TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN NGUYỄN ĐẠI QUỐC DƯƠNG KHẢO SÁT MẬT ĐỘ VI KHUẨN E. coli, Coliforms Listeria TRONG THỊT CÁ VÀ TRONG MÔI TRƯỜNG NƯỚC AO NUÔI Ở AN GIANG VÀ HẬU GIANG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 2013 i LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Ban Chủ Nhiệm Khoa Thủy Sản, Quý Thầy Cô Khoa Thủy Sản Bộ môn Thủy Sinh Học Ứng Dụng tạo điều kiện thuận lợi cho học tập cao kiến thức thời gian theo học khoa. Đặc biệt xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô Phạm Thị Tuyết Ngân tận tình hướng dẫn, giúp đỡ cung cấp nhiều kiến thức quý báu giúp hoàn thành luận văn này. Xin gửi lời cảm ơn đến chị Phan Thị Cẩm Tú, anh Trần Phước Vinh nhiệt tình giúp đỡ suốt trình thực thí nghiệm. Tập thể lớp Nuôi Trồng Thủy Sản khóa 36 hỗ trợ, giúp đỡ nhiều mặt trình học tập hoàn thiện luận văn. Sau cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn bè động viên, chia sẽ, giúp đỡ vượt qua khó khăn, trở ngại suốt trình học tập. Ngày 01 tháng 12 năm 2013 Nguyễn Đại Quốc Dương i TÓM TẮT Ngành thủy sản ngành quan trọng phát triển kinh tế Việt Nam. Tuy nhiên, hàng năm có nhiều người mắc bệnh sản phẩm thủy nhiễm khuẩn làm người tiêu dùng dần lòng tin với sản phẩm từ thủy sản. Mà chủ yếu nhiễm vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria. Đề tài “Khảo sát mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria thịt cá môi trường nước ao nuôi An Giang Hậu Giang” nhằm khảo sát mức độ nhiễm khuẩn E. coli, Coliforms Listeria loài cá môi trường nước nuôi ĐBSCL để kịp thời đưa biện pháp phòng tránh, ngăn chặn làm giảm bớt số ca ngộ độc thực phẩm thức ăn từ thủy sản để lấy lại lòng tin người tiêu dùng. Đề tài tiến hành thu mẫu cá điểm: siêu thị Big C, chợ Cần Thơ, ao nuôi An Giang Hậu Giang loài cá rô, cá tra, cá lóc, cá điêu hồng, cá chép, cá rô phi, cá hường loài lặp lại lần; thu mẫu nước lần ao nuôi An giang Hậu Giang. Các mẫu cấy vào đĩa petrifilm mức nồng độ pha loãng10-1, 10-2. Kết phân tích mẫu cho thấy biến động mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms listeria nhiễm cá theo địa điểm thu, thành phần loài khác môi trường nước nuôi. Mật độ loại vi khuẩn loài cá da trơn thấp loài cá có vẩy mật độ loại vi khuẩn siêu thị Big C thấp mật độ vi khuẩn cá chợ thành phố Cần Thơ. ii CAM KẾT KẾT QUẢ Tôi xin cam kết luận văn hoàn thành kết nghiên cứu kết nghiên cứu chưa dùng cho luận văn cấp khác. Ngày 01 tháng 12 năm 2013 Nguyễn Đại Quốc Dương iii DANH SÁCH BẢNG Bảng 4.1. Mật độ vi khuẩn E. coli (CFU/ml) loài điểm thu mẫu khác 16 Bảng 4.2. Mật độ vi khuẩn Coliforms (CFU/ml) loài điểm thu mẫu khác 16 Bảng 4.3. Mật độ vi khuẩn Listeria (CFU/ml) loài điểm thu mẫu khác 17 Bảng 4.4. Mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms, Listeria (CFU/ml) môi trường nước nuôi cá ao nuôi 18 iv MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT . ii CAM KẾT KẾT QUẢ iii DANH SÁCH BẢNG iv MỤC LỤC .v CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ . i 1.1 Giới thiệu: 1.2 Mục tiêu đề tài: 1.3 Nội dung đề tài: 1.4 Thời gian thực đề tài: CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 2.1 Đặc điểm khả gây bệnh nhóm Coliforms E. coli . 2.2.1 Khái quát đặc điểm Coliforms 2.1.2 Khả gây bệnh nhóm vi sinh vật Coliforms 2.1.3 Một số nghiên cứu, phân tích Coliforms . 2.2 Giới thiệu chung Listeria motocytogenes (Phạm Ngọc Hà, 2012) 2.2.1 Khái quát vi khuẩn Listerria . 2.2.2 Phân bố cách lây lan . 2.2.3 Hình thái . 2.2.4 Đặc tính nuôi cấy 2.2.5 Đặc tính sinh hóa . 2.2.6 Đặc tính gây bệnh 10 2.2.7 Khả lây bệnh 10 2.2.8 Miễn dịch .10 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .12 3.1 Địa điểm nghiên cứu .12 3.2 Vật liệu nghiên cứu .12 v 3.2.1 Dụng cụ thu, trữ phân tích mẫu 12 3.2.2 Hóa chất .13 3.3 Phương pháp thu bảo quản mẫu 13 3.4 Phương pháp phân tích mẫu 13 3.5 Cách xác định tính thông số theo dõi 14 3.6 Phương pháp xử lý số liệu .14 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .15 4.1 Khảo sát mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms, Listeria loài cá điểm thu khác nhau: 15 4.2 Khảo sát mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms, Listeria môi trường nước ao nuôi cá nuôi ao: 17 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ SUẤT .19 5.1 Kết luận .19 5.2 Đề suất 19 TÀI LIỆU THAM KHẢO 20 PHỤ LỤC A: BẢNG MẬT ĐỘ VI KHUẨN 22 vi CHƯƠNG ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu: Việt Nam nhận biết xu hướng chung người tiêu dùng giới ngày tiêu thụ nhiều sản phẩm có nguồn gốc thủy sản. Vì năm gần đây, Việt Nam đẩy mạnh phong trào nuôi trồng thủy sản nhằm đáp ứng nhu cầu ngày tăng người tiêu dùng thủy sản trở thành ngành quan trọng phát triển kinh tế đất nước. Nhưng hàng năm có hàng trăm ca ngộ độc thực phẩm phải nhập viện, đặc biệt thức ăn từ thủy sản, gây hậu nghiêm trọng đến sức khoẻ cộng đồng. Điều không phổ biến Việt Nam mà nước khác giới vậy. Việc làm cho người tiêu dùng dần lòng tin với sản phẩm từ thủy sản. Một nguyên nhân gây tình trạng diện mức cho phép vi sinh vật gây hại thực phẩm như: Bacillus cereus, Coliforms, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Shigella spp, Staphylococcusaureus,… Phổ biến dòng vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria (http://topmanjsc.com/tu-van/iso22000/mot-so-vi-khuan-chu-yeu-trong-thuc-pham/). Để ngành thủy sản không vai trò quan trọng kinh tế đất nước giúp người tiêu dùng an tâm sử dụng sản phẩm từ thủy sản ta phải có biện pháp phòng tránh, ngăn chặn làm giảm bớt số ca ngộ độc thực phẩm thức ăn từ thủy sản, nên cần khảo sát mức độ nhiễm khuẩn E. coli, Coliforms Listeria loài cá môi trường nước nuôi ĐBSCL. Vì vậy, đề tài “Khảo sát mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria thịt cá môi trường nước ao nuôi An Giang Hậu Giang” thực hiện. 1.2 Mục tiêu đề tài: Đánh giá mức độ nhiễm khuẩn E. coli, Coliforms Listeria loài cá thường sử dụng mức độ nhiễm khuẩn nguồn nước nuôi hệ thống ao nuôi cá. 1.3 Nội dung đề tài: Xác định mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria loài cá người dân thường sử dụng nơi khác nhau. Xác định mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria môi trường ao nuôi tỉnh An Giang Hậu Giang. 1.4 Thời gian thực đề tài: Từ tháng 8/2013 đến tháng 12/2013. CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm khả gây bệnh nhóm Coliforms E. coli 2.2.1 Khái quát đặc điểm Coliforms Coliforms nhóm vi khuẩn có môi trường xung quanh chúng ta, chúng diện rộng rãi tự nhiên, ruột người động vật máu nóng khác. Coliforms gồm có giống vi sinh vật Escherichia (với loài E. coli), Citrobacter, Klebsiella Enterobacter. Nếu hiểu theo nghĩa hẹp gồm có giống vi sinh vật sau: Enterobacter, Klebsiella Citrobacter (Pieron Corlett, 1992. Trích dẫn Nguyễn Đức Lượng, Phạm Minh Tâm, 1999). Coliforms xem nhóm vi sinh vật thị, số lượng diện chúng thực phẩm, nước hay loại mẫu môi trường dùng để khả diện vi sinh vật gây bệnh khác. Đây nhóm trực khuẩn đường ruột Gram âm, không sinh bào tử, hiếu khí kỵ khí tuỳ nghi, có khả sinh acid, sinh lên men lactose 37±1oC vòng 24-48 giờ. Trong thực tế phân tích Coliforms cho thấy vi khuẩn thuộc nhóm có khả lên men sinh môi trường Lauryl Sulphate Brilliant Green Lactose Bile Salt (Reilly, 1992). Coliforms gồm có Coliforms chịu nhiệt Coliforms phân (Fecal Coliforms hay E. coli giả định). Coliforms chịu nhiệt Coliforms có khả lên men lactose sinh khoảng 24 ủ 44oC môi trường EC (Escherichia coli Broth), chúng có nguồn gốc từ nguồn nước giàu chất hữu nước thải công nghiệp, đất xác thực vật phân hủy. Coliforms phân Coliforms chịu nhiệt có khả sinh Indole ủ khoảng 24 44,5oC môi trường lỏng Trypton (Nguyễn Phước Linh, 2006. Trích dẫn Nguyễn Mạnh Hùng, 2008). Coliforms phát triển tốt nhiều loại môi trường, nhiều loại thực phẩm. Có nhiều nghiên cứu cho thấy chúng phát triển nhiệt độ thấp đến -2oC cao đến 50oC, thực phẩm chúng phát triển yếu chậm 5oC từ 3-6oC. Trên môi trường thạch sau 12-16 chúng có khả phát triển mạnh tạo khuẩn lạc nhìn thấy được. Ngưỡng pH để Coliforms phát triển 4,4-9 (Nguyễn Đức Hùng, 2004). 2.2.6 Đặc tính gây bệnh Khi tiến hành phân tích chẩn đoán Listeriosis khảo sát nguồn nhiễm khuẩn thấy vi khuẩn tồn thời gian dài lâu 90 ngày từ ăn phải thực phẩm nhiễm khuẩn xuất triệu chứng. Thời gian trung bình từ nhiễm khuẩn vào thể đến phát bệnh khoảng 30 ngày. Vi khuẩn bền. Nó kháng nhiệt (mặc dầu nhiệt độ không cao, 60oC), muối, nitrite acid, sống sót điều kiện lạnh đông chí sinh sôi phát triển chậm chạp tủ lạnh (ở khoảng 4oC). Vi khuẩn bị diệt 60oC 30 phút 72oC 15 giây. Vi khuẩn đề kháng với khô hạn. Có thể sống sót thực phẩm đất bị diệt chất sát trùng thông thường. Nhạy cảm với nhiều loại kháng sinh tetracycline cho kết tốt nhất. Người ta kết hợp Trimethoprim với Sulphamethazol điều trị, vi khuẩn kháng lại với Quinolones. Erythromycine, ampicillin dung điều trị bệnh cho người. 2.2.7 Khả lây bệnh Trong tự nhiên vi khuẩn gây bệnh Listeriosis dạng thần kinh gọi bệnh quay mòng, phổ biến động vật nhai lại bò, cừu đặc biệt vào mùa đông đầu mùa xuân với lứa tuổi. Đối với dạng phủ tạng thường gặp động vật dày đơn. Bệnh gây sảy thai ngựa. Ngoài vi khuẩn gây bệnh cho gia cầm cá. Ở người thường gặp sảy thai, thai chết viêm não. Ở vài động vật thể gia tăng bạch cầu đơn nhân. Trong phòng thí nghiệm: Dùng thỏ chuột lang. Chuột nhạy cảm, chết sau tiêm nhiễm 48 với bệnh tích hoại tử gan. Dùng test ANTON gây viêm kết mạc mắt. Một bệnh L. monocytogenes viêm màng não mủ, hay viêm màng não nhiễm khuẩn, tượng viêm màng bao bọc quanh hệ thần kinh trung ương (não tủy sống) diện vi khuẩn gây bệnh khoang dịch não tủy. Sự viêm nhiễm gây nên tình trạng sinh mủ bên hệ thống thần kinh trung ương. Những bệnh nhân suy giảm miễn dịch người già, trẻ sơ sinh, bệnh nhân điều trị thuốc ức chế miễn dịch, AIDS thường có nguy bị bệnh. Viêm màng não mủ sơ sinh tác nhân thường nằm bối cảnh nhiễm trùng huyết nặng. Các dấu hiệu nghi ngờ lâm sàng là: mẹ thường có sốt, sinh non không rõ nguyên nhân, thai có tổn thương hạt . 2.2.8 Miễn dịch Cơ thể thú hình thành miễn dịch sau nhiễm. Miễn dịch trung gian tế bào chủ yếu. Hiện có hai loại vaccine chết nhược độc đem lại 10 kết quả. Vaccine thường sử dụng: 1a 4b đạt kết phòng bệnh cừu. 11 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Địa điểm nghiên cứu Thu mẫu: - Mẫu cá: loài cá mua từ siêu thị Big C, chợ Cái khế, chợ Tân An, chợ Cần Thơ ao nuôi tỉnh An Giang, Hậu Giang. - Mẫu nước: thu ao nuôi tỉnh An Giang Hậu Giang. - Nghiên cứu tiến hành loài cá như: cá rô đồng, cá tra, cá lóc, cá diêu hồng, cá rô phi, cá hường, cá chép mẫu nước ao nuôi. Phân tích mẫu: phòng thí nghiệm vi sinh – khoa Thủy sản – Trường Đại Học Cần Thơ. 3.2 Vật liệu nghiên cứu 3.2.1 Dụng cụ thu, trữ phân tích mẫu Thùng giữ lạnh có nắp đậy Khay thớt nhựa Túi PE tuyệt trùng Túi gói vô trùng Whirl Bộ đồ tiểu phẩu Kính hiển vi Tủ sấy, tủ ấm, tủ mát Tủ cấy vô trùng Máy trộn mẫu (vortex) Nồi tiệt trùng áp suất Đĩa Petrifilm E. Coli/Coliforms Count (EC) Đĩa Petrifilm Environment Listeria (EL) hãng 3M, sản xuất Nhật Bản. Pipet chia khoảng nhựa 25ml (có hút ẩm đầu) Micropipette 1ml, 5ml Đầu ống pipet 1ml, 5ml 12 3.2.2 Hóa chất Peptone Cồn tuyệt đối, cồn 96o, cồn 70o 3.3 Phương pháp thu bảo quản mẫu • Mẫu nước: Mẫu nước thu ống nghiệm nghiệm vô trùng 10 ml, thu tương tự mẫu nước để phân tích hóa học (thu mặt nước). Ghi nhận vị trí thu mẫu hai ống mẫu. Các mẫu vận chuyển đến phòng thí nghiệm thùng giữ lạnh (giữ 10oC), xử lí vòng 6-8 tiếng. • Mẫu cá: 75 mẫu, loài cá thu gom chứa túi nhựa PE. Thu mẫu cho loài cá nơi thu mẫu. Cá đựng chung túi PE cho loài/địa điểm. Khi xử lí cá, nên đeo găng tay, phun cồn 70o, lau khăn giấy khô để giảm ô nhiễm chéo vi khuẩn mẫu cá. Ghi nhận vị trí thu mẫu hai túi mẫu. Các mẫu vận chuyển đến phòng thí nghiệm thùng giữ lạnh (giữ 10oC), xử lí vòng 6-8 tiếng. 3.4 Phương pháp phân tích mẫu Mẫu cá: cắt 2,5-3g thịt cá cho vào túi vô trùng Whirl, cho tiếp vào 5ml dung dịch peptone chuẩn bị trước với nồng độ 1% tuyệt trùng 121oC 20 phút. Túi mẫu để vào máy lắc khoảng phút. Cấy vi khuẩn tiến hành bước sau cho mẫu cá mẫu nước: - Lắc trộn mẫu máy trộn mẫu khoảng giây. - Dùng micropipet hút ml mẫu cho vào ống nghiệm chứa ml peptone thứ (nồng độ 10-1). Lắc ống nghiệm. - Thay đầu col pipet, chuyển 1ml dung dịch từ ống nghiệm thứ sang ống nghiệm thứ hai (nồng độ 10-2). Lắc ống nghiệm. - Cấy vi khuẩn E. coli Coliforms dùng micropipet vô trùng lấy 0.1 ml mẫu nồng độ pha loãng, kể nồng độ 100, cho vào đĩa petrifilm EC. Đối với vi khuẩn Listeria lấy 0.2ml mẫu nồng độ pha loãng, kể nồng độ 100, cho vào đĩa petrifilm EL (đậy đĩa từ từ tránh bọt khí). 13 - Để 10 phút, để mẫu phân tích tủ ấm khoảng 24-32 35±0.5°C đọc kết quả. 3.5 Cách xác định tính thông số theo dõi Sau 24 đếm khuẩn lạc E. coli (màu đỏ/xanh có bọt khí), Coliforms (màu đỏ/xanh) sau 32-48 đếm khuẩn lạc Listeia (màu tím) (theo hướng dẫn sử dụng đĩa petrifilm công ty 3M). Chọn đĩa có số khuẩn lạc khoảng 15-150 khuẩn lạc/đĩa để đếm, số khuẩn lạc nhiều đếm ô, lấy trung bình, nhân cho 19 ô. Kết tính theo công thức: CFU/ml = (số khuẩn lạc x nồng độ pha loãng)/ thể tích nuôi cấy So sánh kết quả: - So sánh mật độ vi khuẩn loài điểm thu mẫu. - So sánh mật độ vi khuẩn điểm thu mẫu loài cá. - So sánh mật độ vi khuẩn có cá nuôi ao mật độ vi khuẩn có môi trường ao nuôi. 3.6 Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu tính toán giá trị trung bình, độ lệch chuẩn Excel. 14 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Khảo sát mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms, Listeria loài cá điểm thu khác nhau: Mật độ vi khuẩn cá biến động khác tùy theo loài cá điểm thu mẫu khác nhau. Sự biến động mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria thể qua Bảng 4.1, Bảng 4.2 Bảng 4.3. Qua khảo sát tất loài cá điểm thu nhiễm vi khuẩn E. coli (Bảng 4.1). Mật độ vi khuẩn E. coli loài cá có biến động lớn không ổn định. Cá rô đồng có mật độ vi khuẩn tương đối cao loài khác (dao động khoảng từ 48±11 đến 88±72 CFU/g), ngoại trừ chợ Tân An mật độ vi khuẩn loài cá rô đồng thấp (19±16 CFU/g). Mật độ vi khuẩn E. coli cá tra (dao động khoảng từ 3±6 đến 41±10 CFU/g) tương đối thấp mật độ vi khuẩn loài lại, riêng chợ Tân An mật độ vi khuẩn E. coli loài cá tra cao (102±5 CFU/g) ổn định loài khác. Có thể loài da trơn có tiết chất nhờn nên vi khuẩn khó xâm nhập loài cá có vẩy. mật độ vi khuẩn E. coli cá thu ao (từ 3±6 đến 64±16 CFU/g) thấp mật độ vi khuẩn E. coli cá thu chợ siêu thị (từ 1±2 đến102±5 CFU/g), riêng loài cá chép mật độ vi khuẩn cá ao (104±79 CFU/g) cao gấp lần cá chợ Cần Thơ (29±33 CFU/g). Việc mật độ vi khuẩn cá thu chợ siêu thị cao mật độ vi khuẩn cá thu ao trình vận chuyển làm cá bị nhiễm, địa điểm thu mẫu (chợ) không hợp vệ sinh, cá bày bán thau, xô để gần lây nhiễm vi khuẩn qua lại. điểm thu thành phố cần Thơ, siêu thị Big C có mật độ vi khuẩn E. coli thấp nhất, chợ lại có mật độ vi khuẩn cao chênh lệch với không đáng kể. Do siêu thị cá kiểm định trước bày bán bày bán khay chứa nước đá để vị trí cao mặt đất hợp vệ sinh điểm thu lại. 15 Bảng 4.1. Mật độ vi khuẩn E. coli loài cá điểm thu mẫu khác (CFU/g): cá rô đồng cá tra cá lóc cá điêu hồng Big C 48±11 41±10 25±5 29±15 Cái Khế 88±72 35±26 5±3 8±7 Tân An 19±16 102±5 40±54 8±11 Cần Thơ 56±73 11±13 1±2 An Giang Hậu Giang cá chép cá hường 29±33 9±8 62±67 cá rô phi 3±6 3±6 104±79 64±16 Ở vi khuẩn Coliforms (Bảng 4.2), cá điêu hồng loài có mật độ vi khuẩn Coliforms cao (dao động khoảng từ 6±6 đến 110±135 CFU/g), cá tra có mật độ vi khuẩn Coliforms (dao động khoảng từ 0±0 đến 34±59 CFU/g) tương đối thấp loài lại. Các loài cá lại biến động không cao. Giống vi khuẩn E. coli, mật độ vi khuẩn Coliforms cá thu ao (từ 0±0 đến 21±6 CFU/g) thấp nhiều lần so với mật độ vi khuẩn cá thu chợ (từ 0±0 đến 110±135 CFU/g), trình vận chuyển làm cá bị nhiễm thêm vi khuẩn, địa điểm buôn bán chưa hợp vệ sinh lam cá dễ bị lay nhiễm vi khuẩn chéo với nhau. Mật độ vi khuẩn Colifroms điểm thu khác có biến động lớn loài nên chưa thể khẳng định điểm thu có mật độ vi khuẩn thấp nhất. Nhưng nhìn chung mật độ vi khuẩn Coliforms tất loài cá đạt tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5289-1992 (số Coliforms ≤ 200 CFU/g). Bảng 4.2. Mật độ vi khuẩn Coliforms loài cá điểm thu mẫu khác (CFU/g): cá rô đồng cá tra cá lóc cá điêu hồng Big C 2±2 2±1 103±168 110±135 Cái Khế 2±1 12±18 9±13 23±36 Tân An 13±19 34±59 4±4 6±6 Cần Thơ 56±73 0±0 63±34 An Giang Hậu Giang cá chép cá hường 3±3 0±0 6±5 cá rô phi 21±6 1±2 1±1 16 1±0 Tương tự hai loài vi khuẩn trên, mật độ vi khuẩn Listeria (Bảng 4.3) cá loài khác có biến động lớn. Cá điêu hồng (từ 28±27 đến 66±20 CFU/g) loài có mật độ vi khuẩn Listeria tương đối cao loài khác, cá tra (từ 0±0 đến 23±13 CFU/g) loài có mật độ vi khuẩn thấp có tính ổn định hơn. Mật độ vi khuẩn cá thu ao cao mật độ vi khuẩn cá thu chợ, nhiễm trình vận chuyển buôn bán. Cũng loài vi khuẩn E. coli, mật độ vi khuẩn Listeria cá siêu thị Big C (từ 3±3 đến 28±27 CFU/g) thấp mật độ vi khuẩn Listeria cá thu chợ khác. Do cá siêu thị kiểm định bày bán nơi thoáng hợp vệ sinh. Bảng 4.3. Mật độ vi khuẩn Listeria loài cá điểm thu mẫu khác (CFU/g): cá rô đồng cá tra cá lóc cá điêu hồng Big C 3±3 7±4 8±7 28±27 Cái Khế 29±13 16±9 58±44 66±20 Tân An 26±15 23±13 38±14 63±32 Cần Thơ 10±8 0±1 314±172 An Giang Hậu Giang cá chép cá hường 17±14 0±0 31±26 cá rô phi 106±31 5±9 4±5 4±0 Nhìn chung mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria loài cá da trơn thấp loài cá có vẩy, cá da trơn có tiết chất nhờn vi khuẩn khó bám nhiễm vào cá. Vi khuẩn nhiễm trình vận chuyển nơi buôn bán nơi bán không hợp vệ sinh. Nên mật độ vi khuẩn loài cá bán siêu thị tương đối thấp loài cá bán chợ. 4.2 Khảo sát mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms, Listeria môi trường nước ao nuôi cá nuôi ao: Qua Bảng 4.4 cho thấy mật độ vi khuẩn cá thấp mật độ vi khuẩn có môi trường nước ao nuôi, riêng mật độ vi khuân Listeria cá ao An Giang (353±448 CFU/ml) cao mật độ vi khuẩn có môi trường nước ao nuôi (86±90 CFU/ml) trình vận chuyển cá bị nhiễm thêm vi khuẩn. Mật độ vi khuẩn E. coli môi trường nước An 17 Giang (271±228 CFU/g) thấp môi trường nước Hậu Giang (338±383 CFU/g) nên mật độ vi khuẩn E. coli cá An Giang (14±21 CFU/g) thấp mật độ vi khuẩn E. coli cá Hậu Giang (67±92 CFU/g); mật độ vi khuẩn Coliforms môi trường nước An Giang (243±359 CFU/g) cao mật độ vi khuẩn Coliforms môi trường nước Hậu Giang (184±204 CFU/g) nên mật độ vi khuẩn Coliforms cá An Giang (228±321 CFU/g) cao mật độ vi khuẩn cá Hậu Giang (180±240 CFU/g); mật độ vi khuẩn Listeria có nhiễm khuẩn tác nhân bên nên so sánh được. Mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria cá biến động theo mật độ vi khuẩn có môi trường nước ao nuôi. Cần quản lí tốt môi trường ao nuôi (khâu cải tạo ao, diệt khuẩn, nguồn cấp nước, quản lí nước trình nuôi) để hạn chế vi khuẩn nước nhiễm vào thịt cá. Bảng 4.4. Mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms, Listeria môi trường nước nuôi cá ao nuôi (CFU/ml): Nghiệm thức An Giang Hậu Giang E. coli Coliforms Listeria Cá 14±21 228±321 353±448 Nước 271±228 243±359 86±90 Cá 67±92 180±240 23±45 Nước 338±383 184±204 498±681 18 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ SUẤT 5.1 Kết luận Mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria biến động lớn cá loài khác nhau. Mật độ vi khuẩn loài cá tra tương đối thấp loài có vẩy khác. Mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria cá siêu thị thấp mật độ vi khuẩn cá chợ thành phố Cần Thơ. 5.2 Đề suất Các mẫu nên có tính đồng sồ lượng, thành phần loài thu địa điểm; thu mẫu nên có tính chu kì để kết thí nghiệm xác hơn. Nên quản lí tốt chất lượng nước nuôi , tổ chức nơi buôn bán hợp vệ sinh cung cấp sản phẩm thủy sản qua kiểm định mức vệ sinh an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng để hạn chế trường hợp ngộ độc cá nhiễm khuẩn. 19 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Ahmed, H. Al-Harbi, 2003. Faecal coliforms in pond water, sediments and hybrid tilapia Oreochromis niloticus, Oreochromis aureus in Saudi Arabia. Aquaculture Research, Volume 34 Issue Page 517-524. 2. Boyd, C. E. and C.S. Tucker, 1998. Pond Aquaculture Water Quality Management. Kluwer Academic Publishing, Boston, USA. 3. Ibarrow, G. R.K.A Feltham, 1987. Cowan and Steel’s manual for indentification of medical bacteria, international journal of systematic bacteriology Vol.37.No4: 110-111, 132-133. 4. http://topmanjsc.com/tu-van/iso-22000/mot-so-vi-khuan-chu-yeu-trongthuc-pham/ 5. James, M. Jay and Bijamin Pub, 1997. Modern food Microbiology. 6. Nguyễn Hoàng Nam Kha, 2006. Phân lập hệ vi khuẩn cộng sinh cá tra tiến hành thử nghiệm kháng sinh đồ, Tạp Chí KHKT Nông Lâm Nghiệp Số 1/2006, Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh. 7. Nguyễn Đức Hùng ctv, 2004. Sổ tay kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm thủy sản. NXB Nông Nghiệp Hà Nội. 8. Nguyễn Mạnh Hùng, 2008. Khảo sát mật độ vi khuẩn tổng cộng nước vi khuẩn Coliforms cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) nuôi ao. Đại Học Cần Thơ, khoa Thủy Sản, môn sinh học bênh thủy sản. Trang 7-14. 9. Nguyễn Đức Lượng, Phạm Minh Tâm, 1999. Vệ sinh an toàn thực phẩm. NXB Đại Học Kỹ Thuật Tp. Hồ Chí Minh. 10. Nguyễn Đình Xuân Quý, 2003. Đánh giá mức độ an toàn vệ sinh thú y tôm nuôi Trà Vinh Kiên Giang. Luận văn thạc sĩ nuôi trồng thủy sản, Khoa Thủy Sản, Trường Đại Học Cần Thơ. 11. Phạm Đình Đôn, 2006. Bảo vệ môi trường nuôi trồng thủy sản Đồng sông Cửu Long. (http://www.Vietlinh.com.vn, truy cập ngày 2/6/2008) 12. Phạm Ngọc Hà, 2012.chuẩn đoán vi khuẩn Listeria monocytogens kỹ thuật gene, Trường Đại Học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh - Bộ môn Công Nghệ Sinh Học. 20 13. Phạm Văn Tuấn, 2008. Khảo sát số tiêu vi sinh vật nước ao nuôi cá tra quận Ô Môn, thành phố Cần Thơ. Luận văn tốt nghiệp bác sĩ thú y, Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ. 14. Reilly (1992), Safety of Food Products from Aquaculture, the Environmenttal Health Division, 2004. Coliform bacteria and drinking water. http://www.bfhd.wa.gov/info/Coliform.phd. Truy cập ngày 28/05/2008. 15. Kozlov, R. O. Stetsiouk and ctv, 1999. Antimicrobial resistance innosocomial strains of Enterobacter spp isolated in intensive care units in Russia: results of multicentre study, 9th European Congress Of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 21-25 March, 1999, Berlin, Germany. 16. R. Suhalim and Y. W. Huang, 2002. Presence of Escherichia coli O157:H7 in raw channel catfish and processed fish products at farmer's markets. Department of Food Science and Technology. 17. Thông tư số 01/2000/TT-BTS ngày 28/04/2000 Bộ Thủy Sản. 18. Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 5289-1992. 19. World health organization, Geneva 1999. Food safety issues associated with products from aquacutre. 21 PHỤ LỤC A BẢNG MẬT ĐỘ VI KHUẨN Bảng 5.1 Mật độ vi khuẩn E. coli, Coliforms Listeria cá (CFU/g) Mẫu Loài cá Mật độ vi khuẩn Địa điểm thu mẫu E, coli Coliforms Listeria CM1 cá rô siêu thị Big C 60 CM2 cá rô siêu thị Big C 40 CM3 cá rô siêu thị Big C 43 CM4 cá tra siêu thị Big C 31 CM5 cá tra siêu thị Big C 40 CM6 cá tra siêu thị Big C 51 11 CM7 cá lóc siêu thị Big C 26 297 CM8 cá lóc siêu thị Big C 29 16 CM9 cá lóc siêu thị Big C 20 11 CM10 cá điêu hồng siêu thị Big C 31 19 CM11 cá điêu hồng siêu thị Big C 14 46 24 CM12 cá điêu hồng siêu thị Big C 43 266 57 CM13 cá rô chợ khế 21 CM14 cá rô chợ khế 103 21 CM15 cá rô chợ khế 151 44 CM16 cá tra chợ khế 43 32 11 CM17 cá tra chợ khế 11 CM18 cá tra chợ khế 57 26 CM19 cá lóc chợ khế 24 CM20 cá lóc chợ khế 81 CM21 cá lóc chợ khế 86 CM22 cá điêu hồng chợ khế 14 83 CM23 cá điêu hồng chợ khế 71 22 CM24 cá điêu hồng chợ khế 65 44 CM25 cá rô chợ Tân An 35 21 CM26 cá rô chợ Tân An 14 CM27 cá rô chợ Tân An 49 43 CM28 cá tra chợ Tân An 103 14 CM29 cá tra chợ Tân An 97 103 17 CM30 cá tra chợ Tân An 106 37 CM31 cá lóc chợ Tân An 103 30 CM32 cá lóc chợ Tân An 31 CM33 cá lóc chợ Tân An 54 CM34 cá điêu hồng chợ Tân An 21 39 CM35 cá điêu hồng chợ Tân An 100 CM36 cá điêu hồng chợ Tân An 13 51 CP37A cá tra chợ Cần Thơ 120 706 CP37B cá tra chợ Cần Thơ CP37C cá tra chợ Cần Thơ 29 CP38A cá tra chợ Cần Thơ CP38B cá tra chợ Cần Thơ CP38C cá tra chợ Cần Thơ 26 CP39A cá rô chợ Cần Thơ 24 CP39B cá rô chợ Cần Thơ 23 27 CP39C cá rô chợ Cần Thơ 140 19 97 CP40A cá chép chợ Cần Thơ 25 CP40B cá chép chợ Cần Thơ 66 25 CP40C cá chép chợ Cần Thơ 17 CP41A cá tra ao An Giang 14 CP41B cá tra ao An Giang CP41C cá tra ao An Giang 14 CP42A cá lóc ao An Giang 55 274 Cp42B cá lóc ao An Giang 100 502 Cp42C cá lóc ao An Giang 33 165 23 CP43A cá rô phi đen ao An Giang 25 125 CP43B cá rô phi đen ao An Giang 14 70 CP43C cá rô phi đen ao An Giang 10 25 123 CP44A cá chép ao Hậu Giang 80 Cp44B cá chép ao Hậu Giang 193 10 CP44C cá chép ao Hậu Giang 40 CP45A cá rô ao Hậu Giang 16 Cp45B cá rô ao Hậu Giang 136 12 61 CP45C cá rô ao Hậu Giang 45 16 CP45D cá hường ao Hậu Giang CP45E cá hường ao Hậu Giang CP45F cá hường ao Hậu Giang CP46A cá tra ao Hậu Giang CP46B cá tra ao Hậu Giang 38 CP46C cá tra ao Hậu Giang CP47A cá tra ao Hậu Giang 10 15 CP47B cá tra ao Hậu Giang CP47c cá tra ao Hậu Giang CP48A cá hường ao Hậu Giang 46 CP48B cá hường ao Hậu Giang 77 CP48C cá hường ao Hậu Giang 69 24 Bảng 5.2 mật độ vi khuẩn E, coli, Coliforms Listeria môi trường nước ao nuôi (CFU/ml) Mật độ voi khuẩn Địa điểm thu mẫu E,coli Coliforms Listeria CP37 An Giang 240 960 80 CP38 An Giang 590 22 85 CP39 An Giang 510 15 260 CP40 An Giang 25 123 CP41 An Giang 152 209 35 CP42 An Giang 111 131 45 CP43 Hậu Giang 900 31 60 CP44 Hậu Giang 220 550 35 CP45 Hậu Giang 80 300 CP46 Hậu Giang 34 76 1600 CP47 Hậu Giang 740 71 1095 CP48 Hậu Giang 52 73 195 mẫu 25 [...]... en ao An Giang 0 25 125 CP43B cá rô phi en ao An Giang 0 14 70 CP43C cá rô phi en ao An Giang 10 25 123 CP44A cá chép ao H u Giang 80 0 0 Cp44B cá chép ao H u Giang 193 2 10 CP44C cá chép ao H u Giang 40 1 3 CP45A cá rô ao H u Giang 5 3 16 Cp45B cá rô ao H u Giang 136 12 61 CP45C cá rô ao H u Giang 45 3 16 CP45D cá hư ng ao H u Giang 5 0 0 CP45E cá hư ng ao H u Giang 9 0 0 CP45F cá hư ng ao H u Giang. .. Giang 0 0 0 CP46A cá tra ao H u Giang 5 1 3 CP46B cá tra ao H u Giang 3 8 38 CP46C cá tra ao H u Giang 0 0 1 CP47A cá tra ao H u Giang 10 3 15 CP47B cá tra ao H u Giang 0 0 0 CP47c cá tra ao H u Giang 0 0 0 CP48A cá hư ng ao H u Giang 46 1 4 CP48B cá hư ng ao H u Giang 77 1 4 CP48C cá hư ng ao H u Giang 69 1 4 24 B ng 5.2 m t vi khu n E, coli, Coliforms và Listeria trong môi trư ng nư c ao nuôi (CFU/ml)... coli trong cơ cá An Giang (14±21 CFU/g) cũng th p hơn m t vi khu n E coli trong cơ cá H u Giang (67±92 CFU/g); m t vi khu n Coliforms trong môi trư ng nư c An Giang (243±359 CFU/g) cao hơn m t vi khu n Coliforms trong môi trư ng nư c H u Giang (184±204 CFU/g) nên m t vi khu n Coliforms trong cá An Giang cũng (228±321 CFU/g) cao hơn m t vi khu n trong cá H u Giang (180±240 CFU/g); i v i m t vi khu n Listeria. .. M t vi khu n E coli, Coliforms và Listeria trong cá bi n ng theo m t vi khu n có trong môi trư ng nư c ao nuôi C n qu n lí t t môi trư ng ao nuôi (khâu c i t o ao, di t khu n, ngu n c p nư c, qu n lí nư c trong quá trình nuôi) h n ch vi khu n trong nư c nhi m vào th t cá B ng 4.4 M t vi khu n E coli, Coliforms, Listeria trong môi trư ng nư c nuôi và trong cơ cá ao nuôi (CFU/ml): Nghi m th c An Giang. .. CP39A cá rô ch C n Thơ 6 5 24 CP39B cá rô ch C n Thơ 23 5 27 CP39C cá rô ch C n Thơ 140 19 97 CP40A cá chép ch C n Thơ 3 5 25 CP40B cá chép ch C n Thơ 66 5 25 CP40C cá chép ch C n Thơ 17 0 0 CP41A cá tra ao An Giang 14 0 0 CP41B cá tra ao An Giang 0 0 0 CP41C cá tra ao An Giang 14 0 0 CP42A cá lóc ao An Giang 4 55 274 Cp42B cá lóc ao An Giang 0 100 502 Cp42C cá lóc ao An Giang 0 33 165 23 CP43A cá rô... n trong cơ cá th p hơn m t vi khu n có trong môi trư ng nư c ao nuôi, riêng m t vi khuân Listeria trong cá ao An Giang (353±448 CFU/ml) cao hơn m t vi khu n có trong môi trư ng nư c ao nuôi (86±90 CFU/ml) có th do trong quá trình v n chuy n cá b nhi m thêm vi khu n M t vi khu n E coli trong môi trư ng nư c An 17 Giang (271±228 CFU/g) th p hơn trong môi trư ng nư c H u Giang (338±383 CFU/g) nên m t vi. .. do cá da trơn có ti t ch t nh n vi khu n khó bám và nhi m vào cá Vi khu n s nhi m trong quá trình v n chuy n và nơi buôn bán n u nơi bán không ư c h p v sinh Nên m t vi khu n trong các loài cá bán trong siêu th s tương i th p hơn trong các loài cá bán các ch 4.2 Kh o sát m t vi khu n E coli, Coliforms, Listeria gi a môi trư ng nư c ao nuôi và trong cơ cá nuôi trong ao: Qua B ng 4.4 cho th y m t vi. .. nuôi (CFU/ml) M t voi khu n a i m thu m u E,coli Coliforms Listeria CP37 An Giang 240 960 80 CP38 An Giang 590 22 85 CP39 An Giang 510 15 260 CP40 An Giang 25 123 9 CP41 An Giang 152 209 35 CP42 An Giang 111 131 45 CP43 H u Giang 900 31 60 CP44 H u Giang 220 550 35 CP45 H u Giang 80 300 0 CP46 H u Giang 34 76 1600 CP47 H u Giang 740 71 1095 CP48 H u Giang 52 73 195 m u 25 ... khu n Listeria trong các loài cá khác nhau (CFU/g): cá rô ng cá tra cá lóc cá iêu h ng Big C 3±3 7±4 8±7 28±27 Cái Kh 29±13 16±9 58±44 66±20 Tân An 26±15 23±13 38±14 63±32 C n Thơ 10±8 0±1 314±172 các i m thu m u An Giang H u Giang cá chép cá hư ng 17±14 0±0 31±26 cá rô phi 106±31 5±9 4±5 4±0 Nhìn chung m t vi khu n E coli, Coliforms và Listeria trong loài cá da trơn th p hơn trong các loài cá có v... gi a các loài các t i cùng m t i m thu m u - So sánh m t vi khu n gi a các i m thu m u trên cùng loài cá - So sánh m t vi khu n có trong cơ cá nuôi trong ao và m t trong môi trư ng ao nuôi vi khu n có 3.6 Phương pháp x lý s li u Các s li u ư c tính toán giá tr trung bình, 14 l ch chu n b ng Excel CHƯƠNG 4 K T QU VÀ TH O LU N 4.1 Kh o sát m t vi khu n E coli, Coliforms, Listeria trong các loài cá các . viêm màng não ở trẻ sơ sinh) và phần lớn các vụ tiêu chảy là do E. coli (James, 19 97) . - Escherichia coli O1 57: H7 có thể gây ra một loạt bệnh truyền nhiễm như tiêu chảy từ nhẹ tới cấp tính hoặc. tính nuôi cấy Vi khuẩn có thể phát triển trong điều kiệm yếm khí. Nhiệt độ thích hợp 30- 37 o C, pH 7, 2 -7, 4 phát triển trên môi trường nhưng thường sử dụng môi trường thạch máu trong điều kiện. nuôi và trong cơ cá nuôi trong ao: 17 CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ SUẤT 19 5.1 Kết luận 19 5.2 Đề suất 19 TÀI LIỆU THAM KHẢO 20 PHỤ LỤC A: BẢNG MẬT ĐỘ VI KHUẨN 22 1 CHƯƠNG 1 ĐẶT