Nguyên liêu
Tinh dầu quê (Oleum Cinnamomum)
Tinh dầu đinh hương (Syzygium aromaticum)
Thực phẩm nướng bao gồm nhiều loại bánh khác nhau, như bánh, bánh mì, bánh đậu xanh và bánh giòn ngón tay Bánh được làm từ bột (60%), trứng (15%), kem (10%), đường (8%) và sữa (5%) Bánh mì có thành phần gồm bột (50%), nước (10%), đường (10%), trứng (10%) và kem (5%) Bánh đậu xanh chủ yếu được làm từ bột (25%), đậu xanh (45%), đường (15%) và dầu đậu phộng (10%) Cuối cùng, bánh giòn ngón tay chứa bột (60%), nước (15%), đường (8%), trứng (5%) và kem (10%).
Tinh dầầ̀u quế (chứa 50 - 60% cinnamaldehyd và 4 - 7% eugenol) và tinh dầầ̀u đinh hương (chứa 70 - 80% eugenol là thành phầầ̀n chính)
Túi đóng gói bằng Polypropylen (PP)
Phương phap thưc hiên
Tách, tinh chế và xác địệ̣nh khuôn
Các khuẩn nấm mốc trên thực phẩm nướng được nuôi cấy trong môi trường thạch khoai tây ở điều kiện vô trùng 28°C trong 2 ngày Quá trình nuôi cấy được lặp lại khi cần thiết cho đến khi thu được mẫu thuần Sáu chủng nấm mốc, được đánh dấu từ A đến F, đã được thu thập và phân tích Đặc điểm địa lý của các chủng này được quan sát qua hai phương pháp nuôi cấy khác nhau: nuôi cấy tại chỗ và nuôi cấy trong buồng ẩm Ngoài ra, các đặc điểm của sợi nấm cũng được nghiên cứu dưới kính hiển vi.
Phân tích tác dụệ̣ng kìm khuẩn củủ̉a tinh dầầ̀u
Chuẩn bịệ̣ huyền phù vi khuẩn
Để thiết lập đường cong AX và phương trình hồi quy cho sáu chủng nấm mốc, huyền phù bào tử đơn tiêu chuẩn của chúng được chuẩn bị bằng cách pha loãng nối tiếp sau khi kích hoạt ở 28°C trong 48 giờ Độ hấp thụ (A) của các bào tử nấm mốc được xác định tại bước sóng 560nm bằng máy quang phổ UV, từ đó cho phép tính toán số lượng bào tử nấm mốc (X).
Mỗi ml của huyền phù bào tử tiêu chuẩn được xác định thông qua bảng đếm máu Giá trị độ hấp thu (A) có mối liên hệ tuyến tính với số lượng bào tử nấm mốc tương ứng.
Hệ số tương quan (R²) được tính toán từ các phương trình hồi quy cho thấy đường cong A-X có tính đáng kể Huyền phù vi khuẩn tiêu chuẩn của các loại vi khuẩn khác nhau được sử dụng làm đối chứng Các bào tử vi khuẩn được rửa bằng nước vô trùng, pha loãng và độ đục của chúng được so sánh trong điều kiện vô trùng Nồng độ huyền phù vi khuẩn được xác định dựa trên đường cong A-X và duy trì ở mức 105 CFU/mL Đo hoạt tính kìm khuẩn được thực hiện bằng phương pháp giấy lọc.
Tổng cộng 0,5 ml huyền phù vi khuẩn được tiêm đều lên bề mặt thạch PDA trong các đĩa chứa 15 mL PDA đã nấu chảy và làm lạnh đến 50°C, nhằm thu thập vi khuẩn trong môi trường thạch.
Thử nghiệệ̣m khuếch tán khí Thử nghiệệ̣m khuếch tán rắn Đo nồng độ ức chế tối thiểu và nồng độ gây chết tối thiểu
Hài lòng, tinh dầu được pha loãng theo tỷ lệ 50.000, 25.000, 12.500, 6.250, 3.125 và 1.562 àL/mL bằng phương pháp pha loãng hai lần Sau đó, 1 mL mỗi mẫu pha loãng được trộn với 14 mL môi trường nuôi cấy PDA và đổ vào đĩa Petri trong điều kiện vô trùng, với môi trường kiểm soát là PDA có 1 mL chất pha loãng Huyền phù khuôn đã chuẩn bị được cấy đều trên các tấm PDA và ủ ở 28°C trong 48 giờ Các xét nghiệm được thực hiện ba lần để quan sát sự tăng trưởng của chủng Nồng độ thấp nhất không có sự tăng trưởng được xác định là nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) Để xác định nồng độ gây chết tối thiểu (MLC), các tấm không có sự tăng trưởng được quan sát thêm trong 48 giờ nữa, và nồng độ thấp nhất không phát hiện sự phát triển được coi là MLC.
Bài viết này nghiên cứu việc bổ sung tinh dầu vào bao bì bánh đậu xanh và bánh finger citron crisp cake nhằm ức chế sự phát triển của nấm mốc mà không thay đổi kiểu đóng gói ban đầu Hai phương pháp được áp dụng là thả tinh dầu vào bề mặt bên trong bao bì và phun tinh dầu lên bề mặt bánh Lượng tinh dầu bổ sung được tính toán dựa trên giá trị MIC và thể tích không gian của bao bì, với lượng tinh dầu lần lượt là 7,2 àL và 8,4 àL cho hai loại bánh Đánh giá cảm quan được thực hiện bởi 12 sinh viên, cho thấy sự khác biệt đáng kể giữa các nhóm thử nghiệm và nhóm kiểm soát với mức ý nghĩa 1% Các nhóm thử nghiệm được gán nhãn A1 và A2, trong khi nhóm kiểm soát là B1 và B2 Nghiên cứu này cũng xem xét ảnh hưởng của các phương pháp đóng gói khác nhau đến thời hạn sử dụng của thực phẩm nướng.
Các loại tinh dầu đã được thêm vào gói bánh đậu xanh và bánh finger citron crisp cake để tăng cường hương vị Nghiên cứu kiểm tra sự lưu trữ của sản phẩm với các phương pháp đóng gói khác nhau, bao gồm gói thông thường và chân không, ở nhiệt độ 30°C Trong suốt 25 ngày, bề mặt thực phẩm nướng được theo dõi sự phát triển của nấm mốc, và thời hạn sử dụng được xác định dựa trên ngày xuất hiện các đốm mốc.
Hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu sả (Cymbopogon nardus) và thành phần chính của nó (geraniol) trên màng sinh học vi khuẩn Staphylococcus aureus (Pontes,
Nguyên liệu
Tên khoa họệ̣c: Cymbopogon nardus.
Lá củ của Cymbopogon nardus được thu thập vào tháng 4/2014 tại thành phố Carire, Ceara, Brazil Nguyên liệu thực vật này đã được xác định bởi Tiến sĩ Elnatan Benzerra de Souza và được ký gửi với số gia nhập 20807 cho Tiến sĩ Francisco Jose de Abreu Matos tại Herbarium của Đại học Bang Vale do Acarau, Sobral, CE, Brazil.
Phương pháp thực hiện
Tinh dầu của C nardus được chiết xuất bằng phương pháp thủy phân Cleavenger từ 320 g lá tươi Các lá được nghiền nát và cho vào bình đáy tròn 5 lít với 2 lít nước cất, sau đó đun sôi trong 2 giờ Trong quá trình này, hỗn hợp nước và dầu được tách ra nhờ sự chênh lệch mật độ Tinh dầu thu được được cân và bảo quản trong chai màu hổ phách có nhãn trong tủ lạnh Năng suất tinh dầu được tính bằng tỷ lệ phần trăm giữa khối lượng dầu chiết xuất và khối lượng lá trong bình, nhân với 100.
Thành phần hóa học của tinh dầu C nardus đã được phân tích tại Phòng thí nghiệm Hóa học tự nhiên thuộc Đại học Liên bang Nông thôn Rio de Janeiro, Seropédica, Rio de Janeiro Kết quả cho thấy geraniol là thành phần chính trong tinh dầu này.
Phân tích thành phầầ̀n củủ̉a tinh dầầ̀u:
Phân tích định tính thành phần hóa học của tinh dầu được thực hiện bằng GC-MS trên công cụ Shimadzu QP-2010 (Shimadzu, Kyoto, Nhật Bản) Các hợp chất được xác định thông qua việc phân tích mẫu mảnh hiển thị trong phổ khối, với sự nhận dạng được xác minh bằng cách so sánh với cơ sở dữ liệu và tỷ lệ lưu giữ (Kovat) của chúng với các hợp chất đã biết, thông qua việc tiêm hỗn hợp các tiêu chuẩn chứa một loạt ankan từ C8 đến C30, như đã được mô tả bởi Van Den Dol và Kratz.
Các chất được phân tích bao gồm tinh dầu của C nardus, với các thành phần chính là geraniol, chlorhexidine và imipenem, được sử dụng làm đối chứng tích cực.
Chủủ̉ng và điều kiệệ̣n nuôi cấy vi khuẩn:
Các chủủ̉ng đã đượệ̣c sử dụệ̣ng trong nghiên cứu này: S aureus ATCC
6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12.228, Enterococcus faecalis ATCC
4083, Streptococcus pyogenes ATCC 19.615, E coli ATCC 11303 và Pseudomonas aeruginosa ATCC 115442 Các chủủ̉ng đượệ̣c mua từ Việệ̣n Oswaldo Cruz -Fiocuz.
Tất cả các chủủ̉ng đượệ̣c bảo quản trong tủủ̉ lạệ̣nh ởủ̉ - 18 ° C trong môi trường sữa tách béo đượệ̣c làm giàu với glycerol.
Trong các thí nghiệm, 100 ml dung dịch gốc đã được tiêm vào môi trường TSA (môi trường thạch đậu nành trypticase) và được ủ ở nhiệt độ 37 °C trong nhà kính.
Sau 24 giờ, việc nuôi cấy đã được hồi sinh bằng cách bổ sung 100 μL chế phẩm vào 10 ml TSB và ủ trong 18 giờ trong điều kiện đã mô tả Trong các thử nghiệm hoạt động kháng khuẩn, các mẫu cấy được rửa bằng nước Mili-Rios và nồng độ của chúng được điều chỉnh thành 10^7 đến 10^8 CFU/mL, sử dụng đầu đo vi bản SpectraMax i3 ở 620nm.
Các hoạt động kháng khuẩn của hợp chất đã được kiểm tra thông qua xét nghiệm độ nhạy cảm với kháng sinh đối với vi khuẩn, sử dụng phương pháp khuếch tán agar và xét nghiệm vi lọc trong nước dùng Những xét nghiệm này nhằm xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) và nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC).
Kết quả
Năng suất củủ̉a tinh dầầ̀u C nardus thu đượệ̣c khi thủủ̉y phân là 1,33%.
Sau khi phân tích thành phần hóa học của tinh dầu C nardus, mười bảy thành phần đã được xác định, trong đó ba thành phần chính chiếm tỷ lệ cao nhất là monoterpenes geraniol (33,88%), citronellal (27,55%) và citronellol (14,40%) Kết quả này phù hợp với nghiên cứu của Hazwan et al, cho thấy geraniol chiếm 42,38% tinh dầu chiết xuất từ lá của cùng một loài cây.
Việc sử dụng tinh dầu EOCN C nardus và geraniol có khả năng kháng khuẩn, dẫn đến sự hình thành halos ức chế các vi khuẩn S aureus với đường kính màng sinh.
So sánh dữ liệu về khả năng ức chế hình thành của các chất từ 41 và 19 mm cho thấy rằng, trong điều trị EOCN, khả năng ức chế lớn hơn 16 mm so với điều trị bằng chlorhexidine.
Các halos ức chế khi vi khuẩn S cholermidis được thử nghiệm với EOCN và geraniol có kích thước lần lượt là 16 mm và 19 mm Kích thước của các nửa ức chế của geraniol và chlorhexidine gần tương đương, với kích thước là 19 mm và 18 mm Điều này cho thấy S cholermidis có phản ứng tương tự khi tiếp xúc với geraniol và chlorhexidine.
Halos ức chế đã được quan sát đối với vi khuẩn E faecalis và S pyogenes khi sử dụng EOCN, với kết quả tương tự như halos ức chế do chlorhexidine gây ra Tuy nhiên, EOCN không tạo ra halos ức chế đối với vi khuẩn P aeruginosa và E coli Khi được điều trị bằng geraniol, E coli xuất hiện quầng sáng 15 mm, gần bằng kích thước quầng do chlorhexidine tạo ra là 18 mm.
Nghiên cứu cho thấy nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của EOCN và geraniol đối với vi khuẩn S aureus lần lượt là 0,5 mg/ml và 0,25 mg/ml, cho thấy cả hai đều có khả năng kìm hãm sự phát triển của vi khuẩn Giá trị nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) cho S aureus là 4 mg/ml đối với EOCN và 2 mg/ml đối với geraniol, trong khi một nghiên cứu khác ghi nhận MBC của geraniol là 2,5 mg/ml Điều này cho thấy geraniol có tiềm năng cao trong việc ức chế sự hình thành màng sinh học của vi khuẩn Staphylococcus aureus.
Việệ̣c giảm sinh khối củủ̉a S aureus biofilm đều xảy ra trong cả hai phương pháp điều trịệ̣ EOCN và geraniol.
Việc sử dụng các loại tinh dầu và sản phẩm phụ của chúng đã trở thành một chiến lược chính để ngăn chặn sự hình thành và phát triển của màng sinh học Các chất được thử nghiệm, đặc biệt là EOCN và geraniol, cho thấy tiềm năng lớn trong việc ức chế sự hình thành màng sinh học của S aureus, một loại vi khuẩn gây ra nhiều vụ ngộ độc thực phẩm.
Geraniol là một monoterpene acyclic có mặt trong nhiều loài thực vật, nổi bật với khả năng kháng khuẩn hiệu quả chống lại vi khuẩn gram dương Chất này không chỉ có giá trị trong ngành thực phẩm mà còn được ứng dụng trong y học và mỹ phẩm nhờ vào hoạt tính kháng khuẩn của nó.
Hoạt động của monoterpen gây ra sự xáo trộn trong lipid của màng plasma vi sinh vật, dẫn đến thay đổi tính thấm và làm chết tế bào qua plasmolysis Sự hiện diện của vi sinh vật trong ngành thực phẩm gây thiệt hại kinh tế nghiêm trọng Việc sử dụng tinh dầu như một biện pháp khử trùng bề mặt công nghiệp là một giải pháp mới Ứng dụng tinh dầu từ lá C nardus, cả độc lập và kết hợp, có thể giảm số lượng tế bào L monocytogenes bám dính trên bề mặt đến 100% (5,64 Log CFU/mL) sau 60 phút.
Nghiên cứu đã chỉ ra rằng geraniol và tinh dầu từ C nardus có hoạt tính kháng khuẩn mạnh đối với màng sinh học của S aureus Sự hiệu quả này được chứng minh qua khả năng ức chế sự hình thành biofilms của S aureus, cũng như giảm sinh khối màng sinh học và khả năng sống sót của tế bào.
Đánh giá tiềm năng và độ an toàn của tinh dầu hoa Myrtus Communis, chất bảo quản tự nhiên hiệu quả chống lại sự phát triển của Listeria monocytogenes trong thịt bò băm bảo quản trong tủ lạnh (Dhifi, Jazi et al 2020)
Nguyên liệu
Tên khoa họệ̣c: Myrtus Communis
Hoa Myrtle được thu thập vào tháng 6 năm 2016 từ vùng Elkef, Tunisia, tọa độ 35,23 ° N và 11,11 ° E Việc xác định nguồn gốc của hoa này được thực hiện bởi Giáo sư Ferigate Ben Abduallah, một nhà thực vật học thuộc Khoa Khoa học Sfax, Tunisia.
Phương pháp thực hiện
Quá trình chiết xuất tinh dầu được thực hiện bằng cách thủy hóa hoa khô trong thiết bị Clevenger trong 3 giờ với 1 kg không khí, cho phép thu được các loại tinh dầu Để chiết xuất, dichloromethane (3 × 50 ml) và natri sulfat khan được sử dụng, sau đó pha nước được làm khô tương ứng Sau khi lọc, dung môi được loại bỏ bằng thiết bị bay hơi quay thông qua chưng cất dưới áp suất giảm Cuối cùng, tinh dầu chiết xuất được bảo quản ở nhiệt độ 4 °C trong bóng tối.
Chuẩn bịệ̣ Nisin: Các dung dịệ̣ch gốc nisin đã đượệ̣c thực hiệệ̣n với nồng độ cuối cùng là
Dung dịch nisin 25.000 IU/ml được chuẩn bị từ 20 mg purenisin (Nisaplin; 50 × 10^6 IU/g; Danisco) hòa tan trong 0,02 N hydrochloric acid (HCl; Sigma‐Aldrich) Sau khi lọc, dung dịch được bảo quản ở nhiệt độ -20 °C Trước khi tiến hành thí nghiệm, dung dịch nisin đông lạnh được rã đông ở 25 °C và pha loãng đến 500 IU/ml bằng nước cất vô trùng.
Hoạệ̣t động kháng khuẩn: Vi sinh vật, điều kiệệ̣n sinh trưởủ̉ng và phương pháp thử
Tính kháng khuẩn của Mc EO được đánh giá thông qua phương pháp khuếch tán agar và pha loãng, với bảng điều khiển gồm sáu chủng vi khuẩn gây bệnh tham khảo, bao gồm Gram dương như cereus ATCC 14579, B monocytogenes ATCC 19117 và Staphylococcus.
Các chủng vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 và Salmonella enterica ATCC 43972 đã được nuôi cấy trong môi trường vô trùng Mueller Hinton (BioRad) ở nhiệt độ 37 °C trong 12 giờ 14 phút Để chuẩn bị các chế phẩm, các chủng vi khuẩn được pha loãng đến khoảng 10^7 đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU)/ml trong dung dịch muối vô trùng.
Phương pháp khuếch tán giếng Agar được thực hiện bằng cách trải đều khoảng 100 μl chất cấy trên bề mặt các đĩa thạch Mueller Hinton Sau khi đĩa được sấy khô vô trùng, một lượng chất có kích thước khoảng 6 mm được đưa vào các đĩa bằng pipet Pasteur vô trùng Mc EO được hòa tan trong dung dịch DMSO/nước với tỷ lệ 1:9 và pha loãng đến nồng độ cuối cùng 50 mg/ml bằng nước vô trùng Khoảng 50 μl dung dịch Mc EO đã chuẩn bị được đặt vào vùng đã cấy chất, sau đó các đĩa được ủ ở 37 °C.
24 giờ Khoảng 50 μl mỗi gentamicin (10 Phag) và dung dịệ̣ch DMSO / nước 1: 9 (1: 9)
(50 μl) lầầ̀n lượệ̣t đượệ̣c dùng làm đối chứng dương và âm Đường kính vùng thử nghiệệ̣m ức chế tăng trưởủ̉ng xung quanh vùng cấy dung dịệ̣ch đượệ̣c đo.
Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) và nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) được xác định thông qua phương pháp vi lọc nước Các nồng độ tinh dầu được sử dụng là 400, 300, 200, 100, 90, 80, 70, 60 và 50 Laul/ml, trong khi các biện pháp kiểm soát tiêu cực bao gồm dung dịch DMSO và nước theo tỷ lệ 1:9 Khoảng 10 μl vi khuẩn từ pha loãng tương ứng với MIC được cấy lên môi trường thạch máu cừu (Thermo Fisher khoa học) để xác định CFU/ml khả thi Việc ủ được thực hiện để đánh giá hiệu quả.
P a g e | 53 ởủ̉ 37 ° C trong 24 giờ Tỷ lệệ̣ MBC / MIC đượệ̣c tính toán để đánh giá loạệ̣i tác dụệ̣ng kháng khuẩn củủ̉a Mc EO.
Thịt bò băm thô được thu mua từ siêu thị ở Sfax, Tunisia, và được vận chuyển đến phòng thí nghiệm trong vòng chưa đầy 30 phút Mỗi mẫu thịt được chia thành sáu phần, bao gồm một mẫu đối chứng không xử lý (C), hai mẫu xử lý bằng Mc EO với nồng độ 0,4% và 0,8% (T1 và T2), một mẫu xử lý bằng nisin với mức 500 IU/g (T3), cùng với hai mẫu xử lý bằng sự kết hợp của Mc EO (T4 và T5).
EO và nisin được sử dụng với nồng độ 0,4% (500 AU/g) và 0,8% (500 AU/g) trong các mẫu McEO Các McEO này được hòa tan trong 10% DMSO, lọc qua bộ lọc polycarbonate 0,22 µm của Merck KGaA và được thêm vào nồng độ 1 MIC và 2 MIC tương ứng với 0,4% và 0,8% v/w của thiệt hại Sau đó, hỗn hợp được trộn đều để phân phối vi sinh vật đồng nhất, tạo thành một hỗn hợp đồng nhất được bảo quản trong điều kiện chân không trong túi nhựa, tạo ra ba bản sao Cuối cùng, các mẫu được làm lạnh ở 4 °C trong 21 ngày.
- Xác địệ̣nh pH: Năm gram củủ̉a mỗi mẫu đượệ̣c đồng nhất hóa trong 50 ml nước cất (pH 7.00), đượệ̣c lọệ̣c và sau đó đượệ̣c đo bằng pH.
Axit thiobarbituric value (TBARS) là chỉ số quan trọng để đánh giá quá trình oxy hóa lipid trong mẫu thịt bò băm Phương pháp chưng cất được sử dụng để đo TBARS, với kết quả được tính theo mg tương đương malonaldehyd (MDA) trên mỗi kg mẫu (mg/kg) Giá trị TBARS được xác định bằng hệ số tuyệt đối mol của axit MDA - 2 - thiobarbituric (TBA) tại bước sóng 532nm (1,56 × 10^5 M^-1 cm^-1).
Khoảng 25 g mỗi mẫu thịệ̣t đượệ̣c hòa tan trong 225 ml nước peptone vô trùng (0,1 g / 100 ml) và đồng nhất trong một máy thổi khí trong 90 giây ởủ̉ nhiệệ̣t độ phòng Một loạệ̣t pha
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã thực hiện 10 lần pha loãng liên tiếp trong nước peptone (0,1 g / 100 ml) để kiểm tra chất lượng vi sinh của từng mẫu Các mẫu được chuyển lên đĩa thạch để xác định số lượng tấm hiếu khí (APC), với đĩa PCA được ủ ở 30 °C trong 48 giờ Số lượng vi khuẩn loài thằn lằn (PTC) cũng được xác định qua đĩa PCA ủ ở 7 °C trong 10 ngày Đối với Enterobacteriaceae, chúng tôi sử dụng phương pháp màng lọc với đĩa thạch Glucose Violet Red, ủ ở 37 °C trong 48 giờ Cuối cùng, hiệu quả của Mc EO được thử nghiệm riêng lẻ và kết hợp với nisin để đánh giá.
L monocytogenes ATCC 19117 trong 21 ngày ởủ̉ 4 ° C, các mẫu thịệ̣t bò băm đượệ̣c tiêm với 100 ml huyền phù tế bào củủ̉a L monocytogenes , chứa 10 6 CFU / ml.
Các mẫu được lưu trữ đã được kiểm tra sau 1, 3, 6, 9, 12, 15, 18 và 21 ngày Mẫu được cấy và bổ sung nước vô trùng làm đối chứng âm, chịu các điều kiện bảo quản tương tự L monocytogenes được liệt kê trên môi trường thạch PLACAM (Oxoid) và các khuẩn lạ được đếm sau 24 giờ ủ ở 30 °C.
Mười tám tham luận viên có kinh nghiệm từ Đại học Sfax đã được chọn để đánh giá các mẫu thịt băm dựa trên màu sắc, hình thức, mùi và khả năng chấp nhận tổng thể Việc đánh giá được thực hiện bằng thang điểm chín, trong đó chín điểm tương ứng với rất tốt và một điểm tương ứng với rất tệ Các giá trị từ năm điểm trở lên được coi là chấp nhận được.
Phần mềm SPSS 19 đã được sử dụng để đánh giá sự khác biệt đáng kể giữa các mẫu thịt bò xay thông qua phân tích phương sai một chiều (ANOVA) Dữ liệu về số lượng vi khuẩn được chuyển đổi thành logarit của CFU trên mỗi gram thịt Các phương tiện tương ứng, lỗi tiêu chuẩn và phương sai đã được phân tích Sự khác biệt giữa các giá trị trung bình của các phương pháp điều trị khác nhau được đánh giá bằng thử nghiệm khác biệt có ý nghĩa nhỏ nhất, với mức xác suất p