VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Thời gian và địa điểm thực hiện
Thời gian thực hiện đề tài từ 15/7/2014 - 7/2015
Thực hiện tại phòng Công nghệ Sinh học Thực vật, trung tâm Công nghệ Sinh học Tp Hồ Chí Minh.
Đối tượng và vật liệu nghiên cứu
Lan Mokara Chao Praya Sunset
Mẫu protocorm like body (PLBs) của lan Mokara Chao Praya Sunset
Môi trường MS (Murashige và Skoog, 1962) có bổ sung các chất điều hòa sinh trưởng NAA và BA
Hệ thống Plantima sản xuất bởi công ty A-tech Bioscientific (Ðài Loan).
Thiết bị, dụng cụ và hóa chất
Thành phần cơ bản của môi trường MS
Chất điều hòa sinh trường NAA, BA
3.3.2 Trang thiết bị dụng cụ
Nồi hấp, pipet, ống đong, micro pipet…
Tủ cấy, dao cấy, đèn cồn…
Hệ thống TIS, hệ thống kệ và đèn chiếu sáng…
Phương pháp nghiên cứu
3.4.1 Điều kiện nuôi cấy và chỉ tiêu theo dõi
Cường độ chiếu sáng: 2500 ± 500 lux
Thời gian chiếu sáng 12 giờ/ngày Độ ẩm trung bình: 55 ± 5%
3.4.1.2 Các chỉ tiêu theo dõi
Trong quá trình thực hiện thí nghiệm tiến hành theo dõi và lấy kết quả theo các chỉ tiêu chung sau:
Số lượng chồi trung bình trên mỗi nghiệm thức
Kích thước và khối lượng của các cụm PLBs sau thời gian 8 tuần nuôi cấy
Tỉ lệ chết, trương nước, thủy tinh thể và phát sinh biến dị nếu có
Sau 8 tuần nuôi cấy, mẫu sẽ được đếm số chồi và cân khối lượng Tất cả chồi có từ 1-2 lá trở lên sẽ được ghi nhận kết quả Mẫu sẽ được cân và ghi lại khối lượng sau khi sử dụng giấy thấm để loại bỏ dung dịch môi trường bám trên bề mặt.
3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng của thể tích môi trường lên sự tái sinh chồi của lan
Mokara Chao Praya Sunset trong hệ thống ngập chìm tạm thời
Khảo sát ảnh hưởng của thể tích môi trường lên sự tái sinh của lan Mokara
Chao Praya Sunset được trồng trong hệ thống ngập chìm tạm thời với môi trường MS không sử dụng chất điều hòa sinh trưởng Thể tích môi trường dinh dưỡng dao động từ 100 ml đến 300 ml, được bố trí theo bảng 3.1 Chu kỳ ngập diễn ra trong 4 phút và có thời gian giãn cách là 7 giờ.
Thí nghiệm được thiết kế theo phương pháp đơn yếu tố hoàn toàn ngẫu nhiên, bao gồm 5 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần Mỗi lần lặp lại chứa 15 cụm PLBs, với khối lượng trung bình là 0,6 ± 0,1 g cho mỗi cụm.
Bảng 3.1 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của thể tích môi trường lên sự tái sinh chồi của lan Mokara Chao Praya Sunset
Nghiệm thức Môi trường Thể tích môi trường (ml)
3.4.3 Khảo sát ảnh hưởng của chu kỳ ngập chìm lên sự tái sinh chồi của lan
Mokara Chao Praya Sunset trong hệ thống ngập chìm tạm thời
Khảo sát tác động của thời gian và chu kỳ ngập chìm đến sự tái sinh của lan Mokara Chao Praya Sunset trong hệ thống ngập chìm tạm thời đã được thực hiện, sử dụng môi trường MS với thể tích tối ưu xác định từ thí nghiệm trước Chu kỳ ngập chìm được thiết lập theo bảng 3.2.
Thí nghiệm được thiết kế theo phương pháp đơn yếu tố hoàn toàn ngẫu nhiên, bao gồm 9 nghiệm thức và được lặp lại 3 lần cho mỗi nghiệm thức Mỗi lần lặp lại chứa 15 cụm PLBs, với khối lượng khoảng 0,6 ± 0,1 g cho mỗi cụm.
Bảng 3.2 trình bày các nghiệm thức thí nghiệm nhằm khảo sát ảnh hưởng của thời gian ngập chìm và chu kỳ ngập chìm đến sự tái sinh của lan Mokara Chao Praya Sunset Nghiên cứu này giúp xác định điều kiện tối ưu để cải thiện khả năng tái sinh của loại lan này.
Nghiệm thức Môi trường Chu kỳ ngập chìm
Thời gian giãn cách (giờ) Thời gian ngập (phút)
3.4.4 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ BA và NAA lên sự tái sinh chồi của lan
Mokara Chao Praya Sunset trong hệ thống ngập chìm tạm thời
Nghiên cứu đã khảo sát tác động của nồng độ BA và NAA đến khả năng tái sinh của lan Mokara Chao Praya Sunset trong hệ thống ngập chìm tạm thời Môi trường MS được bổ sung 0,1 mg/l NAA kết hợp với nồng độ BA thay đổi từ 0 đến 2,5 mg/l Kết quả cho thấy thể tích môi trường và chu kỳ ngập chìm thích hợp đã được xác định qua các thí nghiệm 1 và 2.
Thí nghiệm được thiết kế theo phương pháp đơn yếu tố với 6 nghiệm thức, bao gồm 1 nghiệm thức đối chứng Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 lần, với mỗi lần lặp chứa 15 cụm PLBs có khối lượng 0,6 ± 0,1 g cho mỗi cụm.
Bảng 3.3 Các nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của nồng độ chất điều hòa sinh trưởng lên sự tái sinh chồi của lan Mokara Chao Praya Sunset
Xử lý số liệu của chỉ tiêu theo dõi
Dữ liệu thu thập sẽ được xử lý bằng phần mềm Excel và phân tích thống kê thông qua phần mềm MSTATC, áp dụng phương pháp trắc nghiệm đơn yếu tố và trắc nghiệm phân hạng Ducan.
Nghiệm thức Môi trường Chất điều hòa sinh trưởng