C«ng NghÖ AND T¸i tæ hîp ë C«ng NghÖ AND T¸i tæ hîp ë thùc vËt thùc vËt Plant Recombinant DNA Plant Recombinant DNA Technology Technology Kh¸i niÖm chung Kh¸i niÖm chung ADN t¸i tæ hîp lµ c¸c ADN ®­îc t¹o ra b»ng ADN t¸i tæ hîp lµ c¸c ADN ®­îc t¹o ra b»ng c¸ch ch¾p hay ghÐp hai hay nhiÒu c¸c ®o¹n c¸ch ch¾p hay ghÐp hai hay nhiÒu c¸c ®o¹n ADN cã nguån gèc kh¸c nhau th«ng qua vi thao ADN cã nguån gèc kh¸c nhau th«ng qua vi thao t¸c cña con ng­êi t¸c cña con ng­êi C¸c b­íc chÝnh cña c«ng nghÖ DNA t¸i C¸c b­íc chÝnh cña c«ng nghÖ DNA t¸i tæ hîp tæ hîp T¸ch DNA cña c¬ thÓ nghiªn cøu T¸ch DNA cña c¬ thÓ nghiªn cøu T¹o c¸c ®o¹n DNA t¸i tæ hîp T¹o c¸c ®o¹n DNA t¸i tæ hîp Nèi, g¾n DNA t¸i tæ hîp víi c¸c vector Nèi, g¾n DNA t¸i tæ hîp víi c¸c vector ChuyÓn n¹p DNA t¸i tæ hîp vµo tÕ bµo chñ, ChuyÓn n¹p DNA t¸i tæ hîp vµo tÕ bµo chñ, ho¹t ®éng trong tÕ bµo chñ vµ t¹o ra c¸c s ho¹t ®éng trong tÕ bµo chñ vµ t¹o ra c¸c s ả ả n n phÈm trong tÕ bµo chñ ®ã phÈm trong tÕ bµo chñ ®ã Kh n Kh n ng ứng dụng ng ứng dụng Phát hiện, theo dõi các gen có kh n Phát hiện, theo dõi các gen có kh n ng c i ng c i tiến cây trồng qua các thế hệ tiến cây trồng qua các thế hệ Nghiên cứu cấu trúc và chức n Nghiên cứu cấu trúc và chức n ng của gen ng của gen Dùng để tạo ra giống cây mới có định hướng rõ Dùng để tạo ra giống cây mới có định hướng rõ ràng trong thời gian ngắn ràng trong thời gian ngắn Cho phép phân loại ở mức phân tử Cho phép phân loại ở mức phân tử Chuẩn đoán ở mức phân tử có độ chính xác Chuẩn đoán ở mức phân tử có độ chính xác tuyệt đối tuyệt đối Th«ng sè vÒ hµm l­îng vµ kÝch th­íc Th«ng sè vÒ hµm l­îng vµ kÝch th­íc cña ph©n tö DNA trong tÕ bµo thùc vËt cña ph©n tö DNA trong tÕ bµo thùc vËt P P h©n tö DNA h©n tö DNA C«ng thøc ho¸ häc cña 4 nucleotide C«ng thøc ho¸ häc cña 4 nucleotide Deoxyribose Deoxyribose and and Ribose Ribose ® ® ¬n vÞ ®o ¬n vÞ ®o ®¬n vÞ ®o khèi l­îng tuyÖt ®èi: picogram ®¬n vÞ ®o khèi l­îng tuyÖt ®èi: picogram ®¬n vÞ ®o th«ng dông: cÆp base: bp, kbp, ®¬n vÞ ®o th«ng dông: cÆp base: bp, kbp, mbp… mbp…  1picogram=10 1picogram=10 -12 -12 g g  1 pg DNA = 965 Mbp (Bennett and Smith 1976) 1 pg DNA = 965 Mbp (Bennett and Smith 1976) đ đ ặc điểm ặc điểm Là đại phân tử lớn hơn bất kỳ phân tử chất h u cơ nào Là đại phân tử lớn hơn bất kỳ phân tử chất h u cơ nào khác có trong tế bào khác có trong tế bào DNA của thực vật có chủ yếu trong nhân (dạng thẳng, DNA của thực vật có chủ yếu trong nhân (dạng thẳng, phức tạp), lục lạp, ty thể (dạng vòng, đơn gi n) phức tạp), lục lạp, ty thể (dạng vòng, đơn gi n) S S ố lượng gen là khác nhau ở sinh vật khác nhau (VSV: ố lượng gen là khác nhau ở sinh vật khác nhau (VSV: vài ngh vài ngh ỡ ỡ n, Tv/đv/người: vài chục ngh n, Tv/đv/người: vài chục ngh ỡ ỡ n) n) Người: 30,000-39,000; Lúa indica: 45,000-56,000 gen; Người: 30,000-39,000; Lúa indica: 45,000-56,000 gen; Lúa Japonica: 32,000-50,000 gen) Lúa Japonica: 32,000-50,000 gen) 1 phân tử protein thường chứa 400 aa, 1 aa mã hoá bởi 1 phân tử protein thường chứa 400 aa, 1 aa mã hoá bởi 3 nucleotide, 1 gen ít nhất có 1200 bp 3 nucleotide, 1 gen ít nhất có 1200 bp Trong DNA, Gen, vùng không mã hoá,đoạn lặp lại Trong DNA, Gen, vùng không mã hoá,đoạn lặp lại không có ý nghĩa chiếm 80-85 % nên 1 gen (đoạn không có ý nghĩa chiếm 80-85 % nên 1 gen (đoạn DNA) thường có 4-5kbp DNA) thường có 4-5kbp [...]... một điểm cắt cho một enzym cắt hạn chế, điều này cho phép plasmid chỉ nhận một đoạn ADN cần nhân khi cloning, tốt nhất là có nhiều điểm cắt cho các enzyme hạn chế khác nhau nhưng mỗi enzyme chỉ có 1 điểm cắt ; (3) có một hoặc nhiều các chỉ thị di truyền chọn lọc nhằm xác định được các tế bào mang các vec tơ cloning với ADN thiết kế (4) Có gốc tái bn 4363bp p" = plasmid "BR" là tên của hai nhà khoa học... nucleotide thỡ cách 45= 1024 cặp base mới lặp lại nếu có 6 nucleotide thỡ phi cách 46= 4069 cặp base mới có đoạn lặp lại Tạo phân tử DNA tái tổ hợp Tạo phân tử DNA tái tổ hợp Plasmids Plasmid là các phân tử ADN vòng có cấu trúc chuỗi xoắn kép và có thể tự nhân bn Chúng có mặt trong vi khuẩn và nằm ngoài cũng như độc lập với nhiễm sắc thể của vi khuẩn High copy number = 10-100 copies / cell Low copy number... khoa học F Bolivar và R.Rodrigues "332" là số thứ tự (2) Nhóm Plasmid pUC ây là nhóm các plasmid được phát triển từ nhóm plasmid pBR322 (plasmid thế hệ 2) Phần chứa gen kháng tetraciline (khong 40 % ADN ) được cắt bỏ còn phần gen kháng ampicillin và gốc tái bn của pBR322 được gi lại Ngoài ra, các vị trí nhân dòng của pUC được phân bố tập trung vào một vị trí gọi là vị trí đa nhân dòng (multiple cloning . Technology Kh¸i niÖm chung Kh¸i niÖm chung ADN t¸i tæ hîp lµ c¸c ADN ®­îc t¹o ra b»ng ADN t¸i tæ hîp lµ c¸c ADN ®­îc t¹o ra b»ng c¸ch ch¾p hay ghÐp hai. nhiÒu c¸c ®o¹n c¸ch ch¾p hay ghÐp hai hay nhiÒu c¸c ®o¹n ADN cã nguån gèc kh¸c nhau th«ng qua vi thao ADN cã nguån gèc kh¸c nhau th«ng qua vi thao t¸c cña