ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN QUỐC HUY NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE GÂY VIÊM PHỔI TRONG HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN Ở LỢN TẠI BẮC GIANG VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên Thái Nguyên, 2013 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác chƣa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực đề tài nghiên cứu hoàn thành luận văn đƣợc cảm ơn, thông tin trích dẫn xác đƣợc rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng 09 năm 2013 Tác giả Nguyễn Quốc Huy Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực đề tài hoàn thành luận văn, nhận đƣợc giúp đỡ nhiều tổ chức cá nhân Nhân dịp xin trân trọng cảm ơn Ban giám đốc, Ban quản lý Sau đại học Đại học Thái Nguyên, Ban lãnh đạo trƣờng Đại học Nông Lâm, phòng quản lý sau đại học khoa Chăn nuôi Thú y, trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tạo điều kiện cho đƣợc theo học chƣơng trình đào tạo thạc sĩ trƣờng Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán khoa Chăn nuôi Thú y, trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên; môn Vi trùng, Viện Thú y Quốc gia Chi cục Thú y tỉnh Bắc Giang nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành đề tài nghiên cứu Đặc biệt, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy hƣớng dẫn khoa học GS.TS Nguyễn Quang Tuyên, phó Viện trƣởng Viện Khoa học Sự sống, Đại học Thái Nguyên trực tiếp hƣớng dẫn giúp đỡ trình thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo thầy cô giáo - Viện Thú y Quốc gia giúp đỡ, chia sẻ ý kiến quý báu hƣớng dẫn thực thí nghiệm để hoàn thiện đề tài nghiên cứu Tôi biết ơn gia đình, bạn bè học viên cao học, em sinh viên đóng góp công sức, động viên giúp đỡ hoàn thành luận văn Thái Nguyên, tháng 09 năm 2013 Tác giả Số hóa trung tâm học liệu Nguyễn Quốc Huy http://www.lrc-tnu.edu.vn/ iii Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ iv MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục biểu đồ, hình vẽ ix MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƢỢC NGHIÊN CỨU VỀ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN (PRRS) Ở LỢN 1.1.1 Vài nét Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn 1.1.2 Các đặc tính virus gây PRRS lợn 1.2 MỘT SỐ BỆNH KẾ PHÁT TRONG PRRS Ở LỢN 11 1.2.1 Bệnh viêm phổi- màng phổi lợn (VPMP) 12 Chƣơng NỘI DUNG, ĐỐI TƢỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 29 2.2 ĐỐI TƢỢNG, ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 29 2.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 29 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 29 2.2.3.Thời gian nghiên cứu 29 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ v 2.3 NGUYÊN VẬT LIỆU DÙNG TRONG NGHIÊN CỨU 29 2.3.2 Động vật thí nghiệm 30 2.3.3 Các loại hoá chất, môi trƣờng 30 2.3.4 Giống vi khuẩn 30 2.3.5 Máy móc thiết bị 31 2.4 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.4.1 Phƣơng pháp nghiên cứu dịch tễ 31 2.4.2 Thu thập mẫu phân lập vi khuẩn 33 2.4.3 Phƣơng pháp kiểm tra đặc tính sinh hoá khả lên men đƣờng chủng vi khuẩn phân lập đƣợc 36 2.4.4 Phƣơng pháp xác định A pleuropneumoniae kỹ thuật PCR 36 2.4.5 Phƣơng pháp xác định serotype vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập đƣợc 38 2.4.6 Phƣơng pháp xác định độc lực vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập đƣợc 39 2.4.7 Phƣơng pháp xác định khả mẫn cảm với kháng sinh vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập đƣợc 39 2.4.8 Phƣơng pháp xác định độ dài miễn dịch hiệu lực Autovaccine 40 2.4.9 Xây dựng phác đồ điều trị lợn mắc viêm phổi 41 2.4.10 Phƣơng pháp xử lý số liệu 42 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN Ở LỢN TẠI TỈNH BẮC GIANG 43 3.1.1 Kết xác định tỷ lệ lợn mắc chết PRRS số huyện tỉnh Bắc Giang 43 3.1.2 So sánh nguy tƣơng đối lợn mắc PRRS huyện địa bàn tỉnh Bắc Giang 45 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ vi 3.1.3 Kết xác định tỷ lệ mắc chết PRRS loại lợn khác 47 3.1.4 So sánh nguy tƣơng đối lợn mắc PRRS loại lợn khác 49 3.2 XÁC ĐỊNH VAI TRÒ CỦA VI KHUẨN A PLEUROPNEUMONIAE Ở LỢN MẮC PRRS TẠI TỈNH BẮC GIANG 51 3.2.1 Kết phân lập vi khuẩn A pleuropneumoniae từ bệnh phẩm lợn mắc PRRS lứa tuổi khác 51 3.2.2 Kết xác định số đặc tính sinh học chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập đƣợc 53 3.2.3 Kết xác định chủng A pleuropneumoniae phân lập đƣợc phƣơng pháp PCR 55 3.2.4 Kết xác định serotype chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập đƣợc 56 3.2.5 Kết xác định độc lực chủng A pleuropneumoniae phân lập đƣợc 58 3.2.6 Kết xác định mức độ mẫn cảm với số kháng sinh chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập đƣợc 60 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CÁC BIỆN PHÁP PHÒNG, TRỊ BỆNH VIÊM PHỔI Ở LỢN BỊ MẮC PRRS TẠI BẮC GIANG 61 3.3.1 Kết xác định độ dài miễn dịch Autovaccine 61 3.3.2 Kết xác định hiệu lực Autovaccine thử nghiệm lợn nuôi tỉnh Bắc Giang 68 3.3.3 Kết xác định nguy lợn mắc PRRS, viêm phổi không tiêm Autovaccine so sánh nhóm lợn đƣợc tiêm nhóm lợn không tiêm 70 3.3.4 Kết thử nghiệm số phác đồ điều trị lợn mắc viêm phổi Bắc Giang 71 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 75 KẾT LUẬN 75 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Số hóa trung tâm học liệu vii ĐỀ NGHỊ 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU ADN AGID A.pleuropneumoniae BHI CAMP CFU CPS Cs EDTA ELISA H pleuropneumoniae HIP IHA LPS LTA LDV LD MR NAD omlA PBS PCR PRRS PRRSV RR TYE TSA TSB VP : Acid Deoxyribonucleic : Agargel Immuno Diffuse : Actinobaccillus pleuropneumoniae : Brain Heart Infusion : Chiristie Atkinson Munch Peterson : Colony Forming Unit : Capsule polysaccharide : Cộng : Ethylene Diamine Tetra Acetic acid : Enzyme Linked Immuno Sorbert Assay : Haemophilus pleuropneumoniae : Acid Hippuric : Indirect Haemagglutination test : Lypopolysaccaride : Lipoteibic acid : Lactate dehydrogenase : Lethal dose : Methyl red : Nicotinamide Adenine Dinucleotide : Outer membrane lipoprotein of A pleuropneumoniae : Phosphat buffer solution : Polymerase Chain Reaction : Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome : Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus : Relative Risk : Tryptone Yeast Extract Broth : Tryptic Soya Agar : Tryptone Soya Broth : Voges Prokauer Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ix YE : Yeast Extract Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 74 sử dụng ba phác đồ để điều trị lợn mắc viêm phổi, đặc biệt phác đồ (sử dụng kháng sinh Ceftiofur) Xây dựng thành công phác đồ tạo điều kiện cho ngƣời chăn nuôi, cán thú y sở chủ động phòng điều trị bệnh viêm phổi lợn, giảm thiểu đƣợc thiệt hại, tăng giá trị sản phẩm chăn nuôi Từ ổn định nguồn cung cấp thực phẩm tiêu dùng hàng ngày làm cho giá ổn định đồng thời giúp ngành chăn nuôi lợn tỉnh phát triển bền vững Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 75 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Lợn lứa tuổi có nguy mắc Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRS) Tỷ lệ mắc cao lợn 12,48%, thấp lợn thịt 6,52%; tỷ lệ chết PRRS lợn 24,86% thấp lợn nái hậu bị 4,41% Có 17,78% vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập đƣợc từ lợn dƣơng tính với virus PRRS xác định nguyên nhân phổ biến làm cho lợn mắc PRRS thêm trầm trọng Đã xác định serotype chủng A pleuropneumoniae phân lập có 56,25% thuộc serotype 2; 31,25% thuộc serotype 5a 12,50% thuộc serotype 5b Các chủng vi khuẩn phân lập đƣợc có độc lực cao Có 75,0% gây chết 100% chuột (12-36 giờ); sau tiêm Sau tiêm Autovaccine đến tháng Hiệu giá kháng thể ngƣng kết 1/16; 1/32 đạt tỷ lệ 100 Hiệu giá kháng thể ngƣng kết 1/64 giảm dần từ tháng thứ với tỷ lệ từ 93,33% đến 80% Hiệu lực Autovaccine 70% Vi khuẩn A pleuropneumoniae mẫn cảm cao với florfenicol, ceftiofur, amoxicillin kháng lincomycin, erythromycin, neomycin colistin Ba phác đồ điều trị thử nghiệm cho lợn có kết cao, tỷ lệ lợn khỏi bệnh từ 80% đến 93,33% Trong đó, phác đồ I sử dụng ceftiofur có hiệu kinh tế cao nhất, thời gian điều trị ngắn tỷ lệ lợn khỏi bệnh cao (93,33%) ĐỀ NGHỊ - Áp dụng biện pháp chăn nuôi an toàn dịch bệnh nhƣ: Thƣờng xuyên tiêu độc chuồng trại, định kỳ tiêm chủng loại vaccine đặc biệt vaccine phòng bệnh tai xanh Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 76 - Tiếp tục nghiên cứu sâu chế tạo Autovaccine phòng viêm phổi lợn, để phát triển sản xuất vaccine phòng viêm phổi vi khuẩn A pleuropneumoniae gây lợn - Áp dụng kết đề tài phòng trị bệnh viêm phổi vi khuẩn A pleuropneumoniae gây lợn địa phƣơng sở chăn nuôi để giảm tỷ lệ lợn mắc chết viêm phổi; giúp ngành chăn nuôi lợn phát triển bền vững, tăng giá trị sản phẩm chăn nuôi Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu Tiếng Việt Tiêu Quang An, Nguyễn Hữu Nam (2011), “ Xác định số vi khuẩn kế phát gây chết lợn vùng dịch lợn Tai xanh huyện Văn Lâm tỉnh Hƣng Yên năm 2010”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 18(3), tr 56- 64 Bùi Quang Anh, Hoàng Văn Năm, Văn Đăng Kỳ, Nguyễn Văn Long, Nguyễn Ngọc Tiến (2008) Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (PRRS) NXB Nông nghiệp, tr 7- 21 Đặng Xuân Bình, Nguyễn Thị Ngân, Phan Hồng Phúc (2007), “Tình hình nhiễm Actinobacillus pleuropneumoniae bệnh viêm phổi màng phổi lợn”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 14(2), tr 36-39 Chi cục Thú y tỉnh Bắc Giang (2010), Báo cáo kết phòng chống bệnh Tai xanh lợn năm 2010 địa bàn tỉnh, Bắc Giang Cục thống kê tỉnh Bắc Giang (2012), Thống kê chăn nuôi tỉnh thời điểm ngày 01/4/2012, Bắc Giang 6.Cục Thú y (2008), Báo cáo chẩn đoán nghiên cứu virus gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn Việt Nam từ tháng 3/2007 đến 5/2008, Hội thảo khoa học phòng chống hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn, ngày 21 tháng năm 2008, Hà Nội Nguyễn Thị Thu Hằng (2010), Nghiên cứu số đặc tính sinh học tính sinh miễn dịch Actinobacillus pleuropneumoniae phân lập từ lợn làm sở cho việc chế tạo vaccine Luận án tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia, Hà Nội, tr 115-116 Trịnh Quang Hiệp, Cù Hữu Phú, Nguyễn Thu Hằng, Âu Xuân Tuấn (2004), “Xác định đặc tính sinh vật hoá học, độc lực vi khuẩn Actinobacillus, Pasteurella Streptocococcus gây bệnh viêm phổi Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 78 lợn”, Tạp chí khoa học-công nghệ Bộ Nông nghiệp PTNT (4), tr 476-477 Lê Thanh Hòa, Lê Thị Kim Xuyến, Đoàn Thị Thanh Hƣơng, Trần Quang Vui, Phạm Công Hoạt, Nguyễn Bá Hiên (2009), “ Phân tích gen M mã hóa protein màng vỉus gây PRRS Việt Nam so sánh với chủng Trung Quốc, giới”, Tạp chí Khoa học phát triển, 7(3), tr 282- 290 10 Lý Thị Liên Khai, Võ Thị Cẩm Giàng (2012), “Khảo sát tình hình nhiễm ghép hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản với dịch tả heo tỉnh Bạc Liêu Sóc Trăng”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 19(6), tr 29- 39 11.Phạm Sỹ Lăng, Đỗ Ngọc Thúy, Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Hoàng Đăng Huyến, Bạch Quốc Thắng, Nguyễn Văn Diêm, Trần Đức Hạnh (2011), Một số bệnh quan trọng lợn biện pháp phòng trị, Nxb Hà Nội, tr 137-139 12 Nguyễn Hữu Nam, Nguyễn Thị Lan Hƣơng (2007), Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn, Hội thảo khoa học hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản bệnh liên cầu gây lợn 10/2007, Trƣờng Đại học Nông nghiệp, Hà Nội, tr 34-39 13.Hoàng Văn Năm, Nguyễn Văn Thanh, Bùi Quang Anh, Văn Đăng Kỳ, Bùi Thị Việt Hằng, Bùi Thị Tho, Sử Thanh Long, Trần Thanh Vân, Hoàng Hải Hóa, Võ Ngân Giang, Hán Văn Khoát (2012), Tài liệu đào tạo Thú y sở, Nxb Nông nghiệp - Hà Nội, tr 58 14.Nguyễn Thị Mến, Trần Thị Dân, Nguyễn Thị Phƣơng Ninh, Lê Thanh Hiền, Thái Quốc Hiếu, Nguyễn Văn Hân (2012), “Đặc điểm dịch tễ dịch PRRS năm 2010- 2011 số ứng dụng an toàn sinh học huyện tỉnh Tiền Giang”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 19(6), tr 24- 28 15.Cù Hữu Phú, Nguyễn Ngọc Nhiên, Nguyễn Thu Hằng, Âu Xuân Tuấn, Nguyễn Bích Thuỷ, Vũ Ngọc Quý (2005) Xác định nguyên nhân gây Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 79 bệnh đường hô hấp lợn nuôi số tỉnh phía Bắc Tạp chí KHKT thú y, 7(4), tr 25-32 16.Cù Hữu Phú (2011), Nghiên cứu mối liên quan hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn với vi khuẩn gây bệnh kế phát xác định biện pháp phòng, trị bệnh, Báo cáo khoa học Viện Thú y Quốc gia 2011 17.Phạm Ngọc Thạch (2007), Một số tiêu lâm sàng, tiêu máu lợn mắc hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (bệnh Tai xanh) số đàn lợn tỉnh Hải Dương Hưng Yên, Hội thảo khoa học hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản bệnh liên cầu gây lợn 10/2007, Trƣờng Đại học Nông nghiệp, Hà Nội, tr 25-34 18.Nguyễn Nhƣ Thanh (2007), “Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản” Hội thảo Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản bệnh liên cầu khuẩn gây lợn 10/2007, Trƣờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội, tr 34-37 19.Nguyễn Nhƣ Thanh (2011), Dịch tễ học thú y, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 20.Tô Long Thành (2007), “Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 14 (3), tr 81-88 21.Tô Long Thành Nguyễn Văn Long (2008), “Kết chẩn đoán nghiên cứu virus gây hội chứng rối lọan hô hấp sinh sản lợn Việt Nam từ tháng 3/2007 đến 5/2008”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, 15(5), tr 5-13 22.Nguyễn Văn Thiện (1997), Phương pháp nghiên cứu chăn nuôi, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 22-45 II Tài liệu nƣớc 23.Belanger M., Dubreuil D., Harel J., Girard C., Jacques M (1990), Role of lipopolysaccharides in adherence of Actinobacillus pleuropneumoniae to porcine tracheal rings Infect Immun 58:3523-3530 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 80 24.Bertchinger HU, Seifert P (1978), Isolation of a Pasterella haemolyticalike organism from porcine necrotic pleuropneumoniae, Proc Int Congr Pig Vet Soc 5: Abstr M19 52: 157-149 25.Bertram T A (1986), Intravascular macrophages in lungs of pigs infected with Haemophilus pleuropneumoniae Vet Pathol 23: 681-691 26.Blackall P J., Klaasen H B L M., van den Bosch H., Kuhnert P., Frey J (2002), Proposal of a new serovar of Actinobacillus pleuropneumoniae: serovar 15, Vet Microbiol (84) 47-52 27.Bongtae Kim, Kyoungsub Min, Changsun choi, Wan-Seob Cho (2001), Antimicrobial Susceptibility of Actinobacillus pleuropneumoniae isolated from pig in Korea using new standardzed procedures J Vet.Sci 63 (3) 341-342 28.Chang Y F., Shi J R., Ma D P., Shin S J., Lein D H (1993), Molercular analysis of the Actinobacillus pleuropneumoniae RTX Toxin-III gene cluster DNA Cell Biol 12: 351-362 29.Chang CF, Yeh TM, Chou CC, Chang YF, Chiang TS (2002), Antimicrobial susceptibility and plasmid analysis of Actinobacillus pleuropneumoniae isolated in Taiwan, Vet Microbiol 3; 84(1-2),169-77 30.Chiers K, Donne E, Van Overbeke I, Ducatelle R, Haesebrouck F (2002), Actinobacillus pleuropneumoniae infectious in closed swine heards: infectious patterns and serological profiles Elsevier science B.V in Ghent University Belgium 7: 214-318 31.Chung J W., Ng- Thow- Hing C., Budman L I., Gibbs B F., Nash J H., Jacques M., Coulton J W (2007), Outer membrane proteome of Actinobacillus pleuropneumoniae: LC-MS/MS analyses validate in silico predictions Proteomics Jun; 7(11): 1854-1865 32.Collins J E., Benfield D A., Christianson W T., Harris L., Hennings J C., Shaw D P., Goyal S M., McCullough S., Morrison R B., Joo S H., Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 81 Gorcyca D., Chladek D (1992), “ Isolation of swine infertility and respiratory syndrome virus (isolate ATCC VR- 2332) in North America and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic pigs”, J Vet Diagn Invest 4: 117- 126 33.Devenish J., Rosendal S (1991), Calcium binds to and is required for biological activity of the 104 kilodalton hemolysin of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1, Can J Microbiol 37:317-321 34.Diarra M S., Dolence J A., Dolence E K., Darwish I., Miller M J., Malouin F., Jacques M (1996), Growth of Actinobacillus pleuropneumoniae is promoted by exogenous hydroxamate and catechol siderophores, Appl Environ Microbiol; 62:853-859 35.D'Silva C G., Archibald F S., Niven D F (1995), Comparative study of iron acquisition by biotype and biotype strains of Actinobacillus pleupneumoniae, Vet Microbiol 44: 11-23 36.Frey J (1995a), Exotoxins of Actinobacillus pleuropneumoniae In: W Donachie (ed.) Haemophilus, Actinobacillus, and Pasteurella New York and London: Plenum 42: 124-127 37.Frey J (1995b), Virulence in Actinobacillus pleuropneumoniae and RTX toxins Trends Microbiol Jul, 3(7): 257- 261 38.Gram T, Ahrens P (1998), Improved diagnostic PCR assay for an outer membrane lipoprotein J Clin Microbiol (36) 443-448 39.Gram T, Ahrens P, Andreasen M, Nielsen JP (2000), An Actinobacillus pleuropneumoniae PCR typeing system based on the apx and omLA gens-evaluation of isolates from lungs and tonsils of pigs Vet Microbiol 75:43-57 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 82 40.Han J., Wang Y., Faaberg K S (2006), Complete genome analysis of RFLP 184 isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus: Virus Research 122 (1-2): pp 175-183 41.Jacques M., Roy G., Mittal K R (1988), Hemmaglutinating properties of A pleuropneumoniae Can J Microbiol 34: 1046-1049 42.Jacques M (2004), Surface polysaccharides and iron-uptake systems of Actinobacillus pleuropneumoniae The Canadian Journal of Veterinary Research 68:81-85 43.Inzana T J (1991), Virulence properties of A pleuropneumoniae Microb.Path 11:305-316 44.Kamp E M., Popma J K., Anakotta J., Smits M A (1991), Identification of hemolytic and cytotoxic proteins of Actinobacillus pleuropneumoniae by using monoclonal antibodies Infect Immun 59:3079-3085 45.Kegong Tian, Yu X (2007), Emergence of Fatal PRRSV Varants: Unparalleled Outbreaks of Atypical PRRS in China and Molecular Dissection of the Unique Hallmark, PloS ONE 2(6) International PRRS Symposium 46.Kilian M, Nicolet J, Biberstin EL (1978), Biochemical and serological characterization of Haemophilus pleuropneumoniae and proposal of a neotype strain Int J Syst Bacteriol 28:20-26 47.Kume K., Nagano I., Nakai T (1986), Bacteriological, serological and pathological examination of Haemophilus pleuropneumoniae infection in 200 slaughtered pigs Jpn J.Vet Sci 48: 965-970 48.Lairini K, Stenbaek E, Lacouture S, Gottschalk M (1995), Production and characterisation of monoclonal antibodies aganints Actinobacillus pleuropneumoniae serotype Vet Microbiol 46, p 369-381 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Số hóa trung tâm học liệu 83 49.Langford P R., Loynds B M., Kroll J S (1996), Cloning and molecular characterisation of copper-zinc superoxidase dismutase from Actinobacillus pleuropneumoniae Inf and Imm 64: 5035-5041 50.Leman A D (1992), The decision to repopulate In Proceedings Am Assoc Swine Pract pp 9-12 51.Liu J., Chen X., Tan C., Guo Y., Chen Y., Fu S., Bei W., Chen H (2009), In vivo induced RTX toxin ApxIVA is essential for the full virulence of Actinobacillus pleuropneumoniae Vet Microbiol 2009 Jun 12;137(3-4):282-289 52.Macdonald J., Rycroft A N (1993), Actinobacillus pleuropneumoniae haemolysin II is secreted from Escherichia coli by Actinobacillus pleuropneumoniae pleurotoxin secretion gene products FEMS Microbiol Lett 109, 317-322 53.Matthew PRJ, Pattison IH (1961), The identification of Haemophilus-like organism associated with pneumonia and pleurisy in the pig J Comp Pathol 71:44-52 54.Min K, Chae C (1999), Serotype and apx genotyp profiles of Actinobacillus pleuropneumoniae field isolated in Korea Vet Rec Aug 28: 145(9):251-4 55.Mittal KR, Higgins R, Lariviere S (1982), Evanluation of slide agglutination and ring precipitation tests for capsular serotypeing of Haemophilus pleuropneumoniae J Clin.Microbiol 15:1019-1023 56.Moller K., Nielsen R., Andersen L V., Killian M (1996), Clonal analysis of the Actinobacillus pleupneumoniae population in a geographically restricted area bu multilocus enzyme elctrophoresis, J Clin Micro 30, p 623 - 627 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 84 57.Møller K, Kilian M (1990), V factor-dependent members of the family Pasteurellaceae in the porcine upper respiratory tract J Clin Microbiol Dec;28(12):2711-6 58.Moore G M., Basson R P., Tonkinson L V (1996), Clinical trials with tilmicosin phosphate in feed for the control of naturally- acquired pleuropneumonia caused by Actinobacillus pleuropneumoniae and Pasteurella multocida in swine Am J Vet Res 57:224-228 59.Negrete-Abascal E., Tenorio V R., Serrano J J., Garcia C., de la Garza M (1994), Secreted proteases from Actinobacillus pleuropneumoniae serotype degrade porcine gelatin, hemoglobin and immunoglobulin A Can J Vet Res 58:83-86 60.Nielsen R (1985), Serological characterization of Haemophilus pleuropneumonia (Actinobacillus pleuropneumoniae) strains and proposal of a new serotype: serotype Acta Vet Scand.501-512 61.Pattison IH, Howell DG, Elliiott J (1957), A Haemophilus-like organism isolated from pig lung and the asociated pneumonic lesions J Comp Pathol 67:320-329 62.Perry MB, Altman E, Brison JR, Beynon LM, Richards JC (1990), Structural characteristics of the antigenic capsular polysachharides and lipopolysaccharides involved in the serological alaccification of Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae strains Serodiagnosis and Immunotherapy in Inf Dis 4, p 299-308 63.Pohl S, Bertschiger HU, Frederiksen W, Manheim W (1983), Transfer of Haemophilus pleuropneumoniae and the Pasteurella haemolytica-like organism causing porcine necrotic pleuropneumoniae to the genus Actinobacilus ( Actinobacillus pleuropneumoniae comb Nov) on the Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 85 basis of phenotyleic anh deoxyribonucleic acid relatedness Int J Syst Bacteriol 33:510-514 64.Prescott J F., Baggot J D (1993), Antimicrobial Therapy in Medicine Ames: Iowa State Univ Press 41: 312-317 65.Rayamajhi N., Shin S J., Kang S G., Lee D Y., Ahn J M., Yoo H S (2005), Development and use of a multiplex polymerase chain reaction assay based on Apx toxin genes for genotypeing of Actinobacillus pleuropneumoniae isolates J Vet Diagn Invest Jul;17(4): 359-62 66.Straw B, D’ Allaire A, Mengalem W, Taylor D (1999), Diseases of Swine 8th Edition Iowa State University Press, p.343-354 67.Taylor DJ (1999), Actinobacillus pleuropneumoniae In: Straw B, Taylor D, Mengeling WL, eds Diseases of Swine Iowa State University Press Ames, Iowa, USA: 343-354 68.Udeze F A., Latimer K S., Kadis S (1987), Role of Haemophilus pleuropneumoniae lipopolysaccharide endotoxin in the pathogenesis of porcine Haemophilus pleuropneumoniae Am J Vet Res 48:768-773 69.Ward C K., Inzana T J (1997), Identification and characterization of a DNA region involved in the export of capsular polysaccharide by A pleuropneumoniae serotype 5a Infect and Immun 65: 2491- 2496 70.Wensvoort G., Terpstra C., Pol J M A (1991), “Mystery swine disease in the Netherlands: the isolation of Lelystad virus”, The Veterinary Quarterly, vol 13, No 3, pp 121- 130 71.Wilke M., Franz B., Gerlach G F (1997), Characterization of a large transferrin-binding protein from Actinobacillus pleuropneumoniae serotype J Vet Med B; 4: 73- 86 72.Wite DC, Leidy G, Jamieson JD, Shope RE (1964), porcine contagious pneuropneumoniae III Interrelationship of Haemophilus pleuropneumoniae Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 86 to other species of Haemophilus: Nủtitional, metabolic, transformation and elẻcton microscopy studies J Exp Med 120:1-12 73.Willson PJ, Deneer HG, Potter A, Albritton W (1989), Characterization of a streptomycin- sulfonamide resistance plasmid from Actinobacillus pleuropneumoniae Antimicrob Agents Chemother 33:235-238 Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HOẠ Hình 1,2: Phổi cuống họng lợn mắc bệnh Tai xanh Bắc Giang dùng làm mẫu bệnh phẩm Hình 3: Khuẩn lạc vi khuẩn A pleuropneumoniae môi trƣờng thạch Số hóa trung tâm học liệu Hình 4: Hình thái A pleuropneumoniae chụp qua kính hiển vi có cấy kèm Sta aureus http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 88 Hình 5: Kết kháng sinh đồ Hình 6: Kết phản ứng lên men đƣờng Số hóa trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ [...]... chung và bệnh vi m phổi ở lợn nói riêng, tạo tiền đề cho ngành chăn nuôi lợn trong nƣớc ngày càng đứng vững và phát triển, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu một số đặc tính sinh học của vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae gây vi m phổi trong Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn tại Bắc Giang và biện pháp phòng trị 2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định một số đặc điểm dịch tễ Hội. .. tễ Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn tại một số huyện thuộc tỉnh Bắc Giang - Phân lập, xác định một số đặc tính sinh vật, hóa học của vi khuẩn A pleuropneumoniae - Xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn A pleuropneumoniae phân lập đƣợc - Thử nghiệm Autovaccine phòng bệnh vi m phổi do vi khuẩn A pleuropneumoniae trong Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn tại địa... đồ điều trị vi m phổi trong Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn đạt hiểu quả cao 3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 3 - Đề tài là công trình nghiên cứu có hệ thống, lý luận gắn liền với thực tiễn sản xuất, xác định đƣợc một số đặc tính của vi khuẩn A pleuropneumoniae gây vi n phổi trong Hội chứng PRRS ở lợn nuôi tại Bắc Giang -... nuôi trong phòng trị bệnh, góp phần giảm thiệt hại và tăng thu nhập cho ngƣời chăn nuôi lợn Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 4 Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 5 Chƣơng 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƢỢC NGHIÊN CỨU VỀ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN (PRRS) Ở LỢN 1.1.1 Vài nét cơ bản về Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn 1.1.1.1 Nguyên nhân gây. .. 1978, Kilian và cs [46] khẳng định vi khuẩn H pleuropneumoniae là nguyên nhân gây bệnh vi m phổi màng phổi ở lợn Năm 1983, Pohl và cs [63] đã phân loại vi khuẩn H pleuropneumoniae vào giống Actinobacillus (A), đặt tên là A pleuropneumoniae do có sự tƣơng đồng về DNA giữa H pleuropneumoniae và A lignieressi Vi m phổi - màng phổi là một bệnh nhiễm trùng quan trọng ở đƣờng hô hấp của lợn và xảy ra ở hầu hết... có một số khác biệt về di truyền và kiểu hình nhƣng các chủng virus Bắc Mỹ và các chủng virus Châu Âu lại cùng gây ra các triệu chứng lâm sàng về hô hấp và sinh sản ở lợn rất giống nhau Dựa vào những kết quả nghiên cứu tổn thƣơng đại thể và vi thể của tổ chức phổi lợn mắc bệnh, ngƣời ta chia ra hai nhóm virus: nhóm virus có độc lực cao và nhóm virus có độc lực thấp Nhóm virus có độc lực cao thƣờng gây. .. cơ hội trỗi dậy gây bệnh cho lợn, trong đó có vi khuẩn A pleuropneumoniae Vi khuẩn A pleuropneumoniae là tác nhân gây bệnh vi m phổi – màng phổi ở lợn Bệnh có phân bố rộng rãi và ngày càng trở nên quan trọng do vi c chăn nuôi lợn ngày một phát triển theo hƣớng chăn nuôi công nghiệp Năm 1957, Pattison và cs [61] là những ngƣời đầu tiên phát hiện bệnh vi m phổi - màng phổi ở lợn, tiếp theo (Mattews và. .. kháng Số hóa bởi trung tâm học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 16 sinh đồ khi thí nghiệm điều trị bằng kháng sinh Sự thành công của điều trị phụ thuộc chủ yếu vào vi c phát hiện sớm các dấu hiệu lâm sàng và can thiệp điều trị kịp thời 1.2.2 Một số nghiên cứu về vi khuẩn A pleuropneumoniae Trong PRRS thì vai trò của vi khuẩn kế phát là một trong những nguyên nhân quan trọng gây chết hàng loạt lợn tại. .. bệnh hô hấp của lợn Kết quả cho thấy có nhiều vi khuẩn gây bệnh cƣ trú tại đƣờng hô hấp của lợn, trong đó A pleuropneumoniae cƣ trú chủ yếu ở niêm mạc đƣờng hô hấp trên A pleuropneumoniae tồn tại thƣờng xuyên ở niêm dịch và chỉ gây bệnh khi có đủ các điều kiện cần thiết nhƣ: độc lực của vi khuẩn cao, sức đề kháng của con vật giảm sút hay yếu tố môi trƣờng khắc nghiệt Kiểm tra các mẫu bệnh của lợn khỏe... tỏ nó có tính chất đặc trƣng cho loài Vai trò của độc tố ApxIV với vật chủ nhƣ thế nào trong quá trình gây bệnh hiện chƣa đƣợc nghiên cứu kỹ, song đã có một số công trình nghiên cứu chứng minh sự tồn tại của ApxIVA trong cơ thể sống và đƣợc tạo ra từ gen độc tố của vi khuẩn A pleuropneumoniae (Liu J và cs, 2009) 51 Nghiên cứu của Inzana (1991) [43] cho thấy serotype 5 thể đột biến không sản sinh ra ... pleuropneumoniae gây vi m phổi Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn Bắc Giang biện pháp phòng trị Mục tiêu nghiên cứu - Xác định số đặc điểm dịch tễ Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn số huyện... SƠ LƢỢC NGHIÊN CỨU VỀ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN (PRRS) Ở LỢN 1.1.1 Vài nét Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn 1.1.2 Các đặc tính virus gây PRRS lợn 1.2 MỘT SỐ BỆNH... Autovaccine phòng bệnh vi m phổi vi khuẩn A pleuropneumoniae Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn địa phƣơng - Xây dựng phác đồ điều trị vi m phổi Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn đạt hiểu