HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐẬU THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU THU NHẬN VI THỂ VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG MANG DNA CỦA VI THỂ TỪ TẾ BÀO HỒNG CẦU NGƯỜI Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Đức Bách NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Đậu Thị Hiền i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc thầy giáo TS Nguyễn Đức Bách tận tình hướng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài Tôi xin cám ơn chân thành đến thầy cô Bộ môn sinh học phân tửCông nghệ sinh học ứng dụng, Bộ môn công nghệ sinh học động vật, Khoa Công nghệ sinh học, Bộ môn bệnh nông dược, Khoa Nông học tạo điều kiện thuận lợi việc sử dụng trang thiết bị, kính hiển vi huỳnh quang, máy siêu ly tâm thiết bị khác mà thực luận văn Bộ môn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Quỹ phát triển Khoa học Công nghệ (NAFOSTED) tài trợ cho đề tài nghiên cứu mã số 106-YS.06-2013.16 để tơi có điều kiện thuận lợi thực luận văn Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Tác giả luận văn Đậu Thị Hiền ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Giả thuyết khoa học 1.3 Mục tiêu nghiên cứu 1.3.1 Mục tiêu chung: 1.3.2 Mục tiêu cụ thể: 1.4 Phạm vi nghiên cứu 1.4.1 Đối tượng nghiên cứu 1.4.2 Phạm vi nghiên cứu 1.4.3 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 1.5 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tổng quan vi thể 2.2.1 Giới thiệu vi thể 2.2.2 Đặc điểm vi thể 2.2.3 Vi thể khả tương tác tế bào 2.2.4 Khả vận chuyển protein vi thể 2.2.5 Khả vận chuyển nucleic acid vi thể 10 2.2 Quá trình hình thành vi thể tế bào 10 2.3 Chức vi thể 12 2.4 Các nghiên cứu vi thể 13 iii 2.4.1 Vi thể tham gia vào q trình đơng máu 13 2.4.2 Vi thể ung thư 13 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 14 3.1 Địa điểm nghiên cứu 14 3.2 Thời gian nghiên cứu 14 3.3 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 14 3.3.1 Mẫu máu 14 3.3.2 Hóa chất 14 3.3.3 Thiết bị dụng cụ 16 3.4 Nội dung nghiên cứu 18 3.5 Phương pháp nghiên cứu 19 3.5.1 Chuẩn bị mẫu hồng cầu 19 3.5.2 Đánh giá hình thành vi thể theo thời gian bảo quản 19 3.5.3 Cảm ứng hình thành vi thể 19 3.5.4 Xác định hình thành vi thể tế bào hồng cầu 19 3.5.5 Phương pháp thu nhận vi thể 20 3.5.6 Xác định đặc điểm vi thể 22 3.5.7 Xác định khả tương tác vi thể với DNA 22 Phần Kết thảo luận 23 4.1 Ảnh hưởng thời gian lên hình thành vi thể 23 4.2 Cảm ứng hình thành vi thể 25 4.2.1 Quá trình cảm ứng 25 4.2.2 Phân tích hình thái hình thái kích thước tế bào cảm ứng 30 4.2.3 Phân tích máy đếm tế bào 31 4.3 Thu nhận xác định đặc điểm vi thể 32 4.3.1 Thu nhận vi thể 32 4.3.2 Phân tích vi thể máy đếm tế bào 32 4.3.3 Phân tích kích thước vi thể máy Nanosizer 33 4.3.4 Phân tích điện tích vi thể máy nanosizer 35 4.4 Nghiên cứu tương tác dna với vi thể 36 4.4.1 Ảnh hưởng sốc nhiệt 36 4.4.2 Ảnh hưởng xung điện 37 iv Phần Kết luận kiến nghị 39 5.1 Kết luận 39 5.2 Kiến nghị 39 Tài liệu tham khảo 40 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt A23187 Calcium Ionophore Cai2+ Ca2+ nội bào DMSO Dimethyl sulfoxide EVs Extracellular vesicles HEPES 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid LPA Lysophosphatidic acid MV Vi thể (microvesicle) PKC Protein kinase C PMA Phorbol myristate acetate PS Phosphatydilserine TFs Các yếu tố mô (Tissue Factors) vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các loại tế bào hình thành từ Evs vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Các dạng cấu trúc màng tiết từ tế bào Hình 2.2 Con đường hình thành vi thể Hình 2.3 Cơ chế tương tác MV với tế bào Hình 2.4 Cơ chế hình thành vi thể 11 Hình 2.5 Cơ chế tương tác truyền tín hiệu vi thể với tế bào đích .12 Hình 3.1 Phân tử calcium ionophore (A23187) 14 Hình 3.2 Phân tử phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 15 Hình 3.3 Phân tử lysophosphatidic acid .15 Hình 3.4 Phân tử Annexin V-FITC 16 Hình 3.5 Máy siêu ly tâm .16 Hình 3.6 Máy nanosizer .17 Hình 3.7 Kính hiển vi thường 18 Hình 3.8 Kính hiển vi huỳnh quang 18 Hình 3.9 Quy trình thu nhận vi thể .21 Hình 4.1 Thời gian ảnh hưởng lên trình hình thành vi thể .25 Hình 4.2 Sự hình thành vi thể tế bào hồng cầu 27 Hình 4.3 Sự hình thành vi thể cảm ứng PMA 30 Hình 4.4 Phân tích SEM hồng cầu bị kích thích hình thành vi thể 31 Hình 4.5 Phân tích hình thành vi thể tế bào cảm ứng .32 Hình 4.6 Phân tích vi thể sau tách siêu ly tâm 33 Hình 4.7 Phân tích kích thước vi thể máy Nanosizer .34 Hình 4.8 Ảnh hưởng môi trường đến zeta vi thể 35 Hình 4.9 Phân tích kích thước hình dạng vi thể 36 Hình 4.10 Ảnh hưởng sốc nhiệt đến khả tương tác vi thể DNA 37 Hình 4.11 Ảnh hưởng xung điện đến khả tương tác vi thể DNA 39 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Đậu Thị Hiền Tên Luận văn: “Nghiên cứu thu nhận vi thể đánh giá khả mang DNA vi thể từ tế bào hồng cầu người” Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Các thành phần tiết có nguồn gốc từ tế bào gọi extracellular vesicles (EVs) Nhiều thuật ngữ khác Evs sử dụng đơi có nhầm lẫn bao gồm exosomes, microvesicles (MV), shedding vesicles, apoptosomes thể apoptosis (apoptosis bodies) Dựa vào nguồn gốc kích thước mà EVs chia thành loại: exosome, vi thể (microvesicle/MV) apotosis bodies Trong nghiên cứu này, hình thành vi thể khả mang DNA vi thể nghiên cứu từ tế bào hồng cầu (RBCs) Dưới điều kiện bảo quản, việc hình thành vi thể từ tế bào hồng cầu quan sát Ngoài ra, theo điều kiện cảm ứng A23187, LPA PMA hình thành giải phóng vi thể nghiên cứu Các đặc điểm vi thể hình thành từ tế bào hồng cầu nghiên cứu thời gian lưu trữ điều kiện cảm ứng khác Bằng cách ly tâm khác phương pháp siêu ly tâm, hai quần thể vi thể thu nhận Phân tích số liệu nanosizer cho thấy kích thước quần thể vi thể 205,8 ± 51,4 nm 125,6 ± 31,4 nm Các hình thái vi thể quan sát SEM Sự tương tác vi thể với DNA thực cách sử dụng phương pháp sốc nhiệt xung điện Kết cho thấy phương pháp sốc nhiệt không ảnh hưởng đến khả tương tác MV DNA Tuy nhiên, diện ion Ca2 + xung điện, tương tác vi thể DNA nghiên cứu quan sát Kết cho thấy vi thể sử dụng làm vật liệu cho việc chuyển DNA Mục đích nghiên cứu Vi thể hình thành hầu hết tất tế bào, kể tế bào hồng cầu Về ngun tắc, tế bào hồng cầu người khơng có nhân vật liệu di truyền Ngoài ra, tế bào hồng cầu chiếm số lượng lớn máu không cần phải nuôi cấy tế bào Hơn nữa, tế bào hồng cầu liên hệ với tất tế bào thể ix 4.3.4 Phân tích điện tích vi thể máy nanosizer Điện tích vi thể mơi trường hay gọi zeta (zetar potential) đo máy nanosizer Trong điều kiện thí nghiệm sử dụng nước mili-Q, vi thể thu tích điện âmvới giá trị trung bình khoảng -33,6 ±18,0 (Hình 4.8) Khơng có khác biệt đáng kể zeta quần thể vi thể thu điều kiện cảm ứng khác Phân tích số liệu cho thấy giá trị zeta vi thể phụ thuộc vào môi trường phân tích bao gồm nồng độ ion pH dung dịch đệm Hình 4.8 Ảnh hưởng môi trường đến zeta vi thể 0 -7.73 zetar potential (MV) -10 -24.2 -20 -30 -37.3 -40 -50 -45.7 -53.2 -60 Ghi chú: Vi thể tách từ tế bào cảm ứ ng A23187, vi thể đo môi trường: (1) nước mili-Q; (2) NaCl 5mM, pH=7,0; (3) NaCl 15mM, pH=7,0; (4) Tris-HCl 5mM, pH=7,0; (5) TrisHCl 15mM, pH=7,0 Phân tích hình dạng kích thước vi thể SEM Vi thể sau thu nhận siêu ly tâm cố định glutaraldehyde 2% theo quy trình mơ tả Sau loại bỏ nước xử lý mẫu quét kính hiển vi SEM Kết trình bày hình 4.9 35 100 nm 200 nm A B Hình 4.9 Phân tích kích thước hình dạng vi thể Ghi chú: Hình ảnh vi thể độ phóng đại 23320 lần (A) 67700 lần (B) 4.4 NGHIÊN CỨU TƯƠNG TÁC GIỮA DNA VỚI VI THỂ Sự tương tác vi thể DNA thông số quan trọng nhằm ứng dụng vi thể để mang DNA thí nghiệm chuyển gen Trong thí nghiệm này, vi thể trộn với DNA plasmid Sự tương tác vi thể DNA thực có mặt vắng mặt Ca2+ Hai phương pháp sốc nhiệt xung điện dùng để đánh giá khả gắn (tương tác) DNA với vi thể Khả tương tác kiểm tra máy Nanosizer phương pháp sốc nhiệt xung điện 4.4.1 Ảnh hưởng sốc nhiệt Trong thí nghiệm này, mẫu thí nghiệm bao gồm vi thể, vi thể trộn với DNA, vi thể trộn với DNA có mặt mM Ca2+ Các mẫu giữ đá trước thực sốc nhiệt Sau sốc nhiệt, mẫu đặt trở lại đá phân tích máy Nanosizer Kết thu trình bày hình 4.10 36 Hình 4.10 Ảnh hưởng sốc nhiệt đến khả tương tác vi thể DNA Ghi chú: 1: Vi thể, 2: Hỗn hợp vi thể với DNA (6g),3: Hỗn hợp MVs với DNA (6g) 2mM Ca2+, 4: Sốc nhiệt (50C/45 giây) Kết cho thấy, có thay đổi kích thước vi thể sau sốc nhiệt tác động không đáng kể Về mặt chất vi thể tích điện âm (vì có mặt phosphatidylserine lớp màng ngồi) DNA tích điện âm (do có nhóm phosphate) nên khả tương tác tự nhiên khó xảy tích điện dấu Điều chứng tỏ sốc nhiệt khơng kích thích q trình gắn kết DNA với vi thể Như sốc nhiệt áp dụng để gắn DNA với vi thể cho thí nghiệm chuyển gen 4.4.2 Ảnh hưởng xung điện Trong thí nghiệm này, mẫu thí nghiệm bao gồm vi thể, vi thể trộn với DNA, vi thể trộn với DNA có mặt mM Ca2+ Các mẫu giữ đá trước thực sốc nhiệt Sau sốc nhiệt, mẫu đặt trở lại đá phân tích máy Nanosizer Kết thu trình bày hình 4.11 37 Hình 4.11Ảnh hưở ởng xung điện đến khả tương tác gi vi thể DNA Ghi chú: 1: Vi thể,, 2: DNA plasmid (6 µg), 3: Vi th thể trộn vớii DNA plasmid (6 µg), 4: Hỗn H hợp vi thể với DNA plasmid (6 µg), 3: Vi th thể trộn với mM Ca2+, 4: Hỗn hợp vi thể vớii DNA plasmidvà mM Ca2+ sốc nhiệt 50C C 45 giây, 5: H Hỗn hợp vi thể với mM Ca2+đượcc xung điện 2500 V 45 giây, 6: Hỗn hợp vi thể vvới DNA plasmid mM Ca2+ xung điện 2500 V 45 giây Kết phân tích cho th thấy, kích thước hỗn hợpp vi thể th với DNA plasmid trộn vớii mM Ca2+ tăng rõ rệt xung điện (đường ng số s 6) so với hỗn hợp vi thể vớii DNA plasmid mM Ca2+ sốc nhiệt 50C 50 45 giây (đường số 4) Điềuu ch chứng tỏ xung điện tạo hiệu ứng ng tương tác gi vi thể vớii DNA Khi m mặt DNA có mặt mM Ca2+hiệu hi xung điện thể hiệnn rõ vi th thể tương tác với (đường số 5) Hiện tượng vi thể tăng kích thướcc khơng có m mặt DNA giảii thích s kết dính vi thể dẫn đếến hình thành hạt có kích thước lớnn Sự S có mặt 2+ 2+ Ca góp phầnn m phân tử cầu nối trung gian Ca tích điện dương Kết gợii ý có th thể sử dụng xung điện để kết gắnn DNA với v vi thể cho thử nghiệm chuyểnn gen sau 38 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Trong điều kiện bảo quản 4C, hình thành vi thể bắt đầu sau tuần kéo dài đến ngày 21 Sự hình thành vi thể trình kèm với trình tự chết (apoptosis) Trong điều kiện bảo quản, tế bào thu nhỏ thể tích hình thành vi thể bề mặt tế bào Khi kích thích tế bào A23187, LPA PMA điều kiện có mặt Ca2+dẫn đến hình thành vi thể PS bề mặt màng tế bào vi thể Hiện tượng bám dính vi thể tế bào hồng cầu điều kiện cảm ứng quan sát Kết cho thấy vi thể tham gia vào hình thành cục máu đơng điều kiện cảm ứng Phân tích kích thước máy đo nanosizer cho thấy vi thể có kích thước khoảng 100-1000 nm Bằng cách ly tâm khác nhau, hai quần thể MV tách với kích thước 205,8 ± 51,4 nm 125,6 ± 31,4 nm Kết zeta vi thể cho thấy tích điện tích âm với giá trị trung bình khoảng -33,6 ±18,0nước Milli-Q Thế zeta vi thể phụ thuộc vào môi trường hòa tan vi thể Đã thử nghiệm điều kiện sốc nhiệt xung điện để thử khả tương tác mang DNA Sốc nhiệt không gây hiệu tương tác rõ rệt vi thể với DNA Tuy nhiên, điều kiện có mặt Ca2+ xung điện, khả tương tác vi thể với DNA xác định máy đo nanosizer Kết chứng tỏ sử dụng vi thể để gắn với DNA cho thí nghiệm chuyển gen 5.2 KIẾN NGHỊ Kết thu từ đề tài cung cấp thêm thơng tin chế hình thành đặc điểm vi thể Kết có ý nghĩa nghiên cứu khả hình thành vi thể tế bào hồng cầu người điều kiện sinh lý, bệnh lý điều kiện cảm ứng Dựa kết thu hiểu rõ đặc điểm vai trò vi thể q trình kết dính tế bào phát triển công cụ để chuyển gen 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Anh: Abid Hussein M.N., A.N Boing, A Sturk, C.M Hau and R Nieuwland (2007) Inhibition of microparticle release triggers endothelial cell apoptosis and detachment Thromb Haemost 98 pp 1096–1107 Akers J C., D Gonda, R Kim and B S Carter and C C Chen (2013) Biogenesis of extracellular vesicles (EV): exosomes, microvesicles, retrovirus-like vesicles, and apoptotic bodies Journal of Neuro-Oncology 113 pp 1-11 Alaarg A., R M Schiffelers, W W Van Solinge and R Van Wijk (2013) Red blood cell vesiculation in hereditary hemolytic anemia Front Physiol, 4: 365 (doi: 10.3389/fphys.2013.00365) Allan D and P Thomas (1981) Ca2+ -induced biochemical changes in human erythrocytes and their relation to microvesiculation The Biochemical journal 198 pp 433-440 Allan D., C Hagelberg, K J Kallen and C W Haest (1989) Echinocytosis and microvesiculation of human erythrocytes induced by insertion of merocyanine 540 into the outer membrane leaflet Biochimica et Biophysica Acta (BBA) – Biomembranes 986 pp 115-122 Allan D., M M Billah, J B Finean and R H Michell (1976) Release of diacylglycerol-enriched vesicles from erythrocytes with increased intracellular (Ca2+) Nature 261 pp 58-60 Allan D., P Thomas and A R Limbrick (1980) The isolation and characterization of 60 nm vesicles ('nanovesicles') produced during ionophore A23187-induced budding of human erythrocytes The Biochemical journal 188 pp 881-887 Al-Nedawi K., B Meehan, R.S Kerbel, A.C Allison and J Rak (2009) Endothelial expression of autocrine VEGF upon the uptake of tumor-derived microvesicles containing oncogenic EGFR Proc Natl Acad Sci USA, 106 pp 3794–3799 Al-Nedawi K., B Meehan, R.S Kerbel, A.C Allison and J Rak (2009) Endothelial expression of autocrine VEGF upon the uptake of tumor-derived 40 microvesicles containing oncogenic EGFR Proc Natl Acad Sci USA 106 pp 3794–3799 10 Anderson H C., R.Garimella and S E Tague (2005) The role of matrix vesicles in growth plate development and biomineralization Front Biosci 10 pp 822-37 11 Ansa R., V Sustar and M Frank (2008) Number of microvesicles in peripheral blood and ability of plasma to induce adhesion between phospholipid membranes in 19 patients with gastrointestinal diseases Blood Cells Mol Dis 41 pp 124-32 12 Antonyak M.A (2011) Cancer cell-derived microvesicles induce transformation by transferring tissue transglutaminase and fibronectin to recipient cells Proc Natl Acad Sci USA 108 pp 4852–4857 13 Antwi-baffour S., S.Kholia, Y K Aryee, E A Aryee, D Stratton, S Lange and J M Inal (2010) Human plasma membrane-derived vesicles inhibit the phagocytosis of apoptotic cells possible role in SLE Biochem Biophys Res Commun 398 pp 278-83 14 Baran J., M Baj-Krzyworzeka and K Weglarczyk (2010) Circulating tumourderived microvesicles in plasma of gastric cancer patients Cancer Immunol Immunother 59 pp 841-50 15 Barteneva, N S., E Fasler-kan, M Bernimoulin, J N Stern, E D Ponomarev, L Duckett and I A Vorobjev (2013) Circulating microparticles: square the circle BMC Cell Biol, 14 pp 23 16 Bateson M.C., D Hopwood and G Milne (1981) Oesophageal epithelial ultrastructure after incubation with gastrointestinal fluids and their components J Pathol 133 pp 33-51 17 Bazhenov D.V (1987) Intercellular relations in esophageal muscle tissues Arkh Anat Gistol Embriol; 93 :77-82 18 Berckmans R.J., A Sturk, L.M van Tienen, M.C Schaap and R Nieuwland (2011) Cell-derived vesicles exposing coagulant tissue factor in saliva Blood, 117 pp 3172–3180 19 Camus S M., J A De Moraes, P Bonnin, P Abbyad, S Le Jeune, F Lionnet, L Loufrani, L Grimaud, J C Lambry, D Charue, L Kiger, J M Renard, C Larroque, H Le Clésiau, A Tedgui, P Bruneval, C Barja-Fidalgo, A Alexandrou, P L Tharaux, C M Boulanger and O P Blanc-Brude (2015) 41 Circulating cell membrane microparticles transfer heme to endothelial cells and trigger vasoocclusions in sickle cell disease Blood 125; 24 pp 3805-3814 20 Camussi G., M.C Deregibus, S Bruno, V Cantaluppi and L Biancone (2010) Exosomes/microvesicles as a mechanism of cell-to-cell communication Kidney Int, 78 pp 838–848 21 Chairoungdua A., D.L Smith, P Pochard, M Hull and M.J Caplan (2010) Exosome release of beta-catenin: a novel mechanism that antagonizes Wnt signaling J Cell Biol 190 pp 1079–1091 22 Choi D.S., et al (2007) Proteomic analysis of microvesicles derived from human colorectal cancer cells J Proteome Res, pp 4646–4655 23 Cocucci E., G Racchetti and J Meldolesi (2009) Shedding microvesicles: artefacts no more Trends Cell Biol, 19 pp 43-51 24 Collino F., M.C Deregibus, S Bruno., et al (2010) Microvesicles derived from adult human bone marrow and tissue specific mesenchymal stem cells shuttle selected pattern of miRNAs PLoS One, 5:e11803 25 Colombo M., G Raposo and C Thery (2014) Biogenesis, secretion, and intercellular interactions of exosomes and other extracellular vesicles Annual review of cell and developmental biology, 30 pp 255-289 26 Comelli L., S Rocchiccioli, S Smirni, A Salvetti, G Signore, L Citti, M G Trivella and A Cecchettini (2014) Characterization of secreted vesicles from vascular smooth muscle cells Molecular bioSystems, 10 pp 1146-1152 27 Crescitelli R., C Lasser, T G Szabo, A Kittel, M Eldh, I Dianzani, E I Buzas and J Lotvall (2013) Distinct RNA profiles in subpopulations of extracellular vesicles: apoptotic bodies, microvesicles and exosomes Journal of extracellular vesicles, 2: 2067728 De vooght K M., C Lau, P P De laat, R Van wijk, W W Van solinge and R M Schiffelers (2013) Extracellular vesicles in the circulation: are erythrocyte microvesicles a confounder in the plasma haemoglobin assay Biochem Soc Trans, 41, 288-92 29 Del conde I., C N Shrimpton, P Thiagarajan and J A Lopez (2005) Tissuefactor-bearing microvesicles arise from lipid rafts and fuse with activated platelets to initiate coagulation Blood, 106, 1604-11 42 30 Edouard M., W Therese, C Paul, J S Sanford, J W Harvery, F.A Robert and J S Peter (2016) Defective Ca2+-InducedMicrovesiculation and Deficient Expression of Procoagulant Activity in Erythrocytes From a Patient With a Bleeding Disorder:a Study of the Red Blood Cells of Scott Syndrome Blood, 1992 79 pp 380-388 31 El andaloussi S., I Mager, X O Breakefield and M J Wood (2013) Extracellular vesicles: biology and emerging therapeutic opportunities Nat Rev Drug Discov, 12 pp 347-57 32 Escrevente C., S Keller, P Altevogt and J.Costa (2011) Interaction and uptake of exosomes by ovarian cancer cells BMC Cancer, 11 pp 108 33 Fevrier B (2004) Cells release prions in association with exosomes Proc Natl Acad Sci USA, 101 pp 9683–9688 34 Foller M., S M.Huber and F.Lang (2008) Erythrocyte programmed cell death, IUBMB Life, 60 pp 661-668 35 Fonsato V., F.Collino and M.B Herrera (2012) Human Liver Stem Cell-Derived Microvesicles Inhibit Hepatoma Growth in SCID Mice by Delivering Antitumor MicroRNAs Stem Cells, 30 :1985-98 36 Frasch S C., P M Henson, J M Kailey, D A Richter, M S Janes, V A Fadok and D L Bratton (2000) Regulation of phospholipid scramblase activity during apoptosis and cell activation by protein kinase C delta The Journal of biological chemistry, 275 pp 23065-23073 37 Giesen P.L., U.Rauch and B Bohrmann (1999) Blood-borne tissue factor: another view of thrombosis Proc Natl Acad Sci USA, 96 :2311-5 38 Ginestra A (1998) The amount and proteolytic content of vesicles shed by human cancer cell lines correlates with their in vitro invasiveness Anticancer Res, 18 pp 3433–3437 39 Ginestra A., M.D.La Placa and F Saladino (1998) The amount and proteolytic content of vesicles shed by human cancer cell lines correlates with their in vitro invasiveness Anticancer Res, 18 :3433-7 Ginestra A., Miceli D., Dolo V., et al., Membrane vesicles in ovarian cancer fluids: a new potential marker Anticancer Res, 19 :3439-45 43 40 Graves L.E., E.V Ariztia and J.R Navari (2004) Proinvasive properties of ovarian cancer ascites-derived membrane vesicles Cancer Res, 64 :7045-9 41 Gyorgy B., T G Szabo, M., Pal Z Pasztoi, P Misjak, B Aradi, V.Laszlo, E.Pallinger, E.Pap, A.Kittel, G.Nagy, A.Falus and E I Buzas (2011) Membrane vesicles, current state-of-the-art: emerging role of extracellular vesicles Cellular and Molecular Life Sciences, 68 pp 2667-2688 42 Higginbotham J.N (2011) Amphiregulin exosomes increase cancer cell invasion Curr Biol, 21 pp 779–786 43 Holme P A., N O Solum, F.Brosstad, Roger M and M Abdelnoor (1994) Demonstration of platelet-derived microvesicles in blood from patients with activated coagulation and fibrinolysis using a filtration technique and western blotting ThrombHaemost, 72 pp 666-671 44 Hron G., M Kollars and H Weber (2007) Tissue factor-positive microparticles: cellular origin and association with coagulation activation in patients with colorectal cancer Thromb Haemost, 97 pp 119-23 45 Huber V., S Fais and M Iero (2005) Human colorectal cancer cells induce T-cell death through release of proapoptotic microvesicles: role in immune escape Gastroenterology, 128 :1796-804 46 Hunter M.P., N Ismail and X Zhang (2008) Detection of microRNA expression in human peripheral blood microvesicles PLoS One, :e3694 47 Inal J M., U Kosgodage, S Azam, D Stratton, S Antwi-Baffour and S Lange, (2013) Blood/plasma secretome and microvesicles Biochimica et biophysica acta, 1834 pp 2317-2325 48 Jean-Daniel Tissota G C., R Olivier, A S Anne, D Julien, P Michel and L Niels (2013) Blood microvesicles: From proteomics to physiology Translational proteomics, pp 38-52 49 Johnstone R M., M Adam, J R Hammond, L Orr and C Turbide (1987) Vesicle formation during reticulocyte maturation Association of plasma membrane activities with released vesicles (exosomes) The Journal of biological chemistry, 262 pp 9412-9420 44 50 Kaestner L., P Steffen, D B Nguyen, J Wang, L Wagner-Britz, A Jung, C Wagner and I Bernhardt (2012) Lysophosphatidic acid induced red blood cell aggregation in vitro Bioelectrochemistry, 87 pp 89-95 51 Kim C.W., H.M Lee and T.H Lee (2002) Extracellular membrane vesicles from tumor cells promote angiogenesis via sphingomyelin Cancer Res, 62 :6312-7 52 Lang F., E Gulbins, H Lerche, S M Huber, D S Kempe and M Foller (2008) Eryptosis, a window to systemic disease Cellular physiology and biochemistry, 22 pp 373-380 53 Lee T.H (2011) Microvesicles as mediators of intercellular communication in cancerthe emerging science of cellular 'debris' Semin Immunopathol, 33 pp 455–467 54 Lee, T H., E D'asti, N Magnus, K Al-nedawi, , B Meehan and J Rak (2011) Microvesicles as mediators of intercellular communication in cancer the emerging science of cellular 'debris' Semin Immunopathol, 33 pp 455-67 55 Lutz H U and A Bogdanova (2013) Mechanisms tagging senescent red blood cells for clearance in healthy humans Front Physiol, pp 387 (doi: 10.3389/fphys.2013.00387) 56 Lutz H U., S C Liu and J Palek (1977) Release of spectrin-free vesicles from human erythrocytes during ATP depletion I Characterization of spectrin-free vesicles The Journal of cell biology, 73 pp 548-560 57 Minetti G., S Egee, D Morsdorf, P Steffen, A Makhro, C Achilli, A Ciana, J Wang, G Bouyer, I Bernhardt, C Wagner, S Thomas, A Bogdanova and L Kaestner (2013) Red cell investigations: art and artefacts Blood reviews 213, 27 pp 91-101 58 Muralidharan-Chari V., J Clancy and C Plou (2009) ARF6-regulated shedding of tumor cell-derived plasma membrane microvesicles Curr Biol, 19 pp 1875-85 59 Muralidharan-Chari V., J W Clancy, A Sedgwick and C D'Souza-Schorey (2010) Microvesicles: mediators of extracellular communication during cancer progression Journal of cell science, 123 pp 1603-1611 60 Nguyen D B., L Wagner-Britz, S Maia, P Steffen, C Wagner, L Kaestner and I Bernhardt (2011): Regulation of Phosphatidylserine Exposure in Red Blood Cells, Cellular physiology and biochemistry, 28 pp 847-856 45 61 Nguyen D B., T B Ly T., M C Wesseling, M Hittinger, A Torge, A Devitt, Y Perrieg and I Bernhardt (2016) Characterization of Microvesicles Released from Human Red Blood Cells Cell Physiol Biochem, 38 pp 1085-1099 62 Park J.E (2010) Hypoxic tumor cell modulates its microenvironment to enhance angiogenic and metastatic potential by secretion of proteins and exosomes Mol Cell Proteomics pp 1085–1099 [PMC free article] [PubMed] 63 Rak J (2010) Microparticles in cancer Semin Thromb Hemost, 36 : 888–906 64 Raposo G (1996) B lymphocytes secrete antigen-presenting vesicles J Exp Med, 183 pp 1161–1172 65 Raposo G and W Stoorvogel (2013) Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends The Journal of cell biology, 200 pp 373-383 66 Ratajczak J., K Miekus and M Kucia (2006) Embryonic stem cell-derived microvesicles reprogram hematopoietic progenitors: evidence for horizontal transfer of mRNA and protein delivery Leukemia, 20 pp 847-856 67 Rikhof B., W.T Van der Graaf and C Meijer (2008) Abundant Fas expression by gastrointestinal stromal tumours may serve as a therapeutic target for MegaFasL Br J Cancer, 99 pp 1600-6 68 Rossella C., L.Cecilia, G S.Tamas, K.Agnes., E.Maria, D.Irma, I B.Edit and L.Jan (2013) Distinct RNA profiles in subpopulations of extracellular vesicles: apoptotic bodies, microvesicles and exosomes Journal of Extracellular Vesicles 2013, 2: 20677 69 Sarkar A., S Mitra and S Mehta (2009) Monocyte derived microvesicles deliver a cell death message via encapsulated caspase-1 PLoS One, 4:e7140 70 Schiera G (2007) Neurons produce FGF2 and VEGF and secrete them at least in part by shedding extracellular vesicles J Cell Mol Med, 11 pp 1384–1394 71 Shen B., N Wu, J.M Yang and S.J Gould (2011) Protein targeting to exosomes/microvesicles by plasma membrane anchors J Biol Chem, 286 pp 14383–14395 72 Simons M and G Raposo (2009) Exosomes-vesicular carriers for intercellular communication Current opinion in cell biology, 21 pp 575-581 46 73 Skog J., T Wurdinger, R.S van, et al (2008) Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers Nat Cell Biol, 10 pp 1470–1476 74 Taylor D.D and C Gercel-Taylor (2011) Exosomes/microvesicles: mediators of cancer-associated immunosuppressive microenvironments Semin Immunopathol, 33 pp 441–454 | 75 Thery C., M Boussac, P Veron, P Ricciardi-Castagnoli, G Raposo, J Garin and S Amigorena (2001) Proteomic analysis of dendritic cell-derived exosomes: a secreted subcellular compartment distinct from apoptotic vesicles Journal of immunology, 166 pp 7309-7318 76 Thery C., M Ostrowski and E Segura (2009) Membrane vesicles as conveyors of immune responses Nature reviews Immunology, pp 581-593 77 Torr E E., D H Gardner, L Thomas, D M Goodall, A Bielemeier, R Willetts, H R Griffiths, L J Marshall and A Devitt (2012) Apoptotic cell-derived ICAM-3 promotes both macrophage chemoattraction to and tethering of apoptotic cells Cell Death Differ, 19 pp 671-679 78 Trams E G., C J Lauter, N Salem and U Jr Heine (1981) Exfoliation of membrane ecto-enzymes in the form of micro-vesicles Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes, 645 pp 63-70 79 Uralidharan-Chari V., J.W Clancy, A Sedgwick and C D'Souza-Schorey (2010) Microvesicles: mediators of extracellular communication during cancer progression J di Sci, 123 pp 1603-1611 80 Valadi H., et al., (2007) Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells Nat Cell Biol, : 654–659 81 Valenti R., V Huber, M Iero, et al., (2007) Tumor-released microvesicles as vehicles of immunosuppression Cancer Res, 67 :2912-5 82 Van Doormaal, F F Kleinjan, A.Di Nisio, M Buller, H R and Nieuwland (2009) Cell-derived microvesicles and cancer Neth J Med, 67, 266-73 83 Wagner-Britz L., J Wang, L Kaestner and I Bernhardt (2013) Protein kinase C alpha and P-type Ca channel CaV2.1 in red blood cell calcium signaling Cellular Physiology and Biochemistry, 31 pp 883-891 47 84 Yuan A., , E L Farber , A L Rapoport, , D Tejada, R Deniskin, N B Akhmedov and D B Farber (2009) Transfer of microRNAs by embryonic stem cell microvesicles PLoS One, 4, e4722 85 Zwicker J.I., B.C Furie and B Furie (2007) Cancer-associated thrombosis Crit Rev Oncol Hematol, 62 :126-36 48 ... ứng, thu nhận vi thể đánh giá khả mang DNA vi thể từ tế bào hồng cầu người để phát triển vật liệu sinh học có khả mang DNA để chuyển gene 1.3.2 Mục tiêu cụ thể: i.Cảm ứng tế bào hồng cầu trình thu. .. chuyển gene vi thể từ tế bào hồng cầu cần xác định điều kiện để tạo thành vi thể Trên sở này, đề tài: Nghiên cứu thu nhận vi thể đánh giá khả mang DNA vi thể từ tế bào hồng cầu người nhằm xác định... quy trình thu nhận vi thể cụ thể đánh giá khả mang DNA plasmid vi thể từ tế bào hồng cầu người Từ nghiên cứu này, vi c xác định khoảng thời gian kích thích chất cảm ứng lên hình thành vi thể góp