HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM PHẠM HỒNG NGỌC “NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH PHÂN TỬ VÀ XÁC ĐỊNH PHẢ HỆ NGUỒN GỐC CỦA MỘT SỐ CHỦNG PARVOVIRUS GÂY BỆNH TRÊN CHĨ TẠI HÀ NỘI” Ngành: Cơng nghê ̣ sinh ho ̣c Mã số : 60 42 02 01 Người hướng dẫn khoa ho ̣c: TS Nguyễn Hữu Đức TS Đoàn Thi ̣Thanh Hương NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP – 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luâ ̣n văn trung thực chưa dùng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luâ ̣n văn rõ nguồn gốc giúp đỡ cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Phạm Hồng Ngọc i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Đoàn Thị Thanh Hương – Trưởng phòng Miễn dịch học, Viện Công nghệ Sinh học TS Nguyễn Hữu Đức – Trưởng môn Công nghệ sinh ho ̣c Động Vâ ̣t, Khoa Công nghê ̣ sinh ho ̣c, Học viện Nông nghiệp Việt Nam người trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện tốt cho học tập và nghiên cứu suốt trình thực luâ ̣n văn Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới chú, anh chi ̣ cán phịng Miễn dịch học, Viện Công nghệ Sinh học tận tình bảo, động viên cho tơi lời khuyên quý báu công việc sống Tiếp theo, xin gửi lời cảm ơn đến Thầy Cô khoa Công nghê ̣ Sinh ho ̣c – Học viện Nơng nghiệp Việt Nam, tận tình bảo cho tơi suốt q trình học tập trường Tôi xin cảm ơn tài trợ quỹ phát triển khoa học công nghệ quốc gia (NAFOSTED) cho đề tài mã số 106.02-2017.10 TS Đoàn Thị Thanh Hương làm chủ nhiệm hỗ trợ cho tơi hồn thành nghiên cứu Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn đến Bố, Mẹ toàn thể người thân gia đình bạn bè ln hỗ trợ, động viên, khuyến khích tơi suốt thời gian qua Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn Phạm Hồng Ngọc ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mu ̣c bảng v Danh mu ̣c hı̀nh vi Danh mu ̣c chữ viế t tắ t vii Trı́ch yế u luâ ̣n văn viii Thesis abstract ix Phần Mở đầu 1.1 Mục tiêu 1.2 Nội dung Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Lịch sử nghiên cứu canine parvovirus 2.1.1 Tình hình nghiên cứu giới 2.1.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 2.2 Đặc điểm sinh học parvovirus 2.2.1 Cấu tạo chung 2.2.2 Vị trí xếp loại 2.2.3 Nguồn gốc kiểu gen chủng CPV-2 2.2.4 Con đường xâm nhập cách lây lan 2.2.5 Cơ chế gây bệnh 2.2.6 Triệu chứng lâm sàng bệnh tích 2.2.7 Các phương pháp chẩ n đoán 10 2.2.8 Vaccine phòng bệnh 11 Phần Vật liệu phương pháp 12 3.1 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 12 3.2 Vật liệu nghiên cứu 12 3.2.1 Nguyên liệu 12 3.2.2 Dụng cụ thiết bị 12 3.2.3 Hóa chất 13 iii 3.3 Phương pháp nghiên cứu 14 3.3.1 Phương pháp thu nhận mẫu 14 3.3.2 Phương pháp tách chiết dna tổng số 14 3.3.3 Phương pháp PCR 16 3.3.4 Phương pháp điện di gel agarose 17 3.3.5 Phương pháp tinh sản phẩm PCR 18 3.3.6 Phân tích xử lý số liệu 18 Phần Kết thảo luận 20 4.1 Kế t quả thu nhâ ̣n dna tổ ng số 20 4.2 Kế t quả thu nhâ ̣n chuỗi gen VP2 20 4.3 Kế t quả giải trı̀nh tự và truy câ ̣p ngân hàng gen xác đinh ̣ chủng CPV 21 4.3.1 Trı̀nh tự chuỗi gen Vp2 của mẫu TH1-VN 21 4.3.2 Trı̀nh tự chuỗi gen VP2 của mẫu TH2-VN 24 4.3.3 Trı̀nh tự chuỗi gen VP2 của mẫu HN-VN 27 4.4 Phân tı́ch mức đô ̣ đồng nucleotide các mẫu CPV hà nô ̣i so với các chủng thế giới 30 Phần Kết luận kiến nghi 42 ̣ 5.1 Kế t luâ ̣n 42 5.2 Kiế n nghi 42 ̣ Tài liệu tham khảo 43 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Danh sách mẫu CPV thu thâ ̣p đươ ̣c 12 Bảng 3.2 Quy trình tách chiết DNA tổng số 15 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng PCR 17 Bảng 3.4 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 17 Bảng 3.5 Quy trình tinh sản phẩm PCR 18 Bảng 3.6 Danh sách các chủng CPV sử du ̣ng nghiên cứu 19 Bảng 4.1 Nồ ng đô ̣ DNA của các chủng nghiên cứu 20 Bảng 4.2 Bảng so sánh tỷ lê ̣ đồ ng nhấ t nucleotide và tỷ lê ̣ tương đồ ng amino acid của các chủng CPV 39 v DANH MỤC HÌ NH Hình 2.1 Cấu trúc capsid CPV Hình 2.2 Một số q trình tiến hố CPV-2 chó Hı̀nh 2.3 Vi ̣ trı́ Parvovirus tấ n công các nhung mao ruô ̣t gây xuấ t huyế t niêm ma ̣c ruô ̣t Hình 2.4 Triệu chứng mắc bệnh Parvo chó 10 Hı̀nh 3.1 Mô ̣t sô trang thiế t bi phòng thı́ nghiê ̣m 13 ̣ Hı̀nh 3.2 Sơ đồ quy trı̀nh thı́ nghiêm ̣ 17 Hı̀nh 4.1 Kế t quả điê ̣n di sản phẩ m PCR thu nhận vùng gen VP2 20 Hı̀nh 4.2 Kế t quả BLAST mẫu TH1-VN 23 Hı̀nh 4.3 Kế t quả BLAST của mẫu TH2-VN 26 Hı̀nh 4.4 Kế t quả BLAST của mẫu HN-VN 29 Hình 4.5 So sánh trình tự chuỗi nucleotide của gen VP2 mẫu CPV phân lập Hà Nô ̣i – Việt Nam với chủng giới 35 Hình 4.6 So sánh trình tự chuỗi amino acid của gen VP2 mẫu CPV phân lập Hà Nô ̣i – Việt Nam với chủng giới 38 Hình 4.7 Cây phả hệ xác định mối quan hệ loài genotype chủng CPV nghiên cứu chủng CPV khác 38 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa Tiếng Việt µl Microlitre bp Base pair ddNTP dideoxynucleoside nm Nanomet CPV Canine Parvovirus DNA Deoxyribose Nucleic Acid HA Haemagglutination ORF Open Reading Frame PCR Polymerase Chain Reaction vii TRÍ CH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Pha ̣m Hồ ng Ngo ̣c Tên Luận văn: Nghiên cứu đặc tính phân tử xác định phả hệ nguồn gốc mô ̣t số chủng Parvovirus gây bệnh chó Hà Nội Ngành: Cơng nghê ̣ sinh ho ̣c Mã số: 60420201 Tên sở đào tạo: Học Viện Nơng Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Giải mã toàn gen kháng nguyên VP2 mẫu CPV thu nhận Hà Nội Từ xác định genotype nguồn gốc phả hệ chủng CPV lưu hành Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu gồm 03 nô ̣i dung giải mã gen kháng nguyên VP2, xác đinh ̣ kiể u gen và mối quan ̣ di truyền số chủng CPV lưu hành Hà Nội Vâ ̣t liệu nghiên cứu phân chó nghi nhiễm Parvovirus đươ ̣c thu nhâ ̣n các phòng khám thú y địa bàn Hà Nô ̣i Nghiên cứu sử du ̣ng các phương pháp sinh học phân tử bao gồ m tách chiế t DNA tổ ng số , PCR, điê ̣n di, giải trı̀nh tự trực tiế p, so sánh trı̀nh tự nucleotide với các chủng của thế giới và xây dựng phân loa ̣i bằ ng các phầ n mề m tin sinh ho ̣c Kết kết luận Thu nhâ ̣n và giải trı̀nh tự toàn bô ̣ chuỗi gen VP2 (gồ m 1755 bp, mã hóa cho 584 amino acid) ba mẫu CPV thu nhận Hà Nội Xác đinh ̣ đươ ̣c kiể u gen của ba mẫu nghiên cứu CPV-2c và có tỷ lệ đồng cao nucleotide (từ 98% đến 100%) so với chủng giới Xây dựng đươ ̣c phả ̣ nguồ n gố c của ba mẫu CPV thu nhận ta ̣i Hà Nô ̣i với 30 chủng CPV thế giới Từ đó, xác đinh ̣ ba mẫu nghiên cứu có sự tương đờ ng cao với các chủng CPV Trung Quố c về mă ̣t di truyề n viii CPV-HB10(C CPV-PVMCAP CPV-Raccoo CPV-5US79( CPV-790312 CPV-RPPV(C CPV-02B9(F CPV-339(NE CPV-T37(TW CPV-DH426( CPV-LCPV-T CPV-Taiwan HCM-6(VN)HCM-8(VN)HCM-23(VN) CPV-436(US CPV-K031(K CPV-Shonan CPV-Taichu CPV-SD-14CPV-5MLG(M CPV-GX1581 CPV-CU21(T CPV-GX14(C HCM7(LC214 HCM8(LC216 HCM20(LC21 CPV-HN1617 CPV-GuangZ CPV-0609(C HN-VN(2018 TH1-VN TH2-VN 1720 * 1740 * : ATTGTATATGAAAAATCTCAACTAGCACCTAGAAAATTATATTAA : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : .C C : 1755 : .C : 1755 : : 1755 : C : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : C : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 : : 1755 Hình 4.5 So sánh trình tự ch̃i nucleotide gen VP2 (1755 bp) mẫu CPV phân lập Hà Nô ̣i – Việt Nam với chủng giới Ghi chú: dấu (.) biểu thị trình tự giống nhau; sai khác nucleotide chủng khác so với chủng đối chiếu thể chữ ký hiệu chúng Qua hı̀nh 4.5 nhâ ̣n thấ y: Các chủng CPV của Hà Nô ̣i có trı̀nh tư ̣ nucleotide tương đồ ng rấ t cao so với và so với các chủng thuô ̣c cùng genotype CPV-2c Giữa ba chủng CPV nghiên cứu có sai khác trình tự nucleotide vị trí 159 (C-T), 246 (AG), 924 (C-T), 1092 (A-G), 1330 (G-A) 1476 (C-T) 35 Sự khác biê ̣t của các chủng CPV-2c đươ ̣c thể hiê ̣n rõ ràng ở các vi ̣ trı́ nucleotide 207 (G – A), 732 ( C – T), 800 (A – T), 963 (C – T), 1109 (G – A), 1278 (A – T), 1509 (A – G), 1659 (C – T) so với các chủng CPV – 2, CPV – 2a và CPV – 2b Riêng vi ̣ trı́ 970 – 971 xảy sư ̣ hoán đổ i giữa A – T ta ̣o thành că ̣p AT – TA Tại vị trí 1276 – 1278, các chủng CPV-2 và CPV-2a có cùng bô ̣ ba AAT (mã hóa cho Asparagine), các chủng CPV-2b mang ba GAT (mã hóa Aspartic Acid) đô ̣t biến điể m A – G vị trí 1276 Trong đó, các chủng CPV-2c đột biến điểm hai vi ̣trı́ 1276 và 1278 thành bô ̣ ba GAA (mã hóa cho Glutamic Acid) Bô ̣ ba ta ̣i vi ̣ trı́ này mã hóa cho amino acid 426, là mô ̣t amino acid quan tro ̣ng quyế t đinh ̣ đă ̣c tính phân tử chủng CPV Kết so sánh trình tự amino acid suy diễn VP2 chủng CPV nghiên cứu chủng giới trình bày Hình 4.6 CPV-HB10(C CPV-PVMCAP CPV-Raccoo CPV-5US79( CPV-790312 CPV-Taiwan CPV-LCPV-T CPV-DH426( CPV-T37(TW CPV-339(NE CPV-02B9(F CPV-RPPV(C CPV-Taichu CPV-Shonan CPV-K031(K CPV-436(US HCM-23(VN) HCM-6(VN)HCM-8(VN)CPV-0609(C CPV-GuangZ CPV-5MLG(M CPV-HN1617 HCM20(LC21 HCM8(LC216 HCM7(LC214 CPV-SD-14CPV-GX1581 CPV-CU21(T CPV-GX14(C HN-VN(2018 TH1-VN TH2-VN : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : * 20 * 40 * 60 * 80 * MSDGAVQPDGGQSAVRNERATGSGNGSGGGGGGGSGGVGISTGTFNNQTEFKFLENGWVEITANSSRLVHLNMPESENYRRVVVNNMDKT P K P K P P P .L P .L P .L P .L P .L P .L P .L P .L P .L H P .L P .L P .L P .L L P .L P H L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L G .P .L // 36 : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 90 CPV-HB10(C CPV-PVMCAP CPV-Raccoo CPV-5US79( CPV-790312 CPV-Taiwan CPV-LCPV-T CPV-DH426( CPV-T37(TW CPV-339(NE CPV-02B9(F CPV-RPPV(C CPV-Taichu CPV-Shonan CPV-K031(K CPV-436(US HCM-23(VN) HCM-6(VN)HCM-8(VN)CPV-0609(C CPV-GuangZ CPV-5MLG(M CPV-HN1617 HCM20(LC21 HCM8(LC216 HCM7(LC214 CPV-SD-14CPV-GX1581 CPV-CU21(T CPV-GX14(C HN-VN(2018 TH1-VN TH2-VN : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : * 200 * 220 * 240 * 260 * NTMPFTPAAMRSETLGFYPWKPTIPTPWRYYFQWDRTLVPSHTGTSGTPTNIYHGTDPDDVQFYTIENSVPVHLLRTGDEFATGTFFFDC I I V I I I I I I I I I I I I I I I I K I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y I .Y : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 270 CPV-HB10(C CPV-PVMCAP CPV-Raccoo CPV-5US79( CPV-790312 CPV-Taiwan CPV-LCPV-T CPV-DH426( CPV-T37(TW CPV-339(NE CPV-02B9(F CPV-RPPV(C CPV-Taichu CPV-Shonan CPV-K031(K CPV-436(US HCM-23(VN) HCM-6(VN)HCM-8(VN)CPV-0609(C CPV-GuangZ CPV-5MLG(M CPV-HN1617 HCM20(LC21 HCM8(LC216 HCM7(LC214 CPV-SD-14CPV-GX1581 CPV-CU21(T CPV-GX14(C HN-VN(2018 TH1-VN TH2-VN : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : 280 * 300 * 320 * 340 * 360 KPCRLTHTWQTDRALGLPPFLNSLPQSEGATNFGDIGVQQGKRRGVTQMGNTNYITEATIMRPAEVGYSAPYYSFEASTQGPFKTPIAAG N .V D D N D D N D .N D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A V Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I .N A G Y D I : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 360 37 CPV-HB10(C CPV-PVMCAP CPV-Raccoo CPV-5US79( CPV-790312 CPV-Taiwan CPV-LCPV-T CPV-DH426( CPV-T37(TW CPV-339(NE CPV-02B9(F CPV-RPPV(C CPV-Taichu CPV-Shonan CPV-K031(K CPV-436(US HCM-23(VN) HCM-6(VN)HCM-8(VN)CPV-0609(C CPV-GuangZ CPV-5MLG(M CPV-HN1617 HCM20(LC21 HCM8(LC216 HCM7(LC214 CPV-SD-14CPV-GX1581 CPV-CU21(T CPV-GX14(C HN-VN(2018 TH1-VN TH2-VN : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : * 380 * 400 * 420 * 440 * RGGAQTDENQAADGDPRYAFGRQHGQKTTTTGETPERFTYIAHQDTGRYPEGDWIQNINFNLPVTNDNVLLPTDPIGGKTGINYTNIFNT N N .A A .D D D D D D D E E R .E R .E R .E R .E R .E R .E R .E R .E R .E R .E R .E M R .E : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 450 // CPV-HB10(C CPV-PVMCAP CPV-Raccoo CPV-5US79( CPV-790312 CPV-Taiwan CPV-LCPV-T CPV-DH426( CPV-T37(TW CPV-339(NE CPV-02B9(F CPV-RPPV(C CPV-Taichu CPV-Shonan CPV-K031(K CPV-436(US HCM-23(VN) HCM-6(VN)HCM-8(VN)CPV-0609(C CPV-GuangZ CPV-5MLG(M CPV-HN1617 HCM20(LC21 HCM8(LC216 HCM7(LC214 CPV-SD-14CPV-GX1581 CPV-CU21(T CPV-GX14(C HN-VN(2018 TH1-VN TH2-VN : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : * 560 * 580 ASHTWNPIQQMSINVDNQFNYLPSNIGGMKIVYEKSQLAPRKLY V.N A V.N A V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V - : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 584 Hình 4.6 So sánh trình tự chuỗi amino acid của protein VP2 mẫu CPV phân lập Hà Nô ̣i – Việt Nam với chủng giới 38 Vi ̣ trı́ amino acid 426 của protein VP2 đươ ̣c coi là chı̉ thi ̣ phân tử quan tro ̣ng viê ̣c xác đinh ̣ genotype virus CPV (Asparagine, kí hiê ̣u N, CPV-2a, Aspartic acid, kı́ hiê ̣u là D, CPV-2b Glutamic acid, kı́ hiê ̣u là E, CPV-2c) (Martella et al., 2006, Chiang et al., 2016) Như vậy, vào kế t quả phân tı́ch trı̀nh tư ̣ amino acid (Hı̀nh 4.6) xác đinh ̣ đươ ̣c chủng CPV nghiên cứu này thuộc genotype CPV-2c với đặc trưng Glutamic acid (được kı́ hiê ̣u là chữ E) ở vi ̣trí amino acid 426 Cùng chung genotype với chủng nghiên cứu còn có chủng của Viê ̣t Nam phân lâ ̣p ta ̣i thành phố Hờ Chí Minh năm 2013 (HCM7 – LC214969, HCM8 – LC216907 HCM20 – LC216910), chủng của Trung Quố c (KR611522, MF467242, MF918379, MF467229, KY937658, GU380303), chủng CU21 (MH711902) của Thái Lan và chủng 5MLG (MH660909) của Mông Cổ Sự khác biê ̣t của các chủng CPV-2c cũng đươ ̣c thể hiê ̣n ở vi ̣ trı́ amino acid 267 và 324 hình 4.6 Tuy nhiên, hai vị trı́ này không quyế t đinh ̣ cho tı́nh kháng nguyên của CPV-2c 39 Bảng 4.2 Bảng so sánh tỷ lê ̣ đồ ng nhấ t nucleotide và tỷ lê ̣ tương đồ ng amino acid của các chủng CPV 1 10 11 12 13 14 15 16 17 18 99.8 100 100 100 100 99.1 99.1 98.8 99.1 99.0 99.0 99.1 99.1 97.4 97.3 97.4 98.1 99.7 99.8 99.8 99.8 99.8 99.0 99.0 98.6 99.0 98.8 98.8 99.0 97.0 97.3 97.1 97.3 97.9 CPV-2C 99.7 99.8 99.7 99.8 99.8 100 100 100 100 100 99.1 99.1 99.1 99.1 98.8 98.8 99.1 99.1 99.0 99.0 99.0 99.0 99.1 99.1 99.1 99.1 97.4 97.4 97.3 97.3 97.4 97.4 98.1 98.1 100 99.7 99.7 99.8 100 99.1 99.1 98.8 99.1 99.0 99.0 99.1 99.1 97.4 97.3 97.4 98.1 99.8 99.8 99.8 99.9 99.8 99.1 99.1 98.8 99.1 99.0 99.0 99.1 99.1 97.4 97.3 97.4 98.1 99.1 99.1 99.1 99.2 99.1 99.2 100 99.7 100 99.7 99.7 99.8 99.8 98.1 97.9 98.1 98.8 CPV-2B 99.0 98.7 98.9 98.7 98.9 98.7 99.0 98.8 99.0 99.0 99.0 98.8 99.6 99.3 99.5 99.7 100 99.7 99.7 99.3 99.7 99.3 99.8 99.5 99.8 99.5 98.1 97.8 97.9 97.6 98.1 97.8 98.8 98.5 10 99.0 98.9 98.9 99.0 98.7 99.0 99.5 99.5 99.4 99.7 99.7 99.8 99.8 98.1 97.9 98.1 98.9 11 99.0 98.9 98.9 99.0 99.0 99.0 99.6 99.7 99.4 99.7 100 99.8 99.8 98.1 97.9 98.1 98.9 CPV-2A 12 13 98.9 98.9 98.9 98.9 98.9 98.9 99.0 99.0 99.0 98.9 99.0 99.0 99.5 99.5 99.6 99.6 99.4 99.4 99.7 99.6 99.9 99.8 99.8 99.8 99.8 100 98.1 98.3 97.9 98.1 98.1 98.3 98.9 99.0 14 99.0 98.9 98.9 99.0 98.9 99.0 99.6 99.7 99.4 99.7 99.9 99.8 99.8 98.3 98.1 98.3 99.0 15 98.2 98.1 98.1 98.2 99.0 98.2 98.9 98.7 98.3 98.6 98.8 98.7 98.7 98.8 99.7 97.8 98.5 CPV-2 16 17 98.2 98.5 98.1 98.5 98.1 98.5 98.2 98.6 98.2 98.5 98.2 98.6 98.9 99.1 98.7 99.1 98.3 98.7 98.6 99.0 98.8 99.2 98.7 99.1 98.7 99.1 98.8 99.2 99.6 98.7 98.8 97.8 98.5 99.0 18 98.8 98.7 98.7 98.9 98.8 98.9 99.4 99.4 99.0 99.3 99.5 99.4 99.4 99.5 99.0 99.1 99.6 Ghi chú:, HN-VN, TH1-VN, TH2-VN, CPV-SD1412(CN)-KR611522 CPV-GX14(CN)-MF918379, HCM7(LC214969)-CPV-2C, HCM-6(VN)AB120720, CPV-436(USA)-AY742955, K031(KR)-EU009206, 10 Shonan(JP)-AB128923, 11 02B9(FR)-DQ025950, 12 CPV-339(NEW)-AY742933, 13 CPV-T37(TW)-U72698, 14 DH426(KR)-EF599096-2A, 15 PVMCAPA-M24001, 16 Raccoon(USA)-M24005, 17 CPV-HB10(CN)-GU392242, 18 CPV5US79(USA)-EU659116 *Tỷ lê ̣ đồ ng nhấ t nucleotide ở đường chéo và tỷ lê ̣ tương đồ ng amino acid ở dưới đường chéo 37 Từ bảng 4.2 cho thấ y: Các chủng CPV của Hà Nô ̣i có tı̉ lê ̣ đồ ng nhấ t nuclotide rấ t cao so với các chủng CPV-2c khác (99,6 – 100%) và so với các chủng CPV thế giới (98,1 – 100%) Các chủng nghiên cứu so với các chủng CPV-2b có tı̉ lê ̣ đồ ng nucleotide từ 98,9 – 99,2% Với các chủng CPV-2a tı̉ lê ̣ này là 98,9 – 99,0% Trong đó, chủng CPV-2 chı̉ có tı̉ lê ̣ đồ ng nhấ t 98,1 – 98,9% Mặt khác, tı̉ lê ̣ tương đồ ng amino acid của các chủng CPV nghiên cứu cũng rấ t cao so với các chủng giới (97,1 – 100%) Riêng nhóm chủng CPV-2c thı̀ tỉ lê ̣ này là 99,8 – 100% Với các chủng CPV-2b thı̀ tı̉ lê ̣ là 98,6 – 99,1% So với các chủng CPV-2a thı̀ là 97,0 – 99,1% Còn với các chủng CPV-2 thı̀ tỉ lê ̣ này chı̉ 97,1 – 98,1% Dựa trình tự nucleotide của toàn gen VP2 thu nhâ ̣n được, tiế n hành xây dựng phả hệ nguồ n gố c của chủng Hà Nô ̣i – Viê ̣t Nam nghiên cứu và 30 chủng CPV của thế giới Mố i quan ̣ loài của 33 chủng được xác đinh ̣ bằ ng MEGA 6.06 sử dụng phương pháp kết nối liền kề NJ (Neighbor-joining), với hệ số tin cậy bootstrap 1000 lần lặp lại (Tamura et al., 2013) Kế t quả đươ ̣c trình bày hình 4.7 Hình 4.7 Cây phả hệ xác định mối quan hệ loài genotype chủng CPV nghiên cứu chủng CPV khác Ghi chú: Vạch ngang cuối hình (0.001) biểu thị sai khác nucleotide (1/1000 nucleotide) theo khoảng cách di truyền nhánh Các mẫu nghiên cứu biểu thị dấu đen trước tên mẫu 38 Kế t quả hı̀nh 4.7 cho thấ y các chủng CPV tâ ̣p trung thành nhóm chı́nh, đó: - Nhóm thứ bao gồm các chủng th ̣c CPV-2c, gồ m chủng của Hà Nô ̣i nghiên cứu (TH1-VN, TH2-VN, HN-VN, chủng của Viê ̣t Nam phân lập thành phố Hồ Chı́ Minh năm 2003 (HCM7, HCM8, HCM20), chủng của Trung Quốc (GuangZhou, 0609, GX1581, SD1412, GX14, HN1617), chủng CU21 của Thái Lan và chủng 5MGL của Mông Cổ - Nhóm thứ hai bao gồm chủng CPV-2b, gồ m: chủng của Viê ̣t Nam phân lập thành phố Hồ Chı́ Minh (HCM-6, HCM-8 và HCM-23), chủng Shonan Nhật, chủng 436 My,̃ chủng K031 của Hàn Quố c và chủng Taichung của Đài Loan - Nhóm thứ ba bao gồm chủng CPV-2a, gồ m: chủng RPPV của Trung Quốc, chủng 02B9 Pháp, chủng 339 của Niu Di-lân, chủng DH426 của Hàn Quố c và chủng của Đài Loan (T37, LCPV-T1 Taiwan9) - Nhóm thứ tư gồm các chủng CPV-2, gồ m: chủng PVMCAPA, chủng HB10 của Trung Quố c và chủng của Mỹ (Raccoon, 5US79, 790312) Hai chủng TH1-VN TH2-VN nằ m chung nhánh nhỏ với Trong đó, chủng cịn lại của nghiên cứu, HN-VN, nằm chung nhánh nhỏ với chủng GX14 của Trung Quốc Điều cũng có thể lı́ giải hai chủng TH1-VN và TH2-VN thu thập cùng khoảng thời gian và khu vưc̣ điạ lý còn chủng HNVN đươ ̣c thu thâ ̣p ở điạ điể m và thời gian khác Với sự tiế n hóa không ngừng, chủng biến thể CPV-2a, CPV-2b, CPV2c ta ̣o nên khoảng cách di truyền rõ ràng với các chủng thuô ̣c CPV-2 Các biế n thể CPV-2 chủ yế u phân biệt với bằ ng amino acid 426 VP2 nên vi ̣ trı́ phả ̣ cũng gầ n Các chủng CPV-2b Việt Nam nằm tách riêng mô ̣t nhánh so với các chủng CPV-2b châu Á và có khoảng cách di truyề n gầ n với các chủng CPV2c Điều nhâ ̣n đinh ̣ các chủng CPV-2b của Viê ̣t Nam là bước đệm để tiế n hóa thành chủng CPV-2c của Viê ̣t Nam hiê ̣n Ngoài ra, kết phân tích phả ̣ cịn cho thấ y đă ̣c tı́nh phân tử ̣ gen của chủng CPV-2 có liên quan đến yế u tố điạ lý Các chủng CPV của Hà Nô ̣i nói riêng và của Việt Nam nói chung có mớ i quan hệ rấ t gần gũi với Trung Quố c Điều có thể lý giải đươ ̣c vi ̣ trı́ điạ lý Viê ̣t Nam tiế p giáp với Trung Quố c nên các chủng có sư ̣ tương đờ ng cao 39 Để theo dõi quá trình tiế n hóa của CPV-2, Zhou cs đã thu thâ ̣p phân tích tất các chuỗi gen VP2 của CPV-2 và FPV Ngân hàng gen Từ kế t quả nghiên cứu này, nhóm tác giả nhâ ̣n đinh ̣ CPV-2a là biến thể chiế m ưu thế ở châu Á và CPV-2c biế n thể chiế m ưu ở châu Âu và Mỹ Latinh (Zhou et al., 2017) Tuy nhiên, nghiên cứu của nhiề u tác giả cho thấy CPV-2c mới là biế n thể thịnh hành ta ̣i Viê ̣t Nam Theo nghiên cứu của nhóm tác giả Nguyễn Hương Quỳnh và Võ Tấn Đa ̣i năm 2015, với kı ̃ thuâ ̣t PCR 69 mẫu phân thu thâ ̣p từ những chó có triêụ chứng ói mửa, tiêu chảy ta ̣i thành phố Hồ Chı́ Minh thı̀ có 65/69 mẫu dương tı́nh với CPV-2b (94.2%) Ngoài ra, nghiên cứu cũng đã phát hiê ̣n có sư ̣ đồ ng nhiễm CPV-2b CPV-2c có 40/65 mẫu dương tı́nh với cả CPV-2b và CPV-2c (Nguyễn Hương Quỳnh và Võ Tấ n Đại, 2015) Trong đó, nghiên cứu năm 2004 của Nakamura với các xét nghiê ̣m ức chế ngưng kế t hồ ng cầu bằ ng kháng thể đơn dòng chı̉ phát hiê ̣n nhấ t CPV-2b và cho rằ ng chủng CPV-2b thịnh hành ta ̣i Viê ̣t Nam (Nakamura et al., 2004) Mặt khác, nghiên cứu của Nguyễn Văn Dũng năm 2018 đã cho thấ y cả hai chủng CPV-2a và CPV-2c đề u lưu hành ta ̣i thành phố Hờ Chí Minh và CPV-2c có xu hướng vươ ̣t trội (Nguyễn Văn Dũng và cs., 2018) Điề u này có thể cho thấ y rằ ng, chủng virus CPV-2b đã dầ n bi CPV-2c thay thế ̣ Nghiên cứu mới nhấ t của Hoang cs 257 mẫu CPV thu thập ba miền Việt Nam xác nhâ ̣n không xuấ t hiê ̣n chủng CPV-2b, đó CPV-2c chiế m tỉ lệ 97,03%; 98,89%; 96,97% (Hoang et al., 2019) Với phương pháp Realtime – PCR, nghiên cứu có đô ̣ tin câ ̣y rât cao Nghiên cứu này cũng có chung nhận đinh ̣ với là các chủng CPV-2c ta ̣i Viê ̣t Nam tương tư ̣ về mặt di truyền với các chủng CPV-2c ta ̣i Trung Quố c Ta ̣i Lào, Vannamahaxay cùng các cô ̣ng sư ̣ tiế n hành nghiên cứu và thu đươ ̣c kế t quả 94 mẫu dương tı́nh với CPV thı̀ có 91/94 mẫu là thuô ̣c nhóm CPV-2c, 03 mẫu còn la ̣i thuô ̣c nhóm CPV-2a Nhóm tác giả nhâ ̣n đinh ̣ vi ̣ trı́ đô ̣t biế n ta ̣i amino acid 370 (Q370R) là đô ̣t biế n nhấ t đă ̣c trưng cho biế n thể CPV-2c của Lào (Vannamahaxay et al., 2017) Tuy nhiên, các chủng CPV-2c của Hà Nô ̣i và các chủng CPV-2c khác nghiên cứu này cũng có đô ̣t biế n amino acid tương tư ̣ Điề u này cũng có thể đươ ̣c lý giải yế u tố điạ lý, Lào tiế p giáp với cả Viê ̣t Nam và Trung Quố c Khi phân tıć h phả ̣ nghiên cứu, các 40 tác giả cũng xác nhâ ̣n mố i quan ̣ chă ̣t chẽ giữa các chủng CPV-2c của Lào và các chủng CPV-2c mới của Trung Quố c (Vannamahaxay et al., 2017) Ta ̣i Thái Lan cũng xác nhận đã có sư ̣ xuất hiê ̣n của CPV-2c Phân tı́ch phát sinh loài cho thấ y các chủng CPV của Thái Lan có liên quan chă ̣t chẽ tới các chủng CPV-2c của châu Á , với amino acid ta ̣i các vi ̣trı́ 297A, 324I, 370R và 426E (Charoenkul et al., 2019) Theo nghiên cứu mı̀nh, Zhou nhâ ̣n định chủng CPV-2a thinh ̣ hành ta ̣i Trung Quố c châu Á (Zhou et al., 2017) Điều có thể khơng chı́nh xác với sư ̣ lan rô ̣ng và phát triể n mạnh mẽ của CPV-2c ta ̣i các quố c gia Đông Nam Á Lào, Việt Nam, Thái Lan các năm gầ n Tuy nhiên, công trı̀nh nghiên cứu có chung nhâ ̣n đinh ̣ là chủng CPV-2c ở châu Á có sư ̣ tương tư ̣ về mặt di truyền, chung nguồ n gố c tiế n hóa với và bi ̣ ảnh hưởng bởi các chủng CPV của Trung Quốc (Vannamahaxay et al., 2017; Hoang et al., 2019; Charoenkul et al., 2019) Bằng kı ̃ thuâ ̣t sinh ho ̣c phân tử và phầ n mề m tin sinh ho ̣c, nghiên cứu cho kế t với độ tin câ ̣y rấ t cao Các kế t quả nghiên cứu cho thấ y, chủng CPV2b dần ưu thế và dầ n dầ n bi ̣thay thế bởi chủng CPV-2c ta ̣i mô ̣t số quố c gia ta ̣i châu Á (Hoang Lin et al., 2019; Charoenkul et al., 2019; Vannamahaxay et al., 2017) Tı́nh đế n thời điểm tại, đã có rấ t nhiề u công trı̀nh nghiên cứu về Parvovirus chó được cơng bớ Trong đó, Trung Quố c đóng góp rấ t nhiề u công trı̀nh, từ đó khái quát được sự biế n đô ̣ng của các chủng CPV ta ̣i châu Á Ta ̣i Viê ̣t Nam, các nghiên cứu về CPV cũng và được tiế n hành mô ̣t số tỉnh thành, qua đó cũng giúp xác đinh ̣ được tình hı̀nh dich ̣ tễ ho ̣c của CPV Nghiên cứu của chúng xác nhâ ̣n có chủng CPV-2c điạ bàn Hà Nơ ̣i Đờ ng thời, kế t quả nghiên cứu cho thấ y các chủng CPV nghiên cứu có mối quan ̣ gầ n gũi mă ̣t di truyền với các chủng CPV-2c của Trung Quố c chủng CPV-2c thu nhận thành phố Hồ Chí Minh 41 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHI ̣ 5.1 KẾT LUẬN - Đã thu nhận giải trình tự tồn ch̃i gen VP2 (gồm 1755bp, mã hóa cho 584 amino acid) ba mẫu CPV thu nhận Hà Nội - Ba mẫu Canine Parvovirus nghiên cứu đươ ̣c xác đinh ̣ CPV-2c, có tỷ lệ đồng nucleotide cao (từ 98% đến 100%) so với chủng giới có mối quan hệ gần gũi với chủng Trung Quốc chủng Việt Nam thu nhận thành phố Hồ Chí Minh nhóm CPV-2c 5.2 KIẾN NGHI ̣ - Cần mở rộng điều tra, thu thập thêm nhiều mẫu CPV ta ̣i nhiề u tı̉nh thành để xác định dịch tễ học phân tử Canine Parvovirus Việt Nam 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liêụ Tiế ng Viêṭ Trầ n Ngọc Bı́ch, Trầ n Thi ̣ Thảo, Nguyễn Thi ̣ Yế n Mai, Nguyễn Quố c Viê ̣t (2013) Khảo sát tỷ lê ̣ bê ̣nh Parvovirus chó từ đến tháng tuổi ở thành phố Cần Thơ Ta ̣p chı́ Khoa ho ̣c Trường Đa ̣i học Cầ n Thơ 28 tr.15-20 Nguyễn Văn Dũng, Phan Xuân Thảo, Vũ Kim Chiến, Ken Maeda (2018) Dịch tễ học phân tử Parvovirus chó ni Thành phố Hồ Chí Minh Tạp chí KHKT Thú y tr 12-18 Đoàn Thị Thanh Hương, Nguyễn Thị Khuê, Pha ̣m Hồ ng Ngo ̣c, Nguyễn Hữu Đức, Đỗ Thị Roan, Lê Thi ̣ Kim Xuyế n, Lê Thanh Hòa (2018) Phát hiê ̣n Parvovirus type 2c chó Hà Nô ̣i năm 2017 bằ ng phương pháp sinh ho ̣c phân tử Ta ̣p chı́ KHKT Thú y XXV (8) Nguyễn Thi ̣ Yế n Mai, Trần Ngo ̣c Bı́ch, Nguyễn Phúc Khánh, Keovongphet Phuthavong,Trầ n Văn Thanh Tı̀nh hı̀nh bê ̣nh viêm ruô ̣t Parvovirus chó ta ̣i các phòng ma ̣ch thú y tỉnh Tiền Giang, Đồng Tháp thành phố Cầ n Thơ Tạp chı́ Khoa ho ̣c Trường Đa ̣i ho ̣c Cầ n Thơ 54 tr 136-142 Nguyễn Hương Quỳnh, Võ Tấn Đa ̣i (2015) Phát Parvovirus type 2b 2c chó số tỉnh/thành phía nam kỹ thuật PCR Tạp chí KHKT Thú y XXII (4) II.Tài liêụ Tiế ng Anh: Altman KD, Kelman M, Ward MP (2017) Are vaccine strain, type or administration protocol risk factors for canine parvovirus vaccine failure?Vet Microbiol 210:8-16 Appel MJG, Scott FW, Carmichael LE (1979) Isolation and immunization studies of a canine parvo-like virus from dogs with hemorrhagic enteritis Vet Res 105:156–159 Black JW, Holscher MA, Powell HS, Byerly CS (1979) Parvoviral enteritis and panleucopenia in dogs J Med Small Anim Clin 74.pp 47–50 Carmichael LE, Joubert JC, Pollock RV (1980) Hemagglutination by canine parvovirus: serologic studies and diagnostic applications Am J Vet Res 41(5):784-91 10 Carpenter JL, Roberts RM, Harpster NK, King NW, Jr (1980) Intestinal and cardiopulmonary forms of parvovirus infection in a litter of pups J Am Vet Med Assoc 176:1269–1273 43 11 Cavalli A, Martella V, Desario C, Camero M, Bellacicco AL, De Palo P, Decaro N, Elia G, Buonavoglia C (2008) Evaluation of the antigenic relationships among canine parvovirus type variants; Clin Vaccine Immunol 15:534-9 12 Charoenkul K, Tangwangvivat R, Janetanakit T, Boonyapisitsopa S, Bunpapong N, Chaiyawong S, Amonsin A (2019) Emergence of canine parvovirus type 2c in domestic dogs and cats from Thailand Transbound Emerg Dis 13 Fletcher KC, Bugster AK, Schmidt RE, Hubbard GB (1979) Parvovirus infection in maned wolves J Am Vet Med Assoc 175:897–900 14 Hayes MA, Russell RG, Mueller RW, Lewis RJ (1979) Myocarditis in young dogs associated with a parvovirus-like agent Can Vet J 20:126–132 15 Hoang M, Lin WH, Le VP, Nga BTT, Chiou MT, Lin CN (2019) Molecular epidemiology of canine parvovirus type in Vietnam from November 2016 to February 2018 Virol J 16(1):52 16 Jacob RM, Weiser MG, Hall RL, Kowalski JJ (1980) Clinic pathogenic features of canine parvoviral enteritis J Am Vet Med Assoc 16:809–813 17 Jin Haibo, Xu Ye, Shi Fushan, Hu Songhua (2019) Vaccination at different anatomic sites induces different levels of the immune responses.Res Vet Sci 122:50-55 18 Kramer JM, Meunter PC, Pollock RVH Canine parvovirus: update (1980) Vet Med Small Anim Clin 175:1541–1555 19 Mathios EM, Iris K, Timoleon SR (2016) Canine parvoviral enteritis: an update on the clinical diagnosis, treatment, and prevention Vet Med (Auckl) 7: 91–100 20 McCandlish IAP, Thompson H, Fisher EW, Cornwell HJC, Macartney J, Walton IA (1981) Canine parvovirus infection In Pract 3:5–14 21 Meunier PC, Cooper BJ, Appel MJ & Slauson DO (1984) Experimental viral myocarditis: parvoviral infection of neonatal pups Vet Pathol 21: 509–515 22 Mochizuki M, Horiuchi M, Hiragi H, San Gabriel MC, Yasuda N, Uno T (1996) Isolation of canine parvovirus from a cat manifesting clinical signs of feline panleucopenia J Clin Microbiol 34:2101–2105 23 Murphy FA, Gibbs EPJ, Horzinek M, Studdert MJ (1999) Veterinary Virology New York: Academic Press pp.169–170 24 Nicholas KB, Nicholas HB, Deerfield DW (1997) GeneDoc: Analysis and visualization of genetic variation Distributed by authors Available: 44 http://download.freedownloadmanager.org/Windows-PC/GeneDoc/FREE-2.7.html Accessed: 14 September 2016 25 Parker JS, Murphy WJ, Wang D, O'Brien SJ, Parrish CR (2001) Canine and feline parvoviruses can use human or feline transferrin receptors to bind, enter, and infect cells J Virol 75:3896-902 26 Parrish CR, Aquadro CF, Carmichael LE (1988).Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvoviruses Virology 166(2) pp 293-307 27 Parrish CR, Aquadro CF, Strassheim ML, Evermann JF, Sgro JY, Mohammed HO (1991) Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirus J Virol 65:6544-52 28 Parrish CR, Kawaoka Y (2005) The origins of new pandemic viruses: the acquisition of new host ranges by canine parvovirus and influenza A viruses Annu Rev Microbiol 59: 553–586 29 Parrish CR (1999) Host range relationships and the evolution of canine parvovirus Vet Microbiol 69:29–40 30 Reed AP, Jones EV, Miller TJ (1988) Nucleotide sequence and genome organization of canine parvovirus J Virol 62:266–276 31 Robinson WF, Huxtable CR, Pass DA (1980) Canine parvoviral myocarditis: a morphological description of the natural disease Vet Pathol 17:282–293 32 Nandi S, Manoj K (2010) Canine Parvovirus: Current Perspective; Indian J Virol 21: 31–44 33 Sime TA, Powell LL, Schildt JC, Olson EJ (2015) Parvoviral myocarditis in a 5week-old Dachshund J Vet Emerg Crit Care 25:765–769 34 Stann SE, DiGiacomo RF, Giddens WE, Evermann JF Clinical and pathological features of parvoviral diarrhoea in dogs (1984) J Am Vet Med Assoc 185:651–654 35 Tamura K, Stecher G, Peterson D, Filipski A, Kumar S (2013) MEGA 6: Molecular evolutionary genetics analysis Version 6.0 Mol Biol Evol, 30: 2725-2729 36 Tratschin JD, McMaster GK, Kronauer G, Siegl G (1982).Canine parvovirus: relationship to wild-type and vaccine strains of feline panleukopenia virus and mink enteritis virus J Gen Virol 61:33-41 45 37 Tsao J, Chapman MS, Agbandje M, Keller W, Smith K, Wu H, Luo M, Smith TJ, Rossmann MG & other authors (1991) The three-dimensional structure of canine parvovirus and its functional implications Science 251:1456–1464 38 Vannamahaxay S, Vongkhamchanh S, Intanon M, Tangtrongsup S, Tiwananthagorn S, Pringproa K3, Chuammitri P5 (2017) Molecular characterization of canine parvovirus in Vientiane, Laos Arch Virol 162(5):1355-136 39 Waner T, Mazar S, Nachmias E, Keren-Kornblatt E, Harrus S (2003) Evaluation of a dot ELISA kit for measuring immunoglobulin M antibodies to canine parvovirus and distemper virus Vet Rec 152(19):588-91 40 Waner T, Naveh A, Wudovsky I, Carmichael LE (1996) Assessment of maternal antibody decay and response to canine parvovirus vaccination using a clinic-based enzyme linked immuno sorbent assay J Vet Diagn Invest 8:427–432 41 Wang D, Yuan W, Davis I, Parrish CR (1998) Nonstructural protein-2 and the replication of canine parvovirus Virology 240:273–281 42 Wilson S, Illambas J, Siedek E, Stirling C, Thomas A, Plevová E, Sture G, Salt J (2014) Vaccination of dogs with canine parvovirus type 2b (CPV-2b) induces neutralising antibody responses to CPV-2a and CPV-2c Vaccine 32(42):5420-4 43 Xie Q, Chapman MS (1996) Canine parvovirus capsid structure, analyzed at 2.9 A resolution J Mol Biol 264:497–520 44 Zhou P, Zeng W, Zhang X, Li S (2017) The genetic evolution of canine parvovirus A new perspective PLoS One 12(3) III Tài liêụ online: 45 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 46 http://www.vetshop.com.vn/2013/03/benh-parvo-virus-o-cho.html 47 http://www.virology.wisc.edu/virusworld/images/cpv-pymol_surf01.jpg 46 ... chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài ? ?Nghiên cứu đặc tính phân tử xác định phả hệ nguồn gốc số chủng Parvovirus gây bệnh chó Hà Nội? ?? nhằm xác định genotype CPV gây bệnh chó lưu hành Hà Nội 1.1 MỤC... nhận Hà Nội Từ xác định genotype nguồn gốc phả hệ chủng CPV lưu hành 1.2 NỘI DUNG - Giải mã gen kháng nguyên VP2 số chủng CPV lưu hành Hà Nội - Xác định kiểu gen số chủng CPV lưu hành Hà Nội - Xác. .. Hồ ng Ngo ̣c Tên Luận văn: Nghiên cứu đặc tính phân tử xác định phả hệ nguồn gốc mô ̣t số chủng Parvovirus gây bệnh chó Hà Nội Ngành: Cơng nghê ̣ sinh ho ̣c Mã số: 60420201 Tên sở đào tạo: Học