi cho hoạt động ADN chứa đó, đảm bảo cho trình tái ADN phân phối ADN tế bào đ-ợc hình thành qua nguyên phân giảm phân trình nhiễm sắc thể có thay đổi hình thái rõ rệt, quan sát đ-ợc thông qua tiêu tạm thời hay cố định 1.2 Đặc điểm phân bào nguyên phân Nguyên phân chế trì số l-ợng nhiễm sắc thể tế bào xôma, có nghĩa từ tế bào mẹ ban đầu qua lần nguyên phân tạo tế bào con, tế bào mang nhiễm sắc thể 2n giống tế bào mẹ [7] Sự phân bào nguyên phân hay giảm phân, dẫn đến hàng loạt trình có trật tự thời gian không gian cuối cho kết định dự đoán tr-ớc đ-ợc Nguyên phân cho tế bào giống nh- mặt di truyền nhờ tính liên tục di truyền (về số l-ợng nh- chất l-ợng) đ-ợc trì, nói cách khác tế bào đ-ợc hình thành trình cã cÊu tróc di trun y nh- ë tÕ bµo mẹ mà từ chúng phát sinh, chúng di truyền [11] Nguyên phân trình xác, hầu nh- không sinh biến dị điều kiện bình th-ờng xác đà đ-ợc định đoạt mức độ phân tử, đặc tr-ng trình tự tái ADN Vì mà kết di truyền phân chia tế bào xôma hay nguyên phân bảo tồn cứng nhắc kiểu gen ban đầu [11] Xét theo nghĩa chặt chẽ từ nguyên phân (mitosis) phân chia nhân thành nhân con, tế bào chất phân chia tế bào chất với hình thành tế bào Sự nguyên phân trình liên tục, giai đoạn chuyển dần sang giai đoạn sau nh-ng để tiện mô tả nhà sinh học phân chia cách nhân tạo phân bào làm bốn giai đoạn: kỳ đầu, kỳ giữa, kỳ sau, kỳ cuối Giữa lần phân bào nguyên phân nhân vào giai đoạn yên nghỉ, giai đoạn chuẩn bị (kỳ trung gian) yên nghỉ nhân không phân chia, hoạt tính trao đổi chất thời kỳ lại cao Nguyên phân trình hoạt động phức tạp mô tả nào, sơ đồ nào, chí tiêu tế bào phân chia mà cho hình dung đ-ợc hoạt động phức tạp đến mức nh- Phim ảnh quay chụp chậm nguyên phân cho thấy rõ hoạt tính cao trình [1] Quá trình nguyên phân diễn mạnh mẽ đỉnh sinh tr-ởng, nhđỉnh ngọn, đỉnh cành, đỉnh rễ Tốc độ phân bào nguyên phân phụ thuộc vào số yếu tố môi tr-ờng nh-: Nhiệt độ, chu kỳ ngày đêm, chu kỳ mùa, trạng thái sinh lý Sự phân bào nguyên phân có tế bào xôma tế bào sinh dục ch-a vào giai đoạn chín 1.3 ý nghĩa nguyên phân Là trình sinh học quan trọng tế bào, chế sinh sản tạo tế bào có nhiễm sắc thể hoàn toàn giống giống tế bào mẹ (về số l-ợng chất l-ợng) Kết tế bào có đủ toàn thông tin di truyền cần thiết cho phát sinh tất tính trạng thể Điều làm cho hiểu từ tế bào lấy từ tr-ởng thành phân hóa phát triển thành hệt gốc nuôi cấy mô thực vật Đối với sinh vật nhân thực đơn bào, nguyên phân chế sinh sản, từ tế bào mẹ qua nguyên phân tạo tế bào giống y hệt Đối với thể sinh vật nhân thực đa bào, nguyên phân làm tăng số l-ợng tế bào giúp thể sinh tr-ởng phát triển Ngoài nguyên phân đóng vai trò quan trọng giúp thể tái sinh mô quan bị tổn th-ơng, ví dụ: Sự tái sinh vỏ củ khoai tây bị tổn th-ơng, tái sinh đuôi bị đứt thần lằn sinh vật sinh sản sinh d-ỡng, nguyên phân hình thức sinh sản tạo c¸c c¸ thĨ cã kiĨu gen gièng c¸ thĨ mĐ Theo quan ®iĨm cđa di trun häc hiƯn đại phân bào nguyên phân giữ vai trò quan trọng, xảy xếp cách xác thông tin di truyền tế bào con, tức thực kế thừa đặc tính di truyền thể trì tính liên tục sống hệ tế bào [5] 1.4 Chu kỳ tế bào trình nguyên phân Các tế bào sinh vật eukaryota trải qua nhiều giai đoạn nối tiếp kết thúc phân chia tạo tế bào Toàn trình từ lúc tế bào đ-ợc tạo thành phân bào tế bào mẹ đến phân chia tạo tế bào gọi chu kỳ tế bào gồm giai đoạn M, G1, S, G2 Sự phân chia tế bào chiếm phần chu trình [9] Ng-ời ta nghiên cứu phân bào nguyên phân quan sát chu kỳ sống tế bào mô phân sinh, tế bào nh- thể trải qua giai đoạn: Kỳ trung gian (interphase), kỳ đầu (prophase), kỳ (metaphase), kỳ sau (anaphase), kỳ cuối (telophase) Tr-ớc xảy trình phân chia tế bào đà xảy trình sinh hóa phức tạp kéo dài Trong kỳ trung gian đà diễn trình quan trọng: Sự phân phối ADN, tích lũy chất cho việc hình thành thể thoi phân bào sinh sản thể trung tâm Kỳ trung gian thời kỳ dài chu trình tế bào ng-ời ta chia thành pha Gap1 (G1): Thêi gian kÐo dµi tõ sau tÕ bµo đ-ợc hình thành sau phân bào đến lúc bắt đầu pha S.Thời gian G1 phụ thuộc vào chức sinh lý tế bào, ví dụ: tế bào phôi G1 1giờ, tế bào gan động vật có vú năm, tế bào nơron kéo dài suốt đời sống cá thể Đây thời kỳ tr-ớc tổng hợp, tế bào diễn trình tăng tr-ởng, chuẩn bị phân đổi ADN pha nhiễm sắc thể dạng sợi mảnh bị xoắn vặn Cuối pha G1 có thời điểm gọi điểm hạn định R tế bào v-ợt qua vào pha S không vào pha G0 (pha biệt hoá) Pha S: Thời kỳ tổng hợp, cuối pha G1 tế bào tổng hợp loại prôtêin cyclinA kết hợp với enzim kynaza xúc tiến tổng hợp ADN Trong giai đoạn sai lệch tái bải ADN đ-ợc sửa chữa Thời gian kéo dài pha S th-ờng ổn định tõ 6-8giê Gap2 (G2): Thêi kú sau tỉng hỵp diễn trình liên quan đến hình thành thoi tơ vô sắc tích lũy l-ợng cho trình nguyên phân, đặc biệt tổng hợp prôtêin tubulin (thành phần cấu tạo tơ vô sắc) Nhiễm sắc thể bắt đầu đóng xoắn, thoi tơ vô sắc không bắt màu, tế bào phải trải qua G2 thực trình nguyên phân [7] Các giai đoạn phân chia tế bào (M - Mitosis) Kỳ đầu - tiền kỳ (prophase): Đây giai đoạn trình phân chia nguyên phân Giai đoạn gồm cã tiỊn kú sím vµ tiỊn kú mn TiỊn kú sớm, nhân tế bào có hình dạng nh- kỳ trung gian, nh-ng bắt đầu xuất sợi chất nhiễm sắc phân bố khắp nhân Tiền kỳ muộn, sợi chất nhiễm sắc thể thấy rõ, nhiễm sắc thể gồm nhiễm sắc tử (chromatit) xoắn với gắn liền tâm động (centrome) Vào cuối tiền kỳ xảy gián đoạn màng nhân tiêu biến nhân con, máy phân chia nhân bắt đầu hình thành Kỳ - trung kỳ (metaphase) giai đoạn nhiễm sắc thể tập trung mặt phẳng xích đạo tế bào Tâm động nhiễm sắc thể nối liền nhiễm sắc tử nằm tế bào, vai nhiễm sắc thể căng nhờ thoi vô sắc pha nhiễm sắc co xoắn cực đại, thấy rõ hình dạng số l-ợng nhiễm sắc thể tế bào Thoi sắc đ-ợc hình thành từ sợi prôtêin trạng thái gen, kéo dài từ đầu đến đầu khoang tế bào chúng gồm loại: loại nối liền cực tế bào, loại dính liền với centrome cđa nhiƠm s¾c thĨ Kú sau - hËu kú (anaphase) Giai đoạn bắt đầu phân chia tâm động, xảy đồng thời tất nhiễm sắc thể Ngay sau tâm động phân chia, nhiễm sắc tử tách hai cực đối lập tế bào, lúc ta gọi chúng nhiễm sắc thể chị em, chúng đồng thời nhanh chóng di động hai cực nhiễm sắc thể lý mà bị tâm động chúng di động cực đ-ợc Sự vận động nhiễm sắc thể hậu kỳ liên quan t-ơng hỗ đến hai trình khác nhau, đồng thời xảy co ngắn sợi tơ vô sắc gắn nhiễm sắc thể với cực tế bào giÃn sợi tơ vô sắc nối liền hai cực tế bào Kỳ cuối - mạt kỳ (telophase): Giai đoạn bắt đầu kết thúc di chuyển nhiễm sắc thể Trong tế bào có cấu trúc trở lại, nhiễm sắc thể trạng thái xoắn đơn độc Nhân đ-ợc hình thành có màng bao quanh Nhân đ-ợc phục hồi với số l-ợng nh- tế bào mẹ Quá trình hình thành tế bào nhờ mặt phẳng xích đạo hình thành nên giới hạn ngăn cách tế bào Sự phân bào tế bào động vật thực vầt diễn theo hai cách khác tế bào động vật, trình phân bào bắt đầu hình thành rÃnh phân cách bề mặt tế bào thắt dần từ vào đ-ợc gọi phân cắt tế bào thực vật, đ-ợc bao bọc màng cứng xenlulo phía nên trình có nhiều khác biệt: Tr-ớc tiên túi màng đơn đ-ợc tách từ thể golgi mang nguyên liệu tạo vách tập hợp lại tế bào mẹ, túi dính liền tạo nên đĩa có màng bao quanh đ-ợc gọi tế bào, tế bào lớn lên, tích lũy nguyên liệu ngày nhiều tạo nên vách tế bào Ta quan sát đ-ợc rõ ràng kỳ tiêu tạm thời hay cố định nhờ biểu đặc tr-ng nhiễm sắc thể 1.5 Thời gian phân bào kỳ phân bào nguyên phân, hoạt tính phân chia Có thể quan sát thời gian thời kỳ phân bào nguyên phân cách quan sát trạng thái sống Thời gian chu kỳ sống tế bào, kỳ phân bào nguyên phân khác loài, mô khác kỳ khác nh-: Thời gian diễn thời kỳ trình nguyên phân tế bào nội nhũ đậu Hà Lan ng-ời ta xác định đ-ợc nh- sau: - Kỳ đầu kéo dài 40 phút - Kỳ kéo dài 20 10 11 12 13 Tæng TB 284 279 277 224 228 224 240 239 237 K§ 29 28 28 27 28 26 20 19 20 KG 3 2 2 2 KS 2 2 2 2 KC 8 4 5 Tæng TB 277 276 278 256 253 258 252 250 254 K§ 25 28 26 35 33 32 28 29 32 KG 2 1 2 KS 3 1 1 1 KC 3 2 4 Tæng TB 228 230 227 220 226 223 221 219 220 K§ 22 21 22 28 28 28 24 25 24 KG 2 0 3 KS 0 3 3 3 KC 1 8 3 Tæng TB 247 250 248 264 268 266 200 207 203 K§ 29 27 27 29 28 29 29 27 28 KG 2 3 1 KS 1 0 1 KC 2 3 1 Tæng TB 251 252 255 282 278 279 242 238 239 K§ 28 27 27 30 32 34 28 30 28 KG 3 3 3 7 KS 1 1 1 2 KC 2 1 0 Tæng TB 198 199 197 244 245 248 289 292 290 K§ 17 17 17 31 33 32 37 36 35 KG 3 3 3 1 KS 0 3 6 KC 2 1 2 Tæng TB 260 259 257 210 213 219 288 284 289 K§ 30 35 34 22 20 24 35 36 34 KG 2 3 3 3 KS 1 2 2 2 KC 1 2 1 141 138.5 144.8 138.1 140.5 141.6 140.5 14 15 16 17 18 19 Tæng TB 280 279 276 260 257 255 272 273 271 K§ 31 34 30 29 31 31 29 30 29 KG 2 2 2 3 KS 2 4 0 KC 1 3 6 Tæng TB 248 242 250 208 209 213 280 283 287 K§ 26 28 27 25 26 26 29 28 27 KG 3 1 1 1 KS 2 2 2 1 KC 3 4 5 Tæng TB 214 215 218 202 200 207 200 208 203 K§ 26 28 24 22 24 25 19 19 19 KG 0 1 2 KS 3 3 3 2 KC 1 5 2 Tæng TB 208 205 219 226 234 229 239 244 242 K§ 18 18 18 30 33 31 34 32 35 KG 3 2 2 2 KS 3 2 0 KC 1 1 1 1 Tæng TB 232 236 239 248 241 244 209 216 213 K§ 25 26 26 27 28 27 26 25 25 KG 4 2 1 KS 2 0 2 KC 2 1 2 Tæng TB 167 168 173 237 242 244 244 240 238 K§ 16 17 16 36 33 35 21 20 21 KG 2 2 2 1 KS 2 3 3 3 KC 3 1 4 141.8 140.3 140.9 142.9 136.5 141.9 20 21 22 23 24 25 Tæng TB 196 199 204 270 269 267 200 207 204 K§ 24 23 23 31 32 34 18 18 19 KG 2 3 4 KS 1 4 3 KC 2 2 2 1 Tæng TB 160 168 165 218 214 220 240 242 243 K§ 20 21 20 23 26 24 26 28 26 KG 1 3 3 3 KS 2 3 5 KC 1 1 1 3 Tæng TB 159 162 158 203 197 198 216 213 220 K§ 14 15 15 20 19 19 30 27 29 KG 1 4 1 KS 1 1 1 2 KC 3 3 3 2 Tæng TB 200 203 202 219 228 222 208 202 213 K§ 21 21 21 27 26 26 25 26 25 KG 3 2 4 KS 2 3 1 KC 2 4 3 Tæng TB 218 219 219 239 235 244 197 199 190 K§ 23 24 22 28 27 30 16 17 17 KG 3 2 2 2 KS 2 2 2 3 KC 4 5 2 Tæng TB 260 263 268 180 189 184 194 195 197 K§ 35 36 35 21 20 20 18 17 17 KG 2 2 2 3 KS 2 2 2 3 KC 4 1 1 1 MI = 142.34 141.7 149.4 138.6 152.6 141.2 142.1 BảNG 7: kết nghiên cứu rễ tỏi (13h30'-14h) TT tiên ThÞ tr-êng I ThÞ tr-êng II ThÞ tr-êng III Kỳ phân chia Lần Lần Lần LÇn LÇn LÇn LÇn LÇn LÇn Tỉng TB 259 251 255 236 230 235 246 248 240 K§ 31 32 34 28 29 27 37 35 36 KG 3 3 3 4 KS 2 4 2 KC 2 4 5 Tæng TB 220 226 228 298 200 208 238 230 236 K§ 28 27 28 24 26 25 36 34 35 KG 6 3 3 3 KS 1 1 1 1 KC 2 3 7 Tæng TB 248 243 245 259 258 261 262 264 269 K§ 40 41 39 38 36 35 41 40 42 KG 1 2 2 2 KS 2 5 7 KC 2 2 2 3 Tæng TB 254 250 256 261 268 263 263 265 269 K§ 50 54 53 37 38 38 25 27 26 KG 2 2 2 KS 4 4 4 4 KC 1 2 1 Tæng TB 226 235 232 224 229 255 270 268 276 K§ 38 36 37 33 34 34 46 45 43 KG 4 1 2 KS 3 4 4 4 KC 2 5 2 Tæng TB 271 278 274 287 294 286 216 218 226 K§ 43 44 44 47 48 46 22 22 22 KG 3 3 3 1 KS 1 2 3 KC 4 1 2 ChØ sè ph©n chia 171.1 165.1 186.1 177.1 192.8 166.3 10 11 12 13 Tæng TB 238 244 236 250 253 255 300 302 304 K§ 34 38 38 30 33 29 38 37 39 KG 4 2 3 KS 1 2 2 2 KC 3 3 3 4 Tæng TB 287 296 285 280 285 289 268 269 266 K§ 38 39 38 34 36 37 37 35 36 KG 0 3 2 KS 5 3 4 KC 4 0 2 Tæng TB 301 302 300 212 218 216 258 267 264 K§ 24 25 25 30 31 31 26 26 26 KG 6 4 8 KS 6 3 5 KC 3 4 3 Tæng TB 208 200 209 216 217 210 240 246 243 K§ 23 23 24 21 20 21 38 38 40 KG 3 2 5 KS 6 1 2 KC 2 1 3 Tæng TB 228 226 229 160 161 165 240 243 249 K§ 32 31 31 18 18 20 35 34 35 KG 3 3 3 0 KS 1 3 3 3 KC 2 1 2 Tæng TB 232 234 238 238 237 234 239 240 230 K§ 33 34 33 27 27 28 35 36 34 KG 4 3 2 KS 2 4 3 KC 2 4 1 Tæng TB 169 195 198 240 239 238 275 270 278 K§ 23 23 24 36 36 35 34 34 36 KG 1 1 1 2 KS 0 2 3 KC 5 3 2 163.8 158.1 161.7 160.8 161.7 170.6 160.9 14 15 16 17 18 19 Tæng TB 238 237 235 172 178 173 182 186 188 K§ 27 27 26 20 22 21 30 31 32 KG 2 3 3 3 KS 3 6 2 KC 4 1 3 Tæng TB 137 133 130 149 152 157 150 156 158 K§ 15 16 15 23 23 23 22 21 21 KG 4 3 3 3 KS 1 4 1 KC 1 1 1 1 Tæng TB 248 259 253 269 269 260 269 261 263 K§ 42 42 40 38 37 39 39 38 40 KG 1 1 1 2 KS 7 2 4 KC 3 3 3 1 Tæng TB 280 294 289 312 313 318 318 310 315 K§ 35 36 36 46 46 48 38 37 38 KG 1 2 0 KS 2 5 6 KC 5 0 3 Tæng TB 304 302 308 200 201 206 251 254 258 K§ 38 37 39 32 31 31 37 38 40 KG 2 2 2 1 KS 5 2 3 KC 0 1 1 1 Tæng TB 253 257 250 159 183 185 246 265 263 K§ 35 36 37 26 25 26 28 22 26 KG 7 3 2 KS 4 4 4 4 KC 2 4 2 179.7 177.8 182 157 165.9 177.1 20 21 22 23 24 25 Tæng TB 248 249 242 196 199 193 253 256 252 K§ 42 43 42 20 20 20 46 44 45 KG 2 2 2 3 KS 4 2 1 KC 1 2 3 Tæng TB 254 248 257 298 296 300 192 195 198 K§ 31 30 30 42 40 41 25 25 24 KG 4 3 1 KS 4 5 3 KC 3 2 6 Tæng TB 225 234 236 288 279 282 280 285 283 K§ 24 23 25 40 40 39 38 39 37 KG 3 4 1 KS 4 2 5 KC 4 1 4 Tæng TB 291 297 292 208 219 218 260 258 252 K§ 31 32 32 35 35 36 32 31 31 KG 4 4 4 2 KS 4 2 5 KC 1 2 2 2 Tæng TB 278 279 286 264 263 268 216 222 225 K§ 27 28 28 35 34 34 44 43 43 KG 6 3 2 KS 1 3 2 KC 0 5 2 Tæng TB 296 295 298 194 198 224 224 223 227 K§ 40 38 37 28 29 28 28 28 29 KG 2 2 2 4 KS 3 3 3 2 KC 3 3 3 1 MI = 170.04 179.3 172.5 161.9 165.8 172.6 163.5 B¶NG 8: kết nghiên cứu rễ tỏi (15h-15h30') TT tiêu Thị tr-ờng I Thị tr-ờng II Thị tr-ờng III Kỳ phân chia Lần LÇn LÇn LÇn LÇn LÇn LÇn LÇn LÇn Tỉng TB 216 218 223 206 207 217 330 232 339 K§ 25 26 24 29 29 28 36 35 37 KG 1 3 3 3 KS 4 3 4 KC 2 5 2 Tæng TB 227 228 236 248 246 244 232 230 239 K§ 26 24 25 35 36 34 27 28 28 KG 1 2 2 2 KS 7 2 5 KC 4 3 2 Tæng TB 204 209 206 252 279 240 202 203 204 K§ 28 29 28 34 32 35 23 23 23 KG 1 3 2 KS 3 2 2 2 KC 2 4 2 Tæng TB 217 210 218 208 200 210 242 247 240 K§ 26 27 27 21 22 20 27 28 29 KG 1 4 4 4 KS 2 3 4 KC 3 3 3 3 Tæng TB 271 275 278 279 286 289 241 248 244 K§ 40 42 43 37 39 38 29 31 34 KG 2 4 1 KS 6 7 1 KC 2 2 2 2 Tæng TB 280 287 283 239 246 248 206 213 208 K§ 37 36 36 28 30 29 25 25 24 KG 4 4 4 1 KS 1 4 2 KC 5 3 6 ChØ sè ph©n chia 161.6 162.8 158.4 154.3 170.6 162.8 10 11 12 13 Tæng TB 248 254 247 211 219 216 251 257 253 K§ 27 28 28 20 22 21 31 32 30 KG 4 4 4 2 KS 5 4 4 4 KC 6 3 1 Tæng TB 220 229 218 279 286 282 249 258 255 K§ 26 27 26 38 39 37 25 28 27 KG 2 3 2 KS 5 4 5 KC 2 1 2 Tæng TB 257 260 252 237 230 234 210 200 209 K§ 30 31 32 26 24 25 20 21 22 KG 3 2 4 KS 4 2 2 2 KC 3 7 2 Tæng TB 231 238 232 265 261 269 223 223 234 K§ 37 35 36 32 35 30 30 32 31 KG 2 2 2 1 KS 1 5 2 KC 1 1 1 3 Tæng TB 310 316 312 300 306 304 221 225 222 K§ 29 30 30 32 31 36 26 28 26 KG 1 2 36 2 KS 8 6 2 KC 4 2 1 Tæng TB 333 328 336 288 283 280 236 232 330 K§ 34 35 35 41 43 42 24 24 24 KG 1 2 3 KS 7 2 7 KC 2 6 4 Tæng TB 289 287 292 248 240 246 252 254 255 K§ 39 36 38 25 26 25 34 36 33 KG 2 3 1 KS 3 3 3 10 10 10 KC 4 3 1 156.4 154.1 151.5 162.2 152.6 153.5 161.4 14 15 16 17 18 19 Tæng TB 285 280 288 237 233 330 220 229 230 K§ 38 36 36 28 26 26 29 30 31 KG 3 2 1 KS 5 1 4 KC 6 4 2 Tæng TB 298 296 290 231 239 233 263 268 265 K§ 35 36 35 33 34 35 28 29 26 KG 1 2 1 KS 8 1 4 KC 4 5 3 Tæng TB 280 285 289 278 275 277 210 213 214 K§ 36 34 32 31 32 32 27 24 26 KG 3 4 5 KS 4 4 4 2 KC 6 6 6 3 Tæng TB 300 304 304 252 255 251 232 234 239 K§ 33 31 33 41 42 43 21 24 23 KG 3 1 3 KS 5 6 2 KC 4 5 4 Tæng TB 247 240 244 209 205 202 226 229 236 K§ 33 35 36 24 24 23 22 22 24 KG 1 1 1 4 KS 3 1 2 KC 3 3 3 8 Tæng TB 288 277 285 210 213 218 243 240 235 K§ 38 35 36 29 28 26 31 29 29 KG 3 1 2 KS 4 1 1 2 KC 2 5 2 156 159.2 166 165 156.6 155.9 20 21 22 23 24 25 Tæng TB 240 239 242 280 284 279 244 253 246 K§ 36 35 37 32 34 30 37 26 28 KG 3 4 4 4 KS 1 3 4 KC 3 1 0 Tæng TB 278 274 270 232 234 238 240 242 249 K§ 34 36 35 29 31 31 33 32 31 KG 3 2 4 KS 1 1 1 2 KC 0 1 2 Tæng TB 248 240 250 284 283 289 236 230 235 K§ 34 35 34 36 37 35 27 28 30 KG 1 1 1 3 KS 4 0 0 0 KC 4 2 4 Tæng TB 286 289 280 243 240 245 240 245 247 K§ 39 35 34 30 30 29 33 30 31 KG 1 4 1 KS 4 2 3 KC 1 2 2 2 Tæng TB 192 197 199 238 240 236 220 229 225 K§ 19 19 19 32 34 33 28 29 27 KG 2 4 2 KS 3 1 2 KC 0 1 2 Tæng TB 244 240 248 252 257 261 260 267 258 K§ 28 28 28 36 34 36 31 32 34 KG 3 3 3 2 KS 1 4 1 KC 1 1 1 2 MI = 157.28 158.7 150.9 154.7 151.9 145.9 148.9 lời cảm ơn Khóa luận tốt nghiệp ®ùoc hoµn thµnh d-íi sù h-íng dÉn vµ gióp ®ì tận tình cô Nguyễn Thị Thảo - cán giảng dạy môn Di truyền học - Khoa Sinh học, Tr-ờng Đại học Vinh Nhân dịp tác giả xin đ-ợc bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô Tác giả trân trọng cảm ơn thầy cô giáo tổ môn Di truyền - Ph-ơng pháp - Vi sinh, thầy cô giáo phụ trách phòng thí nghiệm đà hết lòng tạo điều kiện giúp đỡ tác giả trình thực hiên khóa luận tốt nghiệp Tác giả xin gửi tới tất bạn bè ng-ời thân lòng biết ơn sâu sắc Khoá luận tránh khỏi thiếu xót, tác giả mong nhận đ-ợc ý kiến quý báu từ thầy cô giáo bạn bè Vinh, tháng năm 2008 Tác giả Trần Linh Châm Mục lục Trang mở đầu 1 Lý chọn đề tài Mục đích đề Nhiệm vụ nghiên cứu Địa điểm thời gian nghiên cứu ch-ơng tổng quan tài liệu 1.1 Nhiễm sắc thể 1.2 Đặc điểm phân bào nguyên phân 1.3 ý nghĩa nguyên phân 1.4 Chu kỳ tế bào trình nguyên phân 1.5 Thời gian phân bào kỳ phân bào nguyên phân, hoạt tính phân chia 10 1.6 Hoạt tính phân bào nguyên phân số phân bào nguyên phân 11 1.7 Vị trí thực hành phân bào nguyên phân 12 Ch-ơng đối t-ợng ph-ơng pháp nghiên cứu 13 2.1 Đối t-ợng nghiên cứu 13 2.2 Ph-ơng pháp nghiên cứu 13 2.2.1 Thiết bị hoá chất 13 2.2.2 Ph-ơng pháp chuẩn bị mẫu vật 14 2.2.3 Ph-ơng pháp làm tiêu tạm thời 14 2.2.4 Ph-ơng pháp quan sát tiêu qua kính hiển vi 15 2.2.5 Ph-ơng pháp lấy số liệu 15 2.2.6 Ph-ơng pháp xử lý thống kê toán học 15 2.2.7 Ph-ơng pháp xác định số mitose (MI) 16 2.2.8 Ph-ơng pháp tiền cố định xử lý lạnh 16 Ch-ơng kết nghiên cứu thảo luận 18 3.1 Kết quan sát tế bào kỳ nguyên phân sau rút ngắn thời gian nhuộm màu nhiễm sắc thể 18 3.2 Hoạt tính nguyên phân tế bào 21 3.3 Kết quan sát tế bào kỳ nguyên phân sau giữ cồn 70%-80% 22 3.4 Kết quan sát tế bào kỳ nguyên phân sau tiền cố định 23 nhiệt độ lạnh Kết luận kiến nghị 25 TàI LIệU THAM KHảO 26 PHụ LụC 27 .. .trình thực hành Di truyền học đại c-ơng khoa Sinh học - Tr-ờng Đại học Vinh Mục đích đề tài Đề tài thực nhằm mục đích góp phần nâng cao hiệu thực hành phân bào nguyên phân ch-ơng trình thực hành. .. cứu thực hành phân bào nguyên phân ch-ơng trình thực hành Di truyền học đại c-ơng khoa Sinh học - Tr-ờng Đại học Vinh Bài thực hành đ-ợc nghiên cứu loại đối t-ợng trồng sau: - Hành ta (Allium... gian số l-ợng phân bào nguyên phân cực đại cực tiểu mô phân sinh đầu rễ đầu thời gian [5] 1.6 Hoạt tính phân bào nguyên phân số phân bào nguyên phân Trong nghiên cứu phân chia tế bào th-ờng ta