Mô hình gây nhiễm vi nấm đa thực nghiệ mở chuột lang

- Chuột nhắt trắng 1820 g ,4 6 tuần tuổi.

3. Mô hình gây nhiễm vi nấm đa thực nghiệ mở chuột lang

Gây nhiễm vi nấm da thực nghiệm ở chuột lang có thể dùng Trichophyton mentagrophytes, Epidermophyton floccosum hoặc Microsporum canis. Nhưng ở đây, xin nêu mô hình gây nhiễm vi nâm da bằng Trichophyton mentagrophytes. Muốn gây nhiễm nấm da bằng E.floccosumhoặc M.canis, ta cũng tiến hành tương tự.

3.1. Dụng cụ

- Chủng nấm Trichophyton mentagrophytes

- Chuột lang 300 - 350 gam

- Ống nghiệm to đường kính 15mm, dài 180mm - Hộp Petri

- Ống hút

- Môi trường thạch Sabouraud - Cát trắng vô trùng

- Mật ong vô trùng - Cối chày sứ - Tủ ấm - Tủ sấy

- Que bạch kim để cấy nấm

- Đèn cồn để tiệt trùng que bạch kim - Dao mổ

- Cào 3 răng nhỏ để cào cho rách da - Cân

- Băng

- Thuốc nghiên cứu - Thuốc tham chiếu - Que bôi thuốc

3.2. Chuẩn bị

- Chuẩn bị môi trường thạch Sabouraud, xem mục 3 của chương “Nghiên cứu tác dụng chống vi nấm in vitro”.

- Chuẩn bị Trichophyton mentagrophytes: Dùng 8 ống nghiệp to. Đun nóng môi trường thạch Sabouraud cho nóng chảy ra. Dùng ống hút, hút 5ml môi trường rồi cho vào mỗi ống nghiệm đã để ở vị trí nghiêng để làm ống thạch nghiêng, rồi ủ trong tủ ấm ở 28oC trong 7 ngày. Các khuẩn lạc nấm trên mặt thạch được dùng để chế ra bột nhão nấm.

3.3. Gây mô hình

- Chế bột nhão nấm: Sau khi ủ ở 28 oC sau 7 ngày, đến ngày thí nghiệm, phân lập, tách lấy nấm trên mặt thạch của cả 8 ống thạch nghiêng cho vào cối sứ. Thêm 5 gam cát trắng vô trùng và 2,5 ml mật ong vô trùng. Nghiền kĩ cho thành bột nhão đồng đều, ta được bột nhão nấm.

- Lấy chuôt lang cân nặng 300 – 350 gam, cạo sạch lông ở lưng. Đánh dấu 4 vòng tròn đường kính 14 mm. Dùng cào 3 răng, cào cho rách lớp da ở 4 vòng tròn đã đánh dấu ở trên. Bôi bột nhão nấm lên trên các vòng tròn đã đánh dấu, rồi bắng kín lại.

- Đến ngày thứ 3, tháo băng ra. Sự phát triển của vi nấm phát triển thấy rõ sau 4 - 6 ngày. - Mức độ nhiễm vi nấm dược đánh giá bằng mắt thường bằng cách cho điểm từ 1 đến 4. Xác định số cfu của mỗi diện tích da như đã trình bày ở trên.

3.4. Thử thuôc

- Khi đã chỉnh lý mô hình có kết quả (tức là da có bị nhiễm vi nấm), thì có thể thử thuốc. Thường dùng dạng thuốc buôi trên da.

- Để thử thuốc, thường dùng 3 lô, một lô chứng, một lô dùng thuốc tham chiếu đã biết là có tác dụng chống vi nấm và một lô dùng thuốc nghiên cứu Số chuột cần dùng sao cho số lần lặp lại n = 8 – 10.

- Trên mỗi con chuột lang, có 4 vòng tròn dùng cho 3 lô, nên một lô có thể thử trên 2 vòng tròn.

- Cách tiến hành như phần gây mô hình. Nhưng khi tháo băng ra vào ngày thứ 3, thhif bắt đầu bôi thuốc. Lô chứng bôi tá dược không ó thuốc. Ngày bôi 2 lần sáng và chiều, liền trong 14 ngày.

3.5. Đánh giá kết quả

- Đánh giá kết quả vào 2 thời điểm: lúc 7 ngày và lúc 14 ngày kể từ khi dùng thuốc dựa vào các thông số sau:

Độ nhiễm vi nấm được đánh giá theo điểm từ 1 đến 4 Sự đóng vảy

Sự mọc lông

- Riêng thời điểm sau 14 ngày,còn xác định thếm thông số là số cfu trung bình trên một diện tích