ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC    TỐNG THỊ MƠ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM MULTIENZYMES TỪ NẤM MỐC VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ AN TỒN CỦA CHÚNG DÙNG CHO CHĂN NI LUẬN VĂN THẠC SỸ: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái Nguyên, Năm 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC    TỐNG THỊ MƠ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM MULTIENZYMES TỪ NẤM MỐC VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ AN TOÀN CỦA CHÚNG DÙNG CHO CHĂN NUÔI Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC – VI SINH Mã số: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SỸ: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS.MAI THỊ HẰNG Thái Nguyên, Năm 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Qua thời gian làm việc học tập Phòng thí nghiệm Bộ mơn Cơng nghệ Sinh học – Vi sinh tơi hồn thành cơng trình: “Nghiên cứu quy trình cơng nghệ sản suất chế phẩmMultienzym từ nấm mốc đánh giá độ an toàn chúng dùng cho chăn ni” Để hồn thành cơng trình này, tơi nhận nhiều giúp đỡ, bảo đóng góp ý kiến q báu từ thầy cơ, gia đình bạn đồng nghiệp Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc Tiến sĩ Mai Thị Hằng, người dạy dỗ tơi q trình học tập, người dìu dắt bước đường khoa học sát cánh tơi q trình nghiên cứu! Tơi xin chân thành cảm ơn anh chi em môn Vệ sinh Thú y, Viện Thú y trung ương giúp đỡ tơi q trình làm thí nghiệm Viện! Tơi chân thành cảm ơn tất anh, chị em phòng Công nghệ Sinh học – Vi sinh giúp đỡ suốt thời gian qua! Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 09 năm 2010 Tống Thị Mơ i Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC MỞ ĐẦU i Lý chọn đề tài 2.Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Nội dung đề tài: CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Vai trị enzyme chăn ni 1.1 Các enzyme tiêu hóa chủ yếu sử dụng chăn ni 1.1.1 a-Amylase 1.1.1.1 Đặc tính enzym α-amylase 1.1.1.2 Cơ chế tác dộng enzym α-amylase 1.1.2 Cellulase 1.1.2.1 Hệ enzyme phân giải cellulose 10 1.1.2.2 Endoglucanase (EC.3.2.1.4,b-Dglucan-glucanolhydrolase hay carboxymethylcellulase viết tắt CMCase) 10 1.1.2.3 Exoglucanase (EC.3.2.1.91 1,4 b - glucan – celobiohydrolase 11 1.1.2.4 b-1,4 glucosidase (EC.3.2.1.21 b-1,4 glucosidase hay cellobiase): 11 1.1.2.5 Exoglucohydrolase (EC.3.2.1.74): 1,4 b -D glucan – glucohydrolase) 12 1.1.3 Xylanase 12 1.1.3.1 Cấu trúc hoá học xylan 12 1.1.3.2 Hệ thống enzyme phân giải xylan hình thành tổ hợp xylanase vi sinh vật 14 1.1.4 Phytase 16 1.2 Tình hình nghiên cứu sử dụng enzyme chăn nuôi 17 Các phương pháp lên men enzyme vi sinh vật 21 2.1 phương pháp lên men chìm 21 ii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.2 Phương pháp lên men rắn 22 Ảnh hưởng số yếu tố lên trình sinh tổng hợp enzyme 23 3.1 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng 23 3.2 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy 25 Tính an toàn chế phẩm enzyme từ Aspegillus 26 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1.Vật liệu 29 2.1.1.Chủng vi sinh vật 29 2.1.2 Môi trường sử dụng nghiên cứu 29 2.1.3 Hoá chất 29 2.1.4 Thiết bị 30 2.2 Phương pháp nghiên cứu 30 2.2.1 Phương pháp vi sinh 30 2.2.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn tinh bột đến khả sinh amylase chất bã sắn chủng A oryzae NM1 31 2.2.1.2 Ảnh hưởng độ ẩm ban đầu đến khả sinh amylase 31 2.2.1.3 Ảnh hưởng nồng độ KNO3 KH2PO4 lên khả sinh amylase 32 2.2.1.4 Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả sinh amylase 32 2.2.1.5 Ảnh hưởng pH đến hoạt động amylase 32 2.2.1.6 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt động amylase 33 2.2.1.7 Ảnh hưởng lượng giống (bào tử/g) ban đầu đến khả sinh amylase 33 2.3 Xác định ảnh hưởng H2O2 đến hoạt động amylase 33 2.4 Phương pháp nghiên cứu enzyme 34 2.4.1 Xác định hoạt tinh số loại enzyme thuỷ phân ngoại bào 34 Đánh giá độ an toàn chế phẩm enzyme động vật 40 iii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.1 Đánh giá độ độc cấp tính 40 3.2 Đánh giá độc tính cấp sử dụng enzyme liều cao 7-14 ngày 43 3.3 Đánh giá độc tính chậm sử dụng enzyme liều cao 90 ngày 44 3.4 Tính toán xử lý số liệu 44 3.5 Các phương pháp khác 45 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 46 3.1 Ảnh hưởng yếu tố dinh dưỡng đến sinh tổng hợp amylase 46 3.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn tinh bột đến khả sinh amylase chất bã sắn chủng A oryzae NM1 46 3.1.2 Ảnh hưởng độ ẩm ban đầu đến khả sinh amylase 48 3.1.3 Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả sinh amylase 49 3.1.4 Ảnh hưởng nhiệt độ ban đầu đến khả sinh amylase 51 3.1.5 Ảnh hưởng pH ban đầu đến khả sinh amylase 52 3.1.6 Ảnh hưởng nồng độ KNO3 KH2PO4 đến khả sinh amylase 53 3.1.7 Ảnh hưởng số lượng bào tử ban đầu đến khả sinh amylase 54 3.2 Xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm amylase thô 56 3.3 Phối trộn enzyme thô từ chủng A niger ĐB106 enzyme thô từ chủng A oryzae NM1 60 3.4 Đánh giá độ an toàn chế phẩm enzyme multienzyme động vật 62 3.4.1.Đánh giá cấp độ độc cấp tính 62 a Dị ứng da 62 b Dị ứng mắt 63 c Dị ứng đường thở 63 3.4.2 Đánh giá độc tính cấp chậm 14 ngày 64 3.4.3 Đánh giá độc tính 90 ngày 64 iv Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.4.4 Kết kiểm tra mẫu máu: Kiểm tra Khoa huyết học Bệnh viện Bạch Mai Hà Nội (Bảng 3.4.4) 65 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68 I KẾT LUẬN 68 II KIẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 v Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CMC Carboxyl methyl cellulose CNSH Công nghệ sinh học Cs Cộng DNS Dinitro Salysilic IU International units KLPT Khối lượng phân tử OD Optical Density OSX Oat Spelt Xylan CTM Công thức máu RNM Rừng ngập mặn VSV Vi sinh vật RBC Hồng cầu WBC Bạch cầu PLT Tiểu cầu TN Thí nghiệm MT Mơi trường MTCS Mơi trường sở DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang vi Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Hình Cấu trúc hố học cellulose Hình Cấu trúc xylan với chuỗi bên 14 Hình Sơ đồ tác động loại enzyme thủy phân xylan trình bày tóm tắt 15 Hình Muối phytate liên kết với ion kim loại protein 16 Hình 2.4 35 Đồ thị tinh bột chuẩn Hình 2.5 Đồ thị chuẩn xác định hàm lượng D-glucose DNS 37 Hình 2.6 Đồ thị chuẩn D-xylose (Theo phương pháp DNS) 39 Hình 3.1.2 Ảnh hưởng độ ẩm ban đầu đến khả sinh amylase 49 Hình 3.1.3 Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả sinh amylase 50 Hình 3.1.4 Ảnh hưởng nhiệt độ ban đầu đến khả sinh amylase 52 Hình 3.1.5 Ảnh hưởng pH dịch khoáng ban đầu đến khả sinh amylase 53 Hình 3.2 59 Quy trình sản xuất chế phẩm amylase thơ từ A oryzae NM1 vii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Tóm lại kết cho thấy thử nghiệm multienzymes động vật khơng có dấu hiệu phản ứng ngộ độc Chế phẩm có tính an tồn, sử dụng cho chăn ni Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 67 http://www.lrc-tnu.edu.vn học Kỹ thuật thức ăn chăn nuôi, (1), http//www.vcn.vnn.vn/khoahoc 12 Trần Lan Phương (2007), Nguyên liệu thức ăn chăn nuôi Việt Nam: Cung chưa đáp ứng đủ cầu, Báo thường niên ngành Nông nghiệp Việt Nam, http://www.agro.gov.vn/news/newsdetail.asp 13 Đỗ Đức Quế (2008) Nâng cao hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn lactic sau đột biến UV để sản xuất chế phẩm probiotic cho lợn sau cai sữa Luận văn thạc sỹ khoa học sinh học, Trường ĐHSP Hà Nội 14 Nguyễn Xuân Thành, Nguyễn Bá Hiển, Hồng Hải, Vũ Thị Hoan (2005), Giáo trình vi sinh vật học công nghiệp, Nhà xuất giáo dục, tr 139-151 15 Trần Thị Thanh(2001) Công nghệ Vi Sinh NXB Giáo dục, trang 40-52 16 Đoàn Văn Thược (2005), Tuyển chọn nghiên cứu số chủng vi sinh vật có khả sinh amylase bã sắn phế thải để sản xuất enzym cho chăn nuôi gia súc, Luận Văn Thạc sĩ Khoa học, Đại học Sư phạm Hà Nội, tr 29-34 17 Đặng Thị Thu, Lê Ngọc Tú, Tô Kim Anh, Phạm Thu Thủy, Nguyễn Xuân Sâm (2004), Công nghệ enzym, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 78 -90 18.Trần Quốc Việt, Ninh Thị Len (2005,)Ảnh hưởng việc bổ sung enzyme thương mại vào phần đến suất sinh trưởng hiệu sử dụng thức ăn lợn cai sữa lợn nuôi thịt Hội nghị Khoa học lần thứ nhất, Chương trình hợp tác Việt Nam – Thuỵ Điển, Hà Nội, trang 78-86 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 70 http://www.lrc-tnu.edu.vn TIẾNG ANH 19 Bailey M J, Biely P, Poutanen K (1992), Interlaboratory testing for assay of xylanase activity, J Biotechnol, 23(3), pp 257-270 20 Bedford, M R., (1995) Mechanism of action and potential environmental benefits from the use of feed enzymes, Anim Feed Sci Technol., 53, 145-155 21 Brummell DA, Bird CR, Schuch W, Bennett AB (1997) Plant Mol Biol 33(1): 87 22 Brummell DA, Catala C, Lashbrook CC, Bennett AA (1997) Proc Natl Acad Sci, USA, 94: 4794 23 Brummell DA, Lashbrook CC, Bennett AB (1994) Plant endo-1,4-b-Dglucanases In: Himmel ME, Baker JO, Overend RP (eds) Enzymatic conversion of biomass for fuel sproduction American Chemical Society, Washington, DC, 100 24 Cosgrove DJ, Bedinger P, Durachko DM (1997) Proc Natl Acad Sci, USA, 94: 6559 25 Cynthia Z, Blumenthal A (2004), Production of toxic metabolites in Aspergillus niger, Aspergillus oryzae and Trichoderma reesei justification of mycotoxin testing in food grade enzyme preparations derived from the three fungi, Regulatory Toxicology and Pharmacology, 39, pp 214-228 26.Danicke, S., Franke, E., Strobel, E., Jeroch, H and Simon, H., Effects of dietary fat type and xylanase supplementation in rye containing diets on energy metabolism in male broilers, J Anim Physiol A Anim Nutr., 81, 90-102, 1999 27.Diendric N & Decuyepere, J(1996) Mode of action of exogenous carbohydrase enzymes in growing pig nutrition Pig News and Information, 17 p 41-48 28 Forgaty W M and Kelly C.T (1990)Amylase, amyloglucosidase and related Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 71 http://www.lrc-tnu.edu.vn glucanase Microbial Enzyme and Biotechnology.2nd Ed.,ed.By W.M Forgaty and C.T.Kelly,Elsevier Applied Science, London and New York pp 71-183 29 Fleming AJ, McQueen-Mason S, Mandel T, Kuhlemeier C (1997) Science 276:1415 20 Gruppen H, Hamer R J, Voragen A G J (1992), Water-unextractable cell wall material from wheat flour, fractionation of alkali-extracted polymers and comparison with waterextractable arabinoxylans, J Cereal Sci, 16, pp 53-67 31 Henry L Clasen, Richard Cooper Inproving animal feeding through enzyme use.hhtp://www.agingonet.com/ agricarta/content/feed nems/feed notes 13 32.Hew, L.I., Ravindran1, V., Mollah, Y and Bryden, W L Influence of exogenous xylanase supplementation on apparent metabolisable energy and amino acid digestibility in wheat for broiler chickens, Anim Feed Sci and Technol., 75, 83-92, 1998 33.Hew, L I., Ravindran, V., Ravindran, G., Pittolo, P H and Bryden, (1999) W.L., The apparent metabolisable energy and amino acid digestibility of wheat, triticale and wheat middlings for broiler chickens as affected by exogenous xylanase supplementation, J Sci Food Agric., 79, 1727-1732 34.Howson, S J and Davis, R.J (1983) Production of phytate-hydrolysing enzyme by fungi Enzyme Microbiol Technol 5,p 377-382 35 Khan A, Butt W A, Ali S, (2003), Isolation and screening of Aspergillus niger isolates for xylanase biosynthesis, Biotechnol, 2(3), pp 185-190 36 Kormelink F J M, Leeuwen M G F S L, Wood T M, Voragen A G J (1993), Purification and characterisation of three endo (1,4)-β-xylanase and one βxylosidase from Aspergillus awamori, J Biotechnol, 27, pp 249-254 37 Kulkarni N, Shendye A, Rao M (1999), Molecular and biotechnological aspects of xylanase, FEMS Microbiol Rev, 23, pp 411-456 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 72 http://www.lrc-tnu.edu.vn 38 Ken K Wong, L U Tan, and J N Saddler (1988) Multicity of β-1,4 xylanase in Microorganis: functions and applications Microbiol Review pp 305-317 39 Loopstra CA, Mouradov A, Vivian-Smith A, Glassick TV, Gale BV, Southerton SG, Marshall H, Teasdale RD (1998) Plant Physiol 116: 959 40.Mai Thi Hang, Phuong Phu Cong, Ngo Thanh Xuan, Tran Huu Phong, Pham Cong Thieu, Nguyen Thanh Dat (2008), Efficacy of hydrolytic enzyme preparation from Aspergillus spp on the fattening broiler chicken fed with corn soybeen based diets, Int J Poul Sci 7(10) pp 984-989 41 Miller G L(1959), Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar, Anal Chem 13(3), pp 426-428 42 OECD/OCDE 2002 OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS Acute Dermal Irritation/Corrosion (404) 43 OECD/OCDE 2002 OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS Acute Eye Irritation/Corrosion (405) 44 OECD/OCDE 2009 OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS Acute Inhalation Toxicity - Acute Toxic Class Method 45 T M M COENEN and P AUGHTON (1998) Safety Evalution of Amino Peptidase Enzyme Preparation Derived from Aspergillus niger 46.Pallauf, J and Rimbach, G (1996) Nutritional significance of phytic acid and phytase Arch Anim Nutr 50, p 301-319 47 Trainotti L, Ferrarese L, Casadoro G (1998) Hereditas 128: 121 48 Scrivener AM, Zhao L, Slaytor M (1997) Comp Biochem Physiol B 118: 837 49.Saha B C, Bothast R J (1999), Pretreatment and enzymatic saccharification of corn fiber, Appl Biochem Biotechnol, 76, pp 65-77 50 Shibuya N, Iwasaki T (1985), Structural features of rice bran hemicellulose, Phytochemistry, 24, pp 285-289 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 73 http://www.lrc-tnu.edu.vn 51.Shieh,T.R.and Ware, J.H (1968) Survey of microoganisms for the production of extracellular phytase Appl Microbiol.16,p 1348-1351 52.S.Danicke, E.Franke, E.Strobel, H.Jeroch and O.Simon (1999) Effect of dietary fat type and xylanase supplementation in rye containing diets on energy metabolism in male broilers Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition pp 90-102 53 Simell, M., Turunem, M., Piironem, J and Vaara, T (1989) Feed and food applications of phytase Lecture at 3rd Meet Industrial Applications of Enzymes, Barcelona, Spain 54.Volfova, O., Dvorakova, J., Hanzlikova, A and Jandera, A (1994) Phytase from Aspergillus niger Folia Microbiol.39, p 481-484 55 Warren RAJ (1997) Structure and function in b1,4-glycanases In: Claeyssens M, Nerinckx W, Piens K (eds) Tricel 97, Carbohydrases from Trichoderma reesei and other microorganisms Structures, biochemistry, genetics and applications Ghent Belgium Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK, 115 56 Watanabe H, Noda H, Tokuda G, Lo N (1998) Nature 394: 330 57 White BA, Cann IKO,Mackie RI, Morrison M (1997) Cellulase and xylanase genes from ruminal bacteria: domain analysis suggests a noncellulosome-like model for organization of the cellulase complex In: Onodera R, Itabashi H,Ushida K,Yano H,Sasaki Y (eds) Rumen microbes and digestive physiology in ruminants Jpn Sci Soc Press, Tokyo, 69 58.Wu, Y B and Ravindran, V.,(2004) Influence of whole wheat inclusion and xylanase supplementation on the performance, digestive tract measurements and carcass characteristics of broiler chickens, Anim Feed Sci and Technol., 116, 129–139 59 Xu G-Y, Ong E, Gilkes NR, Kilburn dG, Muhandiram DR, Harris-Brandts Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 74 http://www.lrc-tnu.edu.vn M, Carver JP, Kay LE, Harvey TS (1995) Biochemistry 34: 6993 60 Yonggang Liu and Samuel K Baidoo Exogenus for pig diets: an overview TOPIC.html 61.BBC,Inc RC-147U enzymes for industrial applications (2004) www.bccresearch.com Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 75 http://www.lrc-tnu.edu.vn Phụ lục 1: Kết tính tốn xử lý thống kê thí nghiệm dị ứng da Kết qủa xử lí trước thí nghiệm Lơ 500 500 500 500 Lô 500 500.5 500 500.5 Lô 500.6 500.4 500 500 ĐC 500 500 500 500 Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Lô Lô Lô ĐC ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Sum 2000 2001 2001 2000 Average 500 500.25 500.25 500 Variance 0.083333 0.09 SS df MS F P-value F crit 0.25 0.083333 1.923077 0.179718 3.490295 0.52 12 0.043333 0.77 15 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Kết xử lí sau TN Lơ Lơ Lô ĐC 550 550 550.5 550.3 550 540.1 550.3 540.5 550 550.3 550.2 550.2 Groups Count Sum Average Variance 550 550.6 550 550 Lô 2200 550 Lô 2191 547.75 26.07 Lô 2201 550.25 0.043333 ĐC 2191 547.75 23.37667 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 22.6875 7.5625 0.611235 0.620542 3.490295 Within Groups 148.47 12 12.3725 Total 171.1575 15 Anova: Single Factor SUMMARY ANOVA Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn Phụ lục Kết tính tốn xử lý thống kê thí nghiệm dị ứng đường thở Kêt xử lí trước TN Di ứng đường thở Trước TN Anova: Single Factor Lô Lô Lô ĐC 40 40 40 40 40 40.2 40 40.2 Groups Count Sum Average Variance 40 39.8 40 40 Lô 200 40 40 40 40 39.8 Lô 200 40 0.02 40 40 40 40 Lô 200 40 ĐC 200 40 0.02 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 0 3.238872 Within Groups 0.16 16 0.01 Total 0.16 19 SUMMARY ANOVA Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Kết xử lí sau TN Di ứng đường thở sau TN Lô Lô Lô ĐC 43 43 42.8 43 42.8 43.1 43.2 43 43.2 42.9 43 42.3 Groups Count Sum Average Variance 43 42.7 43 42.8 Lô 215 43 0.02 43 42.3 43 42.9 Lô 214 42.8 0.1 Lô 215 43 0.02 ĐC 214 42.8 0.085 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 0.2 0.066667 1.185185 0.346689 3.238872 Within Groups 0.9 16 0.05625 Total 1.1 19 Anova: Single Factor SUMMARY ANOVA Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phụ lục 3: Đánh giá độc tính cấp chậm Trước thí nghiệm Lơ Lơ Lơ ĐC 29.4 30 30 30 29.7 30 30 30 29.6 30 30 30 30 29.6 29.7 29.6 Groups Count Sum Average Variance 29.3 30 30 30 29.4 267.6 29.73333 0.075 30 29.4 29.4 29.4 30 268 29.77778 0.071944 30 30 30 30 30 268 29.77778 0.081944 29.5 29.5 29.6 29.5 30 268 29.77778 0.071944 30 30 30 30 29.5 29.5 29.3 29.5 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 0.013333 0.004444 0.059095 0.980825 2.90112 Within Groups 2.406667 32 0.075208 Total 2.42 35 Anova: Single Factor SUMMARY ANOVA Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Sau thí nghiệm Độc tính cấp chậm sau thí nghiệm Lơ Lô2 Lô ĐC 30 30.2 30.1 30.1 30.1 30.2 30.1 30.1 30.1 30.1 30.2 30.1 Groups Count Sum Average Variance 30.1 30 30.1 30.1 Lô 10 301 30.1 0.006667 30 30.1 30.2 30.2 Lô 10 301 30.1 0.006667 30.2 30 30 30 Lô 10 301 30.1 0.006667 30.2 30.1 30.1 30.1 ĐC 10 301 30.1 0.004444 30 30 30 30 30.2 30.2 30.2 30.2 30.1 30.1 30 30.1 Anova: Single Factor SUMMARY ANOVA Source of Variation SS df MS F Pvalue Between Groups 1.11E-16 3.7E-17 6.06E-15 Within Groups 0.22 36 0.006111 Total 0.22 39 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn F crit 2.866266 Phụ lục 4: Đánh giá độc tính 90 ngày Trước thí nghiệm Lơ Lô Lô ĐC 30 30.2 30.1 30.1 30.1 30.2 30.1 30.1 Groups Count Sum Average Variance 30.1 30.1 30.2 30.1 Lô 10 300.9 30.09 0.005444 30.1 30 30.1 30.1 Lô 10 301 30.1 0.006667 30.2 30.1 30.2 30.2 Lô 10 301 30.1 0.006667 30 30 30 30 ĐC 10 301 30.1 0.004444 30.1 30.1 30.1 30.1 30 30 30 30 30.2 30.2 30.2 30.2 ANOVA 30.1 30.1 30 30.1 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 0.00075 0.00025 0.043062 0.987911 2.866266 Within Groups 0.209 36 0.005806 Total 0.20975 39 SUMMARY Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn Sau thí nghiệm Lơ1 Lơ Lô ĐC 30.2 30.2 30.1 30.2 30.1 30.2 30.1 30.1 30.2 30.1 30.2 30.2 Groups Count Sum Average Variance 30.1 30.1 30.2 30.1 Lô 10 301.5 30.15 0.002778 30.1 30.2 30.2 30.2 Lô 10 301.4 30.14 0.002667 30.2 30.1 30.1 30.1 Lô 10 301.5 30.15 0.002778 30.2 30.1 30.2 30.1 ĐC 10 301.4 30.14 0.002667 30.1 30.1 30.1 30.1 30.2 30.2 30.2 30.2 30.1 30.1 30.1 30.1 Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 0.001 0.000333 0.122449 0.946267 2.866266 Within Groups 0.098 36 0.002722 Total 0.099 39 Anova: Single Factor SUMMARY ANOVA Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ...    TỐNG THỊ MƠ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM MULTIENZYMES TỪ NẤM MỐC VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ AN TỒN CỦA CHÚNG DÙNG CHO CHĂN NI Chun ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC – VI SINH Mã... gian làm việc học tập Phịng thí nghiệm Bộ mơn Cơng nghệ Sinh học – Vi sinh tơi hồn thành cơng trình: ? ?Nghiên cứu quy trình cơng nghệ sản suất chế phẩmMultienzym từ nấm mốc đánh giá độ an tồn chúng. .. trộn enzyme thô từ chủng A niger ĐB106 enzyme thô từ chủng A oryzae NM1 60 3.4 Đánh giá độ an toàn chế phẩm enzyme multienzyme động vật 62 3.4.1 .Đánh giá cấp độ độc cấp tính