TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƢỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA, KHÁNG NẤM VÀ KHÁNG KHUẨN CỦA HỢP CHẤT POLYPHENOL TRÍCH TỪ QUẢ LỰU Ngƣời hƣớng dẫn: TS HUỲNH THỊ BẠCH YẾN Ngƣời thực hiện: LÊ VIỆT DŨNG Lớp: 08SH1D Khóa: 12 TP Hồ Chí Minh, năm 2013 i TỔNG LIÊN ĐỒN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƢỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA, KHÁNG NẤM VÀ KHÁNG KHUẨN CỦA HỢP CHẤT POLYPHENOL TRÍCH TỪ QUẢ LỰU Ngƣời hƣớng dẫn: TS HUỲNH THỊ BẠCH YẾN Ngƣời thực hiện: LÊ VIỆT DŨNG Lớp: 08SH1D Khóa: 12 TP Hồ Chí Minh, năm 2013 ii LỜI CẢM ƠN Chúng xin chân thành cảm ơn: * Ban Giám hiệu trƣờng Đại Học Tôn Đức Thắng, Ban chủ nhiệm Khoa Khoa học ứng dụng Bộ Môn Công nghệ Sinh học, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình học trƣờng * TS Huỳnh Thị Bạch Yến hết lòng hƣớng dẫn, giúp đỡ để luận văn đƣợc hoàn thành * Ba mẹ ln bên, khuyến khích, động viên tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành đề tài * Tôi vô cảm ơn thầy phịng thí nghiệm Cơng Nghệ Sinh Học, Cơng Nghệ Hóa Học, trƣờng Đại Học Tơn Đức Thắng nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài * Xin chân thành cảm ơn bạn gần gũi giúp đỡ q trình thực hồn thành luận văn * Cuối xin cảm ơn tất ngƣời giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực tốt đề tài Sinh viên thực Lê Việt Dũng iii LỜI CAM ĐOAN “Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Tơi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm chấp nhận hình thức xử lý Nhà trƣờng vi phạm Luật sở hữu trí tuệ Quyền tác giả” Lê Việt Dũng iv MỤC LỤC TRANG Trang bìa phụ i Lời cảm ơn ii Lời cam đoan iii Mục lục iv Lời mở đầu ix Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt xi Danh mục bảng, biểu đồ xiii Danh mục hình vẽ, đồ thị xv CHƢƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Nhiệm vụ CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lƣợc Lựu 2.1.1 Tên gọi 2.1.2 Đặc điểm hình thái Lựu 2.1.3 Nguồn gốc Lựu 2.1.4 Đặc điểm trồng trọt đặc điểm giống Lựu 2.1.4.1 Đặc điểm trồng trọt 2.1.4.2 Đặc điểm giống Lựu 2.1.5 Phân bố Lựu giới Việt Nam 2.1.6 Thành phần hóa học Lựu 2.1.6.1 Vỏ rễ, vỏ thân cành 2.1.6.2 Quả Lựu 2.1.6.3 Hạt Lựu 2.1.6.4 Lá Lựu 2.1.6.5 Dịch v 2.1.6.6 Các thành phần khác 2.2 Hợp chất polyphenol Lựu 2.2.1 Phân loại hợp chất phenol 2.2.2 Hợp chất polyphenol Lựu 10 2.3 Sự trao đổi chất hợp chất ellagitannins từ Lựu 12 2.4 Tác dụng sinh học ứng dụng polyphenol Lựu 14 2.4.1 Tác dụng sinh học hợp chất polyphenol Lựu 14 2.4.1.1 Tác dụng chống oxy hóa 14 2.4.1.2 Tác dụng kháng nấm vi khuẩn 14 2.4.1.3 Tác dụng chống ung thƣ 16 2.4.1.4 Tác dụng khác hợp chất polyphenol Lựu 17 2.4.2 Ứng dụng polyphenol Lựu dƣợc phẩm, mỹ phẩm thực phẩm 17 2.4.2.1 Trong dƣợc phẩm 17 2.4.2.2 Trong mỹ phẩm 18 2.4.2.3 Trong thực phẩm 19 2.5 Tình hình nghiên cứu sản xuất hợp chất polyphenol từ Lựu 19 2.6 Phƣơng pháp trích ly, tinh polyphenol từ Lựu 20 2.6.1 Các yếu tố ảnh hƣởng tới trích ly polyphenol từ Lựu 20 2.6.2 Phƣơng pháp trích ly, tinh polyphenol từ Lựu 21 2.7 Giới thiệu nấm, vi khuẩn sử dụng nghiên cứu 22 2.7.1 Phân loại đặc điểm sinh học nấm Aspergillus niger (A niger) 22 2.7.1.1 Phân loại khoa học 22 2.7.1.2 Đặc điểm sinh học 23 2.7.2 Phân loại đặc điểm sinh học vi khuẩn Escherichia coli (E coli) 23 2.7.2.1 Phân loại khoa học 23 2.7.2.2 Đặc điểm sinh học 24 2.7.3 Phân loại đặc điểm sinh học vi khuẩn Staphylococus aureus (S aureus) 24 vi 2.7.3.1 Phân loại khoa học 24 2.7.3.2 Đặc điểm sinh học 25 2.8 Một số nghiên cứu liên quan đến đề tài 26 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 28 3.1 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 28 3.2 Nội dung thí nghiệm 28 3.3 Vật liệu thí nghiệm 28 3.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 28 3.3.2 Trang thiết bị thí nghiệm 29 3.3.3 Hóa chất, dung mơi mơi trƣờng thí nghiệm 29 3.4 Phƣơng pháp thí nghiệm 30 3.4.1 Sơ đồ tiến hành thí nghiệm 30 3.4.2 Phƣơng pháp trích ly, tinh chế polyphenol 30 3.4.2.1 Sơ đồ trích ly thu nhận cao polyphenol 30 3.4.2.2 Thuyết minh sơ đồ trích ly thu nhận cao polyphenol 32 3.4.3 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến q trình trích ly, tinh polyphenol từ Lựu 34 3.4.3.1 Khảo sát q trình trích ly 34 3.4.3.2 Khảo sát trình xử lý chloroform 36 3.4.3.3 Khảo sát trình tinh ethyl acetate 37 3.4.4 Các phƣơng pháp phân tích 39 3.4.4.1 Định lƣợng polyphenol tổng theo phƣơng pháp Folin – Ciocalteau 39 3.4.4.2 Xác định hoạt tính chống oxy hóa – khả quét gốc tự (2,2) – diphenyl – – picrylhydrazyl (DPPH) 40 3.4.4.3 Xác định tổng hàm lƣợng polyphenol ngun liệu cơng thức tính hiệu suất 41 3.4.5 Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cao polyphenol trích từ Lựu bổ sung vào dầu đậu nành 43 3.4.5.1 Bố trí thí nghiệm 43 vii 3.4.5.2 Phƣơng pháp đánh giá 43 3.4.6 Khảo sát khả kháng nấm, kháng khuẩn cao polyphenol 45 3.4.6.1 Khảo sát khả kháng nấm Aspergillus niger cao polyphenol 45 3.4.6.2 Khảo sát khả kháng Escherichia coli Staphylococcus aureus cao polyphenol 46 3.5 Xử lý số liệu 48 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 49 4.1 Kết khảo sát độ ẩm vỏ hạt Lựu 49 4.2 Xây dựng đƣờng chuẩn acid gallic theo phƣơng pháp Folin - Ciocalteau 49 4.3 Kết q trình trích ly polyphenol từ Lựu 50 4.3.1 Kết khảo sát dung mơi thích hợp 50 4.3.2 Kết khảo sát ảnh hƣởng nồng độ dung mơi trích ly 51 4.3.3 Kết khảo sát ảnh hƣởng pH trích ly 53 4.3.4 Kết khảo sát tỉ lệ nguyên liệu:methanol (g:ml) 54 4.3.5 Kết khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ trích ly 55 4.3.6 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian trích ly 57 4.3.7 Kết khảo sát hiệu suất trích ly 58 4.4 Kết khảo sát trình xử lý cao chiết chloroform 59 4.4.1 Kết khảo sát ảnh hƣởng tỉ lệ cao chiết:chloroform 60 4.4.2 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian xử lý cao chiết 61 4.5 Kết khảo sát trình tinh cao chiết ethyl acetate 62 4.5.1 Kết khảo sát ảnh hƣởng tỉ lệ cao chiết:ethyl acetate 62 4.5.2 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian tinh 63 4.5.3 Kết khảo sát hiệu suất trình tinh cao chiết 65 4.5.4 Kết luận trình thu nhận cao polyphenol tinh khiết, độ tinh khiết cao polyphenol 66 4.5.4.1 Kết luận trình thu nhận cao polyphenol tinh khiết 66 4.5.4.2 Kết xác định độ tinh khiết cao polyphenol 67 viii 4.6 Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cao polyphenol bổ sung vào dầu đậu nành 68 4.6.1 Kết số peroxide dầu đậu nành sau 4, 8, 12, 16 ngày bảo quản 68 4.6.2 Đánh giá kết số peroxide dầu đậu nành sau 4, 8, 12, 16 ngày bảo quản 69 4.7 Kết khảo sát khả kháng nấm, kháng khuẩn cao polyphenol 70 4.7.1 Kết khảo sát khả kháng nấm Aspergillus niger cao polyphenol 70 4.7.2 Kết khảo sát khả kháng Escherichia coli Staphylococcus aureus cao polyphenol 73 4.7.2.1 Kết thử tính kháng Escherichia coli Staphylococcus aureus cao polyphenol 73 4.7.2.2 Kết nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao polyphenol 74 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 75 5.1 Kết luận 75 5.2 Đề nghị 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 ix LỜI MỞ ĐẦU SV LÊ VIỆT DŨNG, Trƣờng Đại Học Tôn Đức Thắng, tháng 12/2012 Đề tài: “Nghiên cứu khả chống oxy hóa, kháng nấm kháng khuẩn hợp chất polyphenol trích từ Lựu” Giảng viên hƣớng dẫn: TS Huỳnh Thị Bạch Yến Hợp chất polyphenol diện nhiều Lựu, có tác dụng thiết yếu sức khỏe Trong đề tài này, tiến hành khảo sát chiết tách, tinh hợp chất polyphenol từ Lựu, xác định điều kiện tối ƣu về: dung mơi thích hợp, nồng độ dung mơi, tỉ lệ ngun liệu:dung môi, pH môi trƣờng, nhiệt độ, thời gian để thu đƣợc hợp chất polyphenol có hàm lƣợng hoạt tính chống oxy hóa cao, độ tinh khiết cao polyphenol thích hợp Ứng dụng đánh giá khả chống peroxide hóa dầu đậu nành, khả kháng nấm kháng khuẩn chúng Kết thí nghiệm thu đƣợc : - Methanol dung mơi trích ly thích hợp nhất, methanol 100%, pH 3,5; nhiệt độ 550C, tỉ lệ nguyên liệu:methanol (g:ml) 1:10 thời gian 90 phút thu hàm lƣợng hoạt tính chống oxy hóa hợp chất polyphenol cao Với lần trích ly thu hàm lƣợng polyphenol 55.392 mg/g chất khô đạt hiệu suất 88,73% - Xử lý cao chiết với tỉ lệ cao chiết:chloroform 1:1 thời gian 120 phút thu đƣợc hàm lƣợng 49,636 mg/2 ml cao chiết hoạt tính chống oxy hóa 68,95% Q trình tinh có tỉ lệ cao chiết:ethyl acetate :2 thời gian 120 phút thu đƣợc hàm lƣợng hoạt tính cao ổn định Với lần tinh sạch, hàm lƣợng polyphenol 18,095 mg/tổng thể tích ethyl acetate đạt hiệu suất 91,53% Thu đƣợc cao polyphenol có độ tính khiết cao 88,27% - Nồng độ cao polyphenol 50 mg/ml bổ sung vào dầu đậu nành có số peroxide thấp dầu đậu nành sau 4, 8, 12 ngày bảo quản 3,92 meq/kg dầu, 5,67 meq/kg dầu, 6,58 meq/kg dầu, so với mẫu đối chứng, chất bảo quản butylated 69 Bảng kết 4.16 cho thấy tất số peroxide khảo sát so với mẫu đối chứng (ĐC) điều thấp Chỉ số peroxide mẫu ĐC biến đổi nhiều tăng nhanh Thử nghiệm cao polyphenol (PP) với nồng độ tăng dần số peroxide giảm dần Ngoài ra, so với chất bảo quản BHT (Butylated hydroxytoluen), acid citric hoạt tính cao PP cao, ổn định biểu số peroxide thu đƣợc 4, 8, 12 ngày bảo quản Sau 16 ngày bảo quản, hoạt tính kháng oxy hóa cao PP giảm nhiều với số peroxide tăng lên khoảng 1,2 meq/kg dầu, cho thấy hoạt tính cao PP thời gian bảo quản dài có biến đổi phần So với BHT, acid citric hoạt tính chống oxy hóa cao PP thấp hơn, thiếu ổn định 4.6.2 Đánh giá kết số peroxide dầu đậu nành sau 4, 8, 12, 16 ngày bảo quản 16 ĐC PP 10 mg/ml 14 PP 20 mg/ml PP 30 mg/ml P (meq/kg dầu) 12 PP 40 mg/ml PP 50 mg/ml 10 BHT 10 mg/ml BHT 20 mg/ml BHT 30 mg/ml BHT 40 mg/ml BHT 50 mg/ml AA 10 mg/ml AA 20 mg/ml AA 30 mg/ml AA 40 mg/ml AA 50 mg/ml 0 10 15 20 Ngày Đồ thị 4.2 Đánh giá kết số peroxide dầu đậu nành sau 4, 8, 12, 16 ngày bảo quản Nhƣ xu hƣớng chung, hoạt tính chống oxy hóa tăng lên tăng nồng độ chất thử bổ sung, qua việc giảm số peroxide Điều hoàn toàn phù hợp với kết nghiên cứu Azizi M H (2007), nghiên cứu sử dụng dịch chiết thô nghiên cứu, số peroxide 12 ngày bảo quản 600C có giá trị 15 meq/kg dầu 70 Tồn mẫu dầu có bổ sung cao polyphenol (PP) nồng độ 10 – 50 mg/ml giúp ổn định dầu nhiệt độ 600C mẫu đối chứng, việc đánh giá số peroxide Ảnh hƣởng chống oxy hóa cao PP cao tăng nồng độ, với nồng độ 50 mg/ml có hoạt tính chống oxy hóa cao khác biệt có ý nghĩa thống kê (P 1,5 mg/ml E coli, MIC > 10 mg/ml S aureus - Sau 16 ngày bảo quản số peroxide dầu có bổ sung cao PP, chất bảo quản butylated hydroxytoluen (BHT), acid citric nồng độ khác điều có giá trị thấp mẫu đối chứng - Hoạt tính chống oxy hóa cao PP, chất bảo quản BHT acid citric điều có nồng độ cao 50 mg/ml 5.2 Đề nghị Trong thời gian ngắn làm luận văn tốt nghiệp này, kết thu đƣợc kết bƣớc đầu Xin đề nghị tiếp tục nghiên cứu sâu hợp chất polyphenol (PP) với nội dung sau: 76 - Khảo sát khả chiết xuất hợp chất PP từ Lựu nhiều loại dung môi khác nhƣ acetone, buthanol, - Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng khoảng điều kiện rộng - Sử dụng kết hợp dung mơi với sóng siêu âm, vi sóng để chiết xuất PP Ứng dụng phƣơng pháp, kĩ thuật đại nhƣ sử dụng phƣơng pháp tinh nhƣ sắc ký mỏng hay sắc ký cột để thu hợp chất PP - Xác định thành phần chất hợp chất PP phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) - Thử nghiệm khả kháng nấm kháng khuẩn chủng nấm, vi khuẩn bệnh khác - Thử nghiệm cao PP thực tế - Ứng dụng cao PP tinh thực phẩm, mỹ phẩm, y học 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Thị Lan Anh, Lê Tự Hải, Lƣu Vũ Diễm Hằng(2011), “Chiết tách xác định thành phần hóa học hợp chất polyphenol nhóm tannin từ vỏ keo Tràm”, tạp chí khoa học cơng nghệ 3: 142 – 149 Nguyễn Hoàng Chinh, Nguyễn Văn Phong, Phạm Minh Tân(2010), Khảo sát tính kháng nấm kháng khuẩn dịch chiết từ vỏ trái chi Citrus lên số tác nhân gây bệnh người trồng, đề tài nghiên cứu khoa học Trƣờng Đại Học Tơn Đức Thắng, Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty(2008), Vi sinh vật học, NXB Giáo Dục Đinh Văn Điện, Nguyễn Thị Bích Hạnh, Trần Trọng Loan(2009), Nghiên cứu q trình trích ly polyphenol chè xanh vụn ứng dụng thực phẩm chức năng, đồ án tốt nghiệp, trƣờng Đại Học Bách Khoa Hà Nội Phạm Lê Mỹ Hạnh(2012), Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn số gia vị, luận văn tốt nghiệp Trƣờng Đại Học Tôn Đức Thắng, Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Văn Mùi(2007), Thực hành hóa sinh học, NXB Đại Học Quốc Gia Hà Nội, tái lần Nguyễn Kim Phi Phụng(2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại Học Quốc Gia thành phố Hồ Chí Minh, ĐH Khoa học tự nhiên 78 Nguyễn Xuân Phƣớc, Nguyễn Xn Trình(2009), Nghiên cứu trích ly polyphenol từ Sake ứng dụng tạo sản phẩm đồ uống giàu polyphenol, khóa luận Kỹ sƣ Cơng nghệ thực phẩm, Đại Học Cơng Nghệ Sài Gịn Trần Linh Thƣớc(2010), Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm, NXB Giáo Dục TIẾNG ANH 10 Agli D M., Bassilico N., Bhattacharya D., Bosisio E., Bulgari M., Galli V G., Romeo S., and Taramelli D.,(2010), “Ellagitannins of the fruit rind of pomegranate (Punica granatum) antagonize in vitro the host inflammatory response mechanisms involved in the onset of malaria”, Dell’Agli et al Malaria Journal 2010: p.1-9 11 Aparajita M., Arjun L., and Nidhl V.,(2010), “Pomegranate Genetic Resource and Germplasm Conversation: A Review”, Fruit, Vegetable and Cereal Science and Biotechnology 4: p.120-125 12 Ayyanar M., Duraipandiyan V., and Ignacimuthu S.,(2006), “Antimicrobial activity of some ethnomedicinal plants used by Paliyar tribe from Tamil Nadu, India”, BMC Complementary and Altermative Medicine: p.1-7 13 Azizi M H., Barzegar M., Sahari M A., and Yasoubi P.,(2007), “Total phenolic contents and antioxidant activity of pomegranate (Punica granatum L.) peel extracts”, J Agric Sci Technol 9: p.35 – 42 14 Bharadwaj R., Devatkal K S., Jaiswal P., Jha N S., Viswas N K.,(2011), “Antibacterial activity of aquerous extract of pomegranate peel against Pseudomonas stutzeri isolated from poultry meat”, Association of Food Scientists and Technologists: p1 – 79 15 Brunet C J., Nicolíc L., Nikolíc V., Ristíc D., Stanojevíc L., Stankovíc M., and Tumbas V.,(2009), “Antioxidant Activity and Total Phenolic and Flavonoid Contents of Hieracium pilosella L Extracts”, Sensors 9: p.5702 – 5714 16 Deepa VM., Mahalakshmi S., Rajan S., Sathya K., Shajitha S., and Thirunalasundari T.,(2011), “Antioxidant potentials of Punica granatum fruit rind extracts”, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences 3, issue 3: p.82 – 88 17 During A., Hollebeeck S., Larondelle Y., and Schneider Y J.,(2012), “The Use of Pomegranate (Punica granatum L.) Phenolic Compounds as Potential Natural Prevention Against IBDs”, Intech: p.276 – 300 18 Elfalleh W., Ferchichi A., Hannachi H., Nasri N., Tlili N., and Yahia Y.,(2012), “Total phenolic contents and antioxidant activities of pomegranate peel, seed, leaf and flower”, Journal of Medicinal Plants Research 6: p.4724 – 4730 19 Ferguson L., and Glozer K.,(2008), “Pomegrante Production in Afghanistan”, College of Agricultural  Enviromental Sciences, 31 20 Fielder D M., Gould WJ S., Kelly F A., and Naughton P D.,(2009), “Antimicrobial activities of pomegranate rind extracts: enhancement by cupric sulphate against clinical isolates of S aureus, MRSA and PVL positive CA-MSSA”, BMC Complementary and Alternative Medicine: p.1 – 21 Field D M., Gould WJ S., Kelly F A., McCarrell M E., Naughton P D., and Sankary El W.,(2008), “Antimicrobial activities of pomegranate rind extracts: 80 enhancement by addition of mental salts and vitamin C”, BMC Complementary and Alternative Medicine: p.1 – 22 Gupta K., Haqqi M T., Khan A K., Rasheed Z., and Shukla M.,(2008), “Bioavailable constituent/metabolites of pomegranate (Punica granatum L.) preferentitally inhirit COX2 activity ex vivo and IL-I beta-induces PGE2 production in human chrondrocyte in vitro”, Journal of Inflammation 2008: p.1 – 10 23 Hajimahmoodi M., Jannat B., Oveisi M R., Photovat M., and Sadeghi N.,(2009), “Antioxidant Activity of Iranian Pomegranate (Punica granatum L.) Seed Extracts”, Just Agriculture Science Technology 11: p.633-638 24 Indrapichate K., Intarapichet K., and Manasathien J.,(2012), “Antioxidant Activity and Bioefficacy of Pomegranate (Punica granatum Linn.) Peel and Seed Extracts”, Global Journal of Pharmacology 6: p.131 – 141 25 Ismaeil S A., Sarmany O A., and Taha I M.,(2011), “Antifungal Activity of Pomegranate and Oak Galls Extracts Against Penicillium spp and Aspergillus niger”, Raf Jou Sci 22: p.1 – 10 26 Jalikop S H.,(2010), “Pomegranate Breeding”, Fruit, Vegetable and Cereal Science and Biotechnology 4: p.26-34 27 Jingjing L., Ke D., and Qipeng Y.,(2008), “Determination of punicalagin isomers in Pomegranate husk”, Cromatographia 60: p.303 – 306 28 Mercure W E., and Stover Ed.,(2007), “Pomegranate: A New Look at the Fruit of Paradise”, HortScience 42: p.1088 – 1091 81 TÀI LIỆU INTERNET 29 http://en.wikipedia.org/wiki/Pomegranate 30 http://www.azprod.az/en/section/3 31 http://www.phytochemicals.info/plants/pomegranate.php 32 http://www.foodreference.com/html/a-pomegranate-history.html 33 http://www.crfg.org/pubs/ff/pomegranate.html 34.http://www.duoclieu.org/2012/02/luu-punica-granatum-l-ho-luu-punicaceae.html 35.http://www.flickr.com/photos/phuonglovejesus2782010/sets/7215763110609806 4/ 36 http://www.docstoc.com/docs/75151156/Cay-luu 37 http://www.scribd.com/doc/92237755/Bacillius-Dieu-LTK1 38 http://en.wikipedia.org/wiki/DPPH 39.http://lib.hiast.edu.vn/tailieuvn/xem-tai-lieu/xac-dinh-chi-so-acid-peroxidetrong-dau-an.622337.html 40 http://www.vietlinh.vn/library/herbs/lt_luu.asp 41.http://www.phununet.com/Wikiphununet/ChiTietWiki.aspxm=0&StoreID=8655 82 42 http://inlook.vn/song-khoe/dinh-duong/tac-dung-tuyet-voi-tu-qua-luu 43.http://cctn.com.vn/index.php?option=com_content&view=article&id=129:nhung -loiich-cua-qua-luu-voi-suc-khoe&catid=59:dinh-duong-va-suc-khoe&Itemid=88 44 http://www.umm.edu/altmed/articles/pomegranate-002881.htm 45 http://www.mdidea.com/products/herbextract/pomegranate/research.html 46.http://www.made-in-china.com/showroom/kathyxiaocaokeji/offerdetailKeZEfLVTCIWB/Sell-Pomegranate-Peel-Extract-Powder-Ellagic-Acid-4090-.html 47.http://www.healthdeep.com/health_841291_pomegranate-extract-pomegranatepeel.html 48 http://www.azizsalon.com/peels 49.http://www.deadseadeal.com/Dead-Sea-Amour-Cosmetics-Shampoo-withPomegranate-Extract-for-all-hair-types.html 50.http://www.puritan.com/buy/products/976-puritans-pride-pomegranate-extract250-mg-120-capsules.html 51.http://hn.24h.com.vn/thi-truong-tieu-dung/suc-manh-mang-ten-trai-caypowerfruit-c52a306764.html 83 52.http://sell.bizrice.com/selling-leads/1077789/Vinsu-Organic-Sour PomegranateExtract-Pomegranate-Sauce-Sour-Pomegranate-Molassas-Nar-Eksili-SosMersin.html 53.http://www.amazon.com/Resveratrol-Advanced-Pomegranate-Quercetincombined/dp/B004WG4YM8 54 http://www.21food.com/products/pomegranate-seed-extract-86681.html 55 http://en.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli 56 http://textbookofbacteriology.net/e.coli.html 57.http://www.calibex.com/pomegranate-polyphenols/zzcalibex1zB1z0 searchhtml?nxtg=241b0a1c0507-99C2285034A8670E 58 http://www.mdidea.com/products/herbextract/pomegranate/data08.html 59 http://en.wikipedia.org/wiki/Aspergillus_niger 60 http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Aspergillus_niger 61 http://www.awl.ch/heilpflanzen/punica_granatum/index.htm ... vi khuẩn, dùng dung dịch để pha Mc.Farland: dung dịch H2SO4 1% (9,95 ml) dung dịch BaCl2 1% (0,05 ml) Dung dịch KI bão hòa, acid acetic đậm đặc, hồ tinh bột 1%, Na2S2O3 0.01N Dung môi: chloroform... 3.2 Nội dung thí nghiệm - Khảo sát dung mơi thích hợp cho q trình trích ly hợp chất polyphenol (PP) từ Lựu - Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng nhƣ nồng độ dung mơi, pH trích ly, tỉ lệ nguyên liệu :dung môi,... cần chiết xuất [3]:  Tinh dung môi: Dùng dung mơi có độ phân cực khác để tách phân đoạn Tùy thuộc vào độ phân cực hợp chất, chúng đƣợc hòa tan loại dung môi khác Một số dung môi thƣờng dùng: benzen,