TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ====== LÊ THU THUỶ ẢNH HƢỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ ĐỘ pH ĐẾN QUÁ TRÌNH TẠO MÀNG BIOCELLULOSE TRÊN MƠI TRƢỜNG DỊCH DƢA CHUỘT (CUCUMIS SATIVUS L.1753) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Vi sinh vật học HÀ NỘI - 2019 TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ====== LÊ THU THUỶ ẢNH HƢỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ ĐỘ pH ĐẾN Q TRÌNH TẠO MÀNG BIOCELLULOSE TRÊN MƠI TRƢỜNG DỊCH DƢA CHUỘT (CUCUMIS SATIVUS L.1753) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Vi sinh vật học Ngƣời hƣớng dẫn khoa học ThS Nguyễn Thị Kim Ngoan HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Bằng tất lòng kính trọng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới cô giáo, ThS Nguyễn Thị Kim Ngoan, ngƣời tận tình bảo giúp đỡ em thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy giáo, cô giáo tổ môn Di truyền – Công nghệ sinh học, Khoa Sinh - KTNN, Trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội nhiệt tình giảng dạy, truyền đạt kinh nghiệm tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian em thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trƣờng, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh - KTNN, Trung tâm thơng tin thƣ viện, Phòng thí nghiệm Vi sinh vật Trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè ngƣời thân, ngƣời ln quan tâm, động viên, khích lệ, giúp đỡ em suốt trình học tập, tiến hành hoàn thiện đề tài Hà Nội, Ngày tháng năm 2019 Sinh viên thực Lê Thu Thủy LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan kết nghiên cứu riêng cá nhân em, tất số liệu đƣợc thu thập từ thực nghiệm qua xử lý thống kê, hồn tồn khơng có số liệu chép, bịa đặt Đề tài nghiên cứu không trùng với cơng trình nghiên cứu tác giả khác Trong đề tài, em có sử dụng số liệu số tác giả khác, em xin phép tác giả đƣợc trích dẫn để bổ sung cho khóa luận Nếu sai em xin chịu hồn toàn trách nhiệm Hà Nội, Ngày tháng năm 2019 Sinh viên thực Lê Thu Thủy MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Tính đề tài NỘI DUNG Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vị trí đặc điểm phân loại Gluconacetobacter sinh giới 1.1.1 Vị trí phân loại Gluconacetobacter sinh giới 1.1.2 Đặc điểm phân loại Gluconacetobacter 1.2 Biocellulose (BC) 1.2.1 Cấu trúc 1.2.2 Một số tính chất 1.2.3 Cơ chế tổng hợp 1.2.4 Chức cellulose vi khuẩn Gluconacetobacter 1.3 Điều kiện nuôi cấy 10 1.3.1 Nhiệt độ 10 1.3.2 Độ pH 10 1.3.3 Độ thơng khí 10 1.4 Ứng dụng màng Biocellulose 10 1.5 Tình hình nghiên cứu sản xuất màng Biocellulose 11 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 11 1.5.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 11 1.6 Dƣa chuột Cucumis sativus 12 1.6.1 Thành phần dinh dưỡng 12 1.6.2 Ứng dụng 12 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG, PHẠM VI, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu hóa chất 14 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 14 2.2 Phạm vi nghiên cứu 15 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Phương pháp vi sinh 16 2.3.1.1 Phân lập tuyển chọn chủng Gluconacetobacter theo phương pháp truyền thống (Phương pháp Vinogradski Beijerinck) 16 2.3.1.2 Quan sát đặc điểm hình thái cách xếp tế bào tiêu nhuộm kép 17 2.3.1.3 Phương pháp bảo quản chủng giống môi trường thạch nghiêng 17 2.3.1.5 Phương pháp lên men tạo màng Biocellulose 18 2.3.2 Phương pháp hóa sinh 18 2.3.2.1 Phát hoạt tính catalase 18 2.3.2.2 Phương pháp kiểm tra khả oxi hóa ethanol thành acid acetic 18 2.3.2.3 Phát khả oxy hoá acid acetic 18 2.3.2.4 Xác định khả tổng hợp cellulose 19 2.3.3 Phương pháp cảm quan 19 2.3.4 Phương pháp xác định trọng lượng tươi màng Biocellulose 19 2.3.5 Phương pháp toán học 19 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả tạo màng Biocellulose mơi trƣờng dịch dƣa chuột 21 3.1.1 Phân lập vi khuẩn Gluconacetobacter từ môi trường dịch dưa chuột 21 3.1.1.1 Làm giàu mẫu nguyên liệu 21 3.1.1.2 Phân lập vi khuẩn Gluconacetobacter có khả sinh màng Biocellulose 21 3.1.2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả tạo màng Biocellulose dai, mỏng 24 3.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ độ pH tới khả tạo màng Biocellulose môi trƣờng dịch dƣa chuột 27 3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả lên men tạo màng Biocellulose 27 3.2.2 Ảnh hưởng độ pH tới khả lên men tạo màng Biocellulose 29 3.2.3 Thử nghiệm khả tạo màng Biocellulose môi trường chọn (MT4) 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sợi cellulose màng Biocellulose Hình 1.2 Con đƣờng sinh tổng hợp cellulose Gluconaccetobacter Hình 3.1 Chủng giống vi khuẩn Gluconacetobacter 22 Hình 3.2 Khả oxi hóa acid acetic vi khuẩn Gluconacetobacter 24 Hình 3.3 Hình thái tế bào vi khuẩn Gluconacetobacter nhuộm Gram độ phóng đại 1000 kính hiển vi quang học 25 Hình 3.4 Màng Biocellulose chủng vi khuẩn T6 T9 tạo 26 Hình 3.5 Biểu đồ biểu diễn ảnh hƣởng nhiệt độ tới trình lên men tạo màng Biocellulose 28 Hình 3.6 Biểu đồ biểu diễn ảnh hƣởng độ pH tới trình lên men tạo màng Biocellulose 30 Hình 3.7 Màng Biocellulose thu đƣợc môi trƣờng chọn lọc MT4 31 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hóa chủng vi khuẩn Gluconacetobacter Bảng 3.1 Một số đặc tính màng Biocellulose 25 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ tới hình thành màng Biocellulose 28 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng độ pH tới trình lên men tạo màng Biocellulose 30 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Nhƣ biết công nghệ sinh học trở thành ngành kĩ thuật chiếm giữ vị trí chủ đạo nhiều quốc gia phát triển toàn giới Là phận công nghệ sinh học, công nghệ vi sinh phát triển mạnh mẽ với thành tựu to lớn có ý nghĩa đời sống đặc biệt ngành nhƣ: công nghiệp, nông nghiệp, y học Một nguồn nguyên liệu đƣợc quan tâm cellulose vi khuẩn hay Bacterial cellulose (BC) Màng sinh học Biocellulose vi khuẩn Gluconacetobacter tạo có cấu trúc đặc tính giống với cellulose thực vật, nhƣng không chứa hợp chất cao phân tử nhƣ: ligin, peptin, hemicellulose, sáp nến Do chúng có đặc tính vƣợt trội độ dẻo dai, độ bền, độ khỏe độ đàn hồi Bởi đặc tính ƣu việt nên màng Biocellulose đƣợc xem nhƣ nguồn nguyên liệu có tiềm năng, đƣợc ứng dụng nhiều lĩnh vực khác nhƣ: công nghiệp sản xuất giấy, màng Biocellulose đƣợc dùng để sản xuất giấy điện tử chất lƣợng cao; công nghệ môi trƣờng màng Biocellulose đƣợc sử dụng làm màng phân tách để xử lý nƣớc biến đổi độ nhớt nƣớc (Brown,1989; Jonas Fonah,1998) Trong y học, màng Biocellulose đƣợc ứng dụng làm da tạm thời trình điều trị bỏng, loét da, làm mặt nạ dƣỡng da cho ngƣời; Ngồi ra, màng Biocellulose đƣợc ứng dụng cơng nghệ sản xuất pin, làm môi trƣờng chất sinh học, thực phẩm hay thay thực phẩm Để nuôi Gluconacetobacter ngƣời ta thƣờng dùng: nƣớc vo gạo, nƣớc dừa già, nƣớc mía, rỉ đƣờng Các loại mơi trƣờng đƣợc nghiên cứu nhiều.Gần đây, phòng thí nghiệm Vi sinh khoa Sinh - KTNN, Trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội tiến hành lên men tạo màng Biocellulose môi trƣờng dịch dƣa chuột Cucumis sativus để ứng dụng vào việc làm mặt nạ dƣỡng da cho ngƣời Đối với chị em phụ nữ việc đắp mặt nạ tự nhiên mặt nạ từ trái cách dƣỡng da đơn giản, tốn mà lại hiệu Từ lâu nay, đắp vàng Đối với chủng thuộc chi Gluconacetobacter có khả phân giải tiếp tục acit acetic thành CO2 H2O làm phục hồi màu xanh nhƣ ban đầu môi trƣờng Ngƣợc lại, chủng thuộc chi Gluconobacter khơng có khả phân giải acid acetic nên môi trƣờng giữ màu vàng Trong chủng phân lập đƣợc có đến chủng có khả oxy hóa ethanol thành acid acetic, chúng khác độ mạnh yếu tùy vào loại chủng đƣợc phân biệt thành nhóm: nhóm sinh trƣởng nhanh nhóm sinh trƣởng chậm Vì nên việc theo dõi khả phục hồi màu xanh môi trƣờng để phân biệt chi Gluconacetobacter Gluconobacter khó khăn thiếu xác Vậy nên sau bƣớc cần tiếp tục khảo sát khả oxy hóa acetate nhằm phân biệt chủng thuộc chi Gluconacetobacter Gluconobacter Bước 3: Các chủng tuyển chọn bƣớc đƣợc đem cấy lên mơi trƣờng có chứa calcium acetate Do chi Gluconacetobacter Glucobacter có khả oxy hóa lactate nhƣng có vi khuẩn thuộc chi Gluconacetobacter có khả oxy hóa acetate Vì thế, mơi trƣờng có chứa calcium acetate, chủng vi khuẩn thuộc chi Gluconacetobacter có khả sử dụng muối acetate làm nguồn cacbon hay nói cách khác chúng có khả oxy hóa acid acetic thành CO2 H2O; giải phóng ATP cung cấp cho hoạt động sống tế bào đồng thời giải phóng Ca2+ tạo vòng phân giải xung quanh khuẩn lạc Ca(CH3COO)2 + O2 → CaCO3 ↓ + H2O + CO2 Từ thí nghiệm thu đƣợc chủng vi khuẩn thuộc chi Gluconacetobacter, họ Acetobacteriaceae T6 T9 23 Hình 3.2 Khả oxi hóa acid acetic vi khuẩn Gluconacetobacter Tiếp tục tiến hành nghiên cứu đặc điểm sinh hóa chủng Gluconacetobacter cách thử hoạt tính catalase chủng Gluconacetobacter (theo phƣơng pháp 2.3.2.1) Kết quả: có xuất bọt khí, chứng tỏ oxy đƣợc giải phóng ra, điều có nghĩa chủng vi khuẩn có enzim catalase phân giải H2O2 theo phƣơng trình: H2O2 → H2O + O2 3.1.2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả tạo màng Biocellulose dai, mỏng Khi tiến hành nuôi cấy mơi trƣờng thạch đĩa, ta dễ dàng quan sát thấy vi khuẩn Gluconacetobacter hình thành khuẩn lạc bóng nhẵn xù xì, phần rìa mép khuẩn lạc phẳng hay gợn sóng, màu trắng đục suốt, khuẩn lạc lồi lên phía mặt thạch tách khỏi mơi trƣờng [28] Để quan sát đƣợc hình thái cấu tạo vi khuẩn Gluconacetobacter sử dụng phƣơng pháp nhuộm Gram thấy vi khuẩn Gluconacetobacter có dạng hình que thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm 24 Hình 3.3 Hình thái tế bào vi khuẩn Gluconacetobacter nhuộm Gram độ phóng đại 1000 kính hiển vi quang học Các chủng Gluconacetobacter đƣợc phân lập chọn lọc bƣớc đƣợc tiếp tục nghiên cứu tuyển chọn tiếp tục để chọn đƣợc chủng có khả tạo màng Biocellulose Q trình chọn lọc cần trải qua bƣớc nhƣ sau: Bước1: Khảo sát khả tạo màng Biocellulose chủng Gluconacetobacter phân lập môi trƣờng (MT3) + Tiến hành nuôi cấy chủng T6 T9 môi trƣờng dịch thể nhiệt độ thích hợp 300C theo dõi khả tạo màng Biocellulose chủng + Kết cho thấy khả hình thành màng môi trƣờng lỏng chủng khác về: tính chất, đặc điểm thời gian hình thành màng Bảng 3.1 Một số đặc tính màng Biocellulose STT Tên chủng Khối lƣợng màng (g/l) Độ dày màng (nm) Đặc điểm màng T6 3,15 1,0 – 2,0 Màng mỏng, trong, dai, nhẵn đƣợc hình thành từ ngày thứ T9 4,02 2,0 – 2,5 Màng dày, nhẵn, dễ rách đƣợc hình thành từ ngày thứ 25 So sánh thời gian hình thành màng ta thấy chủng Gluconacetobacter T9 có khả hình thành màng chậm (ngày thứ bắt đầu hình thành) Chủng Gluconacetobacter T9 tạo đƣợc lớp màng dày nhiên màng dễ rách khơng có dẻo dai nên sử dụng để nghiên cứu bƣớc khó khăn Còn chủng Gluconacetobacter T6 khả hình thành màng sớm (ngày thứ bắt đầu hình thành màng), màng tạo thành mỏng dai, hình thức tƣơng đối đẹp T6 T9 Hình 3.4 Màng Biocellulose chủng vi khuẩn T6 T9 tạo Bước 2: Chúng tiến hành kiểm tra chất cellulose màng theo phƣơng pháp Xác định khả tổng hợp cellulose (phƣơng pháp 2.3.2.4) Kết cho thấy chủng Gluconacetobacter có khả hình thành màng Biocellulose Ngoài ra, kiểm tra thêm số đặc tính sinh hóa khác chủng Gluconacetobacter nói nhƣ hoạt tính catalase, chuyển hóa glycerol thành dihydroxyaceton, khả sinh sắc tố nâu Có thể tạm khẳng định chủng G.xylinus Nhƣ vậy, từ nguồn nguyên liệu ban đầu phân lập đƣợc chủng vi khuẩn tuyển chọn sơ đƣợc chủng Gluconacetobacter, chủng có khả lên men tạo màng Biocellulose Xuất phát từ 14 nguồn nguyên liệu tác giả Đinh Thị Kim Nhung [14] nghiên cứu đa dạng sinh học chủng Gluconacetobacter tuyển chọn đƣợc 65 chủng có khả sinh màng Biocellulose Có thể thấy loài vi khuẩn thuộc chủng 26 Gluconacetobacter đa dạng phong phú, chúng sinh trƣởng phát triển đuợc nhiều điều kiện môi trƣờng khác Khả tạo màng Biocellulose đa dạng độ dày mỏng, màu sắc cảm quan, mùi vị, tính chất vật lý Phân lập chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T Gluconacetobacter xylinus T9, tuyển chọn chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 có khả sinh màng Biocellulose với đặc tính màng mỏng dai, mơi trường có bổ sung dịch dưa chuột 3.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ độ pH tới khả tạo màng Biocellulose môi trƣờng dịch dƣa chuột 3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả lên men tạo màng Biocellulose Nhiệt độ yếu tố định đến khả hình thành màng Biocellulose chủng Gluconacetobacter xylinus T6 Trong điều kiện nhiệt độ thấp vi khuẩn sinh trƣởng chậm, thời gian nuôi cấy kéo dài, khả tổng hợp cellulose nhiệt độ cao dẫn đến q trình hơ hấp diễn mạnh mẽ gây ảnh hƣởng đến trình tổng hợp cellulose Để xác định nhiệt độ tốt cho trình lên men tạo màng, tiến hành nuôi cấy vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 pH=5 tủ ấm Binder (Đức) với mức nhiệt độ khác nhau, sau thu hồi xác định khối lƣợng khơ màng sau ngày nuôi cấy Kết đƣợc thể qua bảng sau: 27 Bảng 3.2: Ảnh hƣởng nhiệt độ tới hình thành màng Biocellulose STT Nhiệt độ (0 C) Đặc điểm màng BC M m 15 Màng khơng hình thành 20 Xuất sợi cellulose mảnh lơ lửng dung dịch 25 Màng mỏng, dai, nhẵn 2,45 0,01 0,02 30 Màng mỏng, trong, dai, 3,12 nhẵn 0,03 0,06 35 Màng dày, dai, nhẵn 0,03 0,05 40 Màng khơng hình thành 45 Màng khơng hình thành 3,25 3.5 Khối lƣợng 2.5 tƣơi 1.5 màng BC 0.5 (g) khuẩn ViVi khuẩn T6 15 20 25 30 35 T6 40Nhiệt độ Hình 3.5 Biểu đồ biểu diễn ảnh hƣởng nhiệt độ tới trình lên men tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn Gluconacetobacter T6 Từ kết bảng 3.2 cho thấy vi khuẩn Gluconacetobacter vi khuẩn đơn bào nên chúng mẫn cảm với biến hóa nhiệt độ Và nhiệt độ nhân tố 28 định ảnh hƣởng tới sinh trƣởng vi khuẩn tính mẫn cảm với nhiệt độ phản ứng xúc tác nhờ hệ enzim Trong điều kiện môi trƣờng nhiệt độ thấp (15 – 200C) phản ứng bị ngƣng trệ diễn chậm chạp dẫn đến sinh trƣởng vi khuẩn bị chậm lại khơng hình thành mà xuất sợi cellulose lơ lửng dung dịch Còn điều kiện nhiệt độ mơi trƣờng tăng cao (40 – 450C), vi khuẩn sinh trƣởng hệ enzim bị thay đổi hoạt tính dẫn đến màng cellulose khơng hình thành Mỗi chủng vi sinh vật thƣờng có ngƣỡng nhiệt độ phát triển khác nhau, chủng vi khuẩn G xylinus T6 sinh trƣởng tổng hợp cellulose thích hợp khoảng nhiệt độ 25 – 350C Khả hình thành màng tốt 300C Vì vậy, nhiệt độ thích hợp cho trình lên men tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn G xylinus T6 300C 3.2.2 Ảnh hưởng độ pH tới khả lên men tạo màng Biocellulose Giá trị pH đƣợc đo nồng độ ion H+ OH- có mơi trƣờng, pH môi trƣờng ảnh hƣởng trực tiếp gián tiếp đến tính chất sinh lí tế bào nên ảnh hƣởng đến khả hình thành màng vi khuẩn Gluconacetobacter T6 Để xác định pH thích hợp cho tế bào sinh trƣởng tạo màng Biocellulose, tiến hành nuôi cấy vi khuẩn mơi trƣờng có giá trị pH khác 300C ngày Kết đƣợc thể qua bảng sau: 29 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng độ pH tới trình lên men tạo màng Biocellulose STT Độ pH Đặc điểm màng Màng mỏng, dễ rách 1,25 0,01 0,02 Màng mỏng, dai, sần 2,58 0,02 0,04 Màng mỏng, trong, dai, nhẵn 3,14 0,03 0,05 Màng mỏng, dai 2,66 0,02 0,03 Màng khơng hình thành Màng khơng hình thành Khối lƣợng tƣơi màng BC (g) M m 3.5 2.5 khuẩn ViVi khuẩn T6T6 1.5 0.5 pH Hình 3.6 Biểu đồ biểu diễn ảnh hƣởng độ pH tới trình lên men tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn Gluconacetobacter T6 Tại giá trị pH khác thu đƣợc khối lƣợng cellulose khác nhau, điều chứng tỏ pH yếu tố ảnh hƣởng đến hiệu suất tổng hợp cellulose Gluconacetobacter Chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 đƣợc nuôi cấy mơi trƣờng dịch dƣa chuột vòng ngày có giá trị pH = khơng xuất màng, giá trị pH = màng mỏng khoảng pH = – màng tạo thành có độ dày tƣơng đƣơng nhƣng khối lƣợng cellulose đạt đƣợc giá 30 trọ cao mơi trƣờng có giá trị pH = màng có đặc tính dai, nhẵn Như vậy, pH thích hợp cho q trình lên men tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 3.2.3 Thử nghiệm khả tạo màng Biocellulose môi trường chọn (MT4) Ngay sau xác định đƣợc ảnh hƣởng yếu tố nhiệt độ nhƣ độ pH môi trƣờng tới khả tạo màng Biocellulose vi khuẩn G xylinus môi trƣờng MT3, định tiến hành thí nghiệm đánh giá khả tạo màng mơi trƣờng chọn (MT4) với điều kiện nhiệt độ 300C pH = Kết quả: Sau ngày nuôi cấy tiến liên tục với điều kiện dinh dƣỡng môi trƣờng ổn định, tối ƣu tiến hành thu màng kiểm tra chất lƣợng màng Biocellulose so sánh với màng thu đƣợc mơi trƣờng MT3 thấy : chất lƣợng màng tốt, đảm bảo đầy đủ yêu cầu đặt ra, phù hợp với việc làm mặt nạ dƣỡng da Hình 3.7 Màng Biocellulosethu mơi trường chọn lọc MT4 Q trình thử nghiệm lên men tạo màng môi trƣờng chọn MT4 cho kết màng Biocellulose thu đƣợc đạt tiêu chuẩn mỏng, dai nhẵn so với môi trƣờng ban đầu MT3, phù hợp với mục đích sử dụng làm mặt nạ dƣỡng da 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1.1 Phân lập, tuyển chọn đƣợc chủng G xylinus có khả lên men tạo màng Biocellulose có đặc tính mỏng dai, mơi trƣờng có bổ sung dịch dƣa chuột 1.2 Tìm đƣợc nhiệt độ độ pH thích hợp cho trình lên men tạo màng Biocellulose mơi trƣờng có bổ sung dịch dƣa chuột nhiệt độ 300C pH = Sau ngày nuôi cấy thử nghiệm môi trƣờng MT4 tĩnh ta thu đƣợc màng mỏng, dai, nhẵn đạt tiêu chuẩn làm mặt nạ dƣỡng da Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn nên xin đề nghị số ý kiến sau: + Tiến hành thí nghiệm quy mơ lớn hơn, lặp lại thí nghiệm nhiều lần để kiểm chứng kết thu đƣợc + Tiến hành nghiên cứu để tìm kiếm nguồn dinh dƣỡng thích hợp nhƣ: Pepton, Nitơ, Cacbon đến hình thành màng + Các khâu xử lý, bảo quản đóng gói màng 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Nguyễn Lân Dũng (1976), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập 1- 2- 3, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội [2] Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo, Vƣơng Trọng Hào (1990), Thực hành vi sinh vật, Nxb giáo dục, tr 17-34, 63-74, 89-92 [3] Đặng Thị Hồng (2007), Phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Acetobacter xylinum chế tạo màng sinh học, Luận văn thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội [4] Nguyễn Quỳnh Hƣơng (2005), Đa dạng hóa mơi trường sản xuất bacterial cellulose từ vi khuẩn Acetobacter xylinum, Luận văn Thạc sĩ sinh học Trƣờng Đại Học Nông Lâm TP.HCM [5] Nguyễn Thúy Hƣơng (2008), “Ảnh hƣởng nguồn chất kiểu lên men đến suất chất lƣợng cellulose vi khuẩn”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, số 24, trang 205-210 [6] Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng”, Tạp chí dược học, số 361 [7] Nguyễn Thị Nguyệt (2008), Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum cho màng Bacterial cellulose làm mặt nạ dưỡng da, Luận văn Thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội [8] Đinh Thị Kim Nhung (1996), Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Acetobacter ứng dụng chúng lên men acidacetic theo phương pháp chìm, Luận án PTS Sinh học, Trƣờng Đại học Tổng hợp Hà Nội [9] Đinh Thị Kim Nhung, Dƣơng Minh Lam (2012), “Nghiên cứu định danh chủng vi khuẩn BHN2_21 có khả tạo màng Bacterial cellulose (BC) 33 phân lập đƣợc từ mẫu bia Hà Nội”, Kỷ yếu toàn văn Hội nghị Khoa học lần 8, ĐHKHTN- ĐHQG Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 10 tháng 11, năm 2012 [10] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Hoàng Thị Thảo (2011), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum sinh tổng hợp màng Bacterial cellulose ứng dụng điều trị bỏng”, Tạp chí Y học thảm họa bỏng, ISSN 1859-3461 Số 2, tr 122-127 [11] Đinh Thị Kim Nhung (2012), Nghiên cứu thu nhận màng cellulose từ vi khuẩn Acetobacter, ứng dụng trị bỏng, Đề tài trọng điểm cấp Bộ (20102012) [12] Trần Nhƣ Quỳnh (2009), Nghiên cứu số đặc tính vật lý màng bacterial cellulose từ Acetobacter xylinum, ứng dụng trị bỏng Luận văn Thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội [13] Trần Linh Thƣớc (2006), Phương pháp phân tích vi sinh vật, Nxb giáo dục, 2006, tr 1- 29, 40- 69 [14] Nguyễn Thị Thùy Vân (2009), Nghiên cứu đặc tính sinh học khả tạo màng Bacterial cellulose vi khuẩn Acetobacter xylinum phân lập từ số nguồn nguyên liệu Việt Nam, Luận văn Thạc sĩ khoa học sinh học, trƣờng ĐHSP Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh [15] Alexander Steinbuchel, Sang Ki Rhee (2005) Polysaccharides and polyamides in the food industry, www.wiley.vch pp 31-85 [16] Barbara Surma - S'lusarska, Sebastion, Presler, Dariusz Danielewicz (2008), "Characteristics of Bacterial Cellulose Obtained from Actobacter xylinum culture for applycation in papermarking", FIBRES TEXTILES in Eastem Europe, vol 16, No 4, pp 108-111 [17] Bergey H, John G Holt( 1992) Bergey’s manual of dererminativa bacteriology, Wolters kluwer health,p.71- 84 34 [18] Brown A.J (1886), ”An acetic ferment which forms cellulose”, J.Chem Soc., 49, 432-439 [19] Yamanaka S, Ishihanra M, Sugiyama J (2000) ”Structural mod-ification of bacterial cellulose”, Cellulose 7: 213-225 35 PHỤ LỤC Hình 1: Một số mẫu màng thu điều kiện mơi trường khác Hình 2: Khả tạo cellulose chủng Gluconacetobacter Hình 3:Hoạt tính Catalase Hình 4: Chuyển hóa ethanol thành acid acetic vi khuẩn Acetic ... khả tạo màng Biocellulose môi trường dịch dưa chuột 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 3.3 Ảnh hưởng độ pH tới khả tạo màng Biocellulose. .. tạo màng Biocellulose dai, mỏng 24 3.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ độ pH tới khả tạo màng Biocellulose môi trƣờng dịch dƣa chuột 27 3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả lên men tạo màng. ..TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PH M HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ====== LÊ THU THUỶ ẢNH HƢỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ ĐỘ pH ĐẾN QUÁ TRÌNH TẠO MÀNG BIOCELLULOSE TRÊN MƠI TRƢỜNG DỊCH DƢA CHUỘT (CUCUMIS SATIVUS L.1753) KHĨA