ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH MƠI TRƢỜNG  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN NI CẤY ĐẾN Q TRÌNH BIỂU HIỆN CỦA β-MANNANASE TRONG ESCHERICHIA COLI BL21 HUỲNH THỊ NGỌC LAN Đà Nẵng, năm 2020 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA SINH MƠI TRƢỜNG  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN QUÁ TRÌNH BIỂU HIỆN CỦA β-MANNANASE TRONG ESCHERICHIA COLI BL21 Ngành: Cơng nghệ sinh học Khóa: 2016-2020 Sinh viên: Huỳnh Thị Ngọc Lan Ngƣời hƣớng dẫn: ThS Lê Vũ Khánh Trang Đà Nẵng, năm 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan liệu trình bày khóa luận trung thực Đây kết nghiên cứu chƣa đƣợc công bố cơng trình khác trƣớc Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm vi phạm quy định đạo đức khoa học Đà Nẵng, tháng năm 2020 Sinh viên thực Huỳnh Thị Ngọc Lan i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến ThS Lê Vũ Khánh Trang trực tiếp hƣớng dẫn, bảo tận tình tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Ban Chủ nhiệm Khoa Sinh – Môi trƣờng, Trƣờng Đại học Sƣ phạm – Đại học Đà Nẵng thầy cô môn Công nghệ Sinh học tạo môi trƣờng thuận lợi, cung cấp đầy đủ trang thiết bị, dụng cụ cho thực đề tài cách thuận tiện Sau cùng, xin cảm ơn ủng hộ, giúp đỡ từ phía gia đình bạn bè suốt trình thực đề tài Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Chúc tất ngƣời sức khỏe thành đạt Đà Nẵng, tháng năm 2020 Sinh viên thực Huỳnh Thị Ngọc Lan ii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI MỤC TIÊU Ý NGHĨA KHOA HỌC 3.1 Ý nghĩa lý luận 3.2 Ý nghĩa thực tiễn NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ MANNANASE 1.1.1 Mannanase 1.1.2 Ứng dụng Mannanase 1.3 CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH BIỂU HIỆN ENZYME 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU 10 1.4.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 10 1.4.2 Tình hình nghiên cứu giới 10 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 VẬT LIỆU 12 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.2.1 Bố trí thí nghiệm 12 2.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 12 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 3.1 SỰ SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN E COLI WT VÀ E.COLI BL21/PBAD3014MANB THEO THỜI GIAN 17 3.2 ẢNH HƢỞNG CỦA MẬT ĐỘ TẾ BÀO ĐẾN SỰ BIỂU HIỆN CỦA MANNANASE 18 iii 3.3 ẢNH HƢỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CHẤT CẢM ỨNG ĐẾN SỰ BIỂU HIỆN CỦA MANNANASE 19 3.4 ẢNH HƢỞNG CỦA THỜI ĐIỂM THU TẾ BÀO ĐẾN SỰ BIỂU HIỆN CỦA MANNANASE 20 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO 24 PHỤ LỤC 30 iv DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT E.coli WT Escherichia coli Wild type E.coli Escherichia coli LB Luria Bertani LBG Locust bean gum PBS Phosphate Buffered Saline SD Standard Deviatio OD Optical Density MOS Mannan oligosacchride v DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng Tên bảng Trang 3.1 Hoạt độ enzyme điểm thời gian bổ sung chất cảm ứng 18 3.2 Hoạt độ enzyme nồng chất cảm ứng 20 3.3 Hoạt độ enzyme điểm thời gian thu tế bào 21 vi DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Tên hình Trang 1.1 Cấu trúc khơng gian mannanase 1.2 Cấu trúc mannan hợp chất mannan 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 12 2.1 Mối tƣơng quan OD mật độ tế bào E.coli BL21/pBAD3014 14 2.2 Mối tƣơng quan OD mật độ tế bào E.coli WT 14 3.1 Đƣờng cong sinh trƣởng E.coli WT E.coli BL21/pBAD3014 ManB 17 3.2 Tốc độ tăng trƣởng E.coli WT E.coli BL21/pBAD3014 ManB 18 3.3 Ảnh hƣởng thời điểm bổ sung chất cảm ứng đến biểu enzyme mannanase 19 3.4 Ảnh hƣởng nồng độ chất cảm ứng đến biểu enzyme mannanase 20 3.5 Ảnh hƣởng thời điểm thu tế bào đến biểu enzyme mannanase 21 vii TÓM TẮT Mannan endo-1,4-beta-mannosidase hay 1,4-β-D-mannanase (EC 3.2.1.78) (tên thƣờng gọi β-mannanase), enzyme nội phân có khả xúc tác phân cắt ngẫu nhiên liên kết β-1,4-mannosidic chuỗi chất β-1,4-mannans, glucomannans, galactomannans lƣợng nhỏ mannose, glucose galactose Nguồn thu β-mannanase phong phú từ vi khuẩn, nấm mốc, nấm men, thực vật trùng β-mannanase có nhiều ứng dụng đặc biệt ngành công nghiệp sản xuất cà phê, sản xuất nƣớc quả; công nghiệp sản xuất giấy bột giấy; công nghiệp dƣợc phẩm; chế biến thức ăn chăn ni dầu khí Việc thu enzyme β-mannanase từ nguồn tự nhiên không đủ cung cấp cho nhu cầu sử dụng nên β-mannanase tái tổ hợp nhằm tăng sản lƣợng enzyme đƣợc quan tâm nghiên cứu Trong nghiên cứu trƣớc, nhóm nghiên cứu biến nạp thành cơng vecto pBAD3014ManB vào E.coli BL21 kiểm tra lại có mặt protein Vì vậy, nghiên cứu đƣợc thực để khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình biểu mannanase, nhằm xây dựng mơ hình tối ƣu hóa điều kiện ni cấy, tăng cƣờng khả sinh tổng hợp mannanase Qua khảo sát thu nhận đƣợc hoạt độ enzyme cao điều kiện sau: thời gian bổ sung chất cảm ứng giá trị OD600nm= 0,6 nồng độ chất cảm ứng L-arabinose 0,9mg/ml; thời gian thu tế bào sau tính từ lúc bổ sung chất cảm ứng viii Bảng 3.3 Hoạt độ enzyme thời điểm thu tế bào Thời điểm thu tế bào (giờ) Hoạt độ enzyme (U/ml) 14,9805±0,15bc 15,1333±0,16bc 15,2916±0,25ab 15,6992±0,32a 24 14,6114±0,03c (Số liệu bảng trung bình lần lặp lại Các chữ số khác cột biểu thị khác biệt có ý nghĩa nghiệm thức khảo sát theo kiểm định Duncan độ tin cậy 95%) Hình 3.5 Ảnh hƣởng thời gian thu tế bào đến hoạt độ enzyme Kết hình 3.5 cho thấy, sau bổ sung chất cảm ứng hoạt độ mannanase tái tổ hợp bắt đầu tăng, đến đạt cực đại (15,6992 U/ml), sau bắt đầu giảm đến 24 hoạt độ cịn 14,6114 U/ml Kết cho thấy khoảng thời gian thích hợp cho trình thu tế bào để thu nhận enzyme đạt đƣợc hoạt độ cao từ đến Theo nghiên cứu khác Trịnh Thị Hà cs (2018) nghiên cứu biểu ChiA tái tổ hợp hệ thống biểu E.coli BL21 cho thấy sau bổ sung chất cảm ứng hoạt tính enzyme chitinase tái tổ hợp bắt đầu tăng đạt cực đại sau Nhƣ vậy, hệ thống biểu E.coli BL21 thời gian để thu nhận loại protein tái tổ hợp khác khác 21 Do lựa chọn thời gian cho việc thu tế bào để sinh mannanase tối ƣu sau từ lúc bổ sung chất cảm ứng 22 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trên sở kết thu đƣợc tổng hợp từ liệu đƣa đƣợc kết luận sau: - Sau biến nạp vecto pBAD3014ManB vào E.coli BL21 không làm ảnh hƣởng đến sinh trƣởng tế bào - Hoạt độ mannanase đạt giá trị cao 15,6992 U/ml tiến hành lên men vi sinh vật E.coli BL21/pBAD3014ManB môi trƣờng LB có bổ sung chất cảm ứng Larabinose với nồng độ 0,9mg/ml vào thời điểm giá trị OD600nm canh trƣờng nuôi cấy đạt 0,6 thực việc thu nhận enzyme sau bổ sung chất cảm ứng KIẾN NGHỊ Tiến hành xây dựng thực mơ hình tối ƣu hóa điều kiện ni cấy để đạt lƣợng enzyme cao 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đỗ Biên Cƣơng, Nguyễn Thị Hoa, Lê Thị Huyền, Đặng Thị Thu (2010), Nghiên cứu chuyển hóa bã cơm dừa tạo prebiotisc mannooligosaccharide endo-beta-1,4mannanase từ Aspergillus niger BK01, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 48(3): 4349 Lê Thị Thu Giang, Quyền Đình Thi, Vũ Thị Cao Hậu, Đặng Thị Thu (2003), Sinh tổng hợp xác định số tính chất endo-beta-1,4-mannanase chủng Bacillus thuringensis DDH2 Báo cáo khoa học, Hội Nghị Cơng nghệ sinh học tồn quốc 2003, Hà Nội, 16-17/12/2003, Nhà xuất Khoa Học Kỹ thuật: 1204-1208 Trịnh Thị Thu Hà, Đồng Văn Quyền, Ngơ Đình Bính (2018), Tối ƣu hóa điều kiện biểu nhằm nâng cao khả sinh tổng hợp Chitinase chủng vi khuản tái tổ hợp phƣơng pháp đáp ứng bề mặt, Tạp chí Sinh học, 40(1): 115-123 Cao Thị Vân Hậu (2003), Tìm chủng có khả tổng hợp endo- Endo-beta-1,4mannanase, ni cấy, xác định đặc tính endo-beta-1,4-mannanase chủng Bacillus thuringensis DDH2 nhân dòng gen này, Luận án tốt nghiệp Đại học, Trƣờng Đại học Bách Khoa Hà Nội Nguyễn Thu hiền, Hoàng Thị Thu hiền, Khuất Hữu Thanh, Nguyễn Huy Hồng (2013), Chọn dịng biểu gen keratinase Escherichia coli BL21 (DH3) từ vi khuẩn Bacillus Tạp chí Sinh học 35 (3): 51-57 Nguyễn Sỹ Lê Thanh, Quyền Đình Thi, Phạm Việt Cƣờng, Đặng Thị Thu (2006), Endobeta-1,4-mannanase từ B subtilis G1: Chọn chủng, xác định động thái sinh trƣờng, nhân dịng phân tích trình tự gen mã hóa, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 4: 327334 Quyền Đình Thi, Nguyễn Sỹ Lê Thanh, Phạm Việt Cƣờng(2008), Biểu endo từ chủng Bacillus subtilis G1 Escherichia coli số tính chất enzyme tái tổ hợp, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 6(2): 183-189 24 Tài liệu nước Boraston A B., Bolam D N., Gilbert H J., Davies G J (2004) Carbohydrate-binding module: fine tuning polysaccharide recognition J Biochem 382 (3):769–781 Kansoh A L., Nagieb Z A (2004), Xylanase and Mannanase enzymes from Streptomyces galbus NR and their use in biobleaching of softwood kraft pulp, Antonie Van Leeuwenhoek 85, 103–114 Anwar Sunna, Moreland D Gibbs, Charles W J Chin, Peter J Nelson, Peter L Bergquist (2000), Gene Encoding a Novel Multidomain β-1,4-Mannanase from Caldibacillus cellulovorans and Action of the Recombinant Enzyme on Kraft Pulp, Applied and Enviromental Microniology 66 (2):664-670 Sachslehner A and Haltrich D (1999), Purification and some properties of a thermostable acidic endo-β-1,4-D-mannanase from Sclerotium (Athelia) rolfsii, FEMS Microbiol Lett 177 (1): 47–55 Bingze Xu Daniel Sellos Jan‐Christer Janson (2002), Cloning and expression in Pichia pastoris of a blue mussel (Mytilus edulis) β‐mannanase gen, Eur J Biochem 269: 1753-1760 Moreland D Gibbs, Anna U Elinder, Rosalind A Reeves, Peter L Bergquist (1996), Sequencing, cloning and expression of a β-1,4-mannanase gen, manA, from the extremely thermophilic anaerobic bacterium, Caldicellulosiruptor Rt8B.4, FEMS Microbiology Letters 141 (1): 37-43 Talbot G and Sygusch J (1990), Purification and characterization of thermostable βmannanase and α-galactosidase from Bacillus stearothermophilus, Appl Environ Microbiol 56 (11): 3505–3510 Soni H., Rawat H.K., Pletschke B.I (2016), Purification and characterization of βmannanase from Aspergillus terreus and its applicability in depolymerization of mannans and saccharification of lignocellulosic biomass, Biotechnology (2): 136 Stalbrand H., Siika-aho M., Tenkanen M., and Viikari L (1993), Purification and characterization of two β-mannanases from Trichoderma reesei, Jouranl of Biotechnology 29 (3): 229–242 25 Stalbrand H., Saloheimo A., Vehmaanpera J., Henrissat B., Penttila M (1995), Cloning and expression in Saccharomyces cerevisiae of a Trichoderma reesei betamannanase gen containing a cellulose binding domain, Appl Environ Microbiol 61: 1090-1097 Buchert J., Salminen J., Siika-Aho M., Ranua M., Viikari L (1993), The role of Trichoderma reesei xylanase and mannanase in the treatment of softwood kraft pulp prior to bleaching, Holzforschung 47: 473–478 Zhang J., He Z & Hu K (2000), Purification and characterization of β-mannanase from Bacillus licheniformis for industrial use, Biotechnology Letters 22: 1375–1378 Isaac K.O Cann, Svetlana Kocherginskaya, Michael R King, Bryan A.White, Roderick (1999), Molecular Cloning, Sequencing, and Expression of a Novel Multidomain Mannanase Gen from Thermoanaerobacterium polysaccharolyticum American Society for Microbiology 181 (5): 1643-1651 Petty L A., Carter S D., Senne B W and Shriver J A (2002), Effects of ß-mannanase addition to corn-soybean meal diets on growth performance, carcass traits, and nutrient digestibility of weanling and growing-finishing pigs, Anim Sci 80(4): 1012-1019 Zhang L., and Tizzard I.R (1996), Activation of a mouse macrophage cell line by acemannan: the major carbohydrate fraction from Aloe vera gel, Immunopharmacology 35 (2): 119-128 Marina Duarte Pinto Lobo, Fredy Davi Albuquerque Silva, Patriscia Gadelha de Castro Landim, Paloma Ribeiro Da Cruz (2013), Expression and efficient secretion of a functional chitinase from Chromobacterium violaceum in Escherichia coli, BMC Biotechnology, Article number: 46 Adibmoradi M., Mehri M (2007), Effects of β-mannanase on broiler performance and gut morphology, 16th European Symposium on Poultry Nutrition, Stasburg, France, 471–47 Blibech M., Ghorbel R E., Fakhfakh I., Ntarima P., Piens K., Bacha A B., Chaabouni S E (2010), Purification and characterization of a low molecular weight of β- 26 mannanases from Penicillium occitanis Pol6, App Biochem Biotechnol 160:1227– 1240 Chandra M R S., Lee Y S., Park I H., Zhou Y., Kim K K., Choi Y L (2011), Isolation, purification and characterization of a thermostable β-mannanase from Paenibacillus sp DZ3, J Korean Soc, Appl BioChem Biotechnol 54(3):325– 331 Jackson M E., Fodge D W., and Hsiao H Y (1999), Effects of β-Mannanase in CornSoybean Meal Diets on Laying Hen Performance, Poultry Science 78 (12):1737– 1741 Zakaria M M, Yamamoto S., Yagi T., Purification and characterization of an endo-1,4-βmannanase from Bacillus subtilis KU-1 (1998), FEMS Microbiology Letters, 158(1): 25–31 Mehri M., Adibmoradi M., Samie A., Shivazad M (2010), Effects of β-Mannanase on broiler performance, gut morphology and immune system, African Journal of Biotechnology (37): 6221-6228 Arcand N., Kluepfel D., Paradis F W., Morosoli R., Shareck F (1993), β-Mannanase of Streptomyces lividans 66: cloning and DNA sequence of the manA gen and characterization of the enzyme, Biochem 290 (3): 857–863 Mendoza N S., Arai M., Sugimoto K., Ueda M., Kawaguchi T., Joson L M (1995), Cloning and sequencing of β-mannanase gen from Bacillus subtilis NM-39, Biochim Biophys Acta 1243 (3): 552-554 Takeda N., Hirasawa K., Uchimura K., Nogi Y., Hatada Y., Usami R., Yoshida Y and Grant W D (2004), Purification and enzymatic properties of a highly alkaline mannanase from alkaliphilic Bacillus sp strain JAMB-750, Biol Macromol (2): 67–74 Nathalie Ethier, Guylaine Talbot, Jurgen Sygusch (1998), Gen Cloning, DNA Sequencing and Expression of Thermostable β-Mannanase from Bacillus stearothermophilus, Appl Envion Microbiol 64 (11): 4428-4432 27 Politz O., Krah M., Thomsen K K., Borriss R (2000), A highly thermostable endo-(1,4)β-mannanase from the marine bacterium Rhodothermus marinus, Appl Microbiology Biotechnology 53: 715-721 Adenmark P., Varga A., Medve J., Harjunpaa V., Drakenberg T., Terneld F., Stalbrand H (1998), Softwood hemicelluloses-degrading enzymes from Aspergillus niger: purification and properties of a β-mannanase, Biotechnol 63 (3):199–210 Agrawal P., Verma D., Daniell H (2011), Expression of Trichoderma reesei βmannanase in tobacco chloroplasts and its utilization in lignocellulosic woody biomass hydrolysis, PLoS One 6(12):e29302 Bhoria P., Singh G., Hoondal G S (2009), Optimization of mannanase production from Streptomyces sp PG-08-03 in submerged fermentation, Bioresources (3): 1130–1138 Prakram Singh ChauHan, Neena Puri, Prince Sharma and Navee Gupta (2012), Mannanases: microbial sources, production, properties and potential biotechnological applications, Applied Microbiology and Biotechnology 93: 18171803 Chauhan P S., Sharma P., Puri N (2014), A process for reduction in viscosity of coffee extract by enzymatic hydrolysis of mannan, Bioprocess Biosyst Eng 37 (7): 1459– 1467 Pierre Marraccini, John Caillet, Nicolas W Rogers, Cyril Allard, Marie-Laure Lacoste, Francoise Andre, Victoria Lausanne & Stephane Michaux (2001), Molecular and biochemical characterization of endo-β-mannanases from germinating coffee (Coffea arabica) grains, Planta 213: 296-308 Zhang Q., Yan X., Zhang L & Tang W ( 2006), Cloning, sequence analysis, and heterologous expression of a β-mannanase gen from Bacillus subtilis Z-2, Molekuliarnaia Biologiia 40 (3): 418-424 Shojaosadati S A., Kolaei S M V., Babaeipourl V., Farnoud A M (2008), Recent advances in high cell density cultivation for production of recombinant protein, Iranian Journal of Biotechnology (2): 63-77 28 Theodor Escherich (1988), The intestinal bacteria of the neonate and breast-fed ifnant, Clinical Infectious Disease 10 (6): 1220–1225 Puchart V., Vrsanska M., Svoboda P., Pohl J., Ogel Z B., and Biely P (2004), Purification and characterization of two forms of endo-β-1,4-mannanase from a thermotolerant fungus, Aspergillus fumigatus IMI 385708 (formerly Thermomyces lanuginosus IMI 158749), Biochim Biophys Acta 1674 (3): 239–250 SVS Verma and McNab J M (1982), Guar meal in diets for broiler chickens, Journal Bristish Poultry Science 23 (2):95-105 Tan X H., Wu Y Y., Ma L X., Jiang S J (2005), Cloning and expression in Pichia pastoris of an alkaline mannanase gen Acta Microbiologica Sinica 45 (4): 543-546 29 PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trƣờng LB Trypton 10g/L NaCl 10g/L Cao nấm men 5g/L Phụ lục Mối tƣơng quan OD600nm Log (CFU/ml), đƣờng cong sinh trƣởng, tốc độ tăng trƣởng E.coli BL21/pBAD3014ManB E.coli WT Nồng độ (OD600nm) 0,1 8,90309 Nồng độ (OD600nm) 0,1 0,2 9,041393 0,2 8,69897 0,3 9,176091 0,3 8,90309 0,4 9,322219 0,4 9,113943 0,5 9,431364 0,5 9,278754 Log (CFU/ml) OD600nm Log (CFU/ml) 0,1078 8,4777121 E.coli BL21/pBAD3014ManB E.coli WT Thời gian (giờ) Log (CFU/ml) OD600nm Log (CFU/ml) Tốc độ tăng trƣởng 8,9208 Tốc độ tăng trƣởng - 0,103 8,4767 - 0,271 9,1337 0,01065 0,2089 8,6997 0,01015 1,0577 10,1601 0,03098 0,7979 9,9396 0,03607 1,4442 10,6643 0,02911 1,303 11,0030 0,04177 1,6759 10,9666 0,02561 1,5371 11,4958 0,03748 10 1,8072 11,1379 0,02220 1,7587 11,9623 0,03466 12 1,9889 11,3749 0,02048 2,0082 12,4876 0,03326 14 2,1683 11,6089 0,01922 2,1733 12,8351 0,03099 16 2,1816 11,6263 0,01693 2,2001 12,8915 0,02747 18 2,2109 11,6645 0,01526 2,201 12,8934 0,02443 20 2,2443 11,7081 0,01395 2,2253 12,9446 0,02224 22 2,2699 11,7415 0,01283 2,2589 13,0153 0,02054 30 24 2,2649 11,7389 0,01175 2,2572 13,0117 0,01881 26 2,2589 11,72716 0,01081 2,2354 12,9659 0,01719 28 2,2174 11,67302 0,00984 2,2099 12,9122 0,01577 30 2,1741 11,61653 0,00899 2,1714 12,8311 0,01447 32 2,169 11,60988 0,00841 2,145 12,7756 0,01337 34 2,1373 11,56852 0,00780 2,1105 12,7029 0,01237 36 2,1047 11,52599 0,00725 2,0876 12,6547 0,01155 Phụ lục Kết OD; thể tích thu dịch nuôi cấy; ý nghĩa mô tả, thống kê kết thí nghiệm khảo sát thời gian bổ sung chất cảm ứng Giá trị sau bổ sung chất cảm ứng(OD600nm) Thể tích thu dịch ni cấy (ml) OD600nm=0,3 1,8547±0,78 10,8 OD600nm=0,6 1,6286±0,59 12,3 OD600nm=0,9 1,9453±0,23 10,3 OD600nm=1,2 1,9211±0,44 10,4 Thời gian bổ sung Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N Mean Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 0.3 1.31305333E1 734510615 424069901 11.30590782 14.95515885 1.248970E1 1.393210E1 0.6 1.40825000E1 180561707 104247350 13.63395985 14.53104015 1.387540E1 1.420690E1 0.9 1.27702000E1 509484563 294151050 11.50457018 14.03582982 1.220960E1 1.320500E1 1.2 1.02486333E1 872703967 503855870 8.08071650 12.41655017 9.248900 1.085810E1 Total 12 1.25579667E1 1.574711631 454580092 11.55744263 13.55849070 9.248900 1.420690E1 31 Homogenous Subsets Thời gian bổ sung chất cảm ứng Subset for alpha = 0.05 N Dunca 1.2 na 0.9 1.02486333E1 1.27702000E1 0.3 1.31305333E1 0.6 Sig 1.31305333E1 1.40825000E1 1.000 504 102 Means for groups in homogenous subsets are displayed Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phụ lục Kết OD; thể tích dịch ni cấy; ý nghĩa mơ tả, thống kê kết thí nghiệm khảo sát nồng độ chất cảm ứng Nồng độ chất cảm ứng (mg/ml) Giá trị sau bổ sung chất cảm ứng(OD600nm) Thể tích thu dịch nuôi cấy (ml) 0,5 1,8527±1,01 10,8 0,7 1,7820±0,87 11,2 0,9 1,8543±0.63 10,8 1,1 1,7846±0.81 11,2 1,3 1,7984±0.92 11,1 Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N Mean Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 1.235810E1 3338958 2361000 9.358165 15.358035 12.1220 12.5942 0.5 1.317905E1 1.0836411 7662500 3.442921 22.915179 12.4128 13.9453 0.7 1.357155E1 0021920 0015500 13.551855 13.591245 13.5700 13.5731 0.9 1.478815E1 9177539 6489500 6.542458 23.033842 14.1392 15.4371 1.1 1.398745E1 3869995 2736500 10.510397 17.464503 13.7138 14.2611 1.3 1.383580E1 1016820 0719000 12.922224 14.749376 13.7639 13.9077 12 1.362002E1 9024627 2605185 13.046619 14.193414 12.1220 15.4371 Total 32 Homogenous Subsets Nồng độ cảm ứng Duncana Subset for alpha = 0.05 N 1.235810E1 0.5 1.317905E1 1.317905E1 0.7 1.357155E1 1.357155E1 1.357155E1 1.3 1.383580E1 1.383580E1 1.383580E1 1.1 1.398745E1 1.398745E1 0.9 1.478815E1 Sig .064 257 110 Means for groups in homogenous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2.000 Phụ lục Kết OD; thể tích dịch ni cấy; ý nghĩa mơ tả, thống kê kết thí nghiệm khảo sát thời điểm thu tế bào Thời điểm thu tế bào (giờ) Giá trị sau thời điểm (OD600nm) Thể tích thu dịch nuôi cấy (ml) 1,24±0,67 16,1 1,46±1,2 13,7 1,55±0,41 12,9 1,79±0,53 11,2 24 4±0,77 4,9 33 Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N Mean Std Deviation Lower Bound Std Error Upper Bound Minimum Maximum 2 1.49804900E1 147601470 104370000 13.65434341 16.30663659 1.487612E1 1.508486E1 1.51333300E1 162026448 114570000 13.67758012 16.58907988 1.501876E1 1.524790E1 1.52910600E1 246398429 174230000 13.07725795 17.50486205 1.511683E1 1.546529E1 1.56991900E1 321507311 227340000 12.81056142 18.58781858 1.547185E1 1.592653E1 24 1.46113800E1 027633733 019540000 14.36310076 14.85965924 1.459184E1 1.463092E1 Total 10 1.51430900E1 407385331 128826553 14.85166409 15.43451591 1.459184E1 1.592653E1 Homogenous Subsets Subset for alpha = 0.05 Thời gian thu tế bào N Duncana 24 1.46113800E1 2 1.49804900E1 1.49804900E1 1.51333300E1 1.51333300E1 Sig 1.52910600E1 1.52910600E1 1.56991900E1 058 Means for groups in homogenous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2.000 34 203 105 Phụ lục Đƣờng chuẩn mannose thí nghiệm khảo sát OD 540nm Đƣờng chuẩn thí nghiệm khảo sát thời gian bổ sung chất cảm ứng 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 y = 0.1279x + 0.0489 R² = 0.9996 Nồng độ đƣờng µmol/ml Đƣờng chuẩn thí nghiệm khảo sát nồng độ chất cảm ứng OD 540nm 0.8 y = 0.1279x + 0.0489 R² = 0.9996 0.6 0.4 0.2 0 Nồng độ đƣờng µmol/ml Đƣờng chuẩn thí nghiệm khảo sát nồng độ chất cảm ứng 0.6 y = 0.1238x - 0.0568 R² = 0.9988 OD500nm 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 Nồng độ đƣờng µmol/ml 35 ... thấp nên đề tài ? ?Ảnh hƣởng điều kiện ni cấy đến q trình biểu β- mannanase Escherichia coli BL21? ?? đƣợc thực để sàng lọc số yếu tố ảnh hƣởng điều kiện ni cấy đến q trình biểu enzyme β- mannanase MỤC... KHOA SINH MƠI TRƢỜNG  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN NI CẤY ĐẾN Q TRÌNH BIỂU HIỆN CỦA β- MANNANASE TRONG ESCHERICHIA COLI BL21 Ngành: Công nghệ sinh học Khóa: 2016-2020 Sinh... PHÁT TRIỂN CỦA VI KHUẨN E COLI WT VÀ E .COLI BL21/ PBAD3014MANB THEO THỜI GIAN 17 3.2 ẢNH HƢỞNG CỦA MẬT ĐỘ TẾ BÀO ĐẾN SỰ BIỂU HIỆN CỦA MANNANASE 18 iii 3.3 ẢNH HƢỞNG CỦA NỒNG ĐỘ