BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG ĐÁNH GIÁ SỰ BIẾN ĐỔI HÌNH THÁI APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY GÂY BỞI DỊCH CHIẾT CÂY LƯỢC VÀNG Mã số: Chủ nhiệm đề tài: TS LÊ NGUYỄN UYÊN CHI Tp Hồ Chí Minh, 12/2018 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG ĐÁNH GIÁ SỰ BIẾN ĐỔI HÌNH THÁI APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY GÂY BỞI DỊCH CHIẾT CÂY LƯỢC VÀNG Mã số: Chủ nhiệm đề tài TS LÊ NGUYỄN UYÊN CHI Tp Hồ Chí Minh, 12/2018 DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA TS LÊ NGUYỄN UYÊN CHI Bộ môn Sinh học Khoa Khoa học Đại học Y dược Tp Hồ Chí Minh MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BIỂU THƠNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết 1.2 Mục tiêu 1.3 Cách tiếp cận 1.4 Đối tượng nghiên cứu 1.5 Phạm vi nghiên cứu 1.6 Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu Lược vàng 2.1.1 Đặc điểm phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Thành phần hóa học dược chất 2.1.4 Công dụng làm thuốc Lược vàng 13 2.2 Tình hình nghiên cứu tính kháng ung thư Lược vàng 14 2.3 Ứng dụng GFP nghiên cứu quan sát tế bào 15 2.3.1 Đặc điểm gfp 15 2.3.2 Gen gfp 16 2.3.3 Ứng dụng GFP 17 CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU – HÓA CHẤT - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU19 3.1 Vật liệu – Hóa chất 19 3.2 Phương pháp nghiên cứu 20 3.2.1 Thu mẫu 20 3.2.2 Thu nhận dịch chiết tổng 20 3.2.3 Nuôi cấy tế bào AGS 20 3.2.4 Tạo dòng tế bào AGS mang gen gfp 20 3.2.5 Thử nghiệm độc tính tế bào 21 3.2.6 Chụp ảnh hiển vi huỳnh quang 21 3.2.7 Tách chiết DNA gen 21 3.2.8 Điện di DNA 22 3.2.9 Xử lý số liệu 22 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 4.1 Thu nhận dịch chiết Lược vàng 23 4.2 Độc tính dịch chiết Lược vàng tế bào AGS 24 4.3 Biến đổi hình thái apoptosis tế bào AGS-gfp gây dịch chiết Lược vàng 27 4.4 Phân tích phân đoạn nhiễm sắc thể apoptosis 30 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATCC American Type Culture Collection bp base pair DNA Deoxyribonucleic acid DAPI 4′,6-diamidino-2-phenylindole EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid FBS Fetal Bovine Serum kb kilobase kDa kiloDalton KHV kính hiển vi KHVHQ kính hiển vi huỳnh quang kV kiloVolt LB Luria Bertani ms milisecond (mili giây) PBS Phosphate Buffer Sodium RNA Ribonucleic acid Rpm round per minute (vòng/phút) siRNA small interfeing RNA TAE Tris Acetate EDTA UV Ultraviolet DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Hình thái Lược vàng Callisia fragrans Hình Ba bước apoptosis 14 Hình Cắn khơ thu từ C fragrans 23 Hình Quan sát tế bào nuôi cấy sau 24 48 giếng ni cấy 26 Hình 5: Tế bào AGS biểu gen gfp 27 Hình Biến đổi hình thái tế bào AGS kiểu apoptosis tác động nồng độ dịch chiết CT CL khác 28 Hình Các dạng hình thái tế bào AGS kiểu apoptosis 29 Hình Sự hình thành phân mảnh DNA tế bào AGS 30 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Hiệu suất thu cắn khô từ C fragrans 23 Bảng Hiệu suất thu cắn khô từ thân C fragrans 23 Bảng Tỷ lệ tế bào sống ủ 48 với nồng độ CL 24 Bảng Tỷ lệ tế bào sống ủ 48 với nồng độ CT 24 THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG Thông tin chung: － Tên đề tài: ĐÁNH GIÁ SỰ BIẾN ĐỔI HÌNH THÁI APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY GÂY BỞI DỊCH CHIẾT CÂY LƯỢC VÀNG － Mã số: － Chủ nhiệm đề tài: TS LÊ NGUYỄN UYÊN CHI － Điện thoại: 01216395936 Email: chile@ump.edu.vn － Đơn vị quản lý: khoa Khoa học bản, môn Sinh học － Thời gian thực hiện: 9/2016 - 9/2018 Mục tiêu: Đánh giá khả gây apoptosis dòng tế bào ung thư dày người dịch chiết từ Lược vàng (Callisia fragrans) Nội dung chính: － Tạo dịng tế bào AGS-gfp phát huỳnh quang ổn định － Thu nhận dịch chiết thân C fragrans － Đánh giá độc tính dịch chiết C fragrans dòng tế bào ung thư dày － Đánh giá khả gây chết apoptosis dịch chiết tế bào AGS-gfp qua hai tiêu biến đổi hình thái tế bào phân đoạn DNA Kết đạt (khoa học, đào tạo, kinh tế-xã hội, ứng dụng, ): － Về đào tạo (số lượng, chuyên ngành, trình độ…): － Cơng bố tạp chí nước quốc tế (tên báo, tên tạp chí, năm xuất bản): － Sách/chương sách (Tên sách/chương sách, năm xuất bản): － Patent, Giải pháp hữu ích (tên; trình trạng nộp đơn giải pháp chưa đăng ký sở hữu trí tuệ; mã số, ngày cấp, thời gian bảo hộ patent giải pháp đăng ký sở hữu trí tuệ): Hiệu kinh tế - xã hội đề tài mang lại: － Kết nghiên cứu chuyển giao:  Báo cáo tổng kết nghiên cứu khả ứng dụng dược chất C fragrans để ức chế tế bào ung thư dày  Đơn vị nhận chuyển giao: Đại học Y dược Tp.HCM  Giá trị chuyển giao: kết nghiên cứu làm sở cho thử nghiệm in vivo tiếp theo; làm tài liệu tham khảo cho sinh viên, nghiên cứu viên ngành dược liệu － Phạm vi địa ứng dụng kết nghiên cứu:  Đơn vị ứng dụng kết nghiên cứu: môn Sinh học, Đại học Y dược Tp.HCM  Bài giảng trích dẫn kết nghiên cứu giảng dạy: Cái chết tế bào độ gốc 10 mg/ml để thử tế bào Lọc qua màng 0,2 μm Dung dịch gốc bảo quản -20oC 4.2 ĐỘC TÍNH CỦA DỊCH CHIẾT LƯỢC VÀNG TRÊN TẾ BÀO AGS 5x105 tế bào AGS nạp vào giếng đĩa nuôi giếng Các nồng độ dịch chiết (CL) thân (CT) C fragrans gồm 100, 300 1000 μg/ml ủ với tế bào 48 Số lượng tế bào sống ghi nhận bảng Bảng Tỷ lệ tế bào sống ủ 48 với nồng độ CL Mẫu (-) Nồng độ (μg/ml) CL 100 300 1000 Số tế bào sống (x106) 1,340±0,087 1,280±0,087 1,120±0,072 1,053±0,042 Tỷ lệ tế bào sống (%) 100 95,52 83,58 78,61 Bảng Tỷ lệ tế bào sống ủ 48 với nồng độ CT Mẫu (-) Nồng độ (μg/ml) CT 100 300 1000 Số tế bào sống (x106) 1,507±0,083 1,467±0,101 1,307±0,083 1,227±0,115 Tỷ lệ tế bào sống (%) 100 97.35 86.73 81.42 Số lượng tế bào sống sót nghiệm thức phản ánh phát triển, sinh sản tồn tế bào ảnh hưởng dịch chiết CL CT Theo kết thu được, hai dịch chiết có hoạt tính ức chế sinh trưởng gây độc cho 24 tế bào, dẫn đến số tế bào nghiệm thức có tăng so với lượng nạp vào ban đầu (5x105) ln so với mẫu đối chứng (-), dẫn đến tỷ lệ % tế bào giếng thấp Nồng độ gây độc (chết) tế bào đáng kể dịch chiết CL CT ghi nhận ngưỡng từ 300 - 1000 μg/ml Dịch chiết CT gây độc so với dịch chiết CL Phương pháp thu nhận dịch chiết nước nghiên cứu chưa đem lại hiệu gây độc tế bào ung thư cao mong muốn, biểu tỷ lệ tế bào sống cao mức 78,64% 81,42% ủ với CL CT 1000 μg/ml Sau ủ 24 gờ, theo quan sát kính hiển vi soi ngược cho thấy mật độ tế bào giếng bình thường, chưa có tượng chết tế bào bong tróc khỏi giếng, nhiên sau 48 giờ, giếng có ủ dịch chiết xuất nhiều tế bào lơ lửng, co rúm (Hình 4), chứng tỏ phần tế bào bị chết độc tính dịch chiết, số lượng tế bào chết không cao 25 Hình Quan sát tế bào ni cấy sau 24 48 giếng nuôi cấy Hình ảnh chụp KHV soi ngược có độ phóng đại x200 Khi ủ với dịch chiết, số tế bào chết không nhiều, nhiên số lượng tế bào sống đếm thấp nhiều so với đối chứng âm, chứng tỏ dịch chiết C fragrans ức chế sinh trưởng tế bào xảy q trình apoptosis Vì chúng tơi cần thực phân tích chết apoptosis tế bào thí nghiệm 26 4.3 BIẾN ĐỔI HÌNH THÁI APOPTOSIS TRÊN TẾ BÀO AGS-GFP GÂY BỞI DỊCH CHIẾT LƯỢC VÀNG Tế bào AGS-gfp chuyển gen chọn lọc có khả biểu gen gfp bền vững (Hình 5) Nguồn tế bào sử dụng để theo dõi thay đổi có ảnh hưởng dịch chiết Lược vàng Hình 5: Tế bào AGS biểu gen gfp, chụp KHVHQ với kính lọc sáng (cột trái) kính lọc huỳnh quang (cột phải) Dịch chiết thân C fragrans có nồng độ 100, 300, 1000 μg/ml ủ với 5x105 tế bào AGS-gfp giếng đĩa nuôi giếng Sau 48 giờ, giếng tế bào quan sát KHVHQ, cho thấy tế bào AGS-gfp chịu ảnh hưởng apoptosis phụ thuộc vào nồng độ dịch chiết, biểu qua mật độ tế bào vi trường thay đổi đặc điểm hình thái tế bào (Hình 6) Ở giếng ủ dịch chiết CT có tế bào mang hình thái apoptosis, giếng ủ với CL 100, 300, 1000 μg/ml có nhiều tế bào chết 27 Hình Biến đổi hình thái tế bào AGS kiểu apoptosis tác động nồng độ dịch chiết CT CL khác Ảnh chụp KHVHQ vật kính x40 28 Hình thái tế bào biến đổi qua giai đoạn apoptosis từ sớm đến muộn, ghi nhận rõ hình Tế bào ủ với dịch chiết CL CT bắt đẩu co rúm, màng phồng rộp, tạo sợi apoptopodia phân mảnh thành thể apoptosome Ở cách chụp ảnh thấy hình ảnh nhân đặc hay nhân phân mảnh, lẽ protein GFP tổng hợp diện ngồi nhân Muốn quan sát nhân cần nhuộm nhân với chất khác DAPI, Hoeschst 33342 Hình Các dạng hình thái tế bào AGS kiểu apoptosis Ảnh chụp KHVHQ vật kính x40 với kính lọc sáng (cột trái) huỳnh quang (cột phải) 29 4.4 PHÂN TÍCH SỰ PHÂN ĐOẠN NHIỄM SẮC THỂ DO APOPTOSIS Sự thay đổi apoptosis tế bào AGS xác định với việc phân mảnh DNA tế bào theo thời gian, biểu qua kết điện di DNA gel agarose (Hình 8) Tế bào ủ với CT CL có nồng độ 300 μg/ml Đối chứng (-) nước cất Thời gian ủ 48 DNA tổng số điện di phân tách gel agarose 1,8% Sự phân mảnh DNA quan sát thấy rõ mẫu ủ với dịch chiết CL 300 μg/ml, khó thấy mẫu ủ với CT không thấy mẫu đối chứng (-) Hình Sự hình thành phân mảnh DNA tế bào AGS Th: thang chuẩn DNA 1kb; CL: dịch chiết lá; CT: dịch chiết thân Tiến trình apoptosis điều khiển nhiều enzyme caspase, gồm caspase khởi động caspase phân giải protein Các caspase khởi động apoptosis theo đường nội bào qua ty thể (caspase-9) đường ngoại bào qua thụ thể màng (caspase-8) Trong hai đường, caspase-3 hoạt hóa để kích hoạt enzyme poly(ADP)-ribose polymerase (PARP) xúc 30 tác phân mảnh DNA Sự gia tăng hoạt động caspase-3 PARP mục tiêu cần nghiên cứu để xác định diễn tiến apoptosis tế bào chịu tác động dich chiết C fragrans Các kết nghiên cứu cho thấy khả ứng dụng Lược vàng C fragrans nguồn dược chất đóng góp vào cơng tác điều chế thuốc kháng ung thư dày cách thúc đẩy trình apoptosis ức chế phát triển tế bào ung thư Các cơng trình nghiên cứu trước xác định Lược vàng C fragrans có chứa số hoạt chất quan trọng anthraquinon (aloe-emodin), scopoletin, acid gallic, kaempferol, v.v… [37-39] thúc đẩy tiến trình gây apoptosis cho tế bào ung thư [5, 20, 22, 24, 25, 40, 47] Hàm lượng hoạt chất không nhiều nên cần có phương thức tách chiết hiệu đạt độ tinh cao để sử dụng an toàn 31 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Phương pháp quan sát đếm số lượng tế bào cho thấy hai dịch chiết nước từ thân C fragrans cho hiệu gây độc tế bào AGS tỷ lệ tế bào chết không cao Dịch chiết gây ức chế tăng sinh số lượng tế bào nuôi cấy 48 khảo sát Dịch chiết nước từ C fragrans có hoạt tính gây độc ức chế tế bào AGS cao dịch chiết từ thân Nồng độ ức chế hiệu từ 300 µg/ml Dịch chiết nước từ C fragrans có hoạt tính gây apoptosis tế bào AGS, biểu qua biến đổi hình thái tế bào phân mảnh DNA Hoạt tính dịch chiết hiệu dịch chiết thân Việc sử dụng dòng tế bào AGS biểu gen gfp ổn định tiện lợi cho việc quan sát hình thái tế bào nhanh bị giới hạn việc quan sát nhân tế bào KIẾN NGHỊ - Thay đổi phương pháp chiết xuất hoạt chất hiệu (methanol, ethanol, …) độc - Thực thử nghiệm độc tính tế bào với kit (như MTT assay) kỹ thuật flow cytometry - Chứng minh thêm khả ức chế phân bào qua đánh giá biểu hoạt tính protein cyclin, CDKs, chất kìm hãm CDK - Chứng minh chế gây apoptosis qua hoạt động enzyme caspase-3, caspase-7, gia tăng poly(ADP)-ribose polymerase, kéo dài thời gian sub-G1 phase,… - Khảo sát hiệu dòng tế bào bình thường dịng tế bào ung thư khác (nếu có) 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn Sinh học – ĐHYD TpHCM (2017) Sinh học tế bào Di truyền học NXB y học Chalfie M, Tu Y, Euskirchen G, Ward WW, Prasher DC (1994) Green fluorescent protein as a marker for gen expression Science (Wash DC), 263(5148):802-805 Chen SH, Lin KY, Chang CC, Fang CL, Lin CP (2007), Aloe-emodin-induced apoptosis in human gastric carcinoma cells Food Chem Toxicol, 45(11): 2296-303 Chernenko TV, Glushenkova AI, Redzhepov D (2007) Chemical investigation of Callisia fragrans Chemistry of natural compounds, 43(3), 253-255 Choi EJ, Ahn WS (2008) Kaempferol induced the apoptosis via cell cycle arrest in human breast cancer MDA-MB-453 cells Nutr Res Pract Winter, 2(4): 322-5 Choi KC, Chung WT, Kwon JK, Yu JY, Jang YS, Park SM, Lee SY, Lee JC (2010) Inhibitory effects of quercetin on aflatoxin B(1)-induced hepatic damage in mice Food Chem Toxicol Chondrogianni N, Kapeta S, Chinou I, Vassilatou K, Papassideri I, Gonos ES (2010) Anti-ageing and rejuvenating effects of quercetin Exp Gerontol Chu kỳ Nam, Hoàng Văn Quốc Chương, Trần Linh Thước (2005) Tạo dòng biểu mini-proinsulin người tái tổ hợp Escherichia coli Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 3(2): 155-160 Chudakov DM, Lukyanov S, Lukyanov KA (2005) Fluorescent proteins as a toolkit for in vivo imaging Trends in Biotechnology, 23(12): 605–13 10 Đỗ Thị Ngọc Hân (2006) Chuyển gen gfp vào tế bào vi khuẩn Pseudomonas fluorescens phương pháp tiếp hợp ba thành phần Luận văn kỹ sư Công nghệ sinh học, Đại học Nông Lâm TpHCM 33 11 Ehrenberg M (2008) The green fluorescent protein: discovery, expression and development Scientific background on the Nobel Prize in Chemistry The Royal Swedish Academy of Science 12 Garcia-Mediavilla V, Crespo I, Collado PS, Esteller A, Sánchez-Campos S, Tón MJ, González-Gallego J (2007) The anti-inflammatory flavones quercetin and kaempferol cause inhibition of inducible nitric oxide synthase, cyclooxygenase-2 and reactive C-protein, and down-regulation of the nuclear factor kappaB pathway in Chang Liver cells Eur J Pharmacol, 557(2-3): 221-9 13 Guo J, Xiao B, Zhang S, Liu D, Liao Y, Sun Q (2007) Growth inhibitory effects of gastric cancer cells with an increase in S phase and alkaline phosphatase activity repression by aloe-emodin Cancer Biol Ther, 6(1): 85-8 14 Heim R, Cubitt AB, Tsien RY (1995) Improvement of green fluorescent protein by site-directed mutations Nature; 373: 663-664 15 Hoàng Lê Tuấn Anh, Đan Thị Thúy Hằng, Bùi Hữu Tài, Nguyễn Xuân Nhiệm, Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm, Nguyễn Văn Hùng (2013) Nghiên cứu thành phần hóa học thân lược vàng Callisia fragrans (Lindl.) Woods Phần I: phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ dịch chiết metanol thân Tạp chí Hóa học 16 Hoffman RM (2002) In vivo imaging of metastatic cancer with fluorescent proteins Cell Death and Differentiation, 9: 786 – 789 17 Hoffman RM (2015) Application of GFP imaging in cancer Lab Invest, 95(4): 432–452 18 Inoue M, Suzuki R, Koide T, Sakaguchi N, Ogihara Y, Yabu Y (1994), Antioxidant, gallic acid, induces apoptosis in HL-60RG cells Biochem Biophys Res Commun, 204(2): 898-904 19 Kouros-Mehr H, Bechis SK, Slorach EM, Littlepage LE, Egeblad M, Ewald AJ, Pai SY, Ho IC, Werb Z (2008) GATA-3 links tumor differentiation and dissemination in a luminal breast cancer model Cancer Cell, 13(2): 141–52 34 20 Kuo PL, Lin TC, Lin CC (2002) The antiproliferative activity of aloe-emodin is through p53-dependent and p21-dependent apoptotic pathway in human hepatoma cell lines Life Sci, 71(16): 1879-92 21 Lee EJ, Ji GE, Sung MK (2010), Quercetin and kaempferol suppress immunoglobulin E-mediated allergic inflammation in RBL-2H3 and Caco-2 cells Inflamm Res 22 Leung HW, Lin CJ, Hour MJ, Yang WH, Wang MY, Lee HZ (2007) Kaempferol induces apoptosis in human lung non-small carcinoma cells accompanied by an induction of antioxidant enzymes Food Chem Toxicol, 45(10): 2005-13 23 Lin CW, Wu CF, Hsiao NW, Chang CY, Li SW, Wan L, Lin YJ, Lin WY (2008), Aloe-emodin is an interferon-inducing agent with antiviral activity against Japanese encephalitis virus and enterovirus 71 Int J Antimicrob Agents, 32(4): 355-9 24 Liu XL, Zhang L, Fu XL, Chen K, Qian BC (2001) Effect of scopoletin on PC3 cell proliferation and apoptosis Acta Pharmacol Sin, 22(10): 929-33 25 Lo C, Lai TY, Yang JH, Yang JS, Ma YS, Weng SW, Chen YY, Lin JG, Chung JG (2010) Gallic acid induces apoptosis in A375.S2 human melanoma cells through caspase-dependent and -independent pathways Int J Oncol, 37(2): 377-85 26 Manuele MG, Ferraro G, Barreiro Arcos ML, López P, Cremaschi G, Anesini C (2006) Comparative immunomodulatory effect of scopoletin on tumoral and normal lymphocytes Life Sci, 79(21): 2043-8 27 Min JJ, Le UN, Moon SM, Heo YJ, Song HC, Bom HS, Kim YS (2004) Introduction of optical reporter gen into cancer and immune cells using lentiviral vector Proceedings of the Korean Society Nuclear Medicine Autumn Meeting, p 570 28 Mulabagal V, Shih-hua F, Chan Z, Hsin-sheng T (2006) Modulation of Activated Murine Peritoneal Macrophages Functions by Emodin, Aloe-emodin 35 and Barbaloin Isolated from Aloe barbadensis Journal of Food and Drug Analysis, 14(1): 7-11 29 Murakami A, Ashida H, Terao J (2008) Multitargeted cancer prevention by quercetin Cancer Lett, 269(2): 315-25 30 Mylonis I, Lakka A, Tsakalof A, Simos G (2010) The dietary flavonoid kaempferol effectively inhibits HIF-1 activity and hepatoma cancer cell viability under hypoxic conditions Biochem Biophys Res Commun, 398(1): 74-8 31 Nguyễn Đình Cường, Nguyễn Thùy Hiền, Lương Thị Thu Hường, Trần Thị Phương Liên, Nguyễn Huy Hoàng, Phan Văn Chi, Nơng Văn Hải (2003) Biểu gen mã hóa protein bất hoạt ribosome mướp đắng vi khuẩn Escherichia coli Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 1(4): 451-460 32 Nguyễn Hải Hà, Lê Thị Thu Hiền, Nông Văn Hải Biểu protein huỳnh quang xanh (GFP) tế bào động vật có vú ni cấy (2009) Tạp chí Công nghệ Sinh học, 7(3): 313-318 33 Nguyễn Minh Khởi, Trịnh Thị Điệp, Nguyễn Trọng Thông, Phạm Thị Vân Anh, Đỗ Thị Phương, Phạm Nguyệt Hằng, Nguyễn Thị Phượng, Phương Thiện Thương, Nguyễn Trang Thúy Hoàng Thị Diệu Hương (2011) Nghiên cứu độc tính tác dụng sinh học Lược Vàng Cơng trình nghiên cứu khoa học Viện Dược liệu 2006-2011, NXB Khoa học Kỹ thuật, trang 233-241 34 Nguyễn Thị Minh Hằng, Nguyễn Thị Tú Oanh, Cao Thị Huệ, Hà Thị Thoa, Trần Hữu Giáp, Lê Nguyễn Thành, Châu Văn Minh, Nguyễn Văn Hùng (2013) Nghiên cứu thành phần hóa học chồi nhánh lược vàng Callisia fragrans (Lindl.) Woods Phần I: Một số ecdysteroit từ chồi nhánh Tạp chí Hóa học 35 Nguyễn Thị Minh Hằng, Tô Hải Tùng, Nguyễn Thị Tú Oanh, Cao Thị Huệ, Lê Nguyễn Thành, Nguyễn Văn Hùng (2016) Nghiên cứu khả kháng u lược vàng (Callisia fragrans (Lindl.) Woods) Tạp chí Dược học, 56 (10) 36 Nikolaeva IG, Nikolaeva GG (2009), Aminoacids and trace elements from Callisia fragrans Chemistry of natural compounds, 45(6): 939-940 36 37 Olennikov DN, Ibragimov TA, Zilficarov IN, Chelombitko VA (2008) Chemical composition of Callisia fragrans juice, Phenolic compounds Chemistry of natural compounds, 44(6): 627-628 38 Olennikov DN, Zilficarov IN, Toronova AA, Ibragimov TA (2008), Chemical composition of Callisia fragrans juice and it’s antioxydant activity in vitro Chemistry of natural compounds, 44(4): 95-100 39 Olennikov DN, Nazarova A, Rokhin AV, Ibragimov TA, Zilfikarov IN (2010) Chemical composition of Callisia fragrans juice II Carbohydrate Chemistry of natural compounds, 46(2): 273-275 40 Pecere T, Gazzola MV, Mucignat C, Parolin C, Vecchia FD, Cavaggioni A, Basso G, Diaspro A, Salvato B, Carli M, Palù G (2000) Aloe-emodin is a new type of anticancer agent with selective activity against neuroectodermal tumors Cancer Res, 60(11): 2800-4 41 Phạm Thanh Bình, Hà Mạnh Tuấn, Trần Thị Hồng Hạnh, Nguyễn Tiến Đạt, Châu Văn Minh, Nguyễn Văn Hùng (2013) Nghiên cứu thành phần hóa học lược vàng Callisia fragrans (Lindl.) Woods Phần I: Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất megastigmane amide từ Lược vàng Tạp chí Hóa học 42 Rasool MK, Sabina EP, Ramya SR, Preety P, Patel S, Mandal N, Mishra PP, Samuel J (2010) Hepatoprotective and antioxidant effects of gallic acid in paracetamol-induced liver damage in mice J Pharm Pharmacol, 62(5): 638-43 43 Tixeira R., Caruso S., Paone S et al (2017) Defining the morphologic features and products of cell disassembly during apoptosis Apoptosis, 22(3): 475-477 44 Tran Manh Hung, Nguyen Hai Đang, Nguyen Tien Dat (2014) Methanol extract from Vietnamese Caesalpinia sappan induces apoptosis in HeLa cells Bio Res, 47(1):20 37 45 Trịnh Thị Điệp, Đỗ Thị Phương, Nguyễn Kim Phượng, Nguyễn Minh Khởi (2008) Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Lược Vàng Callisia fragrans (Lindl.) Woods Tạp chí Dược liệu, 13(6): 276-279 46 Vásquez-Garzón VR, Arellanes-Robledo J, García-Román R, Aparicio-Rautista DI, Villa-Treviño S (2009) Inhibition of reactive oxygen species and preneoplastic lesions by quercetin through an antioxidant defense mechanism Free Radic Res, 43(2): 128-37 47 You BR, Moon HJ, Han YH, Park WH (2010) Gallic acid inhibits the growth of HeLa cervical cancer cells via apoptosis and/or necrosis Food Chem Toxicol, 48(5): 1334-40 48 https://www.nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/2008/illpres.ht ml 49 http://www.tuvankhoe.com/suc-khoe.html 50 http://vast.ac.vn/component/detai/?view=detai&id=824 51 http://www.vusta.vn/vi/news/Thong-tin-Su-kien-Thanh-tuu-KH-CN/Lan-dautien-o-Viet-Nam-Chuyen-gen-thanh-cong-tao-ra-ca-phat-sang-20920.html 38 ... fragrans) dòng tế bào ung thư dày người với đánh giá biến đổi hình thái apoptosis tế bào ung thư 1.2 MỤC TIÊU Đánh giá khả gây apoptosis dòng tế bào ung thư dày người dịch chiết từ Lược vàng (Callisia... nhận dịch chiết Lược vàng 23 4.2 Độc tính dịch chiết Lược vàng tế bào AGS 24 4.3 Biến đổi hình thái apoptosis tế bào AGS-gfp gây dịch chiết Lược vàng 27 4.4 Phân tích phân đoạn nhiễm sắc thể apoptosis. .. thân C fragrans － Đánh giá độc tính dịch chiết C fragrans dòng tế bào ung thư dày － Đánh giá khả gây chết apoptosis dịch chiết tế bào AGS-gfp qua hai tiêu biến đổi hình thái tế bào phân đoạn DNA