BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ HƯƠNG LAN XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN CYP1B1 GÂY BỆNH GLÔCÔM BẨM SINH NGUYÊN PHÁT ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Hà Nội - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐỖ THỊ HƯƠNG LAN XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN CYP1B1 GÂY BỆNH GLƠCƠM BẨM SINH NGUYÊN PHÁT Chuyên ngành: Hóa sinh Mã số : 60720106 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Trần Huy Thịnh Hà Nội - 2017 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT A Adenin C Cytosin CYP1B1 Cytochrome P450, family 1, subfamily B, polypeptide DNA Deoxyribonucleotid acid dNTP Deoxyribonucleotid 5’- triphosphat EDTA Ethylen Diamin Tetraacetic Acid G Guanin NADP Nicotinamid Adenin Dinucleotid Phosphat NST Nhiếm sắc thể PCR Polymerase Chain Reaction T Thymin TE tri - EDTA MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.1.Khái niệm phân loại glôcôm bẩm sinh 1.1.2 Dịch tễ học glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh 1.1.4 Điều trị glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.2 Cơ chế bệnh học phân tử 1.2.1 Cấu trúc vị trí gen CYP1B1: 1.2.2 Chức năng, chế gây bệnh gen CYP1B1 1.3.Tình hình nghiên cứu giới Việt Nam 11 1.4 Phương pháp phát đột biến gen CYP1B1 16 1.4.1 Phương pháp PCR 16 1.4.2 Phương pháp giải trình tự gen 17 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .20 2.1.Đối tượng nghiên cứu .20 2.1.1.Nhóm bệnh 20 2.1.2 Nhóm chứng .21 2.2 Phương tiện nghiên cứu 21 2.2.1 Dụng cụ, trang thiết bị 21 2.2.2 Hoá chất 22 2.3 Phương pháp nghiên cứu 23 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu: 23 2.3.2 Sơ đồ nghiên cứu 24 2.4 Nội dung nghiên cứu .25 2.5 Các bước tiến hành 25 2.5.1.Chẩn đoán phân loại bệnh nhân: 25 2.5.2 Xác định đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân chọn 26 2.5.3 Xác định đột biến gen CYP1B1 .33 2.5.4 Xác định tỷ lệ đột biến gen nhóm bệnh nhân, so sánh khác biệt 33 2.6 Xử lý kết 33 2.7 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 33 CHƯƠNG 3: DỰ KIẾN KẾT QUẢ 35 3.1 Kết phân tích đột biến gen CYP1B1 35 3.1.1 Kết tách chiết DNA 35 3.2.2 Kết xác định đột biến gen CYP1B 35 3.2 Một số đặc điểm đối tượng nghiên cứu 35 3.2.1 Phân bố bệnh nhân theo giới tính .35 3.2.2 Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát 35 3.2.3 Phân bố bệnh nhân theo triệu chứng lâm sàng 35 3.2.4 Một số đặc điểm khác 36 3.3 Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 36 3.4 Mối liên quan đột biến gen đặc điểm đối tượng 36 3.4.1 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo giới 36 3.4.2 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo tuổi khởi phát 37 3.4.3 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo triệu chứng .37 3.4.4 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo tiền sử gia đình 38 3.4.5 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo tiền sử thai nghén .38 3.4.6 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo bệnh, tật bẩm sinh kèm theo 39 CHƯƠNG 4: DỰ KIẾN BÀN LUẬN 40 4.1 Mục tiêu 1: Xây dựng quy trình xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát .40 4.2 Mục tiêu 2: Bước đầu xác định tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát .40 DỰ KIẾN KẾT LUẬN 41 DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ .41 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự mồi dùng cho phản ứng PCR 29 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 30 Bảng 2.3 Thành phần master mix 32 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Dấu hiệu lâm sàng glơcơm bẩm sinh nguyên phát Hình 1.2 Vị trí gen CYP1B1 nhánh ngắn nhiễm sắc thể .8 Hình 1.3 Cấu trúc gen CYP1B1 Hình 1.4 Sơ đồ minh họa chế ảnh hưởng đột biến gen CYP1B1 10 Hình 1.5 Sự di truyền thành viên 24 gia đình Saudi Arabian .13 Hình 1.6 Phân bố loại đột biến CYP1B1 toàn giới 14 Hình 1.7 Giải trình từ gen CYP1B1, đột biến p.V419GfsX11 .15 Hình 1.8 Các bước phản ứng PCR 17 Hình 1.9 Phương pháp giải trình tự gen .19 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 24 ĐẶT VẤN ĐỀ Năm 2003, nhà khoa học cơng bố báo cáo thức trình tự gene người, kiện đánh giá mở kỷ nguyên sinh học di truyền, hứa hẹn mang lại cách mạng y khoa Cùng với tiến ngành hóa sinh, số kỹ thuật y sinh học phân tử, chế bệnh sinh nhiều bệnh dược sáng tỏ Đột biến gen xác định nhiều nguyên nhân gây nên nhiều bệnh, đặc biệt bệnh lý di truyền chuyển hóa Những tổn thương gen thường xảy sớm nhất, lưu giữ gen người bệnh có khả truyền lại cho hệ sau Mặc dù không phổ biến số nhóm bệnh lý khác thực tế cho thấy hàng năm có số lượng lớn trẻ sinh bị dị tật mắc bệnh lý di truyền Đây nhóm bệnh lý gây nhiều khó khăn điều trị để lại hậu nặng nề sức khỏe, tinh thần chất lượng sống Y học đại bước tìm phương hướng phát sớm điều trị can thiệp trúng đích nhằm giải tận gốc nguyên bệnh Glôcôm bệnh phổ biến giới Việt Nam, hầu nguyên nhân thứ hai gây mù phòng chữa được, mối đe dọa nguy hiểm sức khỏe cộng đồng [1] Glôcôm bẩm sinh nguyên phát tình trạng tăng nhãn áp phát triển bất thường hệ thống thoát lưu thủy dịch, gây tổn hại đến cấu trúc mắt, dẫn đến thị giác Bệnh xuất trẻ từ sinh đến năm tuổi Việc phát sớm điều trị kịp thời cải thiện đáng kể thị lực trẻ [2] Đây bệnh gặp thử thách chẩn đoán điều trị cho bác sĩ nhãn khoa.Tỷ lệ bệnh thay đổi theo quốc gia nhóm dân tộc Tỷ lệ mắc nước phương Tây (Ireland, Anh, Mĩ) khoảng 1/10.000 đến 1/70.000 Tại Ả Rập Xê-út, miền Nam Ấn Độ, Slovakia, tỷ lệ mắc 1/ 1.250 1/3300 Ở Trung Quốc, tỷ lệ chiếm 1% tất rối loạn mắt bẩm sinh Tuổi trung bình glơcơm bẩm sinh ngun phát sớm chủng có tỷ lệ cao hơn: khoảng từ đến tháng (người châu Á, người Arabians người Ấn Độ); 11 tháng (các nước phương Tây) Mặc dù tỷ lệ tuổi khác nhau, tỷ lệ phần trăm nam giới người châu Á phương Tây khoảng 65% [3] Glôcôm bẩm sinh nguyên phát thể bệnh glôcôm di truyền lặn liên kết nhiễm sắc thể thường, phổ biến trẻ em [4] Những nghiên cứu mức độ in vitro in vivo protein CYP1B1 đóng vai trò quan trọng việc hình thành cấu trúc trì chức mắt Đột biến gen CYP1B1 chủ yếu đột biến điểm nằm rải rác toàn chiều dài gen; tỉ lệ phát đột biến CYP1B1 mang tính đặc trưng cho chủng tộc, châu Á khoảng 30% Bệnh biểu bệnh hai mắt với mức độ khác [5], [6], [7] [8] Hiện Việt Nam nghiên cứu đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân glơcơm bẩm sinh ngun phát chưa đồng Việc phát xác định tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát đưa nhìn nhận, đánh giá phù hợp tình hình bệnh, giúp bác sĩ lâm sàng kịp thời phát hiện, tăng hiệu điều trị nâng cao chất lượng chăm sóc sức khỏe cộng đồng Do vậy, đề tài: ”Xây dựng quy trình xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát” thực với mục tiêu: Xây dựng quy trình xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Bước đầu xác định tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.1.Khái niệm phân loại glôcôm bẩm sinh Glôcôm bẩm sinh dị tật nhãn cầu, gây hội chứng tăng nhãn áp nghiêm trọng mắt trẻ từ lúc sinh đến tuổi thiếu niên Bệnh nguyên phát thứ phát phối hợp với dị dạng toàn thân mắt Hậu tăng nhãn áp thể tích nhãn cầu, bán cầu trước tăng nhanh rối loạn trầm trọng đến chức thị giác Glôcôm bẩm sinhđược phân làm: - Glôcôm bẩm sinh nguyên phát: liên quan bất thường hệ thống lưu thể dịch (glơcơm rối loạn góc tiền phòng): chiếm 50-70% glơcơm bẩm sinh - Glôcôm bẩm sinh thứ phát: kèm theo bất thường phần khác mắt) * Glôcôm bẩm sinh nguyên phát: Bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Shaffer Weissđịnh nghĩa: “Glôcôm di truyền phổ biến trẻ em, di truyền theo NST thường, lặn, với bất thường đặc biệt góc gồm khơng có lùi điểm gắn chân mống tạo góc vùng bè không kèm theo bất thường phát triển khác Tăng nhãn áp nguyên nhân gây giác mạc to, đục chảy nước mắt rạn màng Descemet.” Việc phát điều trị sớm bệnh ngăn ngừa dẫn đến mù lòa Bệnh glơcơm bẩm sinh nguyên phát phần lớn phát muộn sau sinh, tỉ lệ cao trai (65%) so với gái (35%) Bệnh thường hai mắt với mức độ khác Triệu chứng thường gặp sợ ánh sáng, chảy nước mắt, co quắp mi Những triệu chứng thường khiến cha mẹ bệnh nhân lưu ý [1] 32 Bảng 2.3 Thành phần master mix STT Thành phần Sản phẩm sau PCR tinh Big Dye Buffer 5X Big Dye terminator V3.1 (2,5X) Nước cất Mồi ( 5pmol/µl) Tổng thể tích Thể tích(µl) 1,0 3,0 2,0 13 1,0 20 Chú ý: - Toàn khâu chuẩn bị master mix phải thực khay đá - Các hóa chất phải làm tan hồn tồn trộn trước sử dụng - Mỗi DNA thực hai phản ứng với mồi xuôi mồi ngược + Giai đoạn 2: chạy sequencing Sau chuẩn bị master mix cho phản ứng xong, ly tâm nhanh ống PCR để tồn dịch dính thành nắp ng xu ng làm tan bọt - Xếp ống master mix vào máy PCR - Chọn chương trình nhiệt cài đặt sẵn máy theo chu trình tối ưu hóa - Kiểm tra lại tồn chu trình nhiệt: + Chu kỳ 1:- Biến tính :96oC : phút + Chu kỳ – 26: - Biến tính: 96oC :10 giây - Bắt cặp : 50oC :5 giây - Tổng hợp : 60oC:4 phút + Bảo quản 10oC - Các sản phẩm sau khuếch đại big dye kit tinh cồn để loại bỏ toàn thành phần thừa đem đọc máy giải trình tự gen ABI (Applied Biosystem) Trình tự gen đối chiếu so sánh với trình tự GenBank (National center for biotechnology information, NCBI) phân tích theo 33 phương pháp ABI Prism 310 genetic analyzer (Applied Biosystems) 2.5.3 Xác định đột biến gen CYP1B1 Dựa kết giải trình tự gen CYP1B1, so sánh với trình tự GenBank xác định số lượng, vị trí, loại đột biến bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát Phát đột biến (nếu có) 2.5.4 Xác định tỷ lệ đột biến gen nhóm bệnh nhân, so sánh khác biệt 2.6 Xử lý kết Các số liệu nhập phần mềm SPSS 16.0 Tất số liệu kết nghiên cứu xử lý theo phương pháp thống kê y học Phân tíchthống kê mơ tả, so sánh, tính giá trị trung bình (X), tỷ lệ phần trăm (%) 2.7 Vấn đề đạo đức nghiên cứu - Đề tài tuân thủ chặt chẽ theo đạo đức nghiên cứu Y học - Bệnh nhân gia đình hồn tồn tự nguyện tham gia vào nghiên cứu: có chấp thuận bênh nhân gia đình (có chấp thuận người bảo hộ bệnh nhân 18 tuổi) - Các gia đình bệnh nhân rút khỏi nghiên cứu không muốn tham gia - Bệnh nhân người bảo hộ thông báo kết xét nghiệm, đồng thời giải thích khả điều trị phòng bệnh - Các thơng tin bệnh nhân gia đình đảm bảo bí mật: nhóm nghiên cứu thơng báo thông tin tiền sử, bệnh sử, kết khám bệnh kết xét nghiệm cho bệnh nhân người bảo hộ bệnh nhân Nghiên cứu tiến hành hồn tồn mục đích khoa học lợi ích điều trị bệnh nhân 34 CHƯƠNG DỰ KIẾN KẾT QUẢ 3.1 Kết phân tích đột biến gen CYP1B1 3.1.1 Kết tách chiết DNA 3.2.2 Kết xác định đột biến gen CYP1B 3.2.2.1 Kết PCR 3.2.2.2 Kết giải trình tự phát đột biến 3.2 Một số đặc điểm đối tượng nghiên cứu 3.2.1 Phân bố bệnh nhân theo giới tính Biểu đồ hình tròn 35 3.2.2 Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát Tuổi phát – tháng tháng – tuổi – tuổi Số bệnh nhân Tỷ lệ 3.2.3 Phân bố bệnh nhân theo triệu chứng lâm sàng Triệu chứng lâm sàng Triệu chứng điển hình Triệu chứng khơng điển hình Số bệnh nhân Tỷ lệ 3.2.4 Một số đặc điểm khác 3.3 Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh ngun phát Kết Có đột biến Khơng đột biến Số bệnh nhân Tỷ lệ 3.4 Mối liên quan đột biến gen đặc điểm đối tượng 3.4.1 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo giới Đột biến gen Có đột biến Khơng đột biến Nam Giới Nữ Số BN % Số BN % Tổng 36 Tổng p= Số BN % 37 3.4.2 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo tuổi khởi phát Đột biến gen Có đột biến Không đột biến Tuổi Khởi phát Tổng Số BN % Số BN 1-6 tháng % tháng – Số BN % năm 0-1 tháng Tổng Số BN % p= 3.4.3 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo triệu chứng Đột biến gen Có đột biến Khơng đột biến Tổng Số BN Triệu % Khơng điển Số BN chứng % hình Số BN Tổng % p= Điển hình 3.4.4 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo tiền sử gia đình Đột biến gen Có đột biến Khơng đột biến Tiền sử Có người bị Số BN % gia đình glơcơm Khơng có Số BN Tổng 38 bị % glôcôm Tổng Số BN % p= 3.4.5 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo tiền sử thai nghén Đột biến gen Có đột biến Khơng đột biến Tiền sử Có thai nghén Khơng Tổng p= Số BN % Số BN % Số BN % Tổng 39 3.4.6 So sánh tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo bệnh, tật bẩm sinh kèm theo Đột biến gen Có đột biến Khơng đột biến Bệnh,tật Có bẩm sinh kèm theo Tổng Không Số BN % Số BN % Số BN % = CHƯƠNG DỰ KIẾN BÀN LUẬN Tổng 40 4.1 Mục tiêu 1: Xây dựng quy trình xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Hồn thiện bước quy trình phát đột biến gen CYP1B1: -Xây dựng tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh nhânglơcơm bẩm sinh ngun phát - Phân tích phân bố bệnh theo tuổi, giới , tiền sử gia đình - Hồn thiện, tối ưu hóa bước quy trình kỹ thuật sinh học phân tử phát đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát phương pháp giải trình tự gen trực tiếp 4.2 Mục tiêu 2: Bước đầu xác định tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát - Bước đầu đưa tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát - Tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát có khác bệnh nhân nam, nữ; tuổi khởi phát bệnh; tiền sử thân; tiến sử thai nghén tiền sử gia đình khơng DỰ KIẾN KẾT LUẬN 41 DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Như Hơn (2012), Nhãn khoa, tập 1, ed Nhà xuất y học, tr 465 474 Gerhard W Cibis, MD; Chief Editor;Inci Irak Dersu, http://emedicine.medscape.com/article/1206081 Julia Yan Yu Chan, Bonnie NK Choy, Alex LK Ng (2015) Review on the Management of Primary Congenital Glaucoma J Curr Glaucoma Pract ,9(3): 92–99 Robert N Weiss, Shaffer Daniel I (1970), "Congenital and pediatric glaucomas", Mosby, St Louis, tr 37 Ji Hyun Lee, Chang-Seok Ki, Hee-Jung Kim cộng (2011), "Analysis of copy number variation using whole genome exon-focused array CGH in Korean patients with primary congenital glaucoma" Mol Vis ,17, tr 3583–3590 Mukesh Tanwar, Tanuj Dada, Ramanjit Sihota cộng (2009), "Mutation spectrum of CYP1B1 in North Indian congenital glaucoma patients" Mol Vis,15, tr 1200–1209 Fuse N., Miyazawa A., Takahashi K cộng (2010), "Mutation spectrum of the CYP1B1 gene for congenital glaucoma in the Japanese population" Jpn J Ophthalmol,54(1), tr 1-6 A O Khan, M A Aldahmesh, J Y Mohamed cộng (2012), "CYP1B1 analysis of unilateral primary newborn glaucoma in Saudi children" J AAPOS,16(6), tr 571-2 B Thylefors and A D Négrel The global impact of glaucoma BULL Who,72(3): 323–326 10 Shields M B, Third edition, Williams and Wilkins (1982).” Primary congenital glaucoma.” USA, 220-233 11 Anil K Mandal , Debasis Chakrabarti, Jan (2011)“ Update on congenital glaucoma.”, Indian Ophthalmol , 59(Suppl1): S148–S157 12 Nguyễn Như Quang (1982), "Đặc điểm lâm sàng bệnh glôcôm bẩm sinh phẫu thuật cắt bè củng mạc" Nhãn khoa,1, tr 65-70 13 T R Sutter, Y M Tang, C L Hayes cộng (1994), "Complete cDNA sequence of a human dioxin-inducible mRNA identifies a new gene subfamily of cytochrome P450 that maps to chromosome 2" J Biol Chem,269(18), tr 13092-9 14 Y M Tang, Y Y Wo, J Stewart cộng (1996), "Isolation and characterization of the human cytochrome P450 CYP1B1 gene" J Biol Chem,271(45), tr 28324-30 15 Stoilov I., Akarsu A N Sarfarazi M (1997), "Identification of three different truncating mutations in cytochrome P4501B1 (CYP1B1) as the principal cause of primary congenital glaucoma (buphthalmos) in families linked to the GLC3A locus on chromosome 2p21" Hum Molec Genet, ( 6) tr 641-647 16 M Sarfarazi, A N Akarsu, A Hossain cộng (1995), "Assignment of a locus (GLC3A) for primary congenital glaucoma (Buphthalmos) to 2p21 and evidence for genetic heterogeneity" Genomics,30(2), tr 171-7 17 http://westcoastglaucoma.com/education/glaucoma/gonioscopy 18 Schwartzman M L., Balazy M., Masferrer J cộng (1987), "12(R)-hydroxyicosatetraenoic arachidonate metabolite that acid: a inhibits cytochrome-P450-dependent Na+,K+-ATPase in the cornea",.”Eye (Lond),84(22), tr 8125-9 19 M Sarfarazi I Stoilov (2000), "Molecular genetics of primary congenital glaucom.”Eye (Lond),14 ( Pt 3B), tr 422-8 20 Ni Li, Yong Zhou, Liang Du cộng (2011), "Overview of Cytochrome P450 1B1 gene mutations in patients with primary congenital glaucoma" Experimental Eye Research,93, tr 572-579 21 H J Kim, W Suh, S C Park cộng (2011), "Mutation spectrum of CYP1B1 and MYOC genes in Korean patients with primary congenital glaucoma" Mol Vis,17, tr 2093-101 22 K K Abu-Amero, E A Osman, A Mousa cộng (2011), "Screening of CYP1B1 and LTBP2 genes in Saudi families with primary congenital glaucoma: genotype-phenotype correlation" Mol Vis,17, tr 2911-9 23 W Suh C Kee (2012), "A clinical and molecular genetics study of primary congenital glaucoma in South Korea" Br J Ophthalmol,96(11), tr 1372-7 24 Chen X1, Chen Y, Wang L cộng (2014 Feb), "CYP1B1 genotype influences the phenotype in primary congenital glaucoma and surgical treatment" Br J Ophthalm,98(2), tr 246-51 25 Tạ Thành Văn (2010) PCR số kỹ thuật y sinh học phân tử Nhà xuất Y học 26 Sanger F., Nicklen S and Coulson A.R (1977) DNA sequencing with chain-terminating inhibitors Proc Natl Acad Sci 74(12), 5463-5467 27 Koolman J (2005).” DNA sequencing.” Color Atlas of Biochemistry, 2nd edition, 260-262 28 Giáo trình bệnh mắt trẻ em; 2003 NXB Y Nà Nội 29 Gerhard W Cibis, MD; Chief Editor;Inci Irak Dersu, http://emedicine.medscape.com/article/1206081 30 https://ghr.nlm.nih.gov/gene/CYP1B1#location 31 http://www.uniprot.org/uniprot/Q16678 32 Kiranpreet Kaur, Anil K Mandal, Subhabrata Chakrabarti “Primary Congenital Glaucoma and the Involvement of CYP1B” Middle East Afr J Ophthalmol, 2011(8) – 16 33 Latifa Hilal, Soraya Boutayeb,Aziza Serrou “Screening of CYP1B1 and MYOC in Moroccan families with primary congenital glaucoma: Three novel mutations in CYP1B1” Molecular Vision, (16) 1215-1226 34 Aramati B M Reddy; Shirly G Panicker “Identification of R368H as a Predominant CYP1B1 Allele Causing Primary Congenital Glaucoma in Indian Patients” Investigative Ophthalmology Science, October 2003, Vol.44, 4200-4203 35 Basem A, Benjjani, Richard Alan Lewis (1998) & Visual “Mutations in CYP1B1, the Gene for Cytochrome P4501B1, Are the Predominant Cause of Primary Congenital Glaucoma in Saudi Arabia” AJHJ, Pages 325-333 PHỤ LỤC Phụ lục ... thực với mục tiêu: Xây dựng quy trình xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát Bước đầu xác định tỷ lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 3 CHƯƠNG... cứu đột biến gen CYP1B1 bệnh glôcôm Cuối cùng, đột biến DNA gen CYP1B1 xác định 542 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo 52 báo khoa học 147 đột biến khác tìm thấy Các loại đột biến gen. .. lệ đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát theo bệnh, tật bẩm sinh kèm theo 39 CHƯƠNG 4: DỰ KIẾN BÀN LUẬN 40 4.1 Mục tiêu 1: Xây dựng quy trình xác định đột biến