ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM - BÙI THỊ NGUYÊN NỮ NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ CỦA CÁC CHỦNG VI SINH VẬT SINH PHYTASE TRONG MỘT SỐ LOẠI ĐẤT TẠI HUYỆN HÒA VANG, THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH THÁI HỌC Đà Nẵng – Năm 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM - BÙI THỊ NGUYÊN NỮ NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ CỦA CÁC CHỦNG VI SINH VẬT SINH PHYTASE TRONG MỘT SỐ LOẠI ĐẤT TẠI HUYỆN HÒA VANG, THÀNH PHỐ ĐÀ NẴNG Chuyên ngành : SINH THÁI HỌC Mã số : 8420120 LUẬN VĂN THẠC SĨ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN HUY THUẦN PGS TS ĐỖ THU HÀ Đà Nẵng – Năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn BÙI THỊ NGUYÊN NỮ DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CFU : Colony Foming Unit (Đơn vị khuẩn lạc) CT : Công thức HSCC : Hệ sợi chất HSKS : Hệ sợi khí sinh MT : Mơi trường NM : Nấm mốc STT : Số thứ tự TB : Trung bình TP : Thành phố VK : Vi khuẩn VKTSHK : Vi khuẩn tổng số hiếu khí VSV : Vi sinh vật VSVHK : Vi sinh vật hiếu khí VSVTS : Vi sinh vật tổng số VSVTSHK : Vi sinh vật tổng số hiếu khí DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang 1.1 Phytase từ nguồn khác 12 2.1 Thành phần phản ứng PCR 26 2.2 Mã số trình tự 18S rARN số loài nấm mốc 28 Số lượng, thành phần chủng VSV sinh phytase đất 3.1 số xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (từ 30 tháng 03/2017 đến tháng 05/2017) Số lượng, thành phần chủng VSV sinh phytase đất 3.2 số xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (từ 31 tháng 06/2017 đến tháng 08/2017) 3.3 Số lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (tháng 03/2017) 34 Số lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số 3.4 xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (tháng 04/2017) Phụ lục Số lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số 3.5 xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (tháng 53/2017) Phụ lục Số lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số 3.6 xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (tháng 04/2017) Phụ lục Số lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số 3.7 xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (tháng 07/2017) 35 Số lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số 3.8 xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (tháng 08/2017) Phụ lục Số lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số 3.9 xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (tháng 09/2017) 36 Số lượng VSV sinh phytase theo thành phần giới đất 3.10 số xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng 37 Số hiệu Tên bảng bảng Trang Số lượng nấm môc sinh phytase theo thời gian (tháng) 3.11 số xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (x 104 39 CFU/g) Số lượng nấm mốc sinh phytase theo độ ẩm đất số xã 3.12 thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng 43 Khả sinh enzyme phytase số chủng NM VK 3.13 môi trường PSM có bổ sung CaCl2 47 Đặc điểm ni cấy hình thái chủng VK-2 sinh phytase 3.14 mạnh 52 Đặc điểm hình thái chủng nấm mốc NM-1, NM-4 sinh phytase 3.15 mạnh 53 Hoạt độ enzyme chủng MN-1, MN-4 VK -2 3.16 qua thời gian nuôi cấy 57 Chiều cao trung bình lúa qua cơng thức sau ngày 3.17 gieo trồng 62 DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Phản ứng xúc tác enzyme phytase 1.2 Bản đồ hành huyện Hịa Vang, thành phố Đà Nẵng 18 2.1 Chương trình chạy PCR 27 3.1 3.2 Một số chủng nấm mốc sinh phytase đất phân lập số xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng Một số chủng vi khuẩn sinh phytase đất phân lập số xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng 33 33 3.3 Động thái nấm mốc sinh phytase theo thời gian (tháng) 40 3.4 Động thái nấm mốc sinh phytase theo độ ẩm 44 3.5 Tỉ lệ % chủng vi khuẩn, nấm mốc có khả sinh phytase mạnh 48 3.6 Hai chủng vi khuẩn có khả sinh phytase mạnh 49 3.7 Bốn chủng nấm mốc có khả sinh phytase mạnh 49 3.8 3.9 3.10 3.11 3.12 Phân giải acid phytate chủng NM-1 NM-4 phân lập từ mẫu đất xã Hòa Tiến Hòa Châu Phân giải acid phytate chủng NM-6 NM-7 phân lập từ mẫu đất xã Hoà Khương Phân giải acid phytate chủng VK-2 VK-4 phân lập từ mẫu đất xã Hòa Châu Hòa Sơn Khuẩn lạc chủng VK2 môi trường LB sau ngày ni cấy Hình ảnh ống giống chủng VK2 sau ngày nuôi cấy 51 51 52 54 54 Chủng nấm mốc NM-1 nuôi cấy môi trường PDA 3.13 sau ngày nuôi cấy 55 3.14 Cơ quan sinh sản chủng nấm mốc NM-1 kính hiển vi 55 3.15 Chủng nấm mốc NM-4 nuôi cấy mơi trường PDA 56 Số hiệu Tên hình hình Trang Sau ngày nuôi cấy 3.16 3.17 3.18 3.19 3.20 Cơ quan sinh sản chủng nấm mốc NM-4 kính hiển vi Thu dịch lỏng ni cấy chủng tuyển chọn qua thời gian nuôi cấy Dịch nuôi cấy lỏng qua 120 nuôi cấy Kết phản ứng PCR nhân gen mã hóa18S rARN mẫu NM1 Kết phản ứng PCR nhân gen mã hóa18S rARN mẫu NM4 56 57 57 59 59 Giản đồ phả hệ chủng nấm NM1, NM4 số chủng nấm 3.21 khác dựa so sánh trình tự nucleotide gen mã hóa 18S 60 rARN 3.22 3.23 Các khay CT1, CT2, CT3, CT4 theo thứ tự từ 1, 2, 3, sau ngày gieo trồng Chiều cao ngẫu nhiên khay CT1, CT2, CT3, CT4 theo thứ tự từ 1, 2, 3, 63 63 M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -TCTAAGTGCTCTGGAACGG -AATGGAGAGGGTGAAAATCCCGTCTGGGATGGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTTGGGCAGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGACGGG -TCTAAGTGCCCTGGAACGGGCCGTCAGAGAGGGTGAGAATCCCGTCTGGGATGGG -TTCGTGGCCGCCG -GGGGCTCTCAGCCCCG -AATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACG TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA G-ACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA TGACGGAAGGGCACCACCAGGTGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGGGGAAA * : : : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 GTGTCCGCGTCCA -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGCCAG GTGCCCGTGCCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA GTGTCTGCGTCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA GTGTCCGCGCCCG -TGTGAAGCTCCTTCGA CGAGTCGA -GGCCCGCGCCCG -CCGGAGACACCACGAA CTCTGTCT CACATTGCGCCCC -CTGGTATTCCGGGGGG CATGCCTG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG CTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCATGATTTTATGG * ** : * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -TTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACC GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT GTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAATGGGTGGTAAATTTCATCT AAAGCTAAATACT GATCTAGTGAAAG -TCTGAGTTGATTGTATCCATCGTTT AAAACTTTCAACA TCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAG -CCCGGCT TGTGTGTTGGGCC GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG GTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAATTCCGATAACG : *: ** * * :.: : * M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -GGCCGGAGACCG-ATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCA -ATGGATCTCTTGGTTCGGCATCATGAAGAAGCAGCGAAATGCGATAACTA -CTCGTCCCCCGG -CTCCCGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGG -AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCTGGCTTCTGCTAGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCCGGCTTTTGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCTGGCTTTTGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA AACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCAGGCCGGCTTTCGCTGGTCGCCGGCTTCTTAGA * * : M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CTTTGAAAAGG -CCAAAGCGCACGTGAAATTGTTGAA CTTTGAAAAGAGAGTTAAACAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGCTTG CTTTGAAAAGAGAGTTAAACAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGTTTG CTTTGAAAAGAGAGTTAAAAAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGCTTG GTGTGAAATTGCGAATTCTGAAATCATCAGTCTTTGAAAG -CACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTTCGTCTTCCG GGGACTGTCAGTGTCTAACTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA GGGACTGTCAGCGTCTAGCTGACGGAAGTTTGAGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTA : * : : : : : M4 EF652478.1 KX664376.1 -CGACCAGACTCGGCCTCGGGGTTCAGCCAGCATTCGTGCTGGTGTACTTCCCCGGGGCCG CGACCAGACTCGCCCGCGGGGTTCAGCCGGCATTCGTGCCGGTGTACTTCCCCGTGGGCG AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 CGACCAGACTCGCCTCCAGGGTTCAGCCGGCATTCGTGCCGGTGTACTTCCCTGGGGGCG CCATTGGCCC CTCCGTAGGCCC GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTTTCCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTCACCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGATCCAGCGAGTTTTTCACCTTGGCCG GATGTTCTGGGCCGCACGCGCGCTACACTGACAGAGCCAGCGAGTTTTTTTCCTTGACCG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1cc AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -GGCCAGCG TCGGTTCGGGCGGCCGGTCAAAGGCCCCAGGAATGT GGCCAGCG TCGGTTTGGGCGGCCGGTCAAAGGCCCTCGGAATGT GGCCAGCG TCGGTTTGGGCGGCCGGTCAAAGGCTCCCGGAATGT CTGGTATG TCGGGGGGAATGCTCGCTCCAGCGCCATTG -C GGCCGGCG CCCG -GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG GAAGGTCTGGGTAATCTTGTGAAACTCTGTCGTGCTGGGGATAGAGCATTGCAATTATTG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -ATCGTCCTCCGGGACGTCTTATAGCCTGGGG TGCAATGCGGCCAGCCTGG ATCACCTCTCGGGGTGTCTTATAGCCGAGGG TGCAATGCGGCCTGCCTGG AGTGCCCTCCGGGGCACCTTATAGCCGGGAG TGCAATGCGGCCAGCCTGG TGCCTCATCCCAACCTGTGTGTGTGGGGGGG CGCTCCCCCTCTCTCCCG -CCGACGCATTTATTTGCAACTTGT TTTTTTCCAGGTGACCTCG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG CTCTTCAACGAGGAATACCTAGTAAGCGTGAGTCATCAGCTCGCGTTGATTACGTCCCTG M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 -ACCGAGGAACGCGCT TCGGCACGGACGCTGGCGTAATGGTTGCAAACGACC ACCGAGGAACGCGCT TCGGCTCGA -ACCGAGGAACGCGCT TCGGCACGGACGCTGGCATAATGGTTGCAAACGACC -GGGGAAGGGGCC CCAACACAAGGGCGGCCGCG GATCAGGTACGATAC CAAG CCCTTTGTACACACCGCCCGTC-CTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT CCCTTTGTACACACCGCCCGTCGCTACTACCGATTGAATGGCTTAGTGAGGTCTCCGGAT M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 TGGCTTTGGGGAGCC TGGCTTTGGGGAGCCGGCGACGGCATCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT TGGCTTTGGGGAGCCGGCAACGGCACCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT TGGCTTTGGGGAGCCGGCAACGGCACCCTATTGCTGAGAAGCTGATCAAACTTGGTCATT M4 EF652478.1 KX664376.1 AF272574.1 KP686456.1 M1 AY771607.1 AY771609.1 KU058587.1 KF830076.1 TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGTGAACCTGCGGAACC TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGT TAGAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGC - PHỤ LỤC 02 MỘT SỐ HÌNH ẢNH NƠI LẤY MẪU Hình 3.30 Khu vực lấy mẫu vào tháng 03/2017 xã Hòa Khương, huyện Hịa Vang, thành phố Đà Nẵng Hình 3.31 Khu vực lấy mẫu vào tháng 06/2017 xã Hòa Sơn, huyện Hịa Vang, thành phố Đà Nẵng Hình 3.32 Khu vực lấy mẫu vào tháng 04/2017 xã Hòa Châu, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng ... ? ?Nghiên cứu phân bố chủng vi sinh vật sinh phytase số loại đất huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng? ?? Mục tiêu đề tài Xác định phân bố chủng vi sinh vật sinh phytase số loại đất huyện Hòa Vang, thành. .. lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số 3.4 xã thuộc huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng (tháng 04/2017) Phụ lục Số lượng vi sinh vật sinh phytase phân bố đất số 3.5 xã thuộc huyện Hòa Vang, thành. .. thành phố Đà Nẵng + Nghiên cứu phân bố chủng vi sinh vật sinh phytase theo thành phần giới đất số xã thuộc huyện Hòa Vang – thành phố Đà Nẵng + Nghiên cứu động thái chủng vi sinh vật sinh phytase