BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ----------- ----------- ðẶNG VĂN PHÚ ðÁNH GIÁ HOẠT ðỘNG GIẾT MỔ VÀ Ô NHIỄM VI SINH VẬT TRONG THỊT LỢN TẠI MỘT SỐ CƠ SỞ GIẾT MỔ TRÊN ðỊA BÀN QUẬN LÊ CHÂN THÀNH PHỐ HẢI PHÒNG CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà SỐ : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : PGS.TS. CHU ðỨC THẮNG HÀ NỘI – 2014 LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây công trình nghiên cứu riêng tôi. Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa ñược công bố công trình khác. Tôi xin cam ñoan thông tin trích dẫn luận văn ñều ñã ñược rõ nguồn gốc. Mọi giúp ñỡ ñã ñược cảm ơn. Hà Nội, ngày 30 tháng 10 năm 2014 Tác giả luận văn ðặng Văn Phú Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hướng dẫn khoa học PGS.TS. Chu ðức Thắng ñã tận tình hướng dẫn trình nghiên cứu xây dựng luận văn. Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể thầy giáo, cô giáo Bộ môn Nội Chẩn - Dược - ðộc chất, Ban chủ nhiệm khoa Thú y – Học viện Nông Nghiệp Việt Nam ñã tạo ñiều kiện thuận lợi giúp hoàn thành luận văn. Chân thành cảm ơn Chi cục Thú y Hải Phòng, quan Thú y vùng II ñã tạo ñiều kiện cho có ñược số liệu thực tế ñể xây dựng luận văn. Nhân dịp xin trân trọng cảm ơn bạn bè, ñồng nghiệp gia ñình ñã giúp ñỡ, tạo ñiều kiện, ñộng viên trình học tập hoàn thành luận văn này. Hà Nội, ngày 30 tháng 10 năm 2014 Tác giả luận văn ðặng Văn Phú Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình ix MỞ ðẦU Tính cấp thiết ñề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình hoạt ñộng giết mổ nước 1.1.1 Tình hình giết mổ gia súc, gia cầm Hà Nội Thành phố Hồ Chí Minh 1.1.2 Tình hình giết mổ gia súc, gia cầm Thành phố Hải Phòng 1.2 Nguyên nhân gây hư hỏng thịt 1.3 ðường xâm nhập vi khuẩn vào thịt 1.4 Tình hình ngộ ñộc thực phẩm vi khuẩn giới Việt Nam 1.4.1 Khái niệm ngộ ñộc thực phẩm bệnh truyền qua thực phẩm: 1.4.2 Nguyên nhân gây ngộ ñộc thực phẩm 1.4.3 Tình hình ngộ ñộc thực phẩm vi khuẩn giới Việt Nam 12 1.5 Các nguồn ô nhiễm vi khuẩn vào thịt 15 1.5.1 Lây nhiễm từ không khí 15 1.5.2 Lây nhiễm từ nước 16 1.5.3 Lây nhiễm từ ñất 17 1.5.4 Lây nhiễm trình giết mổ 17 1.5.5 Lây nhiễm trình phân phối thực phẩm 18 1.6 Những nghiên cứu ô nhiễm vi sinh vật thực phẩm 19 1.7 Các tổ chức hoạt ñộng ATVSTP 20 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii 1.8 Một số vi khuẩn thường gặp ô nhiễm thịt ñộng vật 22 1.8.1 Tập ñoàn vi khuẩn hiếu khí 22 1.8.2 Coliform 23 1.8.3 Escherichia coli 23 1.8.4 Vi khuẩn Salmonella 25 1.8.5 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 27 1.8.6 Vi khuẩn Clostridium perfringens 28 1.9 Vệ sinh an toàn thực phẩm sở giết mổ chế biến thực phẩm 28 Chương ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 ðối tượng ñịa ñiểm nghiên cứu 34 2.2 Nội dung nghiên cứu 34 2.2.1 ðiều tra tình hình giết mổ lợn phường ñịa bàn quận Lê Chân, thành phố Hải Phòng 2.2.2 34 ðánh giá thực trạng ñiều kiện trang thiết bị, công nghệ, vệ sinh thú y ý thức người tham gia hoạt ñộng giết mổ lợn số sở giết mổ quận Lê Chân, 2.2.3 34 Xác ñịnh mức ñộ ô nhiễm vi khuẩn không khí nguồn nước sử 34 dụng giết mổ. 2.2.4 Xác ñịnh mức ñộ ô nhiễm vi khuẩn thịt lợn số sở giết mổ bao gồm tiêu: tổng số vi khuẩn hiếu khí, E. Coli, Coliform, 34 Salmonella, Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens 2.2.5 ðề xuất giải pháp quy hoạch, quản lý, công nghệ ñối với sở theo hướng giết mổ tập trung. 34 2.3 Nguyên liệu nghiên cứu 34 2.3.1 Mẫu xét nghiệm 34 2.3.2 Môi trường nuôi cấy vi khuẩn 35 2.3.3 Thiết bị máy móc, dụng cụ hoá chất dùng thí nghiệm 35 2.4 Phương pháp nghiên cứu 35 2.4.1 Phương pháp ñiều tra 35 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 2.4.2 Phương pháp lấy mẫu kiểm tra ñánh giá ô nhiễm vi khuẩn: 35 2.4.3 Phương pháp xét nghiệm vi khuẩn 35 2.5 Phương pháp ñánh giá xử lý số liệu 37 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 ðiều tra tình hình giết mổ lợn ñịa bàn Quận Lê Chân 38 3.1.1 ðịa ñiểm, số lượng quy mô 38 3.1.2 Loại hình sở giết mổ 39 3.2 ðánh giá ñiều kiện sở hạ tầng, trang thiết bị ý thức người tham gia hoạt ñộng giết mổ số sở giết mổ lợn. 40 3.2.1 ðánh giá ñiều kiện sở hạ tầng sở giết mổ quận Lê Chân 40 4.2.2 ðánh giá ñiều kiện trang thiêt bị CSGM lợn Quận Lê Chân 43 4.2.3 ðiều tra tình hình vệ sinh công nhân giết mổ sở giết mổ lợn quận Lê Chân 4.3 45 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm không khí nước sử dụng sở giết mổ lợn 46 4.3.1 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm vi sinh vật không khí. 46 4.3.2 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm vi sinh vật nước sử dụng sở giết mổ lợn. 4.4 48 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm vi sinh vật thịt lợn số sở giết mổ 4.4.1 52 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm tổng số vi sinh vật hiếu khí thịt lợn số sở giết mổ 52 4.4.2 Kiểm tra tình trạng nhiễm vi khuẩn E.coli. thịt lợn 54 4.4.3 Kết kiểm tra tiêu tổng số Coliform 56 4.4.4 Kết kiểm tra tiêu vi khuẩn Salmonella 58 4.4.5 Kết kiểm tra tiêu vi khuẩn Staphylococcus aureus 60 4.4.6 Kết kiểm tra tiêu vi khuẩn Clostridium perfringens 62 4.4.7 Tổng hợp kết kiểm tra vi khuẩn ô nhiễm thịt lợn số sở giết mổ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 64 Page v ðề xuất giải pháp quy hoạch, quản lý, công nghệ ñối với sở theo hướng giết mổ tập trung. 65 Chương KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 66 Kết luận 66 ðề nghị 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 PHỤ LỤC 72 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CFU : Colony Forming Unit (ñơn vị hình thành khuẩn lạc) COD : Chemical Oxygen Demand (Nhu cầu oxy hóa học) CSGM : Cơ sở giết mổ FAO : The Food and Agriculture Organization (Tổ chức nông lương) GMP : Good Manufacturing Practice (Thực hành sản xuất tốt) GMTT : Giết mổ tập trung HACCP : Hazard Analysis Critical Control Point (Phân tích mối nguy kiểm soát ñiểm tới hạn) ISO : International Organization for Standardization (Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế) LT : Heat Labile Toxin (ðộc tố không chịu nhiệt) MPN : Most Probable Number ST : Heat Stable Toxin (ðộc tố chịu nhiệt) TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TSS : Total Suspended Solids (Tổng chất rắn lơ lửng) TSVKHK : Tổng số vi khuẩn hiếu khí VSATTP :Vệ sinh an toàn thực phẩm VSTY : Vệ sinh thú y VKHK : Vi khuẩn hiếu khí WHO : World Health Organization (Tổ chức y tế giới) WTO : World Trade Organisation (Tổ chức thương mại giới) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Tình hình ngộ ñộc thực phẩm nước ta từ 1999 ñến 2011 14 1.2 Quy ñịnh tạm thời vệ sinh thú y sở giết mổ ñộng vật 29 3.1 ðịa ñiểm, quy mô giết mổ lợn quận Lê Chân- Hải Phòng 38 3.2 Kết ñiều tra ñiều kiện sở hạ tầng sở giết mổ lợn 41 3.3 Kết ñiều tra ñiều kiện trang thiết bị sở giết mổ lợn 43 3.4 Kết ñiều tra vệ sinh công nhân giết mổ sở giết mổ lợn 45 3.5 Kết kiểm tra mức ñộ ô nhiễm không khí sở giết mổ lợn 47 3.6 Kết kiểm tra tiêu Coliform nước sử dụng cho hoạt ñộng giết mổ CSGM ñịa bàn Quận Lê Chân 3.7 49 Kết kiểm tra tiêu E.coli nước sử dụng cho hoạt ñộng giết mổ CSGM ñịa bàn Quận Lê Chân 3.8 50 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm tổng số vi sinh vật hiếu khí thịt lợn số sở giết mổ 53 3.9 Kết kiểm tra tiêu E. Coli thịt lợn số sở giết mổ 55 3.10 Kết kiểm tra tổng số Coliform thịt lợn sở giết mổ 57 3.11 Kết kiểm tra Salmonella thịt sở giết mổ 59 3.12 Kết kiểm tra Staphylococcus aureus thịt sở giết mổ 61 3.13 Kết kiểm tra Clostridium perfringens thịt sở giết mổ 63 3.14 Tổng hợp kết kiểm tra vi khuẩn ô nhiễm thịt lợn số sở giết mổ Quận Lê Chân – Hải Phòng Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 64 Page viii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 3.1 Tháo tiết cạo lông mổ lợn nền, sàn. 42 3.2 Khu vực giết mổ vệ sinh 42 3.3 Chuồng nuôi nhốt lợn chật chội 44 3.4 Thịt ñược pha lọc sàn. 44 3.5 Công nhân giết mổ bảo hộ lao ñộng 46 3.6 Tỷ lệ mẫu thịt lợn không ñạt tiêu tổng số vi khuẩn hiếu khí 54 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ix 32. Tiêu chuẩn Việt Nam (1995). Chất lượng nước - Lấy mẫu. Hướng dẫn kỹ thuật lấy mẫu nước uống nước dùng ñể chế biến thực phẩm ñồ uống: TCVN 5992:1995. 33. Tiêu chuẩn Việt Nam (1995). Chất lượng nước - Lấy mẫu. Hướng dẫn bảo quản xử lý mẫu: TCVN 5993:1995. 34. Tiêu chuẩn Việt Nam (1996). Chất lượng nước – Phát ñếm vi khuẩn Coliform, vi khuẩn Coliform chịu nhiệt Escherichia coli giải ñịnh. TCVN 6187:1996 (ISO 9308:1990). 35. Tiêu chuẩn Việt Nam (2002). Thịt tươi – Quy ñịnh kỹ thuật. TCVN 7046:2009. 36.Tiêu chuẩn Việt Nam (1991), Cơ sở giết mổ - yêu cầu vệ sinh, TCVN-5452. 37. Tiêu chuẩn Việt Nam (2002). Thịt sản phẩm thịt, Phương pháp lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử. TCVN 4833-2002. 38. Tiêu chuẩn Việt Nam (2005). Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi. Phương pháp ñịnh lượng vi sinh vật ñĩa thạch. Kỹ thuật ñếm khuẩn lạc 300C: TCVN 4884:2005. 39. TCVN 7924-2:2008 (ISO 16649-2:2001), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Phương pháp ñịnh lượng E. Coli dương tính beta glucuronidaza. Phần 2: Kỹ thuật ñếm khuẩn lạc 44°C sử dụng 5-bromo-4-clo-3-indol beta-d-glucuronid. 40. TCVN 6848 : 2007 (ISO 4832 : 2007), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi - Phương pháp ñịnh lượng Coliform – Kỹ thuật ñếm khuẩn lạc. 41. Tiêu chuẩn Việt Nam (2002). Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi. Phương pháp phát Salmonella ñĩa thạch. TCVN 4829: 2005 (ISO 06579: 2002). 42. Viện khoa học kỹ thuật miền nam (2007). Nghiên cứu giải pháp cải tiến khâu vận chuyển thịt lợn. Tạp chí chăn nuôi 6-07. Tài liệu nước ngoài: 43. FAO (1992), Manual of Food quality control 4.rew, Microbiological analysis, Published by Food and Agriculture Organization of United Nations, Rome. 44. Akiko Nakama, Michinori Terao (1998). “Accomparisoniof Listeria monocytogenes serovar 4b islates of clinical and food origin in Japan by pulsed-field gel eletrophoresis”. International journal of food microbiology, May, No42. 45. Andrews W. (1992). Manual of food quality control microbiological anlysis. FAO, 1992. 46. Avery S.M. (2000). Comparision of two cultural methods for insolating Staphylococcus aureus for use in the New Zealand meat industry. Meat Ind, res. Inst. N.Z.Publ. No686. 47. Beutin L.,H. Karch (1997). “Virulence markers of Shiga-like toxin producing E.coli strains originating from health domestic animals of different species”. Journal of Clinical Microbiology. (33) 48. Borowka J. (1989). Results of slaughter animals and meat inspection, Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 70 Fleischwirtschaft, pp. 69-99. 49. Cromwell (1991). Economic Research Service (ERS). Bacterial foodborn disease. Agricultural economic report No 741. Washington D.C, USA. 50. Fox Maggie (2009). Salmonella outbreak linked to peanut butter. Yahoo News Fri jan, 2009. 51. Grau F.H., Ed.A.M. Pearson and T.R. Dutson (1986). Advances in Meat Research. Vol. 2. Meat and Poultry microbiology, AVI publishing Co., Connecticut, USA 86. 52. Helrick A.C. (1997). Association of Official Analytical Chemists, 16th edition, Vol.1, Published by Ins, Washington, Virginia, USA. 53. Herry F. J. (1990). Bacterial contamination of warning food and drinking in rural. Banladesh, pp.79-85 54. Ingram M. and Simonsen J. (1980). Microbial ecology on food. Published by Academic Press, New York. 55. Lowry and Bates (1989), Identification of Salmonella in the meat industry biochemical and serological procedures. Meat. Ind. Red, Inst. No2, bub. No860. 56. Meat Industry Research Institute (MIRIN) (1991). Biological and methods for meat industry. Published by Meat Ind. Res. Inst No2. No757. 57. Morita R.Y. (1975). Psychorotrophic bacteria bacteriological. Reviews p.144 – 167. 68. Solomon J. (2004). “Protecting meat from oxygen and spoilage”. Food magazine of Australia. 23 November 2004, pp. 12-15. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 71 PHỤ LỤC *Cách lấy mẫu thịt - Dụng cụ: + Cồn Etanol 70%, cồn + Kéo cắt vô trùng, panh kẹp vô trùng + Găng tay, trang vô trùng + Túi ñựng mẫu vô trùng + Thùng xốp bảo quẩn lạnh túi ñá lạnh - Cách tiến hành lấy mẫu: Sử dụng panh kẹp kéo cắt mẫu từ 10 ñến 20g thịt mặt cắt khác nhau. Gộp miếng mô vừa cắt thành mẫu, cho vào túi ñựng mẫu vô trùng. Thời ñiểm lấy mẫu sau khám thịt, trước thịt ñược ñưa ñi tiêu thụ, mẫu ñược thu thập vòng 30 phút. Quy mô GM nhỏ lấy từ 1-3 mẫu, vừa lấy từ 4-6 mẫu, lớn lấy 7-12 mẫu. *Cách lấy mẫu nước - Dụng cụ lấy mẫu: lọ ñựng mẫu nước vô trùng; Panh, kéo, tẩm cồn 70%; Khay ñựng dụng cụ lấy mẫu; ðèn bật; Thùng bảo ôn có ñá lạnh - Lấy mẫu nước máy vòi nước: trước lấy mẫu cần mở vòi cho nước chảy hết cỡ vòng - phút. Sau ñó ñóng vòi lại khử khuẩn kỹ vòi nước nhiệt ñộ cao cồn. Mở lại vòi cho nước chảy mạnh - phút ñiều chỉnh cho chảy vừa ñủ ñể lấy mẫu vào chai nút mài 500ml ñã ñược hấp, sấy tiệt trùng. Thao tác lấy mẫu cần phải vô trùng, mẫu ñã lấy phải bảo quản lạnh sau ñó chuyển phòng thí nghiệm. - Lấy mẫu bể chứa nước: khử trùng giá inox cồn 70 ñộ, ñặt chai nút mài 500ml (ñã ñược hấp, sấy tiệt trùng) có buộc dây nắp vào giá treo. Thả chai lấy mẫu xuống ñộ sâu 0,3 - 0,5m, giật dây nút mài ñể nước chảy vào ñầy chai kéo lên, nghiêng giá ñổ bớt phần nước chai mẫu, ñậy nút mài ghi nhãn, bao gói, bảo quản lạnh ñưa mẫu phòng thí nghiệm. *Cách lấy mẫu không khí - Dụng cụ: ðĩa ñựng thạch thường, túi chất dẻo bao gói, thùng xốp túi ñá lạnh bảo quản Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 72 - Tại sở ñặt ñĩa thạch thường, vị trí khác mở nắp ñậy ñĩa thạch. Sau khoảng 15 phút ñi ñậy ñĩa thạch theo chiều ngược lại với lúc ñi ñặt ñĩa thạch, bao gói bảo quản ñưa phòng thí nghiệm 1. TCVN 6187-2 : 1996 (ISO 9308-2 : 1990) Chất lượng nước - xác ñịnh - phát ñếm vi khuẩn Coliform, vi khuẩn Coliform chịu nhiệt Escherichia coli giả ñịnh. Phương pháp nhiều ống (số có xác suất cao nhất) Nguyên tắc: Cấy phần mẫu thử ñã ñược pha loãng không pha loãng vào dãy ống nghiệm chứa môi trường nuôi cấy chọn lọc dạng lỏng có lactoza. Kiểm tra ống thử sau 24h 48h nuôi nhiệt ñộ 35°C 37°C; cấy chuyển tiếp từ ống có biểu ñục kèm sinh khí vào ống môi trường khẳng ñịnh chọn lọc muốn tìm E. Coli giả ñịnh cấy vào môi trường mà qua ñó quan sát thấy tạo thành indol. Nuôi môi trường khẳng ñịnh 48h nhiệt ñộ 35°C 37°C ñể xác ñịnh loại Coliform chịu nhiệt E. Coli giả ñịnh. Bằng bảng thống kê, tính toán số xác suất cao dạng Coliform, Coliform chịu nhiệt E. Coli giả ñịnh có 100ml mẫu thử từ số ống thử có kết xác nhận dương tính. Nuôi cấy: Chuẩn bị mẫu thử, tiến hành pha loãng mẫu cấy vào môi trường phân lập phần mẫu thử theo ISO 8199. Cấy ủ mẫu vào môi trường Trypton Lauryl Sulfat (TLS): Mỗi nồng ñộ pha loãng cấy vào dãy liên tiếp dãy chứa ống môi trường TLS. Cấy 10ml mẫu thử vào ống dãy ống ñầu tiên, 1ml mẫu thử vào ống dãy ống 0,1ml mẫu thử vào ống dãy ống cuối cùng. Nuôi cấy 37ºC, ñếm số lượng ống TLS cho kết dương tính dãy sau 24h – 48h. ðể khẳng ñịnh Coliform: Cấy chuyển vòng que cấy từ ống TLS dương tính sang ống nghiệm chứa trường Brilliant Green Bile 2% broth (BGB), ủ 30ºC 24 h. ðể khẳng ñịnh E. Coli cần thực tiếp: Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 73 Cấy chuyển ủ môi trường Escherichia coli broth (EC): Cấy chuyển vòng que cấy từ ống nghiệm TLS dương tính sang ống nghiệm ñựng canh thang EC, ủ 44ºC 24h ± 2h. ðếm số lượng ống EC cho kết dương tính dãy. Các ống dương tính môi trường EC ñược cấy chuyển sang môi trường nước pepton không indol ñể kiểm tra sinh Indol. Cấy ủ môi trường nước pepton không Indol: Cấy vòng que cấy canh khuẩn từ ống nghiệm EC dương tính sang ống nghiệm ñựng 5-10ml nước pepton không Indol, ủ 44ºC 24h ± 2h. Sau ñó kiểm tra sinh khí Indol. Kiểm tra sinh Indol: Nhỏ 0,5 ml thuốc thử Kovac vào ống nghiệm chứa nước pepton không Indol ñã ñược ủ, trộn kỹ kiểm tra sau phút. Nếu xuất vòng màu ñỏ phía chứng tỏ có mặt E. Coli. Ghi nhận số lượng ống nghiệm có E.coli dương tính ñộ pha loãng mẫu. Tính kết quả: Từ số lượng ống nghiệm có E.coli, Coliform dương tính ñộ pha loãng mẫu, dùng bảng bảng thống kê ISO 8199, số có xác suất cao vi khuẩn Coliform E. Coli giả ñịnh. 2. Xác ñịnh tổng số vi sinh vật hiếu khí thịt theo TCVN 4884 : 2005. Nguyên lý: Trên môi trường thạch PCA ñiều kiện hiếu khí 30ºC sau 24 - 72 h, vi sinh vật hiếu khí có khả phát triển hình thành khuẩn lạc riêng rẽ. Do ñó, ñếm số khuẩn lạc môi trường Plate Count Agar ñể xác ñịnh số lượng vi sinh vật có chứa 1gam mẫu phân tích ñược biểu diễn dạng số ñơn vị hình thành khuẩn lạc CFU ñơn vị khối lượng thực phẩm. Cách tiến hành: Dùng phương pháp ñổ ñĩa. Với mẫu xét nghiệm phải nuôi cấy ñộ pha loãng liên tiếp, ñộ pha loãng ñược cấy ñĩa petri vô trùng. Dùng pipet vô trùng chuyển ml dung dịch mẫu ñộ pha loãng tương ứng vào ñĩa petri trống vô trùng. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 74 Rót vào ñĩa khoảng 15 ml môi trường Plate Count Agar (PCA) ñã ñun tan chảy ñược làm nguội ñến nhiệt ñộ 44 - 47oC. Xoay nhẹ ñĩa theo chiều kim ñồng hồ lắc sang trái phải cách nhẹ nhàng ñể cho mẫu tan ñều vào môi trường. ðặt ñĩa mặt phẳng ngang ñể thạch ñông tự nhiên nhiệt ñộ phòng, lật úp ñĩa ñặt vào tủ ấm 30oC nuôi ấm ñến 72 h. Tính kết quả: Chọn tất ñĩa có khuẩn lạc mọc riêng rẽ có số khuẩn lạc nằm khoảng từ 15 ñến 300 khuẩn lạc/ñĩa ñể ñếm. ðộ pha loãng cao số khuẩn lạc ñó phân bố khuẩn lạc ñĩa nuôi cấy phải hợp lý. Nếu kết không hợp lý phải tiến hành bước nuôi cấy lại. Tổng số vi sinh vật hiếu khí 1g mẫu ñược tính theo công thức: Trong ñó: X: Tổng số vi sinh vật hiếu khí 1g thịt (CFU/g) C: Tổng số khuẩn lạc ñếm ñược ñĩa ñộ pha loãng liên tiếp. n1: Là số ñĩa ñộ pha loãng thứ ñược ñếm. n2: Là số ñĩa ñộ pha loãng thứ ñược ñếm. d : Hệ số pha loãng với ñộ pha loãng thứ ñược ñếm. - Nếu ñĩa ñộ pha loãng liên tiếp có số khuẩn lạc từ 15-30, tính số khuẩn lạc ñộ pha loãng kết trung bình số học giá trị thu ñược. - Nếu ñĩa nuôi cấy ứng với ñộ pha loãng 10-1 có số khuẩn lạc < 15 thì: - Nếu ñĩa nuôi cấy ñộ pha loãng 10-1 khuẩn lạc thì: Với: m trung bình số khuẩn lạc ñĩa. d ñộ pha loãng huyễn dịch ban ñầu, d = 10-1. Cách biểu thị kết quả: Số thập phân từ 1.00 ñến 9.99 nhân với số mũ tương ứng, ví Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 75 dụ 1,56×104CFU/g. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 76 3. Xác ñịnh E. Coli thịt theo TCVN 7924-2 : 2008. Nguyên lý: E. Coli dương tính - glucuronidaza. Vi khuẩn nhiệt ñộ 44°C hình thành khuẩn lạc màu xanh ñiển hình môi trường Tryptone Bile X-glucuronide (TBX). Dựa vào ñặc tính ta phát ñịnh lượng ñược vi khuẩn E. Coli. Cách tiến hành: Cấy ñộ pha loãng 10-1; 10-2; 10-3, ñộ pha loãng nuôi cấy ñĩa môi trường. Dùng pipet vô trùng chuyển ml dung dịch mẫu ñộ pha loãng tương ứng vào ñĩa petri vô trùng. Rót vào ñĩa khoảng 15 ml môi trường TBX ñã ñun tan chảy ñược làm nguội ñến nhiệt ñộ 44 – 47°C. Xoay nhẹ ñĩa theo chiều kim ñồng hồ lắc sang hai bên ñể cho mẫu tan ñều vào môi trường, ñể ñông tự nhiên nhiệt ñộ phòng mặt phẳng nằm ngang. Lật ngược ñĩa, cần ủ ấm ñĩa 37°C/4h sau ñó chuyển sang ủ ấm 44°C/18 - 24h. Tính kết quả: Chọn ñĩa có chứa 150 khuẩn lạc ñiển hình E. Coli dương tính glucuronidaza 300 khuẩn lạc tổng số ñĩa thạch. Số lượng khuẩn lạc E. Coli 1g mẫu thử ñược tính theo công thức: Trong ñó: N: Số khuẩn lạc E. Coli 1g thịt (CFU/g ) a: Là tổng số khuẩn lạc ñếm ñược tất ñĩa ñược giữ lại sau ñộ pha loãng liên tiếp, có ñĩa chứa tối thiểu 15 CFU màu xanh. n1: Số ñĩa ñược giữ lại ñộ pha loãng thứ n2: Số ñĩa ñược giữ lại ñộ pha loãng thứ hai V: Thể tích mẫu cấy ñã dùng ñĩa, tính ml d: Hệ số pha loãng tương ứng với ñộ pha loãng thứ ñược giữ lại (d = trường hợp mẫu dạng lỏng mẫu thử ñược cấy trực tiếp). Nếu ñĩa chứa 10 khuẩn lạc, có khuẩn lạc, tính kết theo trường hợp chung báo cáo kết số ước tính nhân với VSV 1ml Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 77 1g sản phẩm. Nếu tổng số khuẩn lạc từ ñến 1, ñộ chụm kết thấp kết phải ñược ghi sau: “Có mặt vi sinh vật nhỏ (4 × d) 1g 1ml. Trong trường hợp nồng ñộ ñầu tiên khuẩn lạc ñặc trưng mọc lên tổng số E. Coli ñược biểu thị kết sau: “ít 1/d vi sinh vật 1ml (sản phẩm dạng lỏng)” “ 1/d vi sinh vật gam (sản phẩm dạng khác). Với d hệ số pha loãng mẫu huyền phù ban ñầu ñộ pha loãng thứ ñã cấy giữ lại. 4. ðịnh tính vi khuẩn Salmonella thịt theo TCVN 4829 : 2005. Nguyên lý: Quá trình phát Salmonella thực phẩm cần qua giai ñoạn nhau: (1) Tăng sinh sơ mẫu ñã ñược ñồng ñể ñảm bảo phát lượng nhỏ Salmonella ñã bị suy giảm hoạt tính → (2) Tăng sinh chọn lọc môi trường lỏng → (3) Phân lập nhằm tách nhận dạng Salmonella khỏi quần thể vi sinh vật khác mẫu → (4) Khẳng ñịnh ñặc tính sinh hóa, huyết học. Một số môi trường ñặc ñổ ñĩa sử dụng ñể phân lập Salmonella như: thạch XLD, HE, . Mỗi môi trường giúp nhận dạng loài thuộc giống dựa ñặc tính sinh hoá ñặc trưng tương ứng. Cách tiến hành: Tăng sinh sơ bộ: Cân 25g mẫu trung bình ñã cắt nhỏ vào túi PE vô trùng chuyên dụng, bổ sung thêm 225ml dung dịch ñệm peptone, ñồng máy dập mẫu Stomacher tốc ñộ 260 vòng/phút phút thu huyễn dịch có nồng ñộ 10-1. Ủ huyễn dịch mẫu ñã ñồng ñộ pha loãng 10-1 tủ ấm 37°C/18±2h. Tăng sinh chọn lọc: Tiến hành môi trường Rappaport-Vassiliadis (RVS) Tetrathionate Broth Muller-Kauffmann (MKTTn) Chuyển 0,1 ml dung dịch tiền tăng sinh vào ống nghiệm chứa 10 ml môi trường RVS, ủ 41,5°C/24h. Chuyển 1ml dung dịch tiền tăng sinh vào ống chứa 10ml môi trường MKTTn, ủ 37°C/24h. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 78 Phân lập môi trường ñặc chọn lọc nhận dạng: Sau ủ, sử dụng dịch tăng sinh chọn lọc ria cấy lên bề mặt thạch ñĩa Xylose Lysine Deoxycholate Agar (XLD) Hektoen enteric agar (HE). Lật úp ñĩa ñặt tủ ấm 37°C/24h. Khẳng ñịnh: Nếu môi trường XLD hình thành khuẩn lạc màu hồng, trung tâm khuẩn lạc màu ñen nghi Salmonella. Nếu môi trường HE hình thành khuẩn lạc màu ñen nghi Salmonella. ðánh dấu khuẩn lạc Salmonella nghi ñĩa. Ria cấy khuẩn lạc ñiển hình lên bề mặt ñĩa thạch máu. Ủ ấm 37°C/24h ñể thu ñược khuẩn lạc nhất. Các khuẩn lạc ñược dùng ñể ñể khẳng ñịnh tính chất sinh vật hoá học hệ thống VITEK compact làm phản ứng huyết học (HTH) với kháng huyết O, H ña giá . Tiến hành làm phản ứng HTH với kháng huyết (KHT) ña giá O kháng huyết ña giá H (Phản ứng ngưng kết phiến kính). Trước làm phản ứng HTH cần kiểm tra khả tự ngưng kết vi khuẩn. Nếu phản ứng tự ngưng kết âm tính ta tiếp tục tiến hành phản ứng ngưng kết với KHT O, H, Vi. Nếu phản ứng HTH dương tính (có tượng ngưng kết) kết luận có diện vi khuẩn Salmonella mẫu thử. 5. Xác ñịnh Staphylococcus aureus thịt theo TCVN 4830-1 : 2005. Nguyên lý: Vi khuẩn Staphylococci phát triển tốt môi trường Baird Parker Agar Base có bổ sung Egg-Yolk Tellurite Emulsion (BP) tạo khuẩn lạc màu ñen, tròn, lồi, bờ ñều, bóng có vòng suốt xung quanh chuyển hóa muối telorite de potassium dung giải protein lòng ñỏ trứng. Qua ñó ñếm số lượng vi khuẩn dựa số khuẩn lạc mọc môi trường nuôi cấy. Việc khẳng ñịnh vi khuẩn Staphylococci (S. aureus loài khác) dựa phản ứng ñông huyết tương thỏ (coagulase). Cách tiến hành: Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 79 Phân lập (cấy láng bề mặt thạch) Sử dụng ñĩa môi trường BP ñể nuôi cấy ñậm ñộ pha loãng 10-1; 10-2; 10-3, ñộ pha loãng nuôi cấy ñĩa môi trường. Hút 0,1ml dung dịch mẫu ñộ pha loãng khác lên bề mặt ñĩa thạch. Sử dụng dụng cụ dàn mẫu dàn chất cấy bề mặt ñĩa thạch, ñể khô 15 phút nhiệt ñộ phòng. Lật ngược ñĩa ủ 37oC/24h, ñếm số lượng khuẩn lạc ñiển hình ñĩa thạch, ñánh dấu vị trí khuẩn lạc ñiển hình. Ủ tiếp 37oC/24h, sau ủ ñánh dấu vị trí khuẩn lạc ñiển hình khuẩn lạc không ñiển hình. Phép thử coagulase: Chọn ñĩa có số khuẩn lạc từ 15 ñến 300 khuẩn lạc. Từ ñĩa chọn khuẩn lạc ñiển hình khuẩn lạc không ñiển hình (nếu có loại khuẩn lạc) khuẩn lạc ñiển hình khuẩn lạc không ñiển hình (nếu chứa loại khuẩn lạc). Từ khuẩn lạc ñã chọn dùng que cấy vô trùng lấy phần chuyển vào môi trường Brain Heart Infusion (BHI), ñem ủ 37°C/24h. Sau ủ lấy 0,1ml dịch cấy vô trùng cho vào 0,3 ml huyết tương thỏ, ủ 37°C, sau - 6h kiểm tra ñông huyết tương. Nếu phản ứng âm tính, kiểm tra lại sau ủ 24h. Phản ứng dương tính thể tích kết dính chiếm nửa thể tích ban ñầu chất lỏng. Lấy khuẩn lạc ñiển hình có phản ứng catalase (+), coagulase (+) cấy môi trường thạch máu ñể thu ñược khuẩn lạc nhất. Tính kết quả: Tính số lượng vi khuẩn S. aureus/gam sản phẩm sau: - ðối với ñĩa có chứa tối ña 300 khuẩn lạc, có 150 khuẩn lạc ñiển hình và/hoặc không ñiển hình, ñĩa thạch ñã chọn ñộ pha loãng liên tiếp số lượng vi khuẩn S. aureus ñược tính theo công thức: Trong ñó: a : Số lượng vi khuẩn S. aureus nồng ñộ pha loãng liên tiếp ñược chọn Ac : số lượng khuẩn lạc ñiển hình ñã qua phép thử coagulase Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 80 Anc: số lượng khuẩn lạc không ñiển hình ñã qua phép thử coagulase bc : số lượng khuẩn lạc ñiển hình cho thấy có phản ứng dương tính với coagulase bnc : số khuẩn lạc không ñiển hình cho thấy có phản ứng dương tính với coagulase cc : tổng số khuẩn lạc ñiển hình nhìn thấy ñĩa cnc : tổng số khuẩn lạc không ñiển hình nhìn thấy ñĩa Số lượng vi khuẩn Staphylococcus aureus/1g sản phẩm ñược tính theo công thức: Trong ñó: ∑a : tổng số khuẩn lạc có phản ứng dương tính với coagulase ñã nhận biết tất ñĩa ñã chọn. V : thể tích chất cấy ñĩa, tính mililit n1: số ñĩa ñã ñược chọn ñộ pha loãng thứ n2: số ñĩa ñã ñược chọn ñộ pha loãng thứ d : ñộ pha loãng tương ứng với dung dịch pha loãng thứ ñã chọn - Nếu hai ñĩa tương ứng với mẫu thử huyền phù ban ñầu, ñĩa 15 khuẩn lạc kết tính sau: Trong ñó: ∑a: Tổng số khuẩn lạc Staphylococcus có phản ứng dương tính với coagulase nhận biết hai ñĩa ñã chọn. d: Hệ số pha loãng huyền phù ban ñầu. V : Thể tích cấy ñĩa Nếu hai ñĩa, tương ứng với mẫu thử huyền phù ban ñầu không chứa khuẩn lạc Staphylocuccus có phản ứng dương tính với coagulase báo cáo kết sau: “ Ít 1/d Staphylococci có phản ứng dương tính với coagulase gam sản phẩm, ñó d hệ số pha loãng huyền phù ban ñầu”. 6. Xác ñịnh tổng số vi khuẩn Clostridium perfringens thịt theo TCVN Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 81 4991:2005. Nguyên lý: Vi khuẩn C. perfringens yếm khí tuyệt ñối, hình thành dạng khuẩn lạc ñặc trưng màu ñen môi trường Tryptose Sulfite Cycloserine Agar (TSC) ñiều kiện yếm khí. Do ñó, ñếm số khuẩn lạc mọc môi trường từ ñó xác ñịnh số lượng vi khuẩn có mặt mẫu phân tích. Cách tiến hành: Phân lập : Cấy ñộ pha loãng 10-1; 10-2; 10-3, ñộ pha loãng nuôi cấy ñĩa môi trường. Dùng pipet vô trùng chuyển 1ml huyễn dịch mẫu ñộ pha loãng tương ứng vào ñĩa petri vô trùng. Rót 10 - 15ml môi trường thạch TSC ñược trì 44°C - 47°C vào ñĩa petri, xoay nhẹ ñĩa ñể trộn ñều dịch cấy vào môi trường, ñể môi trường ñông tự nhiên nhiệt ñộ phòng. Phủ thêm lớp khoảng 10 ml môi trường thạch TSC lên bề mặt ñĩa thạch TSC ñã ñông trên, ñể ñĩa thạch ñông tự nhiên bề mặt nằm ngang. ðặt ñĩa vào bình nuôi cấy yếm khí, dùng pack yếm khí (anaerobical pack) ñể tạo ñiều kiện yếm khí. Ủ 370C/ 18 - 20h. ðếm ñĩa thạch chứa 150 khuẩn lạc màu ñen, chọn khuẩn lạc ñiển hình ñể khẳng ñịnh sinh hóa. Khẳng ñịnh sinh hóa: Sử dụng môi trường lactoza sunfit (LS) Cấy khuẩn lạc ñiển hình ñã chọn vào môi trường Thioglycolate lỏng, ủ kỵ khí 37°C/18 - 24h. Sau thời gian ủ, chuyển giọt dịch cấy môi trường thioglycolate cấy vào môi trường LS, ủ hiếu khí 46oC/18 - 24h. Các ống dương tính có tượng sinh khí kết tủa ñen sắt sulfit. Vi khuẩn hình thành khuẩn lạc ñiển hình màu ñen môi trường thạch SC ñược khẳng ñịnh dương tính với môi trường LS ñược coi Clostridium perfringens. Tính kết quả: ðếm số khuẩn lạc ñiển hình ñĩa petri ñộ pha loãng liên tiếp có số khuẩn lạc không 150. Số vi khuẩn C. perfringens gam thịt ñược tính theo công thức: Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 82 Trong ñó: C: Tổng số khuẩn lạc ñếm ñược tất ñĩa ñộ pha loãng liên tiếp. X: Số vi khuẩn C. perfringens gam thịt (CFU/g) n1: số ñĩa ñộ pha loãng thứ ñược ñếm. n2: số ñĩa ñộ pha loãng thứ ñược ñếm. d : hệ số pha loãng với ñộ pha loãng thứ ñược ñếm. Nếu ñĩa ñộ pha loãng liên tiếp có số khuẩn lạc từ 15 - 30, tính số khuẩn lạc ñộ pha loãng kết trung bình số học giá trị thu ñược. Nếu ñĩa nuôi cấy ứng với ñộ pha loãng 10-1 có số khuẩn lạc < 15 thì: Nếu ñĩa nuôi cấy ñộ pha loãng 10-1 khuẩn lạc thì: Với: m trung bình số khuẩn lạc ñĩa d ñộ pha loãng huyễn dịch ban ñầu, d = 10-1 7. Xác ñịnh Coliforms tổng số thịt theo TCVN 6848 : 2007. Nguyên tắc: Cấy lượng mẫu thử xác ñịnh (mẫu lỏng) với lượng xác ñịnh huyền phù ban ñầu (mẫu khác) lên cặp ñĩa petri trống vô trùng. ðổ khoảng 1215ml môi trường VRBL (Violet Red Bile lactoza) vào trung tâm ñĩa. Lắc xoay cho vi khuẩn phân tán ñều lòng thạch. Sử dụng dung dịch pha loãng thập phân cần thiết (10-1, 10-2, 10-3). Ủ ñĩa 30oC/24h ðếm khuẩn lạc ñặc trưng, cần khuẩn lạc ñược khẳng ñịnh lên men lactoza. Xử lý sơ pha loãng mẫu ðồng mẫu cách cân xác 25 g 10 g mẫu thử ñặc (hoặc 25 ml 10 ml ñối với mẫu thử lỏng) túi ñập mẫu vô trùng. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 83 Bổ sung 225 ml 90 ml nước ñệm pepton vô trùng ñể thu ñược lượng dịch mẫu pha loãng ban ñầu 10-1. ðập mẫu máy Stomacher, dung dịch thu ñược gọi dung dịch mẫu. Dùng pipet vô trùng chuyển 1ml mẫu thử (dạng lỏng) huyền phù ban ñầu (10-1) dạng khác vào cặp ñĩa Petrri vô trùng. Tiến hành tương tự với nồng ñộ pha loãng tiếp theo. ðổ ñĩa: Rót vào ñĩa khoảng 15 ml thạch VRBL trước ñó ñã ñược ñun tan chảy làm nguội ñến 44 – 47oC nồi cách thủy. Trộn ñều thạch mẫu thử cách quay sang trái phải chiều vòng cho vi khuẩn phân tán ñều thạch. ðể ñông tự nhiên mặt phẳng nằm ngang. Chuẩn bị ñồng thời ñĩa ñể kiểm tra vô trùng. Sau ñông ñặc hoàn toàn, rót khoảng ml loại môi trường lên bề mặt ñĩa. ðể ñông tự nhiên. Lật ngược ñĩa, ñể vào tủ ấm 30oC/24 ± 2h. ðọc kết quả: ðếm khuẩn lạc ñiển hình môi trường VRBL, tính kết số khuẩn lạc Coliform/g ml sản phẩm.(khuẩn lạc có màu ñỏ ánh tía có ðK 0.5mm lớn hơn, ñôi có vùng mật tủa ñỏ bao quanh). Với khuẩn lạc không ñiển hình, cấy khuẩn lạc vào ống nghiệm chứa canh thang mật lactoza lục sáng. Ủ ống 30oC/24h. Các ống Durham cho thấy sinh khí ñược coi có chứa Coliform. Tính kết từ khuẩn lạc ñiển hình môi trường VRBL theo công thức sau: C: số khuẩn lạc ñiển hình ñếm ñược ñĩa n1, n2: số ñĩa nồng ñộ pha loãng 1, d: hệ số pha loãng thứ ñược chọn N: số khuẩn lạc g ml mẫu thử ñược biếu thị kết dạng thập phân 1,0 9,9 nhân với 10x số mũ thích hợp. Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 84 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 85 [...]... và giám sát c a cơ quan thú y và các ban ngành ch c năng Cơ s c a vi c quy ho ch các cơ s gi t m ñ ng v t là k t qu c a vi c kh o sát tình hình gi t m trên ñ a bàn thành ph ñ có các ñ xu t thi t th c, phù h p và k p th i v i các c p chính quy n ñ a phương Lê Chân là m t trong nh ng qu n n i thành ñông dân cư c a thành ph H i Phòng Trên ñ a bàn Qu n có nhi u cơ s gi t m l n t p trung công su t l n và. .. gi t m nh l không có s giám sát c a cơ quan Thú y có th m quy n Do v y, vi c ki m soát ch t lư ng th t trên ñ a bàn Qu n g p r t nhi u khó khăn T th c t trên, chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: “ðánh giá ho t ñ ng gi t m và ô nhi m vi sinh v t trong th t l n t i m t s cơ s gi t m trên ñ a bàn qu n Lê Chân thành ph H i Phòng 2 M c tiêu nghiên c u Có thêm cơ s , căn c ñ k t lu n, ñánh giá chính xác... có r t nhi u vi sinh v t như vi khu n, n m m c Ch t lư ng không khí ph thu c vào các thành ph n có trong không khí và khác nhau gi a các vùng mi n Không khí chu ng nuôi, khu v c gi t m , ch bi n H c vi n Nông nghi p Vi t Nam – Lu n văn Th c s Khoa h c Nông nghi p Page 15 có th ch a m t lư ng l n vi sinh v t t phân, nư c th i, n n chu ng xâm nh p vào không khí ð s ch, b n c a môi trư ng không khí khu... còn là môi trư ng lý tư ng cho s phát tri n c a vi khu n S xâm nh p c a vi sinh v t vào th t theo 2 con ñư ng: n i sinh, ngo i sinh Nhi m n i sinh: Nh ng ñ ng v t b b nh, m m b nh m t s cơ quan t ch c ho c n i t ng tràn vào máu và vào th t ðôi khi do h u qu c a suy như c cơ th , làm vi c quá s c, ñói, l nh cũng làm cho vi sinh v t ñư ng ru t tràn vào th t và các t ch c khác qua m ch máu Th c ăn trong. .. Cũng trong th i gian này thì s lây nhi m vi sinh v t do môi gi i truy n lây cũng c n ñư c chú ý ðó là ru i nh ng, côn trùng trên cơ th chúng có th ch a r t nhi u vi sinh v t k c vi sinh v t gây b nh và chúng ñ u lên th t và làm cho th t nhi m b n ð c bi t là nh ng khu gi t m , buôn bán th t kém v sinh thì s lây nhi m này r t l n Quá trình lây nhi m b t ñ u t b m t thân th t, vi sinh v t s sinh trư ng và. .. v n chuy n H c vi n Nông nghi p Vi t Nam – Lu n văn Th c s Khoa h c Nông nghi p Page 18 1.6 Nh ng nghiên c u v ô nhi m vi sinh v t trong th c ph m V sinh an toàn th c ph m ñang ngày càng thu hút ñư c s quan tâm c a ñông ñ o các nhà khoa h c và các t ch c trên th gi i Nguyên nhân gây ô nhi m th c ph m ph n l n là do vi sinh v t Ingam và Simonsen (1980), nghiên c u h vi sinh v t ô nhi m vào th c ph m... thành ph ban hành v vi c ban hành quy ñ nh t m th i v chăn nuôi, gi t mô và v n chuy n, kinh doang gia c m, s n ph m gia c m trên ñ a bàn thành ph - Quy t ñ nh s : 372/Qð – UBND ngày 09/3/2009 c a UBND thành ph ban hành v vi c phê duy t quy ho ch cơ s gi t m gia súc, gia c m t p trung trên ñ a bàn thành ph h i Phòng giai ño n 2008 – 2010 và ñ nh hư ng ñ n năm 2020 Tuy nhiên ñ n nay, trên ñ a bàn Thành. .. không ñ m b o v sinh an toàn th c ph m (VSATTP) Trong H c vi n Nông nghi p Vi t Nam – Lu n văn Th c s Khoa h c Nông nghi p Page 3 khi ñó, các cơ s gi t m th công t p trung và h gia ñình thư ng hình thành t phát, không theo quy ñ nh và không ñ t tiêu chu n v sinh, m c dù ñang cung c p trên 80% nhu c u tiêu th th t gia súc, gia c m cho toàn TP Các công ño n thư ng ñư c ti n hành trên n n ñ t, n n bê tông... chín, không ñ ru i, gián, chu t ti p xúc v i th c ăn ñã n u S c nóng trên 60ºC trong 15 phút ñ ñ tiêu di t vi khu n - Clostridium perfringens: Cl perfringens tăng trư ng m nh trong môi trư ng ít oxy Chúng có nhi u ñ t, c ng rãnh và các cơ s ch bi n th c ph m v sinh kém Khi vào cơ th , vi khu n thư ng trú trong ru t và theo phân ra ngoài H c vi n Nông nghi p Vi t Nam – Lu n văn Th c s Khoa h c Nông nghi... qu c t c a các cơ quan tiêu chu n hoá qu c gia và là t ch c tiêu chu n hoá l n nh t c a th gi i hi n nay ISO ñư c thành l p năm 1946 t i Luân ðôn, chính th c ho t ñ ng t 23/02/1947 v i 25 thành vi n ñ u tiên ISO hi n có 156 thành vi n trong ñó có 100 thành vi n ñ y ñ , 46 thành vi n thông t n và 10 thành vi n ñăng ký M c tiêu c a ISO là thúc ñ y s phát tri n c a công tác tiêu chu n hoá và các ho t ñ . vi sinh vật trong không khí. 46 4.3.2 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm vi sinh vật trong nước sử dụng tại các cơ sở giết mổ lợn. 48 4.4 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm vi sinh vật trong thịt lợn tại một số cơ. Quận Lê Chân 50 3.8 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm tổng số vi sinh vật hiếu khí trong thịt lợn tại một số cơ sở giết mổ 53 3.9 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu E. Coli trong thịt lợn tại một số cơ sở giết mổ. vệ sinh công nhân giết mổ tại các cơ sở giết mổ lợn của quận Lê Chân 45 4.3 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm trong không khí và nước sử dụng tại cơ sở giết mổ lợn 46 4.3.1 Kiểm tra mức ñộ ô nhiễm vi