3. Nội dung nghiên cứu
3.3.3. Tách dòng gen16S rRNA trong vector pBT
Sản phẩm PCR đã được tiến hành gắn vào vector pBT nhờ T4 DNA ligase và biến nạp vào tế bào khả biến E. coli. Sau khi nuôi qua đêm ở 37o
C, trên đĩa biến nạp xuất hiện các khuẩn lạc xanh và trắng xen kẽ nhau.
Để kiểm tra nhanh tế bào vi khuẩn có mang gen mong muốn hay không, phương pháp colony- PCR đã được sử dụng. Một số khuẩn lạc trắng được sử dụng làm khuôn cho phản ứng như ở phần phương pháp. Kết quả phản ứng colony- PCR được thể hiện ở hình 3.8.
1
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.8. Phổ điện di sản phẩm colony - PCR
Giếng M: Thang DNA chuẩn;
Giếng 1, 2, 3: Thứ tự các dòng được chọn để tiến hành colony- PCR
Quan sát trên hình 3.8 ta thấy sản phẩm PCR của ba khuẩn lạc được chọn để PCR kiểm tra là một đoạn DNA có kích thước khoảng 590 bp phù hợp với kích thước của sản phẩm PCR đoạn gen 16S rRNA. Điều này chứng tỏ cả ba khuẩn lạc được chọn đều có DNA plasmid mang đoạn gen16S RNA. Một dòng DNA plasmid đã được chọn để tách DNA plasmid bằng Kit Plasmid DNA purification. Sau khi tách DNA plasmid, enzym BamHI được sử dụng để cắt dòng DNA plasmid này. Kết quả điện di sản phẩm cắt cho thấy có một đoạn DNA có kích thước khoảng 590 bp đã được cắt (hình 3.9) Kích thước đoạn DNA này phù hợp với kích thước đoạn gen cần nghiên cứu.
Hình 3.9. Điện di đồ sản phẩm cắt DNA plasmid bằng enzym BamHI
Giếng M: Thang DNA chuẩn; Giếng 1(pBT- DKTN 9): dòng Plasmid được chọn Giếng 2 (pBT): dòng Plasmid đối chứng
590bp
M 1 2 3
M 1 2
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn