BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HÓA HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỐ ĐỊNH GLUCOAMYLASE BẰNG PHƯƠNG PHÁP NHỐT TRÊN GEL Na – ALGINATE VÀ ỨNG DỤNG THỦY PHÂN TINH BỘT KHOAI MÌ TẠO ĐƯỜNG GLUCOSE Họ tên sinh viên : VÕ VĂN THỪA Ngành : CƠNG NGHỆ HĨA HỌC Niên khóa : 2007 – 2011 Tháng 08 năm 2011 CỐ ĐỊNH GLUCOAMYLASE BẰNG PHƯƠNG PHÁP NHỐT TRÊN GEL Na – ALGINATE VÀ ỨNG DỤNG THỦY PHÂN TINH BỘT KHOAI MÌ TẠO ĐƯỜNG GLUCOSE Tác giả VÕ VĂN THỪA Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Kỹ sư ngành CÔNG NGHỆ HÓA HỌC Giáo viên hướng dẫn TS VŨ VĂN ĐỘ CN ĐỖ THỊ TUYẾN Tháng 08 năm 2011 i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin cảm ơn cha mẹ người thân gia đình thương yêu, khuyến khích tạo điều kiện tốt cho sống học tập suốt năm tháng qua Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Vũ Văn Độ cô Đỗ Thị Tuyến phòng Các chất có hoạt tính sinh học định hướng nghiên cứu, hướng dẫn thí nghiệm, sửa luận văn tạo điều kiện hóa chất thiết bị để em hoàn thành luận văn Xin cảm ơn cô chú, anh chị cán Viện sinh học nhiệt đới TP.HCM tận tình giúp đỡ suốt thời gian thực tập tốt nghiệp Chân thành cảm ơn Ban giám hiệu thầy Bộ mơn Cơng Nghệ Hóa – Trường Đại học Nơng Lâm TP.HCM tận tình giảng dạy, truyền đạt cho em kiến thức kinh nghiệm q báu tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học Và bạn bè, bạn ln bên tơi, dành tình cảm tốt đẹp cho tơi, động viên tôi vấp ngã Tôi cám ơn bạn làm đề tài tốt nghiệp phòng Các chất có hoạt tính sinh học giúp đỡ tơi vượt qua khó khăn, thất bại phòng thí nghiệm, cho tơi thêm niềm tin để hoàn thành đề tài tốt nghiệp Cuối em xin chúc TS Vũ Văn Độ, CN Đỗ Thị Tuyến, q Thầy Cơ Bộ mơn Cơng Nghệ Hóa toàn thể bạn dồi sức khỏe thăng tiến đường nghiệp Tp HCM, tháng 08 năm 2011 Sinh viên Võ Văn Thừa ii TÓM TẮT Tên đề tài “ Cố định enzyme Glucoamylase phương pháp nhôt gel Na – Alginate ứng dụng thủy phân tinh bột khoai mì tạo đường glucose ” Sinh viên thực hiện: Võ Văn Thừa Đơn vị: Lớp DH07HH, Bộ mơn Cơng nghệ Hóa, Đại Học Nơng Lâm TP.HCM Thời gian thực từ tháng 02 đến tháng 06/2011 Địa điểm : phòng Các chất có hoạt tính sinh học – Viện Sinh Học Nhiệt Đới TP.HCM Địa : 9/621 khu phố – phường Linh Trung – Thủ Đức – TP Hồ Chí Minh Kết  Thu nhận GA từ nấm mốc Asp kawasaki môi trường bán rắn với tỷ lệ cám gạo : bã khoai mì : có bổ sung khống tối ưu, đổ ẩm mơi trường 45%  Đã tinh GA thu nhận (độ tinh 4,726 lần hiệu suất 69,985 %), GA có khối lượng phân tử khoảng 23 – 74 kDa  Thông số cố định tối ưu với nồng độ natrialginate % nồng độ GA  GA cố định hoạt động tối ưu điều kiện: pH = 6; nhiệt độ 70 0C % so với GA hòa tan pH 4; nhiệt độ 60 0C  Khả tái sử dụng lần, hoạt tính giảm xuống gần 50 %  Đối với trình thủy phân, điều kiện tối ưu q trình dịch hóa nồng độ Termamyl 0,2 %, nồng độ tinh bột 25 %, thời gian dịch hóa khoảng 20 – 30 phút  Tối ưu hóa điều kiện q trình thủy phân tinh bột khoai mì tạo đương glucose thu phương trình hồi qui  Tạo sản phẩm glucose với hàm lượng đường 85,20 % iii SUMMARY Project: “Studying the Immobilization Glucoamylase in Na - Alginate and application in hydrolysis tapioca starch create glucose sugar” Practical student: VO VAN THUA Address: class DH06HH, major Chemical Engineering, Chemical Engineering Department, University of Agriculture and Forestry HCM City Instuctor: Dr VU VAN DO; BA DO THI TUYEN Place: Institute of Tropical Biology  Purpose:  Survey of conditions appropriate to immobilize enzymes  Compared the effects of environmental factors (pH, temperature) on enzyme activity before and after immobilization between enzyme from Asp.kawasaki and commercial enzyme  Determine the optimal conditions to the process of tapioca starch hydrolysis produces glucose  Method:  To study overview document  To find out the suitable factors in the experiments  Results:  Obtained glucoamylase from Asp kawasaki on the semi-solid environment rate of rice bran: tapioca residue is : has optimized mineral supplement, relative humidity 45%  Purification of GA from Asp.kawasaki by the techniques of gel filtration chromatography, the purity about times and efficiency is 69,985 %, GA has a molecular weight of about 23 – 74 kDa  Fixed parameter optimization with concentration of natrialginate is 3% , and concentration of GA is 5%  Immobilized glucoamylase has optimum degree of activity in acetate buffer at pH 6, temperature 70 0C and dissolve enzyme is pH temperature 60 0C  The ability to reuse is times  Optimal conditions during process tapioca starch hydrolysis by α – amylase at concentration of Termamyl is 0,2 %, concentration of starch is 25 %, Hydrolysis time 30 minutes  Regression equation glucoamylase concentration, hydrolytic temperature, pH and reaction time Y = -2857,27 + 50,9103*x + 58,1003*x + 398,865*x – 6,13216*x *x 1,03679*x *x – 7,99395*x *x – 6,33811*x *x – 12,3428*x *x – 7,76758*x *x + 0,128569*x *x *x + 0,256398*x *x *x 0,158948*x *x *x + 0.31200x *x *x – 0,006182*x *x *x *x R2 = 88,7 % Where :  x : enzyme concentration  x : pH  x : hydrolytic temperature  x : reaction time  Create products with sugar glucose is 85,20% + MỤC LỤC Trang Trang tựa i Lời cảm ơn ii Tóm tắt iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt viii Danh sách hình ix Danh sách bảng x Danh sách sơ đồ – đồ thị – biểu đồ xi Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Nội dung đề tài Chương TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan GA 2.1.1 Giới thiệu amylase 2.1.2 Phân loại hệ enzyme amylase 2.1.2.1 α – amylase (endo – 1,4 – a – D – glucan glucohydrolaza) 2.1.2.2 β – amylase (a – 1,4 – glucan maltohydrolase) 2.1.2.3 γ – amylase hay glucoamylase 2.2 Nguồn thu nhận 2.3 Ứng dụng GA 2.4 Cơ chất GA 2.4.1 Tinh bột 2.4.1.1 Đặc điểm 2.4.1.2 Tính chất 2.4.2 Glycogen 2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến tổng hợp GA 10 2.5.1 Ảnh hưởng pH 10 2.5.2 Ảnh hưởng nhiệt độ 11 iv 2.5.3 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng 11 2.5.4 Ảnh hưởng ẩm độ 11 2.5.5 Ảnh hưởng thời gian thu nhận enzyme 12 2.6 Sơ lược enzyme cố định 12 2.6.1 Định nghĩa 12 2.6.2 Các phương pháp cố định enzyme 12 2.6.2.1 Phương pháp hấp phụ vật lý 12 2.6.2.2 Phương pháp đưa enzyme vào khuôn gel 13 2.6.2.3 Phương pháp hóa học 14 2.6.2.3.1 Phương pháp liên kết ion 14 2.6.2.3.2 Phương pháp gói enzyme bao cực nhỏ 14 2.6.2.3.3 Phương pháp tạo liên kết chéo phân tử enzyme 14 2.6.2.3.4 Phương pháp gắn enzyme vào chất mang rắn liên kết cộng hóa trị 15 2.7 Khái quát chủng nấm mốc Asp.kawasaki 16 2.8 Tổng quan khoai mì tinh bột khoai mì 16 2.8.1 Tinh bột sắn – nguồn nguyên liệu sản xuất glucose 16 2.8.2 Đặc điểm khoai mì 17 2.8.3 Đặc điểm tinh bột khoai mì 18 2.8.4 Ứng dụng tinh bột khoai mì 19 2.8.4.1 Trong công nghệ thực phẩm 19 2.8.4.2 Trong công nghiệp giấy 19 2.9 Tổng quan Glucose 19 2.9.1 Khái niệm 19 2.9.2 Đặc điểm glucose 20 2.9.3 Phương pháp sản xuất glucose 20 2.9.4 Ứng dụng 21 2.10 Thu nhận enzyme từ VSV phương pháp lên men bề mặt 22 2.10.1.Khái quát 22 2.10.2.Ưu điểm 22 2.10.3.Nhược điểm 22 2.10.4.Phương pháp 22 v Chương NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Thời gian địa điểm 23 3.2 Vật liệu hóa chất 23 3.2.1 Chủng nấm 23 3.2.2 Môi trường 23 3.2.3 Thiết bị thí nghiệm 24 3.2.4 Hóa chất 24 3.2.5 Dung dịch đệm 25 3.3 Nội dung thực phương pháp nghiên cứu 25 3.3.1 Nội dung nghiên cứu 25 3.3.2 Phương pháp thực 26 3.3.2.1 Nuôi cấy thu nhận GA 26 3.3.2.1.1 Cấy chuyền nấm mốc Asp Kawasaki 26 3.3.2.1.2 Nuôi cấy mốc Asp kawasaki môi trường bán rắn 27 3.3.2.1.3 Trích ly GA từ sinh khối mốc Asp kawasaki 27 3.3.2.2 Tinh enzyme sắc ký lọc gel 28 3.3.2.2.1 Nguyên tắc 28 3.3.2.2.2 Tiến hành 29 3.3.2.3 Phân tích GA điện di gel polyacrylamide (Polyacrylamide Gel Electrophoresis) 31 3.3.2.3.1 Nguyên tắc 31 3.3.2.3.2 Tiến hành 31 3.3.2.3.3 Phương pháp tính tốn kết 32 3.3.2.4 Xác định hoạt tính enzyme.theo phương pháp Miller 33 3.3.2.5 Xác định hàm lượng protein theo phương pháp Bradford 35 3.3.2.6 Hoạt tính riêng enzyme 36 3.3.2.7 Khảo sát ảnh hưởng môi trường lên hoạt tính GA 36 3.3.2.7.1 Ảnh hưởng pH 36 3.3.2.7.2 Ảnh hưởng nhiệt độ 37 3.3.2.8 Cố định enzyme 37 3.3.2.8.1 Phương pháp 37 3.3.2.8.2 Xác định hiệu suất cố định enzyme 38 3.3.2.8.3 Số lần tái sử dụng GA cố định 38 vi 3.3.2.9 Thủy phân tinh bột khoai mì tạo sản phẩm đường Glucose 39 3.3.2.9.1 Xác đinh hoạt tính α – amylase theo Rose – Smith 39 3.3.2.9.2 Khảo sát q trình dịch hóa tinh bột α – amylase 40 3.3.2.9.3 Khảo sát q trình đường hóa GA cố định 40 3.3.2.10 Quy trình thủy phân tinh bột khoai mì tạo đường glucose 41 3.3.2.11 Định lượng glucose sản phẩm 43 3.3.2.12 Phương pháp xử lý số liệu 43 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 4.1 Hoạt tính hàm lượng enzyme GA dạng tự 44 4.2 Tinh GA thu nhận phương pháp lọc gel 44 4.3 Xác định trọng lượng phân tử phương pháp điện di 46 4.4 Kết khảo sát GA dạng hòa tan 48 4.4.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính GA 48 4.4.2 Ảnh hưởng pH đến hoạt tính GA 50 4.5 Kết khảo sát GA dạng cố định 51 4.5.1 Nồng độ GA Na – Alginate tối ưu phương pháp cố định 51 4.5.2 So sánh hoạt tính enzyme GA dạng hòa tan cố định 54 4.5.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính GA cố định 55 4.5.4 Ảnh hưởng pH đến hoạt tính GA cố định 56 4.5.5 Số lần tái sử dụng 57 4.6 Quá trình thủy phân tinh bột khoai mì tạo đường glucose 58 4.6.1 Hoạt tính α – amylase 58 4.6.2 Nồng độ α – amylase tinh bột tối ưu q trình dịch hóa 58 4.6.3 Tối ưu hóa q trình thủy phân tinh bột khoai mì tạo đường glucose 59 4.6.4 Tạo sản phẩm đường glucose 62 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 65 5.1 Kết luận 65 5.2 Đề nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC 68 vii Khóa Luận Tốt Nghiệp 11 Đồng Thị Thanh Thu (2002), Sinh hóa ứng dụng, NXB ĐH Khoa Học Tự Nhiên, TP Hồ Chí Minh 12 Cao Lê Hải Yến (2003), Tối ưu hóa q trình sản xuất tinh bột biến tính- Dextrin DE12 phương pháp enzyme, luận văn tốt nghiệp, ĐH Bách Khoa Hà Nội 13 Tổng Cục Thống Kê (2004), Niêm giám thống kê, NXB thống kê Hà Nội (5/2004) trang 115 – 120 14 Ashok Pandy (1994) Solid State Fermentation Wiley Eastern Limited New Age International Publisher 15 Dr Ashok Pandy, P Selvakumar, Calos R.Soccol and Poonam Nigam, Solid State Fermentation for the production of industrial enzymes 16 Balagopalan C and Padmaja G (1988) Cassava in Food, Feed and industry CRC press Inc, Boca Raton, Florida 17 Mathew J Harrison et al (1998), Modified glycosylation of cellobiohydrolase I from at high cellulose-producing mutant strain of Trichoderma reesei, Eur J Biochem 18 Raimbault Maurice (1998), General and microbiological aspects of solid substrate, EJB Electronic Journal of Biotechnology 19 Smits J.P (1998), Solid-state fermentation, modeling fungal growth and activity, The Doctor Thesis 20 http://www.scientificpsychic.com/fitness/carbohydrates1.html 21 http://www.elmhurst.edu/~chm/vchembook/images/547glycogen.gif 67 Khóa Luận Tốt Nghiệp PHỤ LỤC Phụ lục 1: Sơ lược sắc ký lọc gel Nguyên tắc Sắc ký lọc gel hay sắc ký rây phân tử loại sắc ký có khả phân tách, phân tích xác định trọng lượng phân tử hợp chất cao phân tử, protein polymer Phổ biến loại gel hữu loại dextran mạng Sephadex với kích thước lỗ khác khả hấp phụ không đáng kể [8] Nguyên tắc dựa khác phân tử chất tan thẩm thấu vào khung gel chui qua lỗ rây phân tử Nghĩa dựa phân bố chất tan dung môi động dung môi tĩnh nằm hốc vật xốp Mức độ xâm nhập phân tử chủ yếu phụ thuộc vào cấu trúc kích thước lỗ gel Các đại phân tử có kích thước lớn kích thước lỗ xâm nhập vào lỗ, hốc, chúng khuếch tán vào khe hở hạt xốp bị rửa khỏi cột nhanh Các phân tử có kích thước nhỏ kích thước lỗ có khả xâm nhập vào lỗ, dòng pha động qua, phân tử lại khỏi lỗ di chuyển pha động Vậy sắc ký lọc gel cấu tử rửa giải theo thứ tự giảm kích thước phân tử Đối với cấu tử có cấu trúc không gian gần giống nhau, thứ tự rửa giải theo chiều giảm trọng lượng Dĩ nhiên điều hiệu số hấp phụ khơng đáng kể Hình 2.7: Khả tách phân tử lọc gel [9] 68 Khóa Luận Tốt Nghiệp Một số thơng số vật lý phương pháp Giới hạn tách (exclution limit): trọng lượng phân tử (MW) phân tử nhỏ khơng chui vào bên hạt gel Ví dụ giới hạn tách G – 50 từ 1.500 – 30.000 daltons, có nghĩa phân tử lớn không chui vào hạt gel Phạm vi tách (Fructionation range): Thí dụ, sephadex G – 50 có phạm vi tách từ 1.500 – 30.000 daltons, có nghĩa phân tử nằm khoảng MW nói phân tách dễ dàng G – 50 Độ ngậm nước (water regain): Là trọng lượng nước mà gam bột gel khơ hút nước Thí dụ G – 50 có phạm vi tách 5,0 ± 0,3 gam Giá trị chưa tính đến lượng nước bao quanh hạt Do khơng thể sử dụng để tính thể tích cột Thể tích (bed volume): Là thể tích cuối mà gam gel khơ hấp thu trương nở nước G – 50 tích – 11 ml/g gel khơ Hạt gel (gel particle): Hạt gel hình cầu có nhiều lỗ Kích thước hạt xác định khối lượng (mesh) đường kính hạt (bead diameter) tính theo µm Hạt có kích thước lớn (50 – 100 mesh, 100 – 300 µm) cho tốc độ dòng chảy qua cột cao, kết tách thấp Ngược lại hạt mịn (400 mesh, 10 – 40 µm) lại cho tốc độ dòng chảy qua cột nhỏ, tách không tốt Thường người ta chọn hạt gel có kích thước 100 – 200 mesh (50 – 150 µm) Thể tích trống (void volume): Là tổng thể tích khơng gian bao quanh hạt gel cột Xác định nhờ chất màu blue dextran có MW 2.000.000 daltons Thể tích thổi (elution volume): Là thể tích đệm cần thiết để rửa chất cần tách khỏi cột Đặc tính gel Có loại gel thường sử dụng  Dextran – có chất polysaccharide tự nhiên hãng Pharmacia – LKB (Thụy Điển) cung cấp với tên thương mại Sephadex Giới hạn tách gel dextran – 600.000 daltons, dextran tự nhiên chứa liên kết ngang nên khó giữ nguyên vẹn hạt kích thước lỗ to Tuy nhiên dextran bổ sung 69 Khóa Luận Tốt Nghiệp thêm liên kết ngang N,N’ – methylene bisacrylamide dextran có giới hạn tách gia tăng (xem sephacryl Pharmacia – LKB cung cấp)  Gel polyacrylamide: Tạo q trình đồng hóa polymer acrylamide N,N’ – methylene bisacrylamide (Bio – Rad cung cấp – Biogel – P tên thương mại)  Gel agarose: Là thành phần polysaccharide tự nhiên agar, cấu tạo từ galactose anhydrogalactose Mạng gel ổn định nhờ liên kết hydro nhiều liên kết ngang Hãng Bio – Rad cung cấp agarose với tên thương mại Bio – gel A, Pharmacia cung cấp tên thương mại sepharose seperose  Gel kết hợp polyacrylamide agarose có tên thương mại ultragel, cho phép có độ phân tách cao với cấu trúc vững agarose cho phép sử dụng áp suất để tách Bảng 2.5: Các loại gel thường gặp lọc gel Sephadex Loại Sephadex Đường kính hạt (A0) Mức độ nở (ml H O/g) Thể tích gel sau nở (ml/gel khô) Thời gian tối Trọng lượng thiểu để gel nở phân tử (h) T phòng T cách thủy G – 10 40 – 120 ± 0,1 2–3 700 G – 15 40 – 120 1,5 ± 0,2 2,5 – 3,5 1500 G – 25 10 – 40 2,5 ± 0,2 4–6 1000 – 5000 G – 50 10 – 40 2,5 ± 0,2 – 11 1500 – 30000 G – 75 10 – 40 7,5 ± 0,5 12 – 3000 – 70000 72 G – 100 10 – 40 10 ± 15 – 20 4000 – 150000 72 G – 150 10 – 40 15 ± 1,5 20 – 30 5000 – 400000 72 G – 200 40 – 120 20 ± 30 – 40 5000 – 800000 72 G – 250 10 – 40 20 ± 30 – 40 5000 – 800000 72 70 Khóa Luận Tốt Nghiệp Phụ lục 2: Phương pháp pha đệm acetate Lấy 11.55 ml CH COOH đậm đặc cho vào bình định mức 1000 ml có sẵn nước, dẫn nước cất vạch, dung dịch x Lấy 27.2 g CH COONa.3H O hòa tan 60 ml nước cất, sau đẫn lên 1000 ml dung dịch y Chỉnh pH cần thiết từ dung dịch x,y Phụ lục 3: Phương pháp pha đệm phosphate Lấy 27,8 g NaH PO hòa tan vào nước cất dẫn lên 1000 ml dung dịch a Lấy 71,7 g Na HPO 12H O hòa tan vào nước dẫn lên 1000 ml, dung dịch b Chỉnh pH cần thiết từ dung dịch a,b Phụ lục 4: Tiêu chuẩn chất lượng tinh bột khoai mì Chỉ tiêu Chất lượng Hảo hạng Loại Loại Loại 12,5 13 14 14 97,5 97,5 96 96 0,10 0,15 0,3 0,5 0,2 0,3 0,3 0,3 0,1 0,2 0,5 4,5 - 4,5 - 3,5 - 3,5 – 1 3 Độ nhớt (BU) 700 500 400 350 Độ trắng 96,5 94 90 88 Độ ẩm, không (%) Hàm lượng tinh bột tính theo chất khơ, khơng q (%) Hàm lượng tro, khơng q (%) Hàm lượng protein tính theo chất khô không (%) Hàm lượng xơ (của 50 g bột), không (%) pH Tổng chất rắn thu sau lọc qua màng kích thước 150µm, khơng (%) 71 Khóa Luận Tốt Nghiệp Phụ lục 5: Đường chuẩn protein 0.9 0.8 y = 0.007x + 0.021 R² = 0.997 OD 595 nm 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 20 40 60 80 100 120 nồng độ (µg/ml) Đồ thị biểu diễn tương quan mật độ quan OD595 nm với nồng độ protein (µg/ml) Phụ lục 6: Đường chuẩn glucose 2.5 OD 540 1.5 y = 0.025x R² = 0.994 0.5 -0.5 20 40 60 80 100 120 nồng độ (µg/ml) Đồ thị biểu diễn mối tương quan mật độ OD 540 với nồng độ glucose (µg/ml) 72 Khóa Luận Tốt Nghiệp Phụ lục 7: Biểu đồ sắc ký enzyme GA chuẩn hãng ANOVA Phụ lục 8: Bảng phân tích ANOVA thí nghiệm Ảnh hưởng nhiệt độ đến GA thương phẩm dạng hòa tan ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Df Squares 1.53316E8 Mean F-Ratio Square 3.8329E7 132.33 2.89653E6 10 289653 P-Value 0.0013 1.56213E8 14 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD T30 T70 T60 T40 T50 Count 3 3 Mean 1553.33 6066.67 7593.33 8673.33 11173.3 73 Homogeneous Groups X X X X X Khóa Luận Tốt Nghiệp Ảnh hưởng pH đến GA thương phẩm hòa tan ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 7.75228E8 1.55046E8 139.35 0,0003 1.33517E7 12 1.11264E6 7.8858E8 17 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count 3 3 3 pH pH pH pH pH pH Mean 19686.7 20866.7 21533.3 29166.7 32500.0 37133.3 Homogeneous Groups X X X X X X Ảnh hưởng nhiệt độ đến GA thu nhận dạng hòa tan ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Df Squares 5.45087E 145804 10 Mean F-Ratio Square 1.36272E7 934.62 P-Value 0,0026 14580.4 5.46545E 14 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD T70 T30 T40 T50 T60 Count Mean 3 3 199.359 312.821 2089.74 4378.21 4633.97 74 Homogeneous Groups X X X X X Khóa Luận Tốt Nghiệp Ảnh hưởng pH đến GA thu nhận dạng hòa tan ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1.00033E8 2.00067E7 0,0013 Within groups 646871 12 53905.9 Total (Corr.) 1.0068E8 17 371.14 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD pH pH pH pH pH pH Count 3 3 3 Mean 3528.85 4948.72 7637.18 8834.62 8841.67 10259.6 Homogeneous Groups X X X X X X Ảnh hưởng nhiệt độ đên GA thu nhận dạng cố định ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 17749.5 2958.25 Within groups 40.7145 14 2.90818 Total (Corr.) 17790.2 20 75 F-Ratio P-Value 1017.22 0,0001 Khóa Luận Tốt Nghiệp Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD T90 T30 T80 T40 T50 T60 T70 Count 3 3 3 Mean Homogeneous Groups 17.2726 X 19.8693 X 35.001 X 39.4832 X 66.3261 X 89.6885 X 92.1174 X Phụ lục 9: Phân tích thơng kê cho thí nghiệm tối ưu hóa Estimation Results for Y Observed Row 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Value 2324.0 3152.0 1092.0 1056.0 6014.0 472.0 3766.0 4242.0 3660.0 5704.0 326.0 3362.0 4394.0 4472.0 2482.0 5860.0 6166.0 6158.0 6162.0 Fitted Value 2780.06 3608.06 1548.06 1512.06 6470.06 928.059 4222.06 4698.06 4116.06 6160.06 782.059 3818.06 4850.06 4928.06 2938.06 6316.06 3729.68 3729.68 3729.68 Lower Upper 95.0% 95.0% CL CL for Mean for Mean 2762.93 2797.18 3590.93 3625.18 1530.93 1565.18 1494.93 1529.18 6452.93 6487.18 910.934 945.185 4204.93 4239.18 4680.93 4715.18 4098.93 4133.18 6142.93 6177.18 764.934 799.185 3800.93 3835.18 4832.93 4867.18 4910.93 4945.18 2920.93 2955.18 6298.93 6333.18 3725.74 3733.63 3725.74 3733.63 3725.74 3733.63 Average of centerpoints = 6162,0 Average of model predictions at center = 3729,68 76 Khóa Luận Tốt Nghiệp Analysis of Variance for Y Source Sum of Squares Mean Square Df F-Ratio P-Value A:X1 794,394 794,394 741,57 0,0013 B:X2 15,2881 15,2881 14,27 0,0635 C:X3 9412,88 9412,88 8786,96 0,0001 D:X4 32337,0 32337,0 30186,73 0,0000 AB 3365,16 3365,16 3141,39 0,0003 AC 20929,4 20929,4 19537,68 0,0001 AD 3387,82 3387,82 3162,54 0,0003 BC 122,434 122,434 114,29 0,0086 BD 2051,18 2051,18 1914,79 0,0005 CD 413,716 413,716 386,20 0,0026 ABC 5430,95 5430,95 5069,81 0,0002 ABD 4475,61 4475,61 4178,0 0,0002 ACD 21756,3 21756,3 20309,53 0,0000 BCD 28,143 28,143 26,27 0,0360 ABCD 456,463 456,463 426,11 0,0023 Lack-of-fit 13320,3 13320,3 12434,59 0,0001 Pure error 2,14247 1,07123 118299,0 18 Total (corr.) R-squared = 88,7383 percent R-squared (adjusted for d.f.) = 32,4299 percent Standard Error of Est = 1,035 Mean absolute error = 19,3098 Durbin-Watson statistic = 1,59467 (P = 0,1662) Lag residual autocorrelation = 0,192801 77 Khóa Luận Tốt Nghiệp Contours of Estimated Response Surface THOIGIAN=5.0,NONG DO E=10.0 Y 2000.0 2400.0 2800.0 3200.0 3600.0 4000.0 4400.0 4800.0 5200.0 5600.0 6000.0 6400.0 4.6 pH 4.2 3.8 3.4 50 54 58 62 66 70 NHIETDO Standardized Pareto Chart for Y B:pH AC BC ABC D:NONG DO E AB ACD ABCD C:THOIGIAN CD BD AD ABD A:NHIETDO BCD + - 200 400 600 800 Standardized effect 1000 1200 Contours of Estimated Response Surface NHIETDO=60.0,pH=4.0 Y 15 11 5 THOIGIAN 2000.0 2400.0 2800.0 3200.0 3600.0 4000.0 4400.0 4800.0 5200.0 5600.0 6000.0 6400.0 Estimated Response Surface X3=54.0,X4=7.0 123 113 103 Y NONG DO E 13 93 83 73 28 38 48 58 X1 78 68 X2 Khóa Luận Tốt Nghiệp Phụ lục 10: Một số thiết bị dùng thí nghiệm Hệ thống sắc ký cột Bio-Rad Bộ chạy điện di Bio-Rad Thiết bị đo pH Cân điện tử Bể ổn nhiệt Memmeert GmbH Đức Bể ổn nhiệt Memmeert 79 Khóa Luận Tốt Nghiệp Máy quang phổ khả kiến VIS Autoclave Brix kế Thiết bị đông khơ Máy ly tâm 80 Khóa Luận Tốt Nghiệp Bể rửa siêu âm Elmasonic S10 H -ĐỨC 81 ...CỐ ĐỊNH GLUCOAMYLASE BẰNG PHƯƠNG PHÁP NHỐT TRÊN GEL Na – ALGINATE VÀ ỨNG DỤNG THỦY PHÂN TINH BỘT KHOAI MÌ TẠO ĐƯỜNG GLUCOSE Tác giả VÕ VĂN THỪA Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu... tiến đường nghiệp Tp HCM, tháng 08 năm 2011 Sinh viên Võ Văn Thừa ii TÓM TẮT Tên đề tài “ Cố định enzyme Glucoamylase phương pháp nhôt gel Na – Alginate ứng dụng thủy phân tinh bột khoai mì tạo đường. .. nấm mốc Asp kawasaki phương pháp nhốt gel Na – Alginate ứng dụng thủy phân tinh bột khoai mì tạo đường glucose 1.2 Mục đích đề tài  Khảo sát điều kiện thích hợp đến trình cố định enzyme  Khảo