ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Nội dung nghiên cứu
Đề tài nghiên cứu với các nội dung sau:
Nghiên cứu thí nghiệm 1 tập trung vào việc phân tích ảnh hưởng của nồng độ KI kết hợp với IAA đến hệ số nhân nhanh và quá trình hình thành chồi hoa Đồng Tiền trong giai đoạn nhân nhanh Kết quả cho thấy sự tương tác giữa các chất này có vai trò quan trọng trong việc tối ưu hóa quá trình phát triển và hình thái của chồi hoa.
Thí nghiệm gồm 4 công thức:
+ CT1 : Môi trường nền + 3mg KI + 0.5mg IAA
+ CT2: Môi trường nền + 5mg KI + 0.5mg IAA
+ CT3: Môi trường nền + 7mg KI + 0.5mg IAA
+ CT4: Môi trường nền + 10mg KI + 0.5mg IAA
(Môi trường nền : MS + 150ml nước dừa + 20g đường + 9g Agar)
Thí nghiệm 2 : Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ IAA tổ hợp với KI đến khả năng ra rễ của hoa Đồng Tiền (giai đoạn ra rễ )
Thí nghiệm gồm 4 công thức:
+ CT1: Môi trường nền + 2mg IAA + 1mg KI
+ CT2: Môi trường nền + 4mg IAA + 1mg KI
+ CT3: Môi trường nền + 6mg IAA + 1mg KI
+ CT4: Môi trường nền + 8mg IAA + 1mg KI
(Môi trường nền: MS + 150ml Nước dừa + 30g Đường + 9g Agar + 0.5g than hoạt tính)
Phương pháp nghiên cứu
Tất cả các thí nghiệm đều được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với
- Các thí nghiệm ở trong phòng: Mỗi lần nhắc lại 7- 10 bình, mỗi bình 3 - 5 chồi tùy theo giai đoạn nghiên cứu
- Thời gian chiếu sáng là: 12h/ ngày
2.3.3.Các chỉ tiêu theo dõi
- Hệ số nhân chồi Tổng số chồi ban đầu
- Chiều cao trung bình chồi (cm) Tổng số chồi hình thành
- Số lá trung bình/chồi (lá) Tổng số chồi hình thành
Thời gian nghiên cứu của giai đoạn này là 4 tuần
- Ngày bắt đầu ra rễ
- Số cây ra rễ: Đếm số cây ra rễ trong tổng số cây theo dõi
- Chất lượng rễ Tổng số rẽ
- Số rễ trung bình/ cây (rễ) Tổng số chồi the dõi
- Chiều dài trung bình rễ/ chồi (cm) Tổng số chồi theo dõi Thời gian nghiên cứu của giai đoạn này là 4 tuần
2.4 Phương pháp xử lý số liệu
Dữ liệu trong nghiên cứu này đã được phân tích bằng phương pháp toán xác suất thống kê thông qua phần mềm Microsoft Excel 2003 Các số liệu thu thập từ đề tài cũng được xử lý bằng phần mềm chuyên dụng.
CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
Sau 30 ngày nghiên cứu, chúng tôi nhận thấy rằng công thức 1 mang lại số lượng chồi cao nhất, với chồi vươn cao, lá to và có màu xanh nhạt.
Bảng 3.1 trình bày ảnh hưởng của nồng độ KI kết hợp với IAA đến khả năng bật chồi và hệ số nhân nhanh hoa đồng tiền in vitro sau 4 tuần nuôi cấy.
Nồng độ chất điều tiết sinh trưởng (mg)
Số chồi ban đầu (Chồi)
Số chồi tạo thành (Chồi)
Hình 3.1 Ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA đến hệ số nhân nhanh chồi hoa Đồng Tiền
Khi bổ sung 3mg KI vào môi trường nuôi cấy, HSNN đạt 5.56 lần, nhưng giảm xuống 2 lần khi sử dụng 5mg Tăng KI lên 7mg, HSNN chồi có xu hướng tăng lên 4.22 lần Tuy nhiên, ở nồng độ 10mg KI, HSNN chồi chỉ đạt 2.78 lần và có xu hướng giảm dần.
Theo thống kê, HSNN chồi hoa Đồng Tiền trong các thí nghiệm cho thấy sự khác biệt rõ rệt HSNN chồi được phân loại thành 4 mức, được sắp xếp theo thứ tự giảm dần.
+) Mức 1: HSNN đạt 5.56 cao nhất tại nồng độ 3mg
+) Mức 2: HSNN đạt 4,22 tại nồng độ 7mg
+) Mức 3: HSNN đạt 2.78 tại nồng độ 10mg
+) Mức 4: HSNN đạt thấp nhất 2 tại nồng độ 5mg
Kết quả nghiên cứu cho thấy, trong giai đoạn nhân nhanh, việc bổ sung 3mg KI vào môi trường nuôi cấy cho HSNN chồi hoa Đồng Tiền mang lại hiệu quả cao nhất.
Bảng 3.2: Ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA đến khả năng sinh trưởng, phát triển của hoa Đồng Tiền in vitro (sau 4 tuần nuôi cấy)
Số lá / chồi (cm) Đặc điểm hình thái chồi in vitro
CT1 4.2 3.2 Chồi v-ơn cao, lá to, màu xanh nhạt
CT2 2.1 3.5 Chồi yếu, thấp, lá nhỏ, màu xanh nhạt CT3 2.45 2.75 Chồi thấp, lá nhỏ, màu xanh ®Ëm CT4 3.16 2.98 Chồi khoẻ, mập lá to màu xanh ®Ëm
CT1 4.8 9.53 Chồi cao , lá to màu xanh nhạt CT2 2.66 10.02 Chồi thấp, cây yếu lá nhỏ xoăn hơi vàng, hình thành mô sẹo
CT3 3.35 3.82 Chồi cao , lá nhỏ màu xanh nhạt CT4 4.57 5.27 Chồi mập, lá to màu xanh ®Ëm
CT1 5.19 12.25 Cây cao, lá to, cho hệ số nh©n cao CT2 3.01 12.75 Chồi thấp, cây yếu, lá nhỏ xoăn,hình thành mô sẹo, ra nhiều lá và lá vàng
CT3 4.45 9.45 cây mập, khoẻ, lá xanh nh-ng cho hệ số nhân thấp CT4 5.03 10.45 cây mập, khoẻ, lá xanh, dày phiÕn
Hình 3.2 Ảnh hưởng của nồng độ KI tổ hợp với IAA đến khả năng sinh trưởng, phát triển của chồi hoa Đồng Tiền in vitro
Tất cả các công thức thí nghiệm đều cho thấy sự tăng trưởng về chiều cao và số lá qua các tuần nghiên cứu Trong tuần thứ 2 và tuần thứ 3, chiều cao và số lá tăng trưởng chậm, nhưng đến tuần thứ 4, các chỉ tiêu này bắt đầu tăng trưởng nhanh chóng.
Sau 4 tuần nuôi cấy , ở các công thức thí nghiệm chiều cao chồi và số lá/ chồi có xu hướng giảm dần khi tăng nồng độ KI từ 3 – 5mg, khi tiếp tục tăng
KI lên 10 ppm chiều cao chồi có xu hướng tăng Cụ thể là:
Công thức 1 cho thấy chồi hoa Đồng Tiền mập, với lá dày màu xanh nhạt và khả năng vươn cao nhanh chóng Sau 4 tuần, chiều cao chồi hoa đạt 5.19 cm, mặc dù lá có màu xanh nhạt nhưng các chỉ tiêu khác đều vượt trội hơn so với công thức 4 Điều này chứng tỏ chất lượng chồi hoa Đồng Tiền ở công thức 1 rất tốt, cho thấy nồng độ 3mg KI có tác dụng tích cực đến khả năng sinh trưởng và phát triển của chồi hoa Đồng Tiền in vitro.
Công thức 2 với nồng độ KI tăng lên 5mg trong môi trường dinh dưỡng đã dẫn đến kết quả nghiên cứu không khả quan Chồi in vitro trở nên yếu, chiều cao giảm nhanh chỉ còn 3,01 cm sau 4 tuần, với số lá/ chồi đạt 12,75 lá Phiến lá trở nên xoăn, mỏng, nhỏ và có màu xanh nhạt hoặc hơi vàng, trong khi đường kính chồi cũng nhỏ và chồi thấp Mặc dù số lá/ cây tăng nhanh, nhưng mẫu lại hình thành nhiều mô sẹo, cho thấy chất lượng chồi in vitro ở công thức này rất thấp, phát triển kém và chất lượng xấu Do đó, việc bổ sung KI với nồng độ 5mg đã ảnh hưởng tiêu cực đến sự sinh trưởng và phát triển của chồi hoa Đồng Tiền in vitro.
So với công thức 2, công thức 3 cho thấy sự cải thiện rõ rệt ở chồi hoa Đồng Tiền với số lá và chiều cao chồi cao hơn, chồi mập và lá to, cây khỏe hơn Việc bổ sung KI vào môi trường dinh dưỡng với nồng độ 7mg đã tác động tích cực đến hình thái và chất lượng chồi hoa Sau 4 tuần nuôi cấy, cây phát triển mập khỏe, lá xanh nhưng hệ số nhân lại thấp, với số lá/chồi đạt 9,45 lá và chiều cao chồi đạt 4,45 cm.
Khi nồng độ KI tăng, sinh trưởng và phát triển của chồi hoa Đồng Tiền cũng tăng rõ rệt, với đường kính chồi lớn hơn và lá dày màu xanh đậm Chiều cao trung bình của mỗi chồi đạt 5,03 cm và số lá mỗi chồi đạt 10,45 lá Công thức này giúp tạo ra chồi in vitro khỏe mạnh, cứng cáp, phù hợp cho giai đoạn nghiên cứu tiếp theo.
Nghiên cứu về khả năng bật chồi và hệ số nhân nhanh chồi của cây hoa Đồng Tiền in vitro cho thấy nồng độ KI kết hợp với IAA ảnh hưởng tích cực đến sự sinh trưởng và phát triển Môi trường nhân nhanh tối ưu cho hoa Đồng Tiền in vitro được xác định là: MS + 9 g/l Agar + 20 g/l sacaroza + 3 mg KI.
0.5mg IAA + 150ml nước dừa).PH : 5.8 – 5.9
Chồi hoa Đồng Tiền sau 1 tuần nhân nhanh
Chồi hoa Đồng Tiền sau 2 tuần nhân nhanh
Chồi hoa Đồng Tiền sau 3 tuần nhân nhanh
Chồi hoa Đồng Tiền sau 4 tuần nhân nhanh
Sau 30 ngày nghiên cứu, chúng tôi nhận thấy rằng việc bổ sung các nồng độ khác nhau của IAA vào môi trường nhân giống hoa Đồng Tiền đã ảnh hưởng đến sự ra rễ và hình thái rễ của cây Kết quả cho thấy nồng độ 10mg IAA là tối ưu nhất, với thời gian ra rễ sớm hơn và chất lượng rễ tốt hơn.
Nghiên cứu trong Bảng 3.3 cho thấy nồng độ IAA kết hợp với KI có ảnh hưởng đáng kể đến thời gian ra rễ và khả năng ra rễ của hoa đồng tiền in vitro sau 4 tuần nuôi cấy.
Ngày bắt đầu ra rễ (Ngày)
Số chồi ra rễ (Chồi)
Hình 3.3 Ảnh hưởng của nồng độ IAA tổ hợp với KI đến số ngày ra rễ của chồi hoa Đông Tiền
