ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THỊ THU NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DỊCH CHIẾT ETHANOL – NƢỚC CỦA CÂY CỎ SỮA LÁ NHỎ THEO ĐỊNH HƢỚNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC ĐÀ NẴNG, NĂM 2017 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THỊ THU NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DỊCH CHIẾT ETHANOL – NƢỚC CỦA CÂY CỎ SỮA LÁ NHỎ THEO ĐỊNH HƢỚNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60.44.01.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS PHẠM VĂN VƢỢNG ĐÀ NẴNG, NĂM 2017 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thu MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Bố cục đề tài .3 CHƢƠNG TỔNG QUAN .4 1.1 VÀI NÉT VỀ ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN BỐ CÂY CỎ SỮA LÁ NHỎ 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CỎ SỮA LÁ NHỎ .7 1.2.1 Nghiên cứu Việt Nam 1.2.2 Nghiên cứu giới 12 1.3 NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CỎ SỮA LÁ NHỎ .16 1.3.1 Tác dụng hạ đƣờng huyết 16 1.3.2 Tác dụng giảm đau 17 1.3.3 Tác dụng kháng khuẩn, kháng virus, kháng nấm, kháng sinh, kháng viêm 17 1.3.4 Tác dụng chống oxy hóa, gốc tự 17 1.3.5 Tác dụng trị giun .18 1.3.6 Tác dụng lợi tiểu, nhuận tràng 18 1.4 CÔNG DỤNG CỦA CỎ SỮA LÁ NHỎ 18 1.5 MỘT SỐ DƢỢC LIỆU CÓ TÁC DỤNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT .19 CHƢƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Hố chất – dung mơi, thiết bị 21 2.1.3 Động vật thí nghiệm 22 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu .22 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.2.1 Xác định thông số hoá lý 23 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hoá học 25 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng hạ đƣờng huyết .27 2.3 PHƢƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH CÁC THƠNG SỐ HỐ LÝ .29 3.1.1 Độ ẩm .29 3.1.2 Độ tro toàn phần .29 3.1.3 Hàm lƣợng kim loại nặng 30 3.2 KẾT QUẢ THỬ TÁC DỤNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT CỦA CÂY CỎ SỮA LÁ NHỎ 31 3.2.1 Kết chiết xuất dƣợc liệu .31 3.2.2 Kết thử tác dụng hạ đƣờng huyết cỏ sữa nhỏ 32 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC 33 3.3.1 Định tính nhóm chất hữu cỏ sữa nhỏ 33 3.3.2 Kết định tính flavonoid phân đoạn chiết phản ứng hoá học 35 3.3.3 Xác định thành phần hoá học chất dễ bay cỏ sữa nhỏ dung môi hữu 36 3.3.4 Phân lập flavonoid từ cỏ sữa nhỏ 42 3.3.5 Nhận dạng hợp chất phân lập đƣợc 44 3.4 THẢO LUẬN .46 3.4.1 Về đối tƣợng nghiên cứu 46 3.4.2 Về thơng số hố lý cỏ sữa nhỏ 46 3.4.3 Về tác dụng hạ đƣờng huyết cỏ sữa nhỏ 48 3.4.4 Về thành phần hoá học cỏ sữa nhỏ 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN (bản sao) PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt AAS 13 Phƣơng pháp phổ hấp thhụ nguyên tử (Atomic Absorption Spectroscopy) BP Dƣợc điển Anh (British Pharmacopoeia) CC Sắc ký cột (Column Chromatography) C-NMR d D/C dd Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân carbon 13 (Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) doublet Dịch chiết doublet of doublet DĐVN Dƣợc điển Việt Nam DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Tranfer ĐTĐ Đái tháo đƣờng ESI – MS GC – MS Nội dung H-NMR m m/z MDA MS Phổ khối phun mù điện tử (Electron Spray – Spectrometry) Sắc khý khí – khối phổ (Gas Chromatography – Mas Spectrometry) Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectrometry) multiplet Tỷ lệ số khối/ điện tích ion Malonyldialdehyde Phổ khối (Mas Spectrometry) NAD Nicotinamide STZ Streptozotocin TCCS Ionization Mass Tiêu chuẩn sở TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) USP Dƣợc điển Hoa Kỳ (United States Pharmacopoeia)` DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu Tên bảng bảng 1.1 1.2 2.1 Sự khác cỏ sữa to (Euphorbia hirta L.) cỏ sữa nhỏ (Euphorbia thymifolia L.) đặc điểm thực vật Thành phần hóa học cỏ sữa nhỏ dịch chiết Hóa chất, dung mơi sử dụng q trình chiết xuất phân lập Trang 15 21 2.2 Thiết bị sử dụng trình chiết xuất phân lập 22 3.1 Kết xác định độ ẩm 29 3.2 Độ tro toàn phần cỏ sữa nhỏ 30 3.3 Hàm lƣợng kim loại nặng mẫu cỏ sữa nhỏ 30 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 Kết hiệu suất chiết cỏ sữa nhỏ dung môi EtOH-H2O Sự thay đổi đƣờng huyết lô chuột uống Euphorbia thymifolia L Kết định tính nhóm chất hữu cỏ sữa nhỏ Kết định tính flavonoid cao phân đoạn chiết Thành phần hoá học chất dễ bay cỏ sữa nhỏ dịch chiết n – hexane Thành phần hoá học chất dễ bay cỏ sữa nhỏ dịch chiết CH2Cl2 Thành phần hoá học chất dễ bay cỏ sữa nhỏ dịch chiết EtOAc Thành phần hoá học chất dễ bay cỏ sữa nhỏ dịch chiết nƣớc Số liệu phổ NMR hợp chất ET1 31 32 33 36 38 39 40 41 44 DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Cây cỏ sữa nhỏ (Euphorbia thymifolia L.) 1.2 Cây cỏ sữa to (Euphorbia hirta L.) 2.1 Cỏ sữa nhỏ xử lý 21 3.1 Sơ đồ chiết phân đoạn 37 3.2 Sơ đồ phân lập flavonoid tinh khiết 43 3.3 Cấu trúc hoá học hợp chất ET1 45 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày nay, theo thống kê Hiệp hội Đái tháo đƣờng Quốc tế, tính đến năm 2013, tồn giới có khoảng 382 triệu ngƣời mắc bệnh đái tháo đƣờng, số có xu hƣớng tăng lên gấp đơi vào năm 2035, chi phí điều trị dành cho bệnh đái tháo đƣờng nhóm bệnh nhân 20-79 tuổi giới đạt mức 548 tỷ USD [20] Hiện nay, thị trƣờng thuốc điều trị đái tháo đƣờng chủ yếu có nguồn gốc tổng hợp hóa dƣợc, việc nghiên cứu thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên đƣợc nhà khoa học quan tâm nghiên cứu nhằm tìm kiếm thuốc có tác dụng hỗ trợ cho bệnh nhân trình điều trị kéo dài, giảm tác dụng không mong muốn, đồng thời giảm chi phí điều trị Ở Việt Nam, cỏ sữa nhỏ (Euphorbia thymifolia L., họ Euphorbiaceae) mọc hoang khắp nơi, ƣa đất có sỏi, đá, thƣờng thấy kẽ gạch, sân xi măng, dọc đƣờng xe lửa có dải hịn đá vơi xanh Trên giới, cỏ sữa nhỏ mọc hoang số nƣớc nhƣ Bangladesh, Ấn Độ Theo y học cổ truyền, cỏ sữa nhỏ đƣợc sử dụng để chữa lỵ, trẻ em [13]; tăng huyết áp, bệnh lý tim mạch hội chứng khí hƣ; đái tháo đƣờng giảm đau… [32] Lá hạt cỏ sữa nhỏ đƣợc sử dụng chứng rối loạn đƣờng ruột trẻ em thuốc nhuận tràng [27] Đồng thời, hoạt tính kháng khuẩn cỏ sữa nhỏ đƣợc phát từ năm 1988 [25] Cây cỏ sữa nhỏ đƣợc nhà khoa học giới Việt Nam quan tâm nghiên cứu Theo Vũ Minh Trang, từ cặn chiết ethylacetate cỏ sữa nhỏ thu hái Hà Nội phân lập đƣợc chất: apigenin, quercetin, methyl gallate, acid gallic apigenin 7-O-β-D-glucopyranosid với acid palmitic βsitosterol [17] Bên cạnh đó, tác giả phân lập đƣợc số thành phần dipeptide glucoside từ cỏ sữa nhỏ, luteolin-7-O-β-Dglucopyranoside hợp chất có phần chiết nƣớc [18] Một số kết nghiên cứu sơ Việt Nam cho thấy cỏ sữa nhỏ có tác dụng hạ đƣờng huyết [28] đƣợc nhân dân sử dụng dƣới dạng nƣớc uống ngày [13] 75 70 65 60 55 50 17.64 49.51 49.34 49.17 49.00 48.83 48.66 48.49 73.27 72.14 72.03 71.90 ET1-MeOD-C13CPD 45 40 35 30 25 20 ppm ET1-MeOD-C13CPD &DEPT DEPT90 190 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 ppm 180 DEPT135 CH&CH3 CH2 190 C13CPD 190 ET1-MeOD-C13CPD &DEPT DEPT90 120 115 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 ppm 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 ppm 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 ppm 110 DEPT135 CH&CH3 CH2 120 115 C13CPD 120 115 File name: ET Solvent: MeOH MODE: ESI, M-H… Lab: Materials chemistry, Faculty of Chemistry, HUS-VNU 19 Le Thanh Tong, Hoan Kiem, Ha Noi Tel: 844.38.253.053; Fax: 844.38.241.140 Mail: Chem.vnu@.edu.vn C:\LTQ Orbitrap\ \T6\PA3_160621112409 MEOH 8/21/2016 5:05:04 PM PA3_160621112409 #121 RT: 1.14 AV: T: ITMS - c ESI Full m s [150.00-2000.00] Mass Spectrometter NL: 6.91E4 447.36 100 Thermo SCIENTIFIC company 95 Resolution: >60 000 Dt 90 Sensitivity: 10-14 85 Tandem: n >= 15 80 Mass Accuracy: