BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM VĂN MINH MÃ SINH VIÊN: 1101337 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO ARTESUNAT SỬ DỤNG POLY(ACID LACTIC-CO-GLYCOLIC) BAO POLYETHYLEN GLYCOL KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2016 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NÔI PHẠM VĂN MINH MÃ SINH VIÊN: 1101337 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO ARTESUNAT SỬ DỤNG POLY(ACID LACTIC-COGLYCOLIC) BAO POLYETHYLEN GLYCOL KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Ngọc Chiến ThS Hoàng Thị Hương Nơi thực hiện: Viện Công Nghệ Dược phẩm Quốc gia Bộ môn Công Nghiệp Dược HÀ NỘI - 2016 LỜI CẢM ƠN Lời xin tỏ lòng biết ơn chân thành PGS.TS Nguyễn Ngọc Chiến, người thầy giàu kinh nghiệm đầy nhiệt huyết định hướng, giúp đỡ thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới DS Hoàng Thị Hương, người chị hỗ trợ, hướng dẫn trình làm thực nghiệm Tôi xin chân thành cảm ơn NCS Hồ Hoàng Nhân, Th.S Bùi Thị Lan Phương, DS Bùi Thị Vân, người anh, người chị dìu dắt bảo suốt thời gian qua Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, anh chị kỹ thuật viên thuộc Viện Công Nghệ Dược Phẩm Quốc Gia, Bộ môn Công Nghiệp Dược, Bộ môn Bào chế tạo điều kiên thiết bị, máy móc, dụng cụ, hóa chất thời gian giúp đỡ hoàn thành khóa luận Tôi xin cảm ơn Ban Giám Hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo Phòng ban khác, thầy cô cán công nhân viên trường Đại Học Dược Hà Nội dạy bảo, tạo điều kiện cho học tập rèn luyện để hoàn thành khóa học trường Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, bạn bè, người thân bên cạnh ủng hộ động viên giúp đỡ suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 06 tháng năm 2016 Sinh viên Phạm Văn Minh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN 1.1 VÀI NÉT VỀ TIỂU PHÂN NANO POLYME 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Một số phương pháp bào chế tiểu phân nano polyme 1.1.3 Đặc điểm phân bố tiểu phân nano dùng tiêm tĩnh mạch 1.2 TỔNG QUAN VỀ ARTESUNAT 1.2.1 Công thức 1.2.2 Tính chất lý hóa, định tính, định lượng 1.2.3 Dược động học 1.2.4 Tác dụng dược lý 1.3 VÀI NÉT VỀ CHẤT MANG PLGA 1.3.1 Cấu trúc 1.3.2 Tính chất ứng dụng 1.3.3 Một số hạn chế sử dụng PLGA 1.4 VÀI NÉT VỀ CHẤT MANG PEG 1.4.1 Cấu trúc, tính chất 1.4.2 Ứng dụng 1.5 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ ARTESUNAT VÀ HỆ NANO SỬ DỤNG PLGA VÀ PEG 10 1.5.1 Một số nghiên cứu bào chế hệ nano artesunat 10 1.5.2 Một sô nghiên cứu bào chế tiểu phân nano sử dụng kết hợp polyme PLGA PEG ……….…………………………………………………………………………11 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 14 2.1.1 Nguyên vật liệu 14 2.1.2 Thiết bị 15 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 15 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.3.1 Phương pháp bào chế tiểu phân nano artesunat sử dụng PLGA-PEG 16 2.3.2 Các phương pháp đánh giá 17 2.3.3 Phương pháp thiết kế thí nghiệm xử lý số liệu 23 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG ART BẰNG HPLC 24 3.1.1 Độ tuyến tính 24 3.1.2 Độ đặc hiệu 24 3.1.3 Độ ổn định hệ thống 25 3.2 KẾT QUẢ BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO ART-PLGA-PEG 26 3.2.1 Kết khảo sát ảnh hưởng số yếu tố thuộc công thức bào chế 26 3.2.2 Thiết kế thí nghiệm xây dựng công thức bào chế tối ưu 30 3.2.3 Đánh giá số đặc tính tiểu phân nano ART-PLGA-PEG 35 KẾT LUẬN 41 KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ART Artesunat ACN Acetonitril DC Dược chất DCM Dicloromethan DĐVN Dược điển Việt Nam DHA Dihydroartemisinin EE Encapsulation Efficiency (hiệu suất mang thuốc) FT-IR Fourier Transform Infrared Spectroscopy (phổ hồng ngoại biến đổi) HC Hữu Proton Nuclear Magnetic Resonance H-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) HPLC High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) KLPT Khối lượng phân tử KTTP Kích thước tiểu phân LC Drug loading capacity (khả nạp thuốc) PDI Polydispersity index (chỉ số đa phân tán) PEG Polyethylen glycol PEO Polyethylen oxid PGA Poly acid glycolic PLA Poly acid lactic PLGA Poly (acid lactic-co-glycolic) PPO Polypropylen oxid PVA Polyvinyl alcol SEM Scanning Electron Microscopy (Kính hiển vi điện tử quét) XPS X-Ray Photoelectron Spectroscopy (Phổ huỳnh quang tia X) CT Công thức DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh mục nguyên vật liệu, hóa chất sử dụng 14 Bảng 2.2 Thành phần mẫu thử 18 Bảng 2.3 Thành phần mẫu trắng tá dược 19 Bảng 3.1 Mối tương quan diện tích pic nồng độ ART 24 Bảng 3.2 Kết khảo sát độ ổn định hệ thống 25 Bảng 3.3 Ảnh hưởng tỷ lệ PLGA-PEG đến đặc tính lý hóa tiểu phân nano ART-PLGA-PEG 26 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tỷ lệ dược chất/polyme đến đặc tính lý hóa tiểu phân nano ART-PLGA-PEG 28 Bảng 3.5 Ảnh hưởng tỷ lệ Tween 80 đến đặc tính tiểu phân nano ARTPLGA-PEG 29 Bảng 3.6 Ảnh hưởng tỷ lệ pha hữu cơ/nước đến đặc tính lý hóa tiểu phân nano ART-PLGA-PEG 30 Bảng 3.7 Ký hiệu mức biến độc lập 31 Bảng 3.8 Ký hiệu biến phụ thuộc điều kiện tối ưu hóa 31 Bảng 3.9 Kết tối ưu hóa phần mềm MODDE 8.0 34 Bảng 3.10.Một số đặc tính tiểu phân nano bào chế theo công thức tối ưu 35 Bảng 3.11 Độ ổn định KTTP nano ART-PLGA-PEG điều kiện ly tâm khác 37 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Sự khác siêu vi cầu siêu vi nang Hình 1.2 Công thức cấu tạo artesunat Hình 1.3 Cấu trúc hóa học thủy phân PLGA Hình 1.4 Cấu trúc hóa học PEG Hình 1.5 Tiểu phân nano PLGA bao PEG 10 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình bào chế tiểu phân nano ART-PLGA-PEG 17 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ ART 24 Hình 3.2 Mặt đáp biểu thị ảnh hưởng nồng độ Tween 80 tỷ lệ HC/nước đến KTTP nano ART-PLGA-PEG 32 Hình 3.3 Mặt đáp biểu thị ảnh hưởng nồng độ Tween 80 tỷ lệ PLGA-PEG đến PDI nano ART-PLGA-PEG 32 Hình 3.4 Mặt đáp thể ảnh hưởng tỷ lệ PLGA-PEG tỷ lệ HC/nước đến KTTP nano ART-PLGA-PEG 33 Hình 3.5 Mặt đáp biểu thị ảnh hưởng tỷ lệ PLGA-PEG tỷ lệ DC/polyme tới khả nạp thuốc nano ART-PLGA-PEG 34 Hình 3.6 Hình ảnh chụp SEM tiểu phân nano ART-PLGA-PEG 36 Hình 3.7 Ảnh hưởng tá dược bảo vệ đến độ ổn định KTTP nano thử nghiệm đông đá-rã đông 38 Hình 3.8 Đồ thị thể phần trăm giải phóng tích lũy ART từ hệ tiểu phân nano ART-PLGA-PEG hệ ART-PLGA 40 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình bào chế tiểu phân nano ART-PLGA-PEG 17 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ ART 24 Hình 3.2 Mặt đáp biểu thị ảnh hưởng nồng độ Tween 80 tỷ lệ HC/nước đến KTTP nano ART-PLGA-PEG 32 Hình 3.3 Mặt đáp biểu thị ảnh hưởng nồng độ Tween 80 tỷ lệ PLGA-PEG đến PDI nano ART-PLGA-PEG 32 Hình 3.4 Mặt đáp thể ảnh hưởng tỷ lệ PLGA-PEG tỷ lệ HC/nước đến KTTP nano ART-PLGA-PEG 33 Hình 3.5 Mặt đáp biểu thị ảnh hưởng tỷ lệ PLGA-PEG tỷ lệ DC/polyme tới khả nạp thuốc nano ART-PLGA-PEG 34 Hình 3.6 Hình ảnh chụp SEM tiểu phân nano ART-PLGA-PEG 36 Hình 3.7 Ảnh hưởng tá dược bảo vệ đến độ ổn định KTTP nano thử nghiệm đông đá-rã đông 38 Hình 3.8 Đồ thị thể phần trăm giải phóng tích lũy ART từ hệ tiểu phân nano ART-PLGA-PEG hệ ART-PLGA 40 40 Phần trăm giải phóng (%) ART-PLGA-PEG ART-PLGA 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 10 20 30 40 50 Thời gian (giờ) Hình 3.8 Đồ thị thể phần trăm giải phóng tích lũy ART từ hệ tiểu phân nano ART-PLGA-PEG hệ ART-PLGA Nhận xét: Sự giải phóng ART chia làm pha: pha giải phóng nhanh (giải phóng ạt) 24h đầu pha giải phóng chậm (gần đạt định) sau 24h Có giải phóng ạt giai đoạn đầu dược chất liên kết yếu với polyme bề mặt tiểu phân nano hấp phụ dược chất bề mặt tiểu phân nano [27], [44] Giai đoạn sau dược chất giải phóng theo chế khuếch tán qua cốt polyme ăn mòn polyme [22] Sự giải phóng dược chất tiểu phân nano ART-PLGA-PEG nhanh nhiều so với tiểu phân nano ART-PLGA Điều giải thích sự diện dược chất bề mặt tiểu phân nano lớn trình hydrat hóa nhanh có mặt PEG với chất chất thân nước [17], [23] Sự giải phóng kéo dài ART phù hợp cho mục tiêu hướng điều trị ung thư Bởi tiếp xúc lâu dài liên tục để chống lại tế bào ung thư, làm ngăn chặn phát triển yếu tố phát triển mạch máu khối u, lại an toàn so với liệu trình điều trị khác [33] 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Qua trình nghiên cứu, đề tài đạt số kết sau: Bào chế tiểu phân nano ART-PLGA-PEG - Bào chế tiểu phân nano ART-PLGA-PEG phương pháp sử dụng hệ PLGA-PEG: Sử dụng phần mềm MODDE 8.0 thiết kế 23 thí nghiệm Kết tối ưu hóa phần mềm MODDE 8.0 công thức tối ưu sau:  Tỷ lệ PLGA-PEG: 55%  Tỷ lệ dược chất/polyme: 46%  Tỷ lệ Tween 80: 1,85%  Tỷ lệ pha hữu cơ/nước: 0,15  Tổng lượng PLGA sử dụng 50 mg/5 mL DCM Đánh giá số đặc tính hệ tiểu phân nano ART-PLGA-PEG - Tiểu phân có hình cầu, KTTP khoảng 176,5 ± 2,35 nm, tương đối đồng (PDI = 0,189 ± 0,002), zeta -22,80 ± 0,17 mV, hiệu suất mang thuốc cao (92,48 ± 0,80%), khả nạp thuốc tương đối tốt (27,96 ± 0,19%) - KTTP hệ nano thay đổi theo điều kiện ly tâm khác Có thể sử dụng phương pháp ly tâm thường (12000 vòng/phút, 45 phút, 10°C) để thu hồi sản phẩm - Trong điều kiện khắc nghiệt thử nghiệm đông đá - rã đông, KTTP nano có không sử dụng tá dược bảo vệ nồng độ 5% tăng không đáng kể (Sf/Si < 1,30) - Hệ nano ART-PLGA-PEG có khả giải phóng dược chất kéo dài (thời điểm 48h phần trăm giải phóng 87,87 ± 4,62%) KIẾN NGHỊ - Đánh giá tác dụng in vitro tế bào ung thư - Đánh giá tác dụng in vivo khối u chuột TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y tế (2010), Dược điển Việt Nam IV Bộ Y tế (2007), Dược lý học, tập 2, trang 199, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phạm Xuân Chung (2004), Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm đông khô chứa Artesunat, Luận văn thạc sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội Võ Xuân Minh, Phạm Thị Minh Huệ (2013), Kỹ thuật nano liposome ứng dụng dược phẩm - mỹ phẩm, Nhà xuất Y học TIẾNG ANH Abdelwahed W., Degobert G., et al (2006), “Freeze-drying of nanoparticles: Formulation, process and storage considerations”, Advanced Drug Delivery Reviews, 58, pp 1688 – 1713 Arora G., et al (2012), "PLGA nanoparticles for peptide receptor radionuclide therapy of neuroendocrine tumors: a novel approach towards reduction of renal radiation dose", PLoS One, 7(3), pp e34019 Arunkumar R., et al (2015), “Biodegradable Poly (Lactic-co-Glycolic Acid)– Polyethylen Glycol Nanocapsules: An Efficient Carrier for Improved Solubility, Bioavailability, and Anticancer Property of Lutein”, Journal Of Pharmaceutical Sciences, 104, pp 2085–2093 Berejnov V., Husseini N.S., et al (2006), “Effects of cryoprotectant concentration and cooling rate on vitrification of aqueous solutions”, Journal of Applied Crystallography, 39, pp 244-251 Boix-Garriga E., Acedo P., et al (2015), “Poly(D, L-lactide-co-glycolide) nanoparticles as delivery agents for photodynamic therapy: enhancing singlet oxygen release and photototoxicity by surface PEG coating”, Nanotechnology, 26(36), pp 365104 10 Cheng J., Teply B.A., et al (2007), “Formulation of functionalized PLGA–PEG nanoparticles for in vivo targeted drug delivery”, Biomaterials, 28, pp 869-876 11 Crespo-Ortiz M P., Wei M Q (2011), "Antitumor activity of artemisinin and its derivatives: from a well-known antimalarial agent to a potential anticancer drug", Journal of biomedicine & biotechnology, 2012, pp 1-18 12 Danhier F., Leucoturier N., et al (2009), “Paclitaxel-loaded PEGylated PLGAbased nanoparticles: in vitro and in vivo evaluation”, Journal of Controlled Release, 133(1), pp 11-17 13 Dao T P T., Nguyen T H., et al (2014), “A new formulation of curcumin using poly(lactic-co-glycolic acid)-polyethyleneglycol diblock copolymer as carrier material”, Advances in Natural Sciences: Nanoscience and Nanotechnology, 5(3), 035013 (7 pages) 14 Date P V., et al (2010), "Freeze thaw: a simple approach for prediction of optimal cryoprotectant for freeze drying", American Association of Pharmaceutical Scientists Technology, 11(1), pp 304-13 15 Duran-Lobato M., et al (2015), “Comparative study of chitosan- and PEGcoated lipid and PLGA nanoparticles as oral delivery systems for cannabinoids”, Journal of Nanoparticle Research, 17(2), article 61 16 Efferth T., et al (2001), "The anti-malarial artesunate is also active against cancer", International Journal of Oncology, 18, pp 767-773 17 Esmaeili F., Ghahremani M H., et al (2008), “PLGA nanoparticles of different surface properties: Preparation and evaluation of their body distribution”, International Journal of Pharmaceutics, 349, pp 249–255 18 Ferenz K B., Waack I N., et al (2013), “Long-circulating poly(ethylene glycol) coated poly(lactid-co-glycolid) microcapsules as potential carriers for intravenously administered drugs”, Journal of Microencapsulation, 30(7), pp 632-642 19 Garinot M., Fievez V., et al (2007), “PEGylated PLGA-based nanoparticles targeting M cells for oral vaccination”, Journal of Controlled Release, 120(3), pp 195-204 20 Guhagarkar S A., et al (2010), "Polyethylene sebacate-doxorubicin nanoparticles for hepatic targeting", International Journal of Pharmaceutics, 401(1-2), pp 113-122 21 Ho H N., Tran T H., et al (2015), “Optimization and Characterization of Artesunate-Loaded Chitosan-Decorated Poly(D,L-lactide-co-glycolide) Acid Nanoparticles”, Journal of Nanomaterials, Article ID 674175, 12 pages 22 Khalil N M., Nascimento T C., et al (2013), “ Pharmacokinetics of curcuminloaded PLGA and PLGA-PEG blend nanoparticles after oral administration in rats”, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 101, pp 353-360 23 Li Y., Pei Y., et al (2001), “PEGylated PLGA nanoparticles as protein carriers: synthesis, preparation and biodistribution in rats”, Journal of Controlled Release, 71, pp 203-211 24 Makadia H.K et al (2011), “Poly Lactic-co-Glycolic Acid (PLGA) as Biodegradable Controlled Drug Delivery Carrier”, Polymers (Basel)., 3(3), pp 1377–1397 25 Manca M L., Mourtas S., Dracopoulos V., Fadda A M., Antimisiaris S G (2008), "PLGA, chitosan or chitosan-coated PLGA microparticles for alveolar delivery? A comparative study of particle stability during nebulization", Colloids Surf B Biointerfaces, 62(2), pp 220-231 26 Michaelis M., et al (2010), “Anti-cancer effects of artesunate in a panel of chemoresistant neuroblastoma cell lines”, Biochemical Pharmacology, 79, pp 130–136 27 Mirakabad Fatemeh Sadat Tabatabaei, et al (2014), "PLGA-Based Nanoparticles as Cancer Drug Delivery Systems", Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 15(2), pp 517-535 28 Moghimi S M., et al (1991), "Non-phagocytic uptake of intravenously injected microspheres in rat spleen: Influence of particle size and hydrophilic coating", Biochemical and Biophysical Research Communications, 177(2), pp 861-866 29 Mora-Huertas C E., Fessi H., Elaissari A (2010), "Polymer-based nanocapsules for drug delivery", Int J Pharm, 385(1-2), pp 113-42 30 Moretton M.A., Chiappetta D.A., et al (2012), “Cryoprotection – lyophilization and physical stabilization of rifampicinloaded flower-like polymeric micelles”, Journal of the Royal Society Interface, 9, pp 487-502 31 Nagavarma B.V.N et al (2012), “Different techniques for preparation of polymeric nanoparticles- a review”, Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 5, Supply 3, pp 16-23 32 Nguyen H T., et al (2014), "Enhancing the in vitro anti-cancer efficacy of artesunate by loading into poly-D,L-lactide-co-glycolide (PLGA) nanoparticles", Archives of pharmacal research, 38(5), pp 716-724 33 Parveen S., Sahoo S K (2011), "Long circulating chitosan/PEG blended PLGA nanoparticle for tumor drug delivery", European Journal of Pharmacology, 670(2-3), pp 372-383 34 Rowe R.C et al (2009), Handbook of pharmaceutical of excipients, 6th Edition, Pharmaceutical Press and American Pharmacists Association, U,S,A, pp 517522 35 Saez A., et al (2000), "Freeze drying of polycaprolactone and poly(D, L-lacticglycolic) nanoparticles induce minor particle size changes affecting the oral pharmacokinetics of loaded drugs", European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 50(3), pp 379-387 36 Sah H., Thoma L.A., et al (2013), “Concepts and practices used to develop functional PLGA-based nanoparticles systems”, International journal of nanomedicine, 8, pp 747-765 37 Singh N P., Panwar V K (2006), : Case report of a pituitary macroadenoma treated with artemehter”, “ Integrative cancer therapies, 5(4), pp 391-394 38 Timothy M E D., et al (2001), “Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Intravenous Artesunate in Severe Falciparum Malaria”, Antimicrobial Agents And Chemotherapy, 45(1), pp 181-186 39 Tran T H., Nguyen D T., et al (2015), “Development and Evaluation of Artesunate-Loaded Chitosan-Coated Lipid Nanocapsule as a Potential Drug Delivery System Against Breast Cancer”, American Association of Pharmaceutical Scientists Technology, 16(6), pp 1307-1316 40 Tran T H., Nguyen D T., Nguyen N C., et al (2016), “ Targeted and controlled drug delivery system loading artersunate for effective chemotherapy on CD44 overexpressing cancer cells”, Archives of Pharmacal Research, pp 18 41 Tran T H., Nguyen A N., et al (2016), " Enhancing activity of artesunate against breast cancer cells via induced-apoptosis pathway by loading into lipid carriers”, Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology, 11, pp 1-9 42 US National Library (2014), “Artesunate”, Pubchem Compound 43 USP (2010), “Artesunate”, USP’s Non-US Monographs Guideline 44 Vasconcelos A., Vega E., et al (2015), “conjugation of cell-penetrating peptides with poly(lactic-co-glycolic acid)-polyethylene glycol nanoparticles improves ocular drug delivery”, International Journal of Nanomedicine, 10, pp 609–631 45 Vauthier C., Bouchemal K (2009), "Methods for the preparation and manufacture of polymeric nanoparticles", Pharmaceutical research, 26(5), pp 1025-1058 46 Xiao X –C., Hong Z –G (2010), “Firstborn microcrystallization method to prepare nanocapsules containing artesunat”, International Journal of Nanomedicine, 5, pp 483-486 47 Yang N.D., Tan S H., Ng S., Shi Y., Zhou J., Tan K S., Wong W S., Shen H M (2004), “Artesunat induces cell death in human cancer cells via enhancing lysosomal function and lysosomal degradation of ferritin”, J Biol Chem, 289(48), pp 33425-41 48 Zhinqing W., et al (2007), “Preparation and invitro Studies of Stealth PEGylated PLGA Nanoparticle as Carriers for Arsenic Trioxide”, Chinese Journal of Chemical Engineering, 15(6), pp 795-801 PHỤ LỤC Phụ lục Sắc ký đồ mẫu chuẩn ART (nồng độ 90 μg/mL) Phụ lục Sắc ký đồ mẫu trắng tá dược Phụ lục 3: Sắc ký đồ toàn phần mẫu thử Phụ lục Kết xử lý phần mềm MODDE 8.0 Phụ lục Thiết kế thí nghiệm Phụ lục KTTP, số đa phân tán, zeta, hiệu suất mang thuốc tiểu phân nano ART-PLGA-PEG Phụ lục Phần trăm giải phóng tích lũy ART theo thời gian từ hệ tiểu phân nano ART-PLGA-PEG hệ ART-PLGA Phụ lục Kích thước tiểu phân PDI tiểu phân nano ART-PLGA-PEG mẫu tối ưu môi trường nước cất Phụ lục Thế zeta tiểu phân nano ART-PLGA-PEG mẫu tối ưu môi trường nước cất Phụ lục Sắc ký đồ mẫu chuẩn ART (nồng độ 90 μg/mL) Phụ lục Sắc ký đồ mẫu trắng tá dược Phụ lục 3: Sắc ký đồ toàn phần mẫu thử Phụ lục Kết xử lý phần mềm MODDE 8.0 Thông số KTTP (Y1) PDI (Y2) LC (Y3) R2 0,955 0,956 0,986 R hiệu chỉnh 0,877 0,878 0,961 0,353 0,333 0,445 P (hồi quy) 0,001 0,001 0,000 p (phù hợp) 0,063 0,184 0,168 Q Phụ lục Thiết kế thí nghiệm Tween 80 DC/Polyme (%) (%) CT1 2,0 30 0,10 55 CT2 1,25 30 0,10 55 CT3 2,0 50 0,15 100 CT4 1,25 30 0,10 10 CT5 1,25 30 0,15 55 CT6 2,0 50 0,15 10 CT7 2,0 50 0,05 100 CT8 0,5 30 0,10 55 CT9 1,25 10 0,10 55 CT10 2,0 10 0,15 100 CT11 1,25 30 0,10 100 CT12 0,5 10 0,05 100 CT13 0,5 50 0,15 10 CT14 2,0 10 0,15 10 CT15 1,25 30 0,05 55 CT16 0,5 10 0,15 100 CT17 1,25 30 0,10 55 CT18 1,25 30 0,10 55 CT19 2,0 10 0,05 10 CT20 1,25 50 0,10 55 CT21 0,5 50 0,05 10 CT22 0,5 50 0,05 100 CT23 0,5 10 0,05 10 Công thức O/W PLGA-PEG (%) Phụ lục KTTP, số đa phân tán, zeta, hiệu suất mang thuốc tiểu phân nano ART-PLGA-PEG Công thức KTTP (nm) PDI Zeta (mV) LC (%) EE (%) CT1 157,9 0,266 -33,2 19,07 86,91 CT2 178,5 0,221 -36,7 19,01 86,64 CT3 193,1 0,278 -31,9 28,11 91,22 CT4 172,9 0,187 -28,9 18,34 80,22 CT5 204,8 0,179 -29,6 17,52 79,83 CT6 171,8 0,122 -25,3 28,54 86,31 CT7 463,6 0,79 -23,5 25,69 83,35 CT8 246,9 0,269 -12 14,71 67,04 CT9 177,8 0,196 -21,6 6,91 80,65 CT10 184,4 0,248 -17,9 7,22 88,20 CT11 199,6 0,257 -20,2 17,51 83,02 CT12 157,8 0,373 -14,4 7,76 94,87 CT13 273,6 0,233 -21 30,75 92,99 CT14 164 0,156 -18,3 8,37 93,14 CT15 263 0,475 -23,5 19,08 86,95 CT16 420 0,529 -18,7 6,69 81,78 CT17 194,6 0,254 -26 20,64 94,07 CT18 185,4 0,272 -16,7 19,99 91,13 CT19 266,4 0,363 -29,3 7,94 88,28 CT20 191,9 0,215 -16,8 28,6 89,67 CT21 223,4 0,216 -21,8 28,7 86,80 CT22 155,7 0,282 -20,1 26,48 85,92 CT23 198,9 0,216 -21,8 5,55 61,76 Phụ lục Phần trăm giải phóng tích lũy ART theo thời gian từ hệ tiểu phân nano ART-PLGA-PEG hệ ART-PLGA (n=3) Phần trăm giải phóng Phần trăm giải hỗn dịch chứa tiểu phóng hỗn dịch phân nano ART- chứa tiểu phân nano PLGA-PEG (%) ART-PLGA (%) 36,66 ± 1,81 22,09 ± 1,11 43,26 ± 2,13 34,50 ± 1,43 52,58 ± 2,45 42,29 ± 2,07 60,52 ± 1,46 53,14 ± 2,40 63,28 ± 3,01 56,78 ± 2,62 10 65,26 ± 2,95 60,90 ± 2,94 12 67,54 ± 3,25 63,19 ± 3,03 18 76,94 ± 3,55 71,42 ± 3,29 21 80,97 ± 4,02 72,59 ± 3,56 24 82,04 ± 4,18 74,29 ± 3,71 28 83,55 ± 4,27 75,17 ± 3,77 32 84,77 ± 4,38 75,33 ± 3,80 36 86,11 ± 4,56 76,82 ± 3,83 48 87,87 ± 4,62 77,90 ± 4,04 Thời gian (giờ) Phụ lục Kích thước tiểu phân PDI tiểu phân nano ART-PLGA-PEG mẫu tối ưu môi trường nước cất Phụ lục Thế zeta tiểu phân nano ART-PLGA-PEG mẫu tối ưu môi trường nước cất [...]... vậy, đề tài Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano artesunat sử dụng poly (acid lactic-co-glycolic) bao polyethylen glycol được thực hiện với các mục tiêu: 1 Xây dựng được công thức bào chế tiểu phân nano artesunat sử dụng poly (acid lactic-co-glycolic) bao polyethylen glycol 2 Đánh giá được một số đặc tính lý hóa tiểu phân nano artesunat bào chế được 2 TỔNG QUAN 1.1 Vài nét về tiểu phân nano polyme 1.1.1... mang tiểu phân nano PEG thân nước định hướng phía pha nước ngoại của micell tạo lớp áo bao xung quanh tiểu phân có tác dụng như một rào cản làm giảm tương tác với các phân tử khác nên làm tăng độ ổn định [24] 10 Hình 1.5 Tiểu phân nano PLGA được bao PEG [24] 1.5 Một số nghiên cứu về artesunat và hệ nano sử dụng PLGA và PEG 1.5.1 Một số nghiên cứu bào chế hệ nano artesunat Nhằm làm tăng sinh khả dụng. .. được nghiên cứu và xác định Phương pháp được đánh giá là đơn giản, KT siêu vi nang đạt khoảng 76 nm, đồng thời tăng khả năng hòa tan của ART [46] 1.5.2 Một số nghiên cứu bào chế tiểu phân nano sử dụng kết hợp hai polyme PLGA và PEG Một trong những biện pháp nhằm khắc phục những hạn chế khi sử dụng PLGA là bao tiểu phân nano với PEG 12 Zhiqing W và cộng sự (năm 2007) đã tiến hành nghiên cứu bào chế. .. ảnh hưởng của các thành phần trong công thức và lựa chọn công thức tối ưu  Đánh giá một số đặc tính của của hệ tiểu phân nano bào chế được từ công thức tối ưu 16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp bào chế tiểu phân nano artesunat sử dụng PLGA-PEG Tiểu phân ART-PLGA-PEG được bào chế bằng phương pháp nhũ hóa và bốc hơi dung môi Cách tiến hành như sau: PLGA, PLGA-PEG và dược chất ART được hòa... bao tiểu phân với các polyme thân nước như PEG, khi đó PEG liên kết đồng hóa trị với các tiểu phân thân nước như nano albumin, nano PLGA… kéo dài thời gian bán thải  Biến tính bề mặt tiểu phân để ngăn cản quá trình thực bào: tạo ra cấu trúc cồng kềnh hoặc bao chất diện hoạt  Bao tiểu phân bằng các tác nhân phân giải màng lysosome 1.1.3.2 Phân bố đến cơ quan, tổ chức Các tiểu phân không bị thực bào. .. dụng chống ung thư in 13 vivo trên tế bào ung thư cổ tử cung cho thấy hệ nano Paclitaxel-PLGA-PEG ức chế sự phát triển của khối u tốt hơn khi so sánh với Taxol [12] Arunkumar R và cộng sự (2015) đã tiến hành nghiên cứu bào chế nano sử dụng PLGA-PEG nhằm làm tăng độ tan, sinh khả dụng và tác dụng chống ung thư của Lutein Tiểu phân nano Lutein-PLGA-PEG được bào chế bằng kỹ thuật siêu âm nhũ tương đơn... CS Kết quả đánh giá độc tính trên tế bào MCF-7 và A549 cho thấy tiểu phân nano ART-PLGA-CS có khả năng bị hấp thu bởi các tế bào này cao hơn, nghĩa là độc tính trên tế bào ung thư lớn hơn so với tiểu phân nano ART-PLGA [21] Với mục đích cải thiện tác dụng trên tế bào ung thư vú của ART, Trần Tuấn Hiệp và cộng sự (năm 2015, năm 2016) đã tiến hành bào chế nano ART sử dụng chất mang lipid bằng kỹ thuật... vi nang Tiểu phân polyme mang thuốc có đặc điểm chung là dùng polyme làm giá mang dược chất với mục đích che chở, bảo vệ dược chất, kéo dài tác dụng của dược chất và hướng dược chất tới đích tác dụng Theo cơ chế mang dược chất có thể chia làm 3 nhóm [4]: - Hệ cốt: tiểu phân nano được phân tán trong giá mang polyme, siêu vi cầu, tiểu phân lipid rắn; - Hệ màng bao: polyme bao ngoài tiểu phân nano dược... [32] Mặt khác các tiểu phân nano PLGA dễ bị bắt giữ bởi hệ thống thực bào và tương tác không đặc hiệu với protein và tế bào làm giảm hiệu quả điều trị và tăng tác dụng phụ [24], [27], [36] Do đó, nhiều nghiên cứu nhằm thay đổi các đặc tính lý hóa bề mặt của tiểu phân nano PLGA đã được thực hiện như bao tiểu phân với polyme thân nước (PEG, chitosan) để kéo dài thời gian tuần hoàn do tiểu phân thân nước... khi tiêm tĩnh mạch, sự phân bố của tiểu phân nano có thể xảy ra theo 2 hướng đó là thanh thải bằng thực bào và phân bố đến cơ qua tổ chức [4] 1.1.3.1 Thanh thải bằng thực bào Hệ thống thực bào trong cơ thể coi tiểu phân như một vật thể lạ và tiến hành thanh thải theo cơ chế bảo vệ của cơ thể Các tiểu phân có kích thước nhỏ hơn 500 nm dễ bị thanh thải hơn cả Sau khi thực bào, tiểu phân được đưa về gan,