ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - PHẠM THỊ NAM Tên đề tài NGHIÊN CƢ́U KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI GẤM (Paphiopedilum concolor) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO TỪ CHỒI NÁCH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hê ̣đào ta ̣o : Chính quy Chuyên ngành: Công nghê ̣sinh ho ̣c Khoa : CNSH-CNTP Khoá học : 2013-2017 Thái Nguyên, năm 2017 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - PHẠM THỊ NAM Tên đề tài NGHIÊN CƢ́U KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI GẤM (Paphiopedilum concolor) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO TỪ CHỒI NÁCH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hê ̣đào ta ̣o : Chính quy Chuyên ngành : Công nghê ̣sinh ho ̣c Khoa : CNSH-CNTP Khoá học : 2013-2017 Giảng viên hƣớng dẫn 1: GS TS Ngơ Xn Bình Giảng viên hƣớng dẫn 2: ThS Nguyễn Thi Ti ̣ n ̀ h Thái Nguyên, năm 2017 i LỜI CẢM ƠN Đƣợc sự đồng ý của Ban giám hiệu nhà trƣờng , Ban chủ nhiê ̣m khoa Công nghê ̣ sinh ho ̣c và Công nghê ̣ thƣ̣c phẩ m , thời gian thƣ̣c tâ ̣p tố t nghiê ̣p em đã thƣ̣c hiê ̣n đề tài : “Nghiên cƣ́u khả nhân nhanh lan Hài Gấm (Paphiopedilum concolor) bằ ng phƣơng pháp in vitro từ chồi nách” Trang đầ u tiên của khoá luâ ̣n này em xin gƣ̉i lời cảm ơn tới Ban giám hiê ̣ u nhà trƣờng, Ban chủ nhiê ̣m khoa Công nghê ̣ Sinh ho ̣c và Công nghê ̣ Thƣ̣c phẩ m cùng các thầy cô giáo Khoa đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cƣ́u này Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biế t ơn sâu sắ c, em xin gƣ̉i lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo GS.TS Ngơ Xn Bình và giáo ThS Ngũn Thị Tình, giảng viên khoa Cơng nghê ̣ Sinh ho ̣c và Công nghê ̣ Thƣ̣c phẩ m đã tâ ̣n tình chỉ bảo , giúp đỡ và hƣớng dẫn em thời gian thực hiện đề tài Đồng thời, em xin cám ơn tha ̣c si ̃ Ma Thi ̣Hoàn đã giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhấ t cho em suố t quá trình thƣ̣c tâ ̣p tớ t nghiê ̣p Ć i cùng , em xin cảm ơn gia đình đã ta ̣o điề u kiê ̣n vâ ̣t chấ t và là chỗ dựa tinh thần cho em suốt thời gian thực tập , cảm ơn bạn bè đã hết lòng động viên, giúp đỡ suốt thời gian qua Trong quá trình thƣ̣c tâ ̣p , cũng nhƣ là quá trình làm báo cáo thƣ̣c tâ ̣p thời gian có ̣n không tránh khỏi sai sót Em rấ t mong nhâ ̣n đƣơ ̣c nhƣ̃ng ý kiế n đóng góp của thầ y cô và các ba ̣n để đề t ài của em đƣợc hoàn thiện Lời cuố i em xin kiń h chúc các thầ y , cô giáo nhà trƣờng , khoa Công nghê ̣ Sinh ho ̣c và Côn g nghê ̣ thƣ̣c phẩ m , cùng các bạn đồng nghiệp sức khoẻ , thành công sống Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2017 Sinh viên thƣc̣ hiêṇ Phạm Thị Nam ii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Thiế t bi,̣ dụng cụ nghiên cứu 26 Bảng 4.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian khƣ̉ trùng của HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng (sau ngày nuôi cấy) 36 Bảng 4.2 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của số môi trƣờng đế n khả tái sinh chồ i lan Hài P concolor (sau 40 ngày nuôi cấy) 37 Bảng 4.3 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA đến khả nhân nhanh lan Hài P concolor (sau 30 ngày nuôi cấy) 39 Bảng 4.4 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor (sau 30 ngày nuôi cấy)………………………… 41 Bảng 4.5 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của dịch chiết chuối đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor (sau 30 ngày nuôi cấy) 43 Bảng 4.6 Kết quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ lan Hài P concolor (sau 30 ngày nuôi cấy) 45 Bảng 4.7 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA kế t hơ ̣p với than hoa ̣t tính đế n khả rễ lan Hài P concolor(sau 30 ngày nuôi cấy) 47 Bảng 4.8 Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của giá thể tới khả sinh trƣởng phát triển của lan Hài P concolor 49 iii DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Đoa ̣n thân mang chồi ngủ, chồi nách của lan Hài P concolor 25 Hình 3.2: Sơ đờ nghiên cứu ảnh hƣởng của số chất kích thích sinh trƣởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi rễ của lan Hài P concolor 28 Hình 4.1 Biể u đờ ảnh hƣởng của nờ ng đô ̣, thời gian của HgCl đến khả tạo vật liê ̣u vô trùng (sau ngày nuôi cấy) 36 Hình 4.2 Biể u đờ ảnh hƣởng của nờ ng đô ̣ BA đế n khả nhân nhanh lan Hài P.concolor (sau 30 ngày nuôi cấy) 39 Hình 4.3 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA tố t nhấ t kết hợp với Kinetin đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor (sau 30 ngày ni cấy) 41 Hình 4.4 Biể u đồ ảnh hƣởng của dịch chiết chuối đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor (sau 30 ngày nuôi cấy) 43 Hình 4.5 Biể u đờ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ giố ng lan Hài P concolor (sau 30 ngày nuôi cấy) .45 Kế t quả thí nghiê ̣m đƣơ ̣c thể hiê ̣n qua hình 4.6: .47 Hình 4.6 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA kết hợp với THT đế n khả rễ lan Hài P concolor (sau 30 ngày nuôi cấy) 47 Hình 4.7: Ảnh hƣởng của số giá thể tới khả sinh trƣởng phát triển của lan Hài P concolor 50 iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT B5 : Gamborg cs, 1976 BA : 6-Benzyl amino purine CS : Cộng sự CT : Công thức CV : Coeficient of Variation Đ/C : Đối chứng Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashighe Skoog, 1962 MT : Môi trƣờng NAA : α-Napthalene acetic acid P malipoens : Paphiopedilum malipones THT : Than hoạt tính WPM : Woody Plant Medium – Lioyd Mc Cown, 1980 v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầ u của đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài .3 Phần TỔNG QUAN TÀI LIÊU ̣ .4 2.1 Giới thiệu về lan Hài (Paphiopedilum) 2.1.1 Phân loại và nguồn gốc .4 2.1.1.1 Phân loại Về mă ̣t thƣ̣c vâ ̣t ho ̣c, các loài lan Hài thuộc vào chi là: 2.1.1.3 Đặc điểm sống [2] 2.2 Tổng quan về lan Hài P concolor 2.2.1 Nguồ n gố c và sƣ̣ phân bố lan Hài P concolor Việt Nam 2.2.2 Hình thái: 2.2.3 Các điều kiện bản để nuôi trồ ng giố ng lan Hài P Concolor 2.2.4 Các phƣơng pháp nhân giống vơ tính lan Hài P.Concolor .9 2.3 Khái quát về nuôi cấy mô tế bào 10 2.3.1 Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào 10 2.4 Các vấn đề thƣờng gặp nhân giống invitro .10 2.4.1 Tính bất định về mặt di truyền 10 2.4.2 Sự nhiễm mẫu 11 2.4.3 Sự hóa thủy tinh thể 11 2.4.4 Việc sản xuất chất gây độc từ mẫu 11 2.5 Ƣu và nhƣợc điểm của phƣơng pháp nuôi cấy mô 12 2.5.1 Ƣu điểm 12 vi 2.5.2 Nhƣợc điểm .13 2.6 Quy trình nhân giống in vitro [9] 13 2.6.1 Chuẩn bị làm vật liệu gốc 13 2.6.2 Thiết lập hệ thống cấy vô trùng 13 2.6.3 Nhân nhanh chồi .14 2.6.4 Tạo rễ 14 2.6.5 Chuyển đất trồng 14 2.7 Tình hình nghiên cứu nhân giống lan Hài giới và nƣớc 15 2.7.1 Trên giới 15 2.7.2 Trong nƣớc 19 Phần ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .25 3.1 Vâ ̣t liê ̣u, hoá chất và thiết bị nghiên cứu 25 3.1.1 Đối tƣợng, vâ ̣t liê ̣u nghiên cƣ́u 25 3.1.2 Hoá chất sử dụng .26 3.1.3 Thiế t bi,̣ dụng cụ nghiên cứu 26 3.2 Phạm vi, điạ điể m và thời gian nghiên cƣ́u 26 3.2.1 Phạm vi nghiên cứu 26 3.2.2 Điạ điể m nghiên cƣ́u .27 3.2.2 Thời gian nghiên cƣ́u 27 3.3 Nô ̣i dung nghiên cƣ́u 27 3.4 Phƣơng pháp nghiên cƣ́u 27 3.4.1 Chuẩ n bi ̣môi trƣờng nuôi cấ y in vitro 27 3.4.2 Phƣơng pháp nghiên cứu quy trình nhân giống 28 3.4.3 Phƣơng pháp bố trí thí nghiê ̣m 28 3.5 Phƣơng pháp thu thập, xƣ̉ lý số liê ̣u và tiêu đánh giá 33 3.5.1 Thu thập số liệu .33 3.5.2 Các tiêu theo dõi 33 3.5.3 Phƣơng pháp sử lý số liệu .34 Phần KẾT QUẢNGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .35 4.1 Kết quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣, thời gian của chấ t khƣ̉ trùng HgCl đến khả tạo vật liệu vô trùng .35 vii 4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của số môi trƣờng đến khả tái sinh chồi lan Hài P concolor tƣ̀ đoa ̣n thân mang chồ i ngủ , chồi nách .37 4.3 Kết quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của số Cytokintine đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor 38 4.3.1 Kết quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor 38 4.3.2 Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor 40 4.4 Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của dịch chiết chuối tới khả nhân nhanh chồi lan Hài P concolor 42 4.5.Kết quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA và than hoa ̣t tính đế n khả rễ của lan Hài P concolor 44 4.5.1 Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ của lan Hài P concolor 44 4.5.2 Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA kế t hơ ̣p với than hoa ̣t tính (THT) đến khả rễ lan Hài P concolor .46 4.6 Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của giá thể tới khả sinh trƣởng phát triển của lan Hài P concolor 48 Phầ n 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHI 51 ̣ 5.1 Kế t luâ ̣n 51 5.2 Kiến nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Việt Nam quốc gia có tính đa dạng sinh học cao nhất giới, đƣợc công nhận quốc gia ƣu tiên cao cho bảo tờn tồn cầu Hệ sinh thái của Việt Nam giàu có và đa dạng với nhiều kiểu rừng, nhiều loài động, thực vật độc đáo khơng có nơi nào giới [14] Phong lan mọc khắp nơi giới nhiên tập trung loài phong lan đẹp nhất phải kể đến hai khu vực Châu Mỹ Châu Á nhiệt đới Việt Nam nằm khu vực châu Á nhiệt đới - nơi phát sinh nhiều loài phong lan đẹp nhất giới Theo đánh giá của giáo sƣ Averyanov, Việt Nam có 158 chi khoảng 900 loài Theo tác giả Trần Duy Quý và cs đã thống kê phát hiện, Việt Nam có 160 chi và 1004 loài lan Đây là quốc gia có ng̀n tài ngun thực vật và đặc biệt họ Lan phong phú bậc nhất khu vực Châu Á Khơng có nơi nào mà sự đa dạng của loài lan hài lại cao Việt Nam Có thể thấy 18 lồi lan hài thuộc chi Paphiopedilum với vô số dạng lai tự nhiên của chúng Năm số loài lan hài có Việt Nam mà khơng có nơi nào khác Nhu cầu tiêu thụ loài hoa lan có màu sắc sặc sỡ rất lớn, nên ngƣời tìm hoa lan sẵn sàng trèo lên vỉa đá dốc vùng xa xôi hẻo lánh để thu hái chúng Việc thu hái nhƣ đã gây nên tác động tàn phá nghiêm trọng Một loài lan hài đã bị tuyệt chủng Việt Nam, loài bị đe dọa mức độ cực kỳ nguy cấp, 15 loài khác mức độ nguy cấp (trong hầu hết loài đã rất gần với mức độ cực kỳ nguy cấp) Hài Gấm, có tên khoa học Paphiopedilum concolor (P concolor), là nhƣ̃ng loài lan đă ̣c hƣ̃u quý hiế m của khu vực Đông Á Hài P Concolor - Lan Hài nở hoa vào mùa Xuân mùa Thu có hoa cụm Lan Hài P Concolor phân bố Myanma, Thái Lan, Việt Nam nhƣ tại miền Bắc Việt Nam Là loài Hài rất quý đƣợc phát hiện, có hoa to, màu sắc sặc sỡ, lạ mắt rất đẹp, rất đƣợc ƣa chuộng thị trƣờng Lan nƣớc ngoài Tính đa dạng về màu sắc hình dáng của cánh hoa bên và môi là điều hấp dẫn nhất ngƣời trồng lai tạo Lan Hài Ảnh rễ lan Hài P concolor sau 30 ngày nuôi cấy PHỤ LỤC 2: MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY Bảng 1: Thành phần của môi trƣờng MS (Muashige & Skoog) Stock Bottle Component Solution (g/l) I II III IV V Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/l) NH4NO3 82,5 KNO3 95 MgSO4.7H2O 37 MnSO4.4H2O 2,23 ZnSO4.7H2O 1,058 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17 170,0 H3BO4 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 FeSO4.7H2O 2,784 Na2EDTA.2H2O 3,724 20 1.650,0 1.900,0 370,0 10 10 10 22,3 10,6 0,83 6,2 0,25 10 27,85 37,25 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid 100 0,5 0,5 Glycine 100 2,0 2,0 Thiamine acid 100 0,1 0,1 Pyridocine HCl 100 0,5 0,5 Sucrose 30.0000,0 Agar 5.500,0 pH 5,6 - 5,8 Bảng 2: Thành phần của môi trƣờng B5 (Gamborg cs, 1976) Đa lƣợng Vi lƣợng Các chất hữu Muối khoáng Nồng dộ (mg/l) (NH4)2SO4 134 CaCl2.2H2O 150 MgSO4.7H2O 246 KNO3 2.258 MnSO4.2H2O 10 KI 0.75 Na2MoO4.2H2O 0.25 Na2H2PO4.2H2O 150 ZnSO4.7H2O 2.0 Na2EDTA.2H2O 37.2 H3BO3 CoCl2.6H2O 0.025 CuSO4.5H2O 0.025 FeSO4.7H2O 27.8 Myo- inositol 100 Nicotinic acid Pyrodoxine HCl Thiamine 10 Đƣờng 30 Bảng 3: Thành phần của môi trƣờng WPM (Woody Plant Medium Lioyd Mc Cown, 1980) Vi lƣợng Đa lƣợng Các chất hữa Muối khoáng Nồng độ (mg/l) CuSO4.5H2O 0.25 Na2EDTA.2H2O 37.2 H3BO3 6.20 MnSO4.H2O 22.30 FeSO4.7H2O 27.8 ZnSO4.7H2O 8.6 CaCl2.2H2O 96 Ca(NO3)2.4H2O 556 KH2PO4 170 K2SO4 990 MgSO4.7H2O 370 NH4NO3 400 NaMoO4.2H2O 0.25 Myo – inositol 100 Pyridoxine HCl 0.5 Glycine 2.0 Nicotinic acid 0.5 Thiamine HCl 1.0 Agar Đƣờng 30 PHỤ LỤC 3: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ hóa chất thời gian khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMS FILE HGCL2 8/ 5/17 10:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung VARIATE V003 TLMS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT * RESIDUAL 11659.9 1295.54 20 214.215 10.7107 120.96 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 29 11874.1 409.451 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMN FILE HGCL2 8/ 5/17 10:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung VARIATE V004 TLMN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT * RESIDUAL 16461.1 1829.02 20 333.567 16.6783 109.66 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 29 16794.7 579.128 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMC FILE HGCL2 8/ 5/17 10:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung VARIATE V005 TLMC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT * RESIDUAL 26002.5 2889.17 20 214.855 10.7427 268.94 0.000 - * TOTAL (CORRECTED) 29 26217.4 904.048 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HGCL2 8/ 5/17 10:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 TLMS TLMN 0.000000 13.3300 TLMC 0.000000 100.000 84.4400 2.23000 3 23.3300 63.3300 13.3400 46.6633 36.6600 16.6767 50.8867 19.1100 60.0033 20.9967 19.0300 30.0033 50.5500 13.3300 36.1200 66.6600 20.0067 13.3333 53.3300 6.67000 10 40.1100 40.0000 0.000000 59.8900 SE(N= 3) 1.88951 2.35785 1.89233 5%LSD 20DF 5.57399 6.95557 5.58231 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HGCL2 8/ 5/17 10:58 :PAGE nghien cuu anh huong cua nong va thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao vat lieu vo trung F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 30) NO OBS DEVIATION BASED ON BASED ON C OF V |CT % | | | | | | TOTAL SS RESID SS TLMS 30 39.230 20.235 3.2727 8.3 0.0000 TLMN 30 32.086 24.065 4.0839 12.7 0.0000 TLMC 30 28.442 30.067 3.2776 11.5 0.0000 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng của số môi trƣờng đến khả tái sinh chồi của lan Hài P concolor BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE MT 8/ 5/17 16:35 :PAGE Nghien cuu anh huong cua mot so moi truong den kha nang tai sinh choi lan Hai P concolor VARIATE V003 TLBC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 1752.67 876.334 * RESIDUAL 67.4332 11.2389 77.97 0.000 * TOTAL (CORRECTED) 1820.10 227.513 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE MT 8/ 5/17 16:35 :PAGE Nghien cuu anh huong cua mot so moi truong den kha nang tai sinh choi lan Hai P concolor MEANS FOR EFFECT CT CT NOS TLBC 66.6667 56.7000 3 33.3667 SE(N= 3) 1.93553 5%LSD 6DF 6.69532 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE MT 8/ 5/17 16:35 :PAGE Nghien cuu anh huong cua mot so moi truong den kha nang tai sinh choi lan Hai P concolor F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLBC GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 9) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 15.084 3.3524 52.244 C OF V |CT % | | | | | | 6.4 0.0001 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hƣởng của BA đến khả nhân chồi của lan Hài P concolor BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BA KINI 8/ 5/17 11:43 :PAGE Nghien cuu anh huong cuu BA den kha nang nhan nhanh choi lan Hai P concolor VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 6.28667 1.57167 471.50 0.000 * RESIDUAL 10 333335E-01 333335E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 6.32000 451429 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BA KINI 8/ 5/17 11:43 :PAGE Nghien cuu anh huong cuu BA den kha nang nhan nhanh choi lan Hai P concolor MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 HSNC 0.163333 0.663333 1.83333 1.66667 0.733333 SE(N= 3) 0.333334E-01 5%LSD 10DF 0.115035 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BA KINI 8/ 5/17 11:43 :PAGE Nghien cuu anh huong cuu BA den kha nang nhan nhanh choi lan Hai P concolor F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.0000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.67188 0.57735E-01 5.8 0.0000 | | | | Thí nghiệm 4: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BKT 8/ 5/17 12: :PAGE nghien cuu anh huong cua BA ket hop voi Kinetin den kha nang nhan nhanh choi lan Hai P concolor VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.83067 457667 98.07 0.000 * RESIDUAL 10 466666E-01 466666E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.87733 134095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BKT 8/ 5/17 12: :PAGE nghien cuu anh huong cua BA ket hop voi Kinetin den kha nang nhan nhanh choi lan Hai P concolor MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF HSNC 1.83333 2.20000 2.90667 2.60667 2.50667 SE(N= 3) 0.394405E-01 5%LSD 10DF 0.124278 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BKT 8/ 5/17 12: :PAGE nghien cuu anh huong cua BA ket hop voi Kinetin den kha nang nhan nhanh choi lan Hai P concolor F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.3867 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.36619 0.68313E-01 2.9 0.0000 | | | | Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hƣởng của dịch chiết chuối tới khả nhân nhanh lan Hài P concolor BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE CHUOI 8/ 5/17 14:13 :PAGE Nghien cuu anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh lan Hai P concolor VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 1.30267 * RESIDUAL 325667 122.12 0.000 10 266667E-01 266667E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.32933 949524E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE CHUOI 8/ 5/17 14:13 :PAGE Nghien cuu anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh lan Hai P concolor VARIATE V004 CCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 1.20933 * RESIDUAL 10 100000 302333 30.23 0.000 100000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.30933 935238E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CHUOI 8/ 5/17 14:13 :PAGE Nghien cuu anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh lan Hai P concolor MEANS FOR EFFECT CT CT NOS HSNC CCC 1.40667 1.68667 1.80667 2.03333 3 2.26667 2.30000 1.96000 2.10000 1.70667 2.20333 SE(N= 3) 5%LSD 10DF 0.298143E-01 0.577351E-01 0.939458E-01 0.181925 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CHUOI 8/ 5/17 14:13 :PAGE Nghien cuu anh huong cua dich chiet chuoi toi kha nang nhan nhanh lan Hai P concolor F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) NO OBS DEVIATION BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS C OF V |CT % | | | | | | HSNC 15 1.7933 0.30814 0.51640E-01 2.9 0.0000 CCC 15 2.1067 0.30582 0.10000 4.7 0.0000 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hƣởng của NAA đếnkhả rễ của lan Hài P concolor BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMRR FILE NAA 8/ 5/17 14:59 :PAGE Nghien cuu anh huong cua NAA den kha nang re cua cay lan Hai P concolor VARIATE V003 TLMRR LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 7608.96 1902.24 195.74 0.000 * RESIDUAL 10 97.1803 9.71803 * TOTAL (CORRECTED) 14 7706.14 550.439 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 8/ 5/17 14:59 :PAGE Nghien cuu anh huong cua NAA den kha nang re cua cay lan Hai P concolor MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF TLMRR 13.3000 76.6667 56.6667 36.6667 23.3000 SE(N= 3) 1.79982 5%LSD 10DF 5.67129 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 8/ 5/17 14:59 :PAGE Nghien cuu anh huong cua NAA den kha nang re cua cay lan Hai P concolor F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLMRR GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 40.920 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 23.461 3.1174 7.6 0.0000 | | | | Thí nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hƣởng của NAA kết hợp với THT đến khả rễ của lan Hài P concolor BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCRR FILE THT 8/ 5/17 15:27 :PAGE Nghien cuu anh huong cua NAA ket hop voi than hoat tinh den kha nang re cua cay lan Hai P concolor VARIATE V003 TLCRR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 143.380 10 111.024 11.1024 * RESIDUAL 573.520 12.91 0.001 * TOTAL (CORRECTED) 14 684.544 48.8960 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE THT 8/ 5/17 15:27 :PAGE Nghien cuu anh huong cua NAA ket hop voi than hoat tinh den kha nang re cua cay lan Hai P concolor MEANS FOR EFFECT CT CT NOS TLCRR 76.6667 73.3333 3 93.3033 83.3367 80.0667 SE(N= 3) 1.92374 5%LSD 10DF 6.06178 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE THT 8/ 5/17 15:27 :PAGE Nghien cuu anh huong cua NAA ket hop voi than hoat tinh den kha nang re cua cay lan Hai P concolor F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLCRR GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 6.9926 3.3320 15 82.001 C OF V |CT % | | | | | | 4.1 0.0007 Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hƣởng của giá thể đến sự phát triển của lan Hài P concolor BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCS FILE GT1 8/ 5/17 16: :PAGE Nghien cuu anh huong cua gia the den su phat trien cua cay lan Hai P concolor VARIATE V003 TLCS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 1010.00 252.500 10 433.333 43.3333 * RESIDUAL 5.83 0.011 * TOTAL (CORRECTED) 14 1443.33 103.095 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCC FILE GT1 8/ 5/17 16: :PAGE Nghien cuu anh huong cua gia the den su phat trien cua cay lan Hai P concolor VARIATE V004 TLCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT 252.500 10 433.333 43.3333 * RESIDUAL 1010.00 5.83 0.011 * TOTAL (CORRECTED) 14 1443.33 103.095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE GT1 8/ 5/17 16: :PAGE Nghien cuu anh huong cua gia the den su phat trien cua cay lan Hai P concolor MEANS FOR EFFECT CT CT NOS TLCS TLCC 70.0000 85.3333 30.0000 14.6667 3 65.3333 34.6667 90.0000 10.0000 80.0000 20.0000 SE(N= 3) 3.80058 3.80058 5%LSD 10DF 10.9758 10.9758 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE GT1 8/ 5/17 16: :PAGE Nghien cuu anh huong cua gia the den su phat trien cua cay lan Hai P concolor F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS C OF V |CT % | | | | | | TLCS 15 77.333 10.154 6.5828 8.5 0.0112 TLCC 15 22.667 10.154 6.5828 29.0 0.0112 ... - - PHẠM THỊ NAM Tên đề tài NGHIÊN CƢ́U KHẢ NĂNG NHÂN NHANH LAN HÀI GẤM (Paphiopedilum concolor) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO TỪ CHỒI NÁCH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hê ̣đào... BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả nhân nhanh lan Hài P concolor 40 4.4 Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của dịch chiết chuối tới khả nhân nhanh chồi lan Hài P concolor ... loài lan Hài khỏi nguy bị tuyệt chủng Trƣớc thực trạng chúng tơi tiến hành thực hiện đề tài : Nghiên cƣ́u khả nhân nhanh lan Hài Paphiopedilumconcolor (Hài Gấm) phƣơng pháp in vitro