BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƢỜNG O0O ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI KÝ SINH TRÙNG TRÊN MỘT SỐ LOÀI CÁ DA TRƠN DỰA TRÊN ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ DI TRUYỀN Giảng viên hƣớng dẫn : TS Đặng Thúy Bình Sinh viên thực : Trần Thị Thanh Huyền Mã số sinh viên : 55134326 Khánh Hòa, tháng 06/2017 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƢỜNG BỘ MÔN SINH HỌC O0O ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI KÝ SINH TRÙNG TRÊN MỘT SỐ LOÀI CÁ DA TRƠN DỰA TRÊN ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ DI TRUYỀN Giảng viên hướng dẫn : TS Đặng Thúy Bình Sinh viên thực : Trần Thị Thanh Huyền Mã số sinh viên : 55134326 Khánh Hòa, tháng 06/2017 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đồ án tốt nghiệp, cố gắng nỗ lực thân, em nhận giúp đỡ, động viên từ thầy cô, anh chị, bạn bè gia đình Trước tiên em xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu, Viện Công nghệ sinh học môi trường – Trường Đại học Nha Trang tạo điều kiện cho em học tập nghiên cứu suốt năm Đại học Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn kính trọng sâu sắc đến Giáo viên hướng dẫn TS Đặng Thúy Bình tạo điều kiện giúp đỡ, động viên lúc em gặp khó khăn, hướng dẫn tận tình cho em suốt thời gian thực đồ án để em kết thúc đề tài hoàn thành đồ án tốt nghiệp thời gian Em xin chân thành cảm ơn ThS Trần Quang Sáng anh chị, bạn bè phòng thí nghiệm sinh học phân tử giúp đỡ tận tình Cảm ơn dự án NIFES (Na Uy) hỗ trợ kinh phí để hoàn thành đề tài Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình tạo cho em niềm tin, nghị lực, ủng hộ em suốt thời gian tham gia học tập hoàn thành đồ án Trong khoảng thời gian ngắn, báo cáo tốt nghiệp tránh khỏi thiếu sót mong thầy cô giáo góp ý để giúp luận văn hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Nha Trang, tháng 06 năm 2017 Sinh viên Trần Thị Thanh Huyền ii TÓM TẮT Cá da trơn Việt Nam nhiều thị trường quốc tế ưa chuộng giữ vị trí số tổng kim ngạch xuất hàng Thủy sản Việt Nam Tuy nhiên, phát triển ngành nuôi trồng thủy sản làm tăng nguy nhiễm bệnh cá ký sinh trùng gây ra, đặc biệt giai đoạn cá hương cá giống Nghiên cứu tiến hành thu tổng cộng 77 cá thể loài cá da trơn (cá lăng Hemibagrus spilopterus, cá trê đen Clarias fuscus, cá sát sọc Pangasius macronema) miền Trung, Tây Nguyên Nam Bộ Việt Nam Các loài ký sinh trùng (KST) phát hiện, bảo quản, nhuộm phân loại dựa đặc điểm hình thái Tình trạng nhiễm ký sinh trùng đánh giá thông qua tỉ lệ nhiễm (%) mật độ nhiễm (KST/cá nhiễm) Các loài KST nghiên cứu di truyền dựa vào trình tự gen 28S rRNA 18S rRNA thuộc gen nhân để xác định mối quan hệ tiến hóa loài Kết nghiên cứu phát 18 loài KST loài cá thuộc 15 giống, 11 họ, 10 bộ, lớp, loài KST chưa xác định đến loài ghi nhận diện NCHT mô tả 13 loài KST ghi nhận vật chủ chưa có báo cáo rõ ràng Tỉ lệ nhiễm mật độ nhiễm ký sinh trùng dao động loài cá khác Tỉ lệ nhiễm cao loài sán đơn chủ Cornudiscoides longicirrus (64,71%) cá lăng Hemibagrus spilopterus tỉ lệ nhiễm thấp loài sán song chủ Amurotrema sp (2,56%) cá sát sọc Pangasius macronema Mật độ nhiễm cao 33 (KST/cá nhiễm) loài sán đơn chủ Thaparocleidus campylopterocirrus cá sát sọc thấp (KST/cá nhiễm) loài giun đầu gai Corynosoma semerme cá lăng Hemibagrus spilopterus, sán song chủ Amurotrema sp cá sát sọc trùng bánh xe Trichodia nigra cá trê đen Clarias fuscus Nghiên cứu di truyền dựa trình tự gen 28S rRNA 18S rRNA cho thấy loài KST thuộc lớp sán đơn chủ song chủ nằm nhánh đồng dạng (monophyly) thể mối quan hệ gần gũi với Tuy nhiên phát sinh loài dựa trình tự 28S rRNA cho thấy không phù hợp đặc điểm hình thái di truyền mức độ mức độ họ (các loài thuộc họ Heterophyidae Opisthorchiidae xếp chung nhánh) Và khác biệt di truyền lớn giống, ngoại trừ giống Haplorchis Procerovum iii Kết đề tài bổ sung thêm dẫn liệu thành phần loài ký sinh trùng cá da trơn Việt Nam giới Từ làm sở cho nghiên cứu sâu bệnh lý vật chủ giải pháp phòng, trị thích hợp Từ khóa: cá da trơn, ký sinh trùng, 28S rRNA 18S rRNA iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC .iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH ẢNH viii LỜI MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan vùng nghiên cứu 1.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu .6 1.2.1 Cá lăng Hermobagrus spilopterus 1.2.2 Cá trê đen Clarias fuscus .7 1.2.3 Cá sát sọc Pangasius macronema 1.3 Tình hình nghiên cứu ký sinh trùng loài cá nước 1.3.1 Trên giới 1.3.1.1 Động vật nguyên sinh, sán đơn chủ, song chủ giun sán 1.3.1.2 Ấu trùng metacercariae 11 1.3.2 Ở Việt Nam 12 1.3.2.1 Động vật nguyên sinh, sán đơn chủ, song chủ giun sán .12 1.3.2.2 Ấu trùng metacercariae 13 1.4 Tổng quan mối quan hệ phát sinh loài KST cá nước 14 1.4.1 Đặc điểm hệ gen ribosome 15 1.4.2 Khảo sát mối quan hệ phát sinh loài ký sinh trùng 16 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Thời gian, địa điểm đối tượng nghiên cứu .17 2.1.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 17 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 17 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu .17 2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp thu mẫu cá da trơn 19 2.3.2 Phương pháp thu KST cá 19 2.3.3 Phương pháp kiểm tra KST 20 v 2.3.4 Phương pháp bảo quản, cố định mẫu nhuộm tiêu 21 2.3.5 Phương pháp đo KST .21 2.3.6 Khảo sát tình trạng nhiễm KST 22 2.3.7 Phương pháp phân loại KST dựa vào đặc điểm hình thái 22 2.4 Nghiên cứu đặc điểm di truyền KST số loài cá da trơn .24 2.4.1 Tách chiết DNA tổng số loài KST 24 2.4.2 Phản ứng PCR 24 2.4.3 Giải trình tự .26 2.5 Phân tích liệu xây dựng mối quan hệ phát sinh loài 26 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Thành phần đặc điểm hình thái loài ký sinh trùng loài cá nghiên cứu 30 3.2 Mô tả đặc điểm hình thái loài ký sinh trùng nghiên cứu 32 3.2.1 Ấu trùng metacercaria Procerovum cheni (Hình 3.5) 32 3.2.2 Haplorchis pumilio (Hình 3.2) .33 3.2.3 Posthodiplostonum minimum .35 3.2.4 Amurotrema sp 37 3.2.5 Gyrodactylus sp 38 3.2.6 Bychowskyella tchangi 40 3.2.7 Thaparocleidus sp 41 3.2.8 Mizelleus siamensis 43 3.2.9 Cornudiscoides longicirrus 45 3.2.10.Contracaecum sp 47 3.2.11.Corynosoma semerme 49 3.2.12.Monobothrioides woodlandi 50 3.3.13 Trichodina nigra Lom (1960) 51 3.3 Tỉ lệ nhiễm mật độ nhiễm loài KST loài cá nghiên cứu 52 3.4 Nghiên cứu di truyền loài ký sinh trùng cá da trơn .55 3.4.1 Khuếch đại đoạn gen 28S rRNA 18S rRNA loài KST 55 3.4.2 Xây dựng phát sinh loài loài ký sinh trùng 57 3.4.2.1 Mối quan hệ tiến hóa gen 28S rRNA loài KST 57 3.4.2.2 Mối quan hệ tiến hóa gen 18S rRNA loài KST 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .63 TÀI LIỆU THAM KHẢO .64 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu viết tắt Ý nghĩa KST Ký sinh trùng TLN Tỉ lệ nhiễm MĐN Mật độ nhiễm Cm Centimeter Mm Milimeter µl Microliter µm Micrometer G Gram M Meter Ng Nanogram Cs Cộng mtDNA Mitochondrial Deoxyribonucleic acid rRNA Ribosomal Ribonucleic acid PCR Polymerase Chain Reaction Os Oral sucker Vs Ventral sucker In Intestine N Số lượng mẫu kiểm tra NXB Nhà xuất NCHT Nghiên cứu SLDC Sán đơn chủ SLSC Sán song chủ vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Số lượng, chiều dài khối lượng loài cá nghiên cứu 19 Bảng 2.2 Trình tự đoạn mồi sử dụng cho phản ứng PCR 24 Bảng 2.3 Thông tin 12 loài KST sử dụng gen 28S rRNA NCHT 15 loài GenBank 28 Bảng 2.4 Thông tin 12 loài KST sử dụng gen 28S rRNA NCHT 15 loài GenBank 29 Bảng 3.1 Danh sách loài KST thu loài cá da trơn (Dấu “_” loài mô tả hình thái) 31 Bảng 3.2 So sánh tiêu phân loại loài Procerovum cheni 33 Bảng 3.4 Tỉ lệ nhiễm mật độ nhiễm loài KST 53 viii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Các địa điểm thu mẫu Cá NCHT Hình 1.2 Cá lăng Hemibagrus spilopterus Hình 1.3 Cá trê đen Clarias fuscus Hình 1.4 Cá sát sọc Pangasius macronema Hình 1.5 Vùng rDNA (5.8S, 18S, 28S) vi sinh vật nhân thực 15 Hình 2.1 Sơ đồ khối nghiên cứu 18 Hình 2.2 Chu trình nhiệt PCR với gen 28S rRNA (Cặp mồi LSU-5, 1500R) 25 Hình 2.3 Chu trình nhiệt phản ứng PCR với gen 28S rRNA (Cặp mồi C1, D2 cặp mồi ThaF, ThaR) 25 Hình 2.4 Chu trình nhiệt phản ứng PCR với gen 18S Rrna 26 Hình 3.1 Hình dạng cấu tạo Procerovum cheni 32 Hình 3.2 Hình dạng cấu tạo Haplorchis pumlio 34 Hình 3.3 hình dạng cấu tạo Posthodiplostonum minimum 36 Hình 3.4 Hình dạng cấu tạo Amurotrema sp 38 Hình 3.5 Hình dạng cấu tạo Gyrodactylus sp 39 Hình 3.6 hình dạng cấu tạo Bychowskyella tchangi 41 Hình 3.7 Hình dạng cấu tạo Thaparocleidus sp 42 Hình 3.8 Hình dạng cấu tạo Mizelleus siamensis 44 Hình 3.9 hình dạng cấu tạo Cornudiscoides longicirrus 46 Hình 3.10 Hình dạng cấu tạo Contracaecum sp 48 Hình 3.11 Hình dạng cấu tạo Corynosoma semerme 49 Hình 3.12 Hình dạng cấu tạo Monobothrioides woodland 51 Hình 3.13 Hình dạng cấu tạo Trichodina nigra 52 Hình 3.14 Kết điện di sản phẩm PCR đoạn gen 28S rRNA 18S rRNA loài KST loài cá da trơn 56 Hình 3.15 Cây phát sinh loài dựa vào trình tự gen 28S rRNA loài KST số loài cá da trơn (bootstrap 1000) Các loài ký hiệu mã số lấy từ GenBank 57 Hình 3.16 Cây phát sinh loài dựa vào trình tự gen 18S rRNA loài KST số loài cá da trơn (bootstrap 1000) Các loài ký hiệu mã số lấy từ GenBank 61 PHỤ LỤC STT Nội dung Số trang Cách đo loài KST Quy trình tách chiết DNA kít Qiagen phương pháp tiêu Trình tự bắp cặp cặp mồi ThF, ThaR 18SpF, 18SpR Thông số hình thái loài KST NCHT Sự tương đồng trình tự 22 loài phân tích di truyền gen 28S rRNA Sự tương đồng trình tự 22 loài phân tích di truyền gen 18S rRNA Một số hình ảnh nhuộm soi tươi mẫu KST Phụ lục Cách đo loài KST a1 Hình Cách đo quan trùng bánh xe a2 a1 Đường kính thể b2 b1 a2 đường kính đĩa bám b1 Chiều dài móc bám b2 Chiều dài móc bám A2 E F A1 C il D ol G B Hình Cách đo quan sán đơn chủ Monogenean A1 Chiều dài thể, A2 Chiều rộng thể B Chiều dài đĩa bám C Móc lưng (ir Chiều dài gốc bên trong, or Chiều dài gốc bên ngoài) D.Chiều dài lưng E Móc bụng F Chiều dài bụng G Chiều dài quan giao cấu (bao gồm ống giao cấu gai kitin) Hình Cách đo thông số hình thái ấu trùng metacercariae A Metacercariae thoát nang B Metacercariae nan a1 Chiều dài thể, a2 Chiều rộng thể, b1 Chiều rộng giác miệng b2 Chiều dài giác miệng, c1 Chiều rộng tinh hoàn, c2 Chiều dài tinh hoàn d Chiều dài thực quản, e Chiều dài gai sinh dục f1 Chiều dài bào nang, f2 Chiều rộng bào nang Hình Cách đo quan Giun tròn Nematode A Chiều dài thực quản B Chiều dài môi lưng, bụng C Chiều dài mấu nhọn Hình Cách đo quan Giun đầu gai Acanthocephala A1 Chiều rộng thể A2 Chiều dài thể B1 Chiều rộng tinh hoàn B2 Chiều dài tinh hoàn C1 Chiều rộng vòi C2 Chiều dài vòi D1 Chiều rộng móc D2 Chiều dài móc A1 B1 B2 B1 A1 A2 C2 A2 C1 D2 D1 Hình Cách đo thông số sán song chủ Trematoda Hình Cách đo thông số sán dây Cestoda A1 Chiều rộng thể, A2 Chiều dài thể, B1 Chiều dài phần đầu A1 Chiều dài thể, A2 Chiều rộng thể, B1 Chiều dài tinh hoàn, B2 Chiều rộng tinh hoàn, C1 Chiều rộng buồng trứng, C2 Chiều dài buồng trứng, D1 Chiều dài giác bụng, D2 Chiều rộng giác bụng Phụ lục Quy trình tách chiết DNA kit Qiagen phƣơng pháp tiêu NCHT Quy trình tách chiết DNA kit Qiagen Hút mẫu KST cho vào tube 1,5ml (kí hiệu mẫu) Thêm 180µl đệm ATL + 20µl proteinase K, mix Ủ 560C mẫu tan hoàn toàn, mix 15 giây Thêm 4µl RNase A, mix Đợi phút nhiệt độ phòng, vortex 15 giây Thêm 200μl Buffer AL, mix Ủ 700C vòng 10 phút Thêm 200μl ethanol (96 – 1000C), mix Dùng pipet hút toàn dịch chuyển sang tube có cột lọc 2ml (có sẵn) (kí hiệu tương ứng) Ly tâm 6.000g (8.000 vòng/phút) 1phút Loại bỏ dịch, thu cột lọc đặt cột lọc sang tube 2ml (có sẵn) Thêm 500μl đệm AW1, ly tâm 8000 vòng phút Loại bỏ dịch, thu cột lọc đặt cột lọc sang tube 2ml (có sẵn) Thêm 500μl đệm AW2, ly tâm phút 14.000 vòng/phút Loại bỏ dịch chuyển cột lọc sang tube 1,5ml (không có sẵn) Thêm 100μl đệm AE, ủ 3-5 phút nhiệt độ phòng, ly tâm phút 6.000g thu 100μl, bảo quản DNA -200C Phƣơng pháp tiêu tìm ấu trùng metacercariae Bước 1: Cá sau lấy mang quan nội tạng bên riêng biệt, tiếp tục cắt nhỏ phần mẫu cá lại Bước 2: Cá xay nhỏ với dung dịch tiêu Bước 3: Chuyển mẫu xay vào cốc thủy tinh 1000 ml có chứa dung dịch tiêu (8 ml pepsin + ml dung dich HCl 1000 ml nước cất) Bước 4: Cho mẫu vào tủ ấm 370C 2-3 Bước 5: Sau tiến hành lọc với lưới lọc kích thước 1x1 mm Bước 6: Sản phẩm bị tiêu thu sau lọc rửa qua nước muối sinh lý (NaCl 0,85%), để lắng cho phần lắng cặn dễ quan sát Bước 7: Giữ phần cặn loại bỏ dịch nhẹ nhàng Bước 8: Lặp lại 7-8 lần chất lắng trở nên Bước 9: Chuyển lượng nhỏ chất lắng vào đĩa peptri chứa nước muối sinh lý (NaCl 0,86%) Bước 10: Xoay nhẹ đĩa peptri tay cho chất lắng tập trung vào Bước 11: Dùng pipet loại bỏ nhẹ phần dịch Bước 12: Quan sát phần lắng kính soi kiểm tra số lượng metacercariae Phụ lục Trình tự bắt cặp mồi cặp mồi thiết kế NCHT 1, Cặp mồi ThaF ThaR 2, Cặp mồi 18SpF 18SpR Phụ lục Đặc điểm, thông số hình thái loài KST tong NCHT Haplorchis taichui Bộ (Order): Opisthorchiida La Rue, 1957 Họ (Family): Heterophyidae Leiper, 1909 Giống (Genus): Haplorchis Looss, 1899 Vật chủ: Cá sát sọc Cơ quan ký sinh: Cơ Thông số hình thái loài Haplorchis taichui Nghiên cứu (n=3) Haplorchis taichui Chiều dài (μm) 220 Chiều rộng (μm) 165,5 ± 0,5 Số gai quanh giác bám giao phối (*) 16 Giác miệng (µm) Chiều dài 28,5 ± 0,5 Chiều rộng 41 Giác bụng (μm) Chiều dài - Chiều rộng Ghi chú: Dấu (-) chưa xác định Dấu (*) tiêu quan trọng để phân loại Giá trị trình bày dạng: Giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn Đặc điểm hình thái: Bào nang hình trứng, kích thước 220 x 165,5 ± 0,5 μm, thành bào nang lớp mỏng, giác miệng có kích thước 28,5 ± 0,5 x 41 μm, giác bám giao phối (*) hình găng tay có khoảng 16 gai hình que bao xung quanh gần tuyến tiết, kích thước gai μm, giác bám bụng nằm lõm sâu vào nhánh ruột không nhìn thấy rõ, có sắc tố màu vàng nâu nằm rải rác khắp thể, túi tiết hình chữ O chiếm phần lớn phía sau thể Haplorchis yokogawai (Hình 3.3.) Bộ (Order): Opisthorchiida La Rue, 1957 Họ (Family): Heterophyidae Leiper, 1909 Giống (Genus): Haplorchis Looss, 1899 Vật chủ: Cá sát sọc Cơ quan ký sinh: Cơ Đặc điểm hình thái (n=3): Haplorchis yokogawai có bào nang hình elip kích thước 220 ± 0,5 x 165 μm, thành bào nang lớp mỏng, giác miệng có kích thước 25,5 x 41 ± 0,5μm, giác bám giao phối (*) hình chữ U có khoảng 71 xung quanh gần tuyến tiết, có sắc tố màu vàng nâu nằm rải rác khắp thể, túi tiết nhỏ hình chữ O chiếm phần lớn phía cuối thể Thảo luận Loài metacercariae nghiên cứu có đặc điểm giống với loài Haplorchis yokogawai nghiên cứu Hà ký cs (2007), Sohn cs (2009) Các thông số hình thái H yokogawai trình bày Bảng 3.5 Bảng 3.5 So sánh tiêu phân loại loài Haplorchis yokogawai Haplorchis yokogawai Hà ký cs Sohn cs (2009) (2007) Nghiên cứu (n=3) Chiều dài (μm) 240 ± 20 205 ± 35 220 ± 0,5 Chiều rộng (μm) 185 ± 25 190 ± 40 165 Răng quanh vòi sinh dục (*) 72 ± 72 ± 71 - - 25,5 - - 41 ± 0,5 Giác (µm) miệng Chiều dài Chiều rộng bụng Chiều dài Chiều rộng Ghi chú: Dấu (-) chưa xác định Dấu (*) tiêu quan trọng để phân loại Allocreadium markewitschi Os Bộ (Order): Strigeidida Ph Họ (Family): Allocreadiidae Giác (μm) Giống (Genus): Allocreadium (Koval, 1952) Vật chủ: Cá trê Cơ quan ký sinh: ruột Thông số hình thái loài Allocreadium markewitschi In Vs Pi Ov Allocreadium Kích thước Te markewitschi Kích thước thể 0,9-1,52 x 0,285-0,5 mm Kích thước giác miệng 0,19-0,4 x 0,2-0,3 mm Eg Kích thước giác bụng 0,23-1,28 x 0,23-0,31mm Kích thước hầu Kích thước tinh hoàn Kích thước buồng trứng 0,095-0,057mm Đặc điểm hình thái: Cơ thể dẹt, dài, hình bầu dục giảm dần đầu, kích thước đạt 0,9-1,52 x 0,285-0,5 mm Giác miệng gần tròn, gai, nằm phía đầu thể, giác bám phát triển với phần bám lõm vào sâu bên trong, có kích thước 0,190,4 x 0,2-0,3 mm Giác bụng dạng tròn nằm phía trước 1/3 thể phía giác miệng, bề mặt lồi lõm phía với kích thước 0,23-1,28 x 0,23-0,31mm Buồng trứng nằm trước tinh hoàn, số lượng trứng tử cung từ 12-20 Trứng lớn, hình bầu dục, có kích thước 0.095 mm chiều dài 0.057 mm chiều rộng Hệ tiết nhìn thấy cuối phía sau thể Thaparcoleidus campylopterocirrus Bộ (Oder): Dactylogyridae Bychowsky, 1937 Họ (Family): Ancyrocephalidae Bychowsky, 1937 Giống (Genus): Thaparocleidus Jain, 1952 Vật chủ: cá sát sọc Cơ quan ký sinh: Mang Đặc điểm hình thái: T campylopterocirrus có nối lưng chắn, quan giao cấu có đoạn sau uốn dạng hình chữ “D”, có kích thước chiều dài 557±20µm, chiều rộng 108±9µm Chiều dài màng lưng 41±3µm Màng nối bụng 19±2µm Chiều dài móc phía lưng 71±13µm Chiều dài móc nhọn uốn cong móc 35±7µm Móc rìa 14±2µm Camallanus oxycephalus Bộ (Oder): Spirudida Chitwood, 1933 Họ (Family): Camallanidae Railiet et Henry, 1915 Giống (Genus): Camalanus Baylis et Daubney, 1922 Vật chủ: Cá trê Cơ quan ký sinh: Ruột Đặc điểm hình thái: Giun trắng đầy đặn có kích thước trung bình, có nếp nhăn ngang nhìn rõ Bao miệng gồm có mảnh bên màu nâu vàng Thực quản gồm phần, phần phía trước ngắn Thân dài bao phủ lớp cutin mỏng, có kích thước 7,1-10,8 x 0.3-0.5 mm Đuôi tù, có mấu nhọn dài 0,12 mm Phụ lục Sự tương đồng trình tự 28 loài phân tích di truyền gen 28S rRNA 1 ID 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 0.989 0.714 0.714 0.698 0.701 0.715 0.715 0.718 0.715 0.715 0.709 0.709 0.718 0.718 0.718 0.476 0.468 0.454 0.459 0.451 0.465 0.465 0.464 0.464 0.464 0.454 0.461 0.711 0.711 0.697 0.701 0.713 0.713 0.716 0.711 0.711 0.705 0.705 0.718 0.718 0.716 0.472 0.464 0.451 0.456 0.446 0.461 0.461 0.459 0.459 0.459 0.455 0.458 0.778 0.774 0.901 0.901 0.898 0.899 0.899 0.904 0.904 0.888 0.887 0.898 0.533 0.527 0.532 0.54 0.53 0.519 0.519 0.546 0.546 0.532 0.515 0.523 0.778 0.774 0.901 0.901 0.898 0.899 0.899 0.904 0.904 0.888 0.887 0.898 0.533 0.527 0.532 0.54 0.53 0.519 0.519 0.546 0.546 0.532 0.515 0.523 0.971 0.788 0.788 0.791 0.783 0.783 0.775 0.775 0.788 0.79 0.79 0.519 0.518 0.489 0.505 0.496 0.521 0.521 0.523 0.523 0.499 0.492 0.483 0.786 0.786 0.789 0.781 0.781 0.773 0.773 0.786 0.788 0.785 0.517 0.521 0.491 0.507 0.5 0.519 0.519 0.525 0.525 0.505 0.497 0.496 0.99 0.975 0.975 0.956 0.956 0.909 0.907 0.915 0.531 0.519 0.524 0.532 0.527 0.515 0.515 0.534 0.534 0.522 0.502 0.5 0.99 0.975 0.975 0.956 0.956 0.909 0.907 0.915 0.531 0.519 0.524 0.532 0.527 0.515 0.515 0.534 0.534 0.522 0.502 0.5 0.972 0.972 0.953 0.953 0.909 0.907 0.912 0.531 0.521 0.519 0.53 0.522 0.51 0.51 0.529 0.529 0.518 0.499 0.497 0.951 0.951 0.902 0.901 0.914 0.528 0.516 0.519 0.527 0.524 0.508 0.508 0.524 0.524 0.518 0.503 0.503 0.951 0.951 0.902 0.901 0.914 0.528 0.516 0.519 0.527 0.524 0.508 0.508 0.524 0.524 0.518 0.503 0.503 0.899 0.898 0.904 0.528 0.519 0.537 0.548 0.534 0.515 0.515 0.542 0.542 0.529 0.506 0.515 0.899 0.898 0.904 0.528 0.519 0.537 0.548 0.534 0.515 0.515 0.542 0.542 0.529 0.506 0.515 0.99 0.938 0.525 0.516 0.516 0.53 0.513 0.5 0.5 0.516 0.516 0.515 0.505 0.506 0.938 0.523 0.515 0.519 0.534 0.516 0.505 0.505 0.521 0.521 0.518 0.503 0.506 0.528 0.513 0.535 0.543 0.529 0.51 0.51 0.524 0.524 0.532 0.505 0.511 0.843 0.682 0.682 0.689 0.683 0.683 0.733 0.733 0.706 0.515 0.502 0.709 0.712 0.717 0.721 0.721 0.755 0.755 0.722 0.53 0.508 0.943 0.936 0.717 0.717 0.734 0.734 0.717 0.498 0.496 0.895 0.724 0.724 0.748 0.748 0.722 0.503 0.504 0.736 0.736 0.743 0.743 0.71 0.501 0.496 0.854 0.854 0.783 0.507 0.499 0.854 0.854 0.783 0.507 0.499 0.846 0.505 0.51 0.846 0.505 0.51 0.489 0.494 0.989 ID 0.714 0.711 0.714 0.711 0.698 0.697 0.778 0.778 0.701 0.701 0.774 0.774 0.971 0.715 0.713 0.901 0.901 0.788 0.786 0.715 0.713 0.901 0.901 0.788 0.786 0.718 0.716 0.898 0.898 0.791 0.789 0.99 0.99 10 0.715 0.711 0.899 0.899 0.783 0.781 0.975 0.975 0.972 11 0.715 0.711 0.899 0.899 0.783 0.781 0.975 0.975 0.972 12 0.709 0.705 0.904 0.904 0.775 0.773 0.956 0.956 0.953 0.951 0.951 13 0.709 0.705 0.904 0.904 0.775 0.773 0.956 0.956 0.953 0.951 0.951 14 0.718 0.718 0.888 0.888 0.788 0.786 0.909 0.909 0.909 0.902 0.902 0.899 0.899 15 0.718 0.718 0.887 0.887 0.79 0.788 0.907 0.907 0.907 0.901 0.901 0.898 0.898 0.99 16 0.718 0.716 0.898 0.898 0.79 0.785 0.915 0.915 0.912 0.914 0.914 0.904 0.904 0.938 0.938 17 0.476 0.472 0.533 0.533 0.519 0.517 0.531 0.531 0.531 0.528 0.528 0.528 0.528 0.525 0.523 0.528 18 0.468 0.464 0.527 0.527 0.518 0.521 0.519 0.519 0.521 0.516 0.516 0.519 0.519 0.516 0.515 0.513 0.843 19 0.454 0.451 0.532 0.532 0.489 0.491 0.524 0.524 0.519 0.519 0.519 0.537 0.537 0.516 0.519 0.535 0.682 0.709 20 0.459 0.456 0.54 0.54 0.505 0.507 0.532 0.532 0.53 0.527 0.527 0.548 0.548 0.53 0.534 0.543 0.682 0.712 0.943 21 0.451 0.446 0.53 0.53 0.496 0.5 0.527 0.527 0.522 0.524 0.524 0.534 0.534 0.513 0.516 0.529 0.689 0.717 0.936 0.895 22 0.465 0.461 0.519 0.519 0.521 0.519 0.515 0.515 0.51 0.508 0.508 0.515 0.515 0.5 0.505 0.51 0.683 0.721 0.717 0.724 0.736 23 0.465 0.461 0.519 0.519 0.521 0.519 0.515 0.515 0.51 0.508 0.508 0.515 0.515 0.5 0.505 0.51 0.683 0.721 0.717 0.724 0.736 24 0.464 0.459 0.546 0.546 0.523 0.525 0.534 0.534 0.529 0.524 0.524 0.542 0.542 0.516 0.521 0.524 0.733 0.755 0.734 0.748 0.743 0.854 0.854 25 0.464 0.459 0.546 0.546 0.523 0.525 0.534 0.534 0.529 0.524 0.524 0.542 0.542 0.516 0.521 0.524 0.733 0.755 0.734 0.748 0.743 0.854 0.854 26 0.464 0.459 0.532 0.532 0.499 0.505 0.522 0.522 0.518 0.518 0.518 0.529 0.529 0.515 0.518 0.532 0.706 0.722 0.717 0.722 0.71 0.783 0.783 0.846 0.846 27 0.454 0.455 0.515 0.515 0.492 0.497 0.502 0.502 0.499 0.503 0.503 0.506 0.506 0.505 0.503 0.505 0.515 0.53 0.498 0.503 0.501 0.507 0.507 0.505 0.505 0.489 28 0.461 0.458 0.523 0.523 0.483 0.496 0.5 0.5 0.497 0.503 0.503 0.515 0.515 0.506 0.506 0.511 0.502 0.508 0.496 0.504 0.496 0.499 0.499 0.51 0.51 0.494 ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID 0.826 0.826 ID Allocreadium markewitschi Allocreadium lobatum EF032693 Haplorchis pumilio Haplorchis pumilio HM004173 Posthodiplostomum minimum Posthodiplostomum sp KF738450 Procerovum cheni Procerovum cheni HM004179 procerovum varium HM004182 10 Haplorchis taichui 11 Haplorchis taichui HM004181 12 Haplorchis yokogawai 13 Haplorchis yokogawai HM004177 14 Clonorchis sinensis JF823989 15 Opisthorchis viverrini JF823990 16 Metagonimus suifunensis KX387460 17 Cornudiscoides longicirrus 18 Cornudiscoides agarwali KU208071 19 Bychowskyella tchangi 20 Bychowskyella pseudobagri EF100541 21 Mizelleus siamensis 22 Thaparocleidus campylopterocirrus 23 Thaparocleidus campylopterocirrus EF100546 24 Thaparocleidus sp 25 Thaparocleidus sp.EF100555 26 Thaparocleidus infundibulovagina EF100548 27 Gyrodactylus sp 28 Gyrodactylus salaris AJ542394 Phụ lục Sự tương đồng trình tự 23 loài phân tích di truyền gen 18S rRNA 1 ID 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 0.989 0.905 0.905 0.915 0.916 0.87 0.87 0.87 0.923 0.923 0.921 0.921 0.756 0.746 0.746 0.746 0.738 0.746 0.748 0.725 0.725 0.724 0.904 0.904 0.916 0.915 0.867 0.867 0.867 0.924 0.924 0.923 0.923 0.756 0.747 0.747 0.747 0.739 0.746 0.748 0.726 0.724 0.723 0.958 0.959 0.848 0.848 0.847 0.962 0.962 0.963 0.963 0.737 0.74 0.74 0.732 0.734 0.742 0.741 0.71 0.714 0.718 0.958 0.959 0.848 0.848 0.847 0.962 0.962 0.963 0.963 0.737 0.74 0.74 0.732 0.734 0.742 0.741 0.71 0.714 0.718 0.99 0.864 0.864 0.867 0.986 0.986 0.986 0.986 0.742 0.742 0.742 0.735 0.732 0.739 0.74 0.717 0.72 0.721 0.862 0.862 0.866 0.988 0.988 0.988 0.988 0.738 0.738 0.738 0.732 0.729 0.736 0.736 0.716 0.718 0.72 0.99 0.865 0.865 0.864 0.864 0.744 0.738 0.738 0.737 0.733 0.742 0.743 0.711 0.711 0.712 0.99 0.865 0.865 0.864 0.864 0.744 0.738 0.738 0.737 0.733 0.742 0.743 0.711 0.711 0.712 0.868 0.868 0.867 0.867 0.741 0.736 0.736 0.734 0.731 0.741 0.741 0.709 0.709 0.71 0.989 0.989 0.741 0.739 0.739 0.733 0.73 0.738 0.738 0.72 0.72 0.721 0.989 0.989 0.741 0.739 0.739 0.733 0.73 0.738 0.738 0.72 0.72 0.721 0.743 0.742 0.742 0.736 0.733 0.741 0.741 0.717 0.72 0.721 0.743 0.742 0.742 0.736 0.733 0.741 0.741 0.717 0.72 0.721 0.905 0.905 0.905 0.908 0.906 0.915 0.788 0.789 0.785 0.983 0.918 0.91 0.912 0.807 0.803 0.802 0.983 0.918 0.91 0.912 0.807 0.803 0.802 0.92 0.911 0.913 0.807 0.804 0.802 0.978 0.974 0.804 0.803 0.802 0.982 0.801 0.798 0.799 0.805 0.802 0.801 0.985 0.967 0.989 ID 0.905 0.904 0.905 0.904 0.915 0.916 0.958 0.958 0.916 0.915 0.959 0.959 0.99 0.87 0.867 0.848 0.848 0.864 0.862 0.87 0.867 0.848 0.848 0.864 0.862 0.87 0.867 0.847 0.847 0.867 0.866 0.99 0.99 10 0.923 0.924 0.962 0.962 0.986 0.988 0.865 0.865 0.868 11 0.923 0.924 0.962 0.962 0.986 0.988 0.865 0.865 0.868 12 0.921 0.923 0.963 0.963 0.986 0.988 0.864 0.864 0.867 0.989 0.989 13 0.921 0.923 0.963 0.963 0.986 0.988 0.864 0.864 0.867 0.989 0.989 14 0.756 0.756 0.737 0.737 0.742 0.738 0.744 0.744 0.741 0.741 0.741 0.743 0.743 15 0.746 0.747 0.74 0.74 0.742 0.738 0.738 0.738 0.736 0.739 0.739 0.742 0.742 0.905 16 0.746 0.747 0.74 0.74 0.742 0.738 0.738 0.738 0.736 0.739 0.739 0.742 0.742 0.905 17 0.746 0.747 0.732 0.732 0.735 0.732 0.737 0.737 0.734 0.733 0.733 0.736 0.736 0.905 0.983 0.983 18 0.738 0.739 0.734 0.734 0.732 0.729 0.733 0.733 0.731 0.73 0.73 0.733 0.733 0.908 0.918 0.918 0.92 19 0.746 0.746 0.742 0.742 0.739 0.736 0.742 0.742 0.741 0.738 0.738 0.741 0.741 0.906 0.91 0.91 0.911 0.978 20 0.748 0.748 0.741 0.741 0.74 0.736 0.743 0.743 0.741 0.738 0.738 0.741 0.741 0.915 0.912 0.912 0.913 0.974 0.982 21 0.725 0.726 0.71 0.71 0.717 0.716 0.711 0.711 0.709 0.72 0.72 0.717 0.717 0.788 0.807 0.807 0.807 0.804 0.801 0.805 22 0.725 0.724 0.714 0.714 0.72 0.718 0.711 0.711 0.709 0.72 0.72 0.72 0.72 0.789 0.803 0.803 0.804 0.803 0.798 0.802 0.985 23 0.724 0.723 0.718 0.718 0.721 0.72 0.712 0.712 0.71 0.721 0.721 0.721 0.721 0.785 0.802 0.802 0.802 0.802 0.799 0.801 0.967 ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID 0.976 0.976 ID Allocreadium markewitschi Allocreadium neotenicum JX983204 Haplorchis pumilio Haplorchis pumilio HM004195 Procerovum cheni Procerovum varium HM004199 Posthodiplostomum minimum Posthodiplostomum minimum AY245767 Posthodiplostomum sp KF738455 10 Haplorchis taichui 11 Haplorchis taichui HM004197 12 Haplorchis yokogawai 13 Haplorchis yokogawai HM004198 14 Cornudiscoides longicirrus 15 Bychowskyella tchangi 16 Bychowskyella tchangi KT852455 17 Bychowskyella fossilisi KT852454 18 Mizelleus siamensis 19 Thaparocleidus sp 20 Thaparocleidus campylopterocirrus 21 Gyrodactylus sp 22 Gyrodactylus rhodei AJ567670 23 Gyrodactylus salmonis JN230350 MỘT SỐ HÌNH ẢNH NHUỘM VÀ SOI TƢƠI MẪU KST TRONG NCHT Haplorchis pumilio Corynosoma semerme Procerovum cheni Trichodina nigra Gyrodactylus sp Posthodiplostonum minimum ... NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƢỜNG BỘ MÔN SINH HỌC O0O ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN LOÀI KÝ SINH TRÙNG TRÊN MỘT SỐ LOÀI CÁ DA TRƠN DỰA TRÊN ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI VÀ DI TRUYỀN... dẫn, Em nhóm nghiên cứu tiến hành đề tài Nghiên cứu thành phần loài ký sinh trùng số loài cá da trơn dựa đặc điểm hình thái di truyền Mục tiêu nghiên cứu Mục đích đề tài nghiên cứu nhằm khảo... nhiễm ký sinh trùng loài cá nghiên cứu  Khảo sát mối quan hệ phát sinh loài loài ký sinh trùng loài cá da trơn Việt Nam 3 Ý nghĩa đề tài Nghiên cứu cung cấp thêm liệu thành phần loài ký sinh trùng