Nghiên cứu bào chế và đánh giá tương đương sinh học viên phóng thích kéo dài chứa acid valproic và natri valproat

Nguyên vật liệu, trang thiết bị, đối tượng và phương pháp nghiên cứu

Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp nghiên cứu về bào chế

2.2.1.1.Nghiên cứu xây dựng và thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất trong thành phẩm bằng phương pháp HPLC

Dựa trên tính chất chuyển đổi giữa NV và AV trong pha động của sắc ký, nghiên cứu này nhằm phát triển một phương pháp định lượng AV và NV trong cùng một chế phẩm bằng kỹ thuật HPLC.

Dung dịch đệm pH 2,7 được chuẩn bị bằng cách hòa tan 2,72 g KH2PO4 trong 900 ml nước, sau đó điều chỉnh pH về 2,7 bằng dung dịch H3PO4 10% Cuối cùng, thêm nước cất cho đủ 1000 ml và lọc qua màng lọc Sartorius RC 0,45 µm.

Để chuẩn bị dung dịch chuẩn, hãy cân chính xác khoảng 100 mg natri valproat và cho vào bình định mức 50 ml Tiếp theo, thêm khoảng 5 ml methanol và siêu âm trong 2 phút Sau đó, thêm nước cất vừa đủ đến vạch định mức và lắc đều Cuối cùng, lọc dung dịch qua màng lọc Sartorius RC 0,45 µm.

Để chuẩn bị dung dịch thử, cần cân chính xác một lượng bột viên nghiền mịn từ 20 viên, tương đương với 1/5 viên (khoảng 100 mg natri valproat đã qui đổi) Sau đó, cho bột vào bình định mức 50 ml, thêm khoảng 5 ml methanol và lắc mạnh cho đến khi polyme trương nở hoàn toàn Tiếp theo, siêu âm trong 2 phút và thêm nước cất cho đủ đến vạch, sau đó lắc đều Cuối cùng, lọc dung dịch qua màng lọc Sartorius RC 0,45 µm.

Các điều kiện sắc ký được nghiên cứu khảo sát bằng thực nghiệm, bao gồm:

- Bước sóng phát hiện: 210 nm

- Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút

- Pha động: Acetonitril - đệm phosphat 2,7 (55 : 45)

- Thời gian phân tích một mẫu: 5 phút

Tiến hành sắc ký và tính toán kết quả:

Hàm lượng natri valproat tính theo công thức:

Trong nghiên cứu này, các thông số quan trọng bao gồm DT pic dung dịch thử (mAU* phút) và DT pic dung dịch chuẩn (mAU* phút) Khối lượng cân mẫu thử được ký hiệu là mT (g) và khối lượng cân mẫu chuẩn là mC (g) Hàm lượng chuẩn được ký hiệu là C, trong khi khối lượng trung bình viên được ký hiệu là M (g).

Thẩm định quy trình định lượng

Tiến hành thẩm định qui trình HPLC định lượng hoạt chất trong chế phẩm theo hướng dẫn của ICH, thực hiện trên mẫu viên nghiên cứu

Kiểm tra tính tương thích hệ thống

Tính tương thích hệ thống được xác định thông qua việc phân tích 6 mẫu dung dịch chuẩn có cùng nồng độ trong cùng điều kiện Độ lặp lại của diện tích pic và thời gian lưu được đánh giá dựa trên hệ số phân tán (CV%).

Chuẩn bị các dung dịch chuẩn và mẫu thử có cùng nồng độ xấp xỉ 2 mg/ml natri valproat trong nước (được chuẩn bị giống như mục 2.2.1.1)

Dung dịch mẫu placebo: Cân một lượng bột placebo tương ứng của 1/5 viên

Cho khoảng 55,2 mg polyme vào bình định mức 50 ml, thêm 5 ml methanol và lắc mạnh cho đến khi polyme trương nở hoàn toàn Sau đó, siêu âm trong 2 phút, thêm nước cất đủ đến vạch và lắc đều Lọc qua màng lọc Sartorius RC 0,45 µm Tiến hành sắc ký các mẫu placebo, chuẩn, thử và dung môi pha động Đánh giá tính đặc hiệu của phương pháp dựa trên pic của mẫu chuẩn, mẫu thử, mẫu placebo, dung môi pha động và độ tinh khiết của pic thông qua so sánh phổ UV tại các điểm khác nhau trên pic.

Tiến hành khảo sát trong khoảng nồng độ từ 1,19 - 2,76 mg/ml (tương đương

60 – 140% so với nồng độ dung dịch chuẩn là 2 mg/ml natri valproat)

Sắc ký các mẫu chuẩn theo điều kiện đã chọn, phân tích mỗi nồng độ một lần Thiết lập phương trình hồi quy y = ax + b để xác định mối tương quan giữa nồng độ hoạt chất và diện tích pic Kiểm tra hệ số a, b và đánh giá tính tương thích của phương trình hồi quy thông qua thống kê để đảm bảo độ chính xác.

Tiến hành trên 6 mẫu thử cùng nồng độ để xác định RSD% so với yêu cầu Độ chính xác trung gian

Hai kiểm nghiệm viên đã tiến hành phân tích mẫu natri valproat với nồng độ 2 mg/ml trên hai hệ thống HPLC khác nhau trong hai ngày khác nhau, mỗi người thực hiện 6 mẫu Kết quả được đánh giá dựa trên độ lặp lại giữa các ngày thông qua hệ số biến thiên CV% và so sánh kết quả trung bình định lượng giữa hai kiểm nghiệm viên để xác định độ đúng.

Chuẩn bị các mẫu giả định với nồng độ 80%, 100% và 120% so với dung dịch chuẩn theo bảng 2.5, mỗi hàm lượng tạo 3 mẫu Sử dụng phương pháp HPLC để định lượng natri valproat trong các mẫu và tính toán tỷ lệ phục hồi so với giới hạn yêu cầu.

Bảng 2 5 Mẫu thử nghiệm độ đúng Thành phần Mẫu độ đúng 80% Mẫu độ đúng 100% Mẫu độ đúng 120%

Acid valproic 23,2 mg 29,0 mg 34,8 mg

Natri valproat 53,3 mg 66,6 mg 79,9 mg

(Tương ứng natri valproat qui đổi) 79,94 mg 99,93 mg 119,91 mg

Tất cả các thành phần được cân và cho vào bình định mức 50 ml, sau đó thêm khoảng 5 ml methanol Tiến hành lắc mạnh và siêu âm trong 2 phút, rồi thêm nước cất cho đủ đến vạch Cuối cùng, lắc đều và lọc qua màng lọc 0,45 µm.

2.2.1.2 Khảo sát độ hòa tan viên đối chiếu và xây dựng chỉ tiêu độ hòa tan cho chế phẩm

Thử nghiệm tiến hành trên mẫu viên đối chiếu Depakine Chrono 500 mg

(số lô: 1A662, NSX: 11/2012, HD: 10/2015, SĐK: VN - 4095 - 07)

Khảo sát xây dựng phương pháp thử độ hòa tan và định lượng hoạt chất

Môi trường thử độ hòa tan được lựa chọn dựa trên hướng dẫn từ chuyên luận viên về phóng thích kéo dài divalproex natri trong USP 36 Thời gian khảo sát được xác định để đảm bảo tính chính xác và đáng tin cậy của kết quả.

45 phút trong môi trường HCl 0,1N và từ 1 - 12 giờ trong môi trường đệm pH 5,5

Thiết bị: Kiểu cánh khuấy;

Môi trường: 500 ml dung dịch hydrocloric 0,1N (TT) (không sử dụng NaCl); Tốc độ: 100 vòng/phút;

- Điều kiện sắc ký: Giống định lượng hoạt chất trong chế phẩm (mục 2.2.1.1)

Để chuẩn bị dung dịch chuẩn, cần cân chính xác khoảng 250 mg natri valproat vào bình định mức 50 ml, sau đó thêm khoảng 5 ml acetonitril và lắc mạnh Tiếp theo, thêm methanol vừa đủ đến vạch định mức, siêu âm trong 2 phút và lắc đều Hút chính xác 2 ml dung dịch này cho vào bình định mức 100 ml, thêm HCl 0,1M vừa đủ và lắc đều Cuối cùng, lọc dung dịch qua màng lọc Sartorius RC 0,45 µm.

Dung dịch thử được thực hiện bằng cách thử nghiệm trên 6 viên, mỗi viên được cho vào một cốc riêng biệt Sau một thời gian hòa tan, lấy dung dịch từ mỗi cốc và lọc qua màng lọc 0,45 micron để thu được kết quả.

Tiến hành thử nghiệm bằng cách tiêm lần lượt 100 mẫu dung dịch chuẩn và thử nghiệm Độ hòa tan của nguyên vật liệu (NV) trong môi trường acid được xác định theo công thức ĐHT 1 (%).

ST: diện tích pic của dung dịch thử (mAU*phút);

SC: diện tích pic của dung dịch chuẩn (mAU*phút); dflC: độ pha loãng của dung dịch chuẩn; mC: khối lượng cân chuẩn (g);

Môi trường đệm pH 5,5 Điều kiện thí nghiệm:

- Thiết bị: Kiểu cánh khuấy

Kết quả nghiên cứu

Bàn luận