BỌ GIẢO DỤC VÀ DÀO TẠO BỌ Y TÉ TRƯỜNG DẠI HỌC Y HÀ NỘI *** NGUYÊN MINH TUẤN KHÁO SÁT MỘT SĨ DA HÌNH GEN MÃ HĨA ENZYM CHUN HÓA HOMOCYSTEIN Ó PHỤ NỦ CÓ TIÊN SỨ SÂY THAI Ngành đào tạo : Bãc SV Y khoa Mã ngành : 52720101 KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP BÁC SỶ Y KHOA KHÓA 2015- 2021 Người hưởng (tần khoa học: TS.BS Vũ Thị Huyền -■c -ÍM Qỉ ugc V Hl HÀ NỘI - 2021 LÒI CÁM ƠN Trước hết em xin bây to lõng kinh trọng nhả khoa học mầu mực cổ GS Tơn Thất Tùng, người thầy lón cua Y học nước nhà Nhùng lòi dạy cua thầy " Đứng khoa học mà nôi cỏ the thảnh công hoỹc không nhimg nghicn cửu quan trọng xảy dụng cho bán thân người nghiên ciru thãi độ khoa học phương pháp khoa học" “Đường vào khoa học cúa tôi" dà truyền càm hứng tạo động lực cho em dẩn thán vào đường khoa hục hành trinh khoa học sai Với lông biết ơn sâu sac em xin chăn thành cam ơn TS BS Vũ Thị Huyền, giang viên Bộ mòn Y Sinh học - Di truyền dã chi báo tận tinh vã hướng dản sâu sát đe em hỗn thành luận vãn Chính nhờ bãi giang dầu tiên cùa cò Sinh học tể bào lúc em vừa bước chân vào trường Dại học Y Hà Nội dà gợi mơ vã tniycn cam hứng cho em tiếp tục tim tòi khám phả nhiều linh vực Y sinh học - Di truyền Em xin chân thành cam ơn PGS TS Nguyễn Thị Trang, giang viên cao cấp Bộ mòn Y Sinh học - Di truyền, người thầy đà diu dẳt em vừa tập tễnh bước chân vảo đường khoa học giúp dở em hoàn thảnh luận ván Nhùng lời dạy cua cỏ phương pháp khoa hục mục đích nghiên cứu hướng tới nhùng vấn dề cỏ ý nghía gắn vởi cộng đồng hay đơn gián chi lã lè sống SC hãnh trang quý bâu cho đời làm thầy thuốc, lảm nhả khoa học cua em sau -ÍM CỊỈ ugc V Hl Em xin chân thành cam ơn Ban giám hiệu Phòng Dâo tạo Đại học, Phỏng Cơng tác trị & Hục sinh Sinh viên trường Đại học Y Hả Nội Bộ mòn Y sinh hợc - Di truyền cãc khoa, mòn em tửng dưực theo học dà tụo diều kiện cho em suốt quà trinh học tập hồn thành luận vãn -ÍM CỊỈ ugc V Hl Em xin chân thành cam ơn thầy cỏ cãc anh chị BSNT anh chị KTV Bộ mòn Y Sinh học - Di truyền đà tạo điều kiện thuận lợi vã nhiệt tính giúp đờ em hoàn thành luận vãn Em xin chân thảnh cam ơn tắt cá bệnh nhản tham gia nghiên cứu Họ dộng lực thúc đảy em không ngừng học lập, nghiên cửu Cuối em xin bày to lông biết ơn đến bố mẹ chị gái bạn bẽ dà cạnh dộng vièik chia se đê em hoàn thành tốt việc học tập nghiên cứu khoa học "Từ rừng mơ mộng ta gi ảnh lại thời gian, người lãm cõng tác khoa học chàng trai dẹp đen đánh thức nàng còng chúa bừng tinh đậy sau giấc ngu trám nàm đằng đẵng.” cồ GS Tôn Thổi Tùng Hừ Nội ngày 15 Ihãng 05 nãm 2021 Nguyền ABnh Tuấn -c -ÍM CỊỈ ugc V Hl LỜI CAM DOAN Tỏi Nguyen Minh Tuấn sinh viên khỏa 2015 2021 chuyên ngành Bác sỳ đa khoa Tnrẽmg Đại học ¥ Hã Nội xin cam đoan: Dây luận văn bán thân trực tiếp thực hướng dần cua TS BS Vũ Thị Huyền, giang viên môn Y Sinh học - Di truyền, Trường Đại học Y Hà Nội Cịng trinh khơng trũng lạp vói bất kỹ nghiên cứu khác dược còng bổ Việt Nam Các sổ liệu thõng tin nghiên cứu hỗn tồn chinh xác trung thực khách quan, dà dược xác nhận chap nhận cua cư sơ nưi nghiên cửu cho phép lấy số liệu Tịi xin hồn tồn chịu trách nhiệm tnrớc pháp luật VC nhùng cam kết Há Nội ngây 15 tháng 05 năm 2021 Xác nhận giang viên hướng dẫn TS BS Vù Thị Huyền -c -ÍM Qỉ ugc V Hl Người Viet cam đoan Nguyễn Minh Tuần MỤC LỤC Lòi câm ơn Lòi cam dam Mục lục Chữ Met tắt Danh mục báng Danh mục biếu đồ Danh mục hình vẽ, sơ dồ DẠT VẨN ĐÈ - - CHƯƠNG 1: TỎNG QUAN TẢI LIỆU 1.1 Tinh hĩnh sây thai 1.1.1 Định nghía sẩy thai, sảy thai liên tiếp .3 1.12 Tình hĩnh $ẳy thai trẽn giới 1.13 Tình hình sây thai Việt Nam 1.2 Homocystein 1.3 Tông quan VC gcn liên quan den chuyên hóa homocystein .11 L.3A.MTHFR 11 1.32 MTR .15 L.33.MTRR 16 1.4 Các phương pháp xác định đa hình gen 17 1.4.1 Giãi trinh tự gen .17 1.42 RFLP-PCR .18 1.43 ARMS-PCR 18 1.4.4 Real-time PCR 19 CHƯƠNG 2: DỚI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 21 2.1 Đỗi tượng nghiên cứu 21 2.2 Địa diêm nghiên cửu .22 2.3 Phương pháp nghicn cứu 22 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu .22 -ÍM CỊỈ ugc V Hl 2.32 Cờ mầu 22 2.4 Quy trinh nghiên cửu 22 2.4.1 Thu thập thòng tin bệnh nhàn vã tiền sứ sây thai 22 2.42 Thu thập vã xứ lý mẫu bệnh phẩm 22 2.43 Tâch chiết DN A 23 2.4.4 Do nồng độ đánh giá độ tinh cua DNA sau tách chiết 23 2.4.5 Xác định đa hỉnh gen bảng phản ứng real-time PCR 24 2.4.6 Đục đảnh giá kết qua 25 2.5 Xứ lý sồ liệu 26 2.6 Vẩn đe đạo dức nghiên cứu .28 CHƯƠNG 3: KÉT QUẢ NGHIÊN’ cứu 29 3.1 Tádi chiết DNA .29 3.2 Đặc diem tuồi cua nhõm bệnh nhân nghiên cứu 30 3.3 Tý lộ đa hình gcn liên quan đến chuyển hóa homocystein .31 3.3 L MTHFR 31 3.32 MTRR .32 3.33 MTR .32 3.4 Mối liên quan da hình gen liên quan đen chuyền hóa homocystein sây thai liên tiếp 33 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN ~ .- .35 4.1 Tách chiết DNA .35 4.2 Đặc diêm tuồi cua nhõm bệnh nhàn nghiên cứu 35 4.3 Ty lệ đa hỉnh gen lien quan dến chuyên hỏa homocystein .36 4.4 Mối liên quan giừa da hình gen liên quan đến chuyên hóa homocy stein vã sây thai li én tiếp 39 KÉT LUẬN 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC -ÍM CỊỈ ugc V Hl DANH MỤC CHƠ MÉT TÁT American of Medical 5MTHF College 5-methyitetrahydrofolate Genetics and Genomics ACMG Amplification Refractory Mutation System ARMS Cystathioninep-synthase Deoxynucleoside triphosphate CBS Deoxyribonucleic acid dNTP Các nucleotide A T G c Multifactor Dimensionality' DNA Reduction MDR Methyienetet rahydio fol ate reduct a se Methionin synthase MTHFR Methionin synthase reductase MTR MTRR Neural tube defect NST Nhicm sac the Polymerase Chain Reaction NTD DỊ tật ống thằn kinh Restriction Fragment Length PCR Polymorphisms Phan úng khuếch đại gen Recurrent RFLP Pregnancy Loss s -adeno sylmethioni n RPL World Health Organization SAM Sây thai, thai lưu tái diễn WHO Tô chức Y tc the giới -ÍM HỘC > ■C MTHFR polymorphisms in US primary care populations Biomarkers in Medicine 2019;13(8):649- 661 doi: 10.2217/bmm-2018-0392 53 Chen LH Liu M-L Hwang H-Y Chen L-S Korenberg J Shane B Human Methionine Synthase cDNA cloning, gene localization, and expression J Biol Chem 1997;272(6):3628-3634 doi:10.1074/jbc.272.6.3628 54 Biselli JM Goloni-Bertollo EM Haddad R Eberlin MN Pavarino- Bertelli EC The MTR A2756G polymorphism is associated with an increase of plasma homocysteine concentration in Brazilian individuals with Down syndrome Bra: J Med Biol Res 2008:41 (l):34-40 doi: 10.1590/sO 100879x2006005000195 55 de Lima ELS da Silva VC, da Silva HDA et al MTR polymorphic variant A2756G and retinoblastoma risk in Brazilian children Pediatr Blood Cancer 2010;54(7):904-908 doi:10.1002/pbc.22472 56 Xia J Wang Y Zhang H Hu Y Association between MTR A2756G polymorphism and childhood acute lymphoblastic leukemia: a metaanalysis Leuk Lymphoma 2014;55(6): 1388-1393 doi: 10.3109/10428194.2013.830304 57 Leclerc D Wilson A Dumas R er al Cloning and mapping of a cDNA for methionine synthase reductase, a flavoprotein defective in patients with homocystinuria PNAS 1998;95(6):3O59-3064 doi: 10.1073/pnas.95.6.3059 58 Hobbs CA Sherman SL Yi p el al Polymorphisms in Genes Involved in Folate Metabolism as Maternal Risk Factors for Down Syndrome The -c -ÍM CỊỈ ugc V Hl American Journal of Human Genetics 2000;67(3):623-630 doi: 10.1086/303055 59 Wu P-P Tang R-N An L A meta-analysis of MTRR A66G polymorphism and colorectal cancer susceptibility J BUON 2015:20(3):918-922 60 Xu J Zhou w The relationship between gene polymorphism of MTRR A66G and lower extremity deep venous thrombosis Hematology- 2018;23(10):828-832.doi:10.1080/10245332.2018.1479498 61 Shi T-L Wu Y Li Y et al The relevance of MTHFR CỔ77T A1298C and MTRR A66G polymorphisms with response to male infertility in Asians: A meta-analysis Medicine (Baltimore) 2019:98(S):el4283 doi: 10.1097/MD.0000000000014283 62 Ritchie MD Halm LW Moore JH Power of multifactor dimensionality reduction for detecting gene-gene interactions in the presence of genotyping error, missing data, phenocopy, and genetic heterogeneity Genet Epidemiol 2003:24(2): 150-157 doi:10.1002/gepi,10218 63 Dato s Soerensen M De Rango F et al The genetic component of human longevity: New insights from the analysis of pathway-based SNP- SNP interactions Aging Cell 2018;17(3) doẼlO.l 11 1/acel 12755 64 Kahleovả R Palyzova D Zvara K et al Essential hypertension in adolescents: association with insulin resistance and with metabolism of homocysteine and vitamins* American Journal of Hypertension 2002:15(10):857-864 doi:10.1016/S0895-7061(02)02984-9 -c -ÍM Qỉ ugc V Hl ... hình gen MTHFR MTR MTRR mà hóa enzym chuyền hóa homocystein aphụ n? ?có liền sư sây thai Btrởc đầu xác định mồi liên quan số da hình gen MTHFR MTR MTRR mà hóa enzym chuyền hỏa homocystein sầy thai. .. trạng sây thai ỡ người phụ nử Nghiên cửu nhầm mỏ ta tỳ lộ da hỉnh gen MTHFR C677T A1298C MTR A275ÓG vã ỈTRR A66G phụ nữ có tiền su sầy thai bước đầu xác định mối liên quan da hình gen sẩy thai tái... HOMOCYSTEIN Õ PHỤ NỮ CĨ TIỀN sử SAY THAI Tóm tut Sẩy thai lã biến cỗ sản khoa nhiều nguyên nhàn gảy Cãc nghiên cứu gần cho thấy đa hình gen XITHFR MTR MTRR dần đen tảng homocystcin máu có thê liên