BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN NGUYỄN THỊ NGỌC HÀ NGHIÊN CỨU HẠT NANO CHITOSAN LÀM TÁ CHẤT CHO VACXIN CÚM A/H1N1 VÀ THỬ NGHIỆM ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Swiss) LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC BUÔN MA THUỘT, NĂM 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN NGUYỄN THỊ NGỌC HÀ NGHIÊN CỨU HẠT NANO CHITOSAN LÀM TÁ CHẤT CHO VACXIN CÚM A/H1N1 VÀ THỬ NGHIỆM ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Swiss) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số : 604230 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS TS. Lê Văn Hiệp PGS TS. Nguyễn Anh Dũng BUÔN MA THUỘT, NĂM 2011 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa ñược ai công bố trong bất kỳ một công trình nào khác. Người cam ñoan Nguyễn Thị Ngọc Hà LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, tôi xin chân thành cảm ơn: GS.TS Lê Văn Hiệp – Viện Vacxin và Sinh phẩm Y tế Nha Trang, Người thầy trực tiếp hướng dẫn, dìu dắt, truyền ñạt kiến thức cho tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn tại Viện Vacxin Nha Trang. PGS.TS Nguyễn Anh Dũng - Trường Đại học Tây Nguyên, Người thầy trực tiếp hướng dẫn, dìu dắt, truyền ñạt kiến thức và ñóng góp nhiều ý kiến quý báu cho tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Lãnh ñạo Trường Đại học Tây Nguyên, tập thể các Thầy Cô giáo Phòng Đào tạo Sau ñại học, Khoa KHTN và CN. Các thầy Cô giáo ñã tận tâm giảng dạy, truyền thụ những kiến thức quý báu trong quá trình học tập. Các cán bộ nhân viên Phòng Nghiên cứu và Phòng Kiểm ñịnh Viện Vacxin Nha Trang. Lãnh ñạo và tập thể cán bộ giáo viên trường Trường THPT Trần Phú, TP Buôn Ma Thuột. Cuối cùng xin gửi những tình cảm thân thương tới gia ñình, bạn bè và ñồng nghiệp ñã giúp ñỡ và ñộng viên tôi hoàn thành luận văn này. Xin chân thành cảm ơn! CÁC CHỮ VIẾT TẮT APC : Antigen- presenting cell (Tế bào trình diện kháng nguyên) CS : Chitosan DNA : Deoxyribo nucleic Acid FCA : Freund’s complete adjuvant FIA : Freund’s incomplete adjuvant HA: : Haemagglutinin HAU : Haemagglutination Unit (Đơn vị kháng nguyên) HI test : Haemagglutination Inhibition test (Phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu) HIU : Haemagglutination Inhibition Unit (Đơn vị hiệu giá kháng thể kháng HA) IgG : Immunoglobulin IVAC : Viện Vacxin và Sinh phẩm Y tế Nha Trang kDa : Kilo Dalton KN : Kháng Nguyên MIC : Nồng ñộ ức chế tối thiểu RNA : Ribonucleic Acid TPP : Tripolyphosphate WHO : World Health Organization (Tổ chức Y tế thế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Protein của virus cúm 18 Bảng 3.1: Ảnh hưởng của khối lượng phân tử hạt nano CS ñến hiệu suất hấp phụ (LE) và khả năng hấp phụ (LC) kháng nguyên cúm A H1N1 43 Bảng 3.2: So sánh kết quả tăng trọng chuột ở các nhóm vacxin hấp phụ tá chất khác nhau (n=5) 46 Bảng 3.3: Ảnh hưởng của các loại tá chất khác nhau ñến tỷ lệ ñáp ứng miễn dịch trên chuột với vacxin cúm A/H1N1. 48 Bảng 3.4: Ảnh hưởng của các loại tá chất ñến hiệu giá kháng thể trung bình của chuột (n = 9) 50 Bảng 3.5: So sánh kết quả tăng trọng chuột ở các nhóm vacxin hấp phụ tá chất nano chiotsan có khối lượng phân tử khác nhau (n=5) 54 Bảng 3.6: Ảnh hưởng của khối lượng phân tử tá chất nano CS cho vacxin cúm A/H1N1 ñến tỉ lệ ñáp ứng miễn dịch trên chuột 56 Bảng 3.7. Ảnh hưởng của khối lượng phân tử tá chất nano CS của vacxin cúm A/H1N1 ñến hiệu giá kháng thể trung bình (HIU) 57 Bảng 3.8: So sánh kết quả tăng trọng chuột ở các nhóm vacxin hấp phụ tá chất nano CS có khối lượng phân tử khác nhau (n=5) 60 Bảng 3.9 ảnh hưởng của liều lượng vacxin cúm A/H1N1 khi sử dụng tá chất nano chitosan ñến ñáp ứng miễn dịch trên chuột 62 Bảng 3.10: ảnh hưởng của liều lượng vacxin cúm A/H1N1 khi sử dụng tá chất nano CS ñến ñáp ứng miễn dịch trên chuột 63 Bảng 3.11: Ảnh hưởng của thời gian bảo quản vacxin hấp phụ trên hạt nano CS ñến ñáp ứng miễn dịch trên chuột .66 Bảng 3.12: Kết quả kháng thể kháng HA trên chuột sau khi tiêm vacxin chứa tá chất nano CS ñược bảo quản trong khoảng thời gian khác nhau 67 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Công thức cấu tạo của nano chitosan 3 Hình 1.2: Sơ ñồ tạo hạt nano chitosan bằng phương pháp tạo gel ion. 7 Hình 1.3: Sơ ñồ tạo hạt nano chitosan bằng phương pháp kết tủa. 8 Hình 1.4: Sơ ñồ tạo hạt nano chitosan bằng phương pháp sấy phun. 9 Hình 1.5 : Sơ ñồ tạo hạt nano chitosan bằng phương pháp mixel ngược pha 10 Hình 1.6 : Cấu tạo của Virus cúm typ A 16 Hình 3.1: Ảnh hưởng của khối lượng phân tử hạt nano chitosan ñến hiệu suất hấp phụ (LE) kháng nguyên cúm A/H1N1 44 Hình 3.2: Ảnh hưởng của khối lượng phân tử hạt nano chitosan ñến khả năng hấp phụ (LC) kháng nguyên cúm A H1N1. 44 Hình 3.3: Tăng trọng chuột của các lô vacxin cúm A/H1N1 hấp phụ các loại tá chất khác nhau 47 Hình 3.4 : Tỉ lệ chuột có ñáp ứng miễn dịch của vacxin cúm A/H1N1 với tá chất nano chitosan và các tá chất khác. 49 Hình 3.5: Ảnh hưởng của các nhóm tá chất ñến hiệu giá kháng thể trung bình trên chuột nhắt. 51 Hình 3.6: Kết quả tăng trọng của chuột ở các nhóm vacxin có tá chất nao chitosan khác nhau. 55 Hình 3.7: Tỉ lệ chuột có ñáp ứng miễn dịch ñối với các nhóm vacxin sử dụng tá chất nano chitosan với khối lượng phân tử khác nhau 57 Hình 3.8: Hiệu giá kháng thể trung bình ở các nhóm vacxin sử dụng tá chất nano chitosan với khối lượng phân tử khác nhau 58 Hình 3.9: Tăng trọng trung bình của chuột ở các nhóm vacxin có hàm lượng kháng nguyên khác nhau 61 Hình 3.10: Tỉ lệ chuột có ñáp ứng miễn dịch ở các nhóm vacxin có hàm lượng kháng nguyên khác nhau 62 Hình 3.11: Hiệu giá kháng thể trung bình ở các nhóm vacxin có hàm lượng kháng nguyên khác nhau 64 Hình 3.12: Tỉ lệ chuột có ñáp ứng miễn dịch ở các nhóm vacxin có thời gian bảo quản sau hấp phụ khác nhau 66 Hình 3.13: Hiệu giá kháng thể trung bình ở các nhóm vacxin có thời gian bảo quản sau hấp phụ khác nhau 68 [...]... vacxin li u ơn nhưng ư c dùng cho vacxin a li u, hàm lư ng 25 g/li u Không s d ng kháng sinh và latex trong s n xu t vacxin cúm A H1N1 - Vacxin c a hãng GlaxoSmithKline: ây là vacxin ti u ph n li u ơn, ch ng A/ California/07/2009 (X-17 9A) c y trong tr ng gà có phôi Vacxin ch a 3.7 g HA và có kèm tá ch t AS03, m t lo i nhũ tương làm t h p ch t squalene, có tá dư c và thiomersal - Vacxin c a hãng Novartis:... trưng cho vùng B c M , gen PB2 và PA c a virus cúm gia c m và gen PB1 c a virus cúm ngư i Ngoài ra, virus m i H1N1 khác v c u trúc kháng nguyên - hemaglutinin H1 So sánh trình t Hemaglutinin c a các virus ó cho th y có s khác bi t trong s thay i c a 30 axit amin S khác bi t c a HA1 và cúm m a là s thay i c a 5 nucleotid và 4 axit amin Neuraminidase c a virus cúm A/ H1N1 ng nh t v i Neuraminidase c a virus... n, làm vector chuy n gen Xu t phát t th c t nghiên c u v i tên ó, chúng tôi s d ng h t nano chitosan làm i tư ng tài Nghiên c u h t nano chitosan làm tá ch t cho vacxin cúm A/ H1N1 và th nghi m áp ng mi n d ch trên chu t nh t tr ng (Mus musculus Swiss) ” M c tiêu c a tài 1 Nghiên c u nh hư ng c a kh i lư ng phân t h t nano chitosan n kh năng h p ph kháng nguyên cúm A/ H1N1 2 ánh giá tính an toàn và. .. : dung dich chitosan ư c h n h p v i TPP sau ó khu y t 10 – 60 phút s thu ư c h t nano chitosan Có th li tâm 15000 vòng/ phút trong 1 gi thu ư c h t nano chitosan nanoparticles Quan Gan (2005) nghiên c u t o h t chitosan nanoparticles trong TPP v i n ng chitosan khác nhau, kh i lư ng phân t chitosan khác nhau và t l chitosan/ TPP khác nhau K t qu cho th y kh i lư ng phân t và n ng chitosan càng l n... n vacxin (vaccine Composition Meeting) dành cho các nư c nam bán c u, virus dùng 2009 (m a ông s n xu t vacxin ư c s d ng cho m a cúm năm nam bán c u) g m nh ng ch ng sau: A/ California/7/2009 (H1N1) , A/ perth/16/2009 (H3N2) và B/Brisbane/60/208 Do ó, vacxin cúm m a dành cho m a cúm năm 2010 nam bán c u s g m m t virus vacxin b t ngu n t ch ng virus cúm hoang d i H1N1 [16] * Quy trình s n xu t vacxin cúm. .. [23] Kapil Khatri (2007) nghiên c u s d ng h t nano chitosan làm tá ch t h p ph Plasmid DNA gây mi n d ch theo ư ng niêm m c mũi ch ng l i viêm gan siêu vi B K t qu cho th y vacxin pDNA h p ph h t nano chitosan ư c b o v ch ng l i s phân h y c a nuclease và tăng hi u qu truy n nhi m c a nó 15 Huy t thanh kháng HbsAg và kháng th IgA trong các nhóm chu t s d ng vacxin có tá ch t h t nano chitosan cao hơn... virus cúm l n dòng châu Âu và dòng châu Á Ngoài ra virus cúm A/ H1N1 ch a Neuraminidase c a virus H1N1 dòng B c M NA c a hai dòng virus H1N1 này khác nhau v s phân ly và ch a 77 s thay Các nhà khoa h c ti n hành nghiên c u gây c ch Neuraminidase Hai lo i virus i axit amin nh y c a virus u tiên có i v i các ch t nh y cao i v i các ch t gây c ch Neuraminidase như Ozeltamivir và Relenza C gen NA và gen... khi nh t l n nh c hai, lô thí nghi m kháng nguyên cúm là r t tá ch t chitosan là 103 l n ch ng th i ch ng antigen là 102 và tá ch t chitosan là 105 [18] Ana Vila (2004) nghiên c u s d ng h t nano chitosan làm tá ch t cho vacxin u n ván qua niêm m c mũi Kích thư c h t nano là 350 nm, i n tích là +40mV, có hi u su t mang vacxin là 50-60% Kháng th IgG thí nghi m s d ng h t nano chitosan cao g p 5 l n so... tiêu s n xu t vacxin an toàn hơn và i trà hơn 1.4.4.2 Vacxin cúm m a * Ch ng s n xu t H u h t các vacxin cúm s d ng trên th gi i hi n nay u là vacxin ba thành ph n g m hai ch ng cúm A (H1N1 và H3N2) và m t ch ng cúm B Hàng năm, d a trên xu hư ng thay truy n và i c a các ch ng virus cùng các d li u v di t bi n, WHO d báo nguy cơ xu t hi n b nh cúm và khuy n cáo ch ng dùng cho s n xu t vacxin * Li u kháng... ván t do sau 2 tu n, tăng g p 15 l n sau 12 tu n và 25 l n sau 24 tu n Kháng th hi u thí nghi m s d ng h t nano chitosan cao hơn so v i c i ch ng g p 2.5 l n và tăng lên theo th i gian t 2-24 tu n [34] Maryan Amadi (2007) nghiên c u s d ng Trimethyl h t nano chitosan làm tá ch t cho vacxin cúm A/ H3N2 K t qu là các ch s mi n d ch HI, IgG thí nghi m Trimethyl h t nano chitosanlà 103 và 105 cao hơn kháng . nghiên cứu với tên ñề tài Nghiên cứu hạt nano chitosan làm tá chất cho vacxin cúm A/ H1N1 và thử nghiệm ñáp ứng miễn dịch trên chuột nhắt trắng (Mus musculus Swiss) ” Mục tiêu c a ñề tài 1. Nghiên. NGHIÊN CỨU HẠT NANO CHITOSAN LÀM TÁ CHẤT CHO VACXIN CÚM A/ H1N1 VÀ THỬ NGHIỆM ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Swiss) Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN NGUYỄN THỊ NGỌC HÀ NGHIÊN CỨU HẠT NANO CHITOSAN LÀM TÁ CHẤT CHO VACXIN CÚM A/ H1N1 VÀ THỬ NGHIỆM ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG