BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC TRAMADOL BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN /2017/HĐ-NCKH Chủ nhiệm đề tài: ThS Nguyễn Thị Minh Phƣơng ThS Trần Quốc Thanh Tp Hồ Chí Minh 9-2018 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC TRAMADOL BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN /2017/HĐ-NCKH Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) Tp Hồ Chí Minh, 9-2018 Danh sách thành viên tham gia nghiên cứu đề tài PGS.TS Nguyễn Đức Tuấn ThS Nguyễn Thị Minh Phƣơng ThS Trần Quốc Thanh Lâm Yến Huê MỤC LỤC MỞ ĐẦU TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TRAMADOL HYDROCLORID 2.2 Các cơng trình tách đồng phân tramadol điện di mao quản ĐỐI TƢỢNG & PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 3.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ 11 4.1 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CỦA TRAMADOL 11 4.1.1 Khảo sát pH 11 4.1.2 Khảo sát nồng độ dung dịch điện ly 11 4.1.3 Khảo sát tác nhân đối quang 12 4.2 ĐÁNH GIÁ QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CỦA TRAMADOL 13 4.2.1 Tính phù hợp hệ thống 13 4.2.2 Tính đặc hiệu 14 4.2.3 Tính tuyến tính 16 4.2.4 Độ lặp lại 20 4.2.5 Độ 21 KẾT LUẬN 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Từ nguyên Nghĩa Tiếng Việt BGE Background Electrolyte Dung dịch điện ly CD Cyclodextrin Cyclodextrin CE Capillary Electrophoresis Điện di mao quản CM--CD Carboxymethyl--cyclodextrin CorrArea Corrected Area Diện tích pic đƣợc chuẩn hóa CZE Capillary Zone Electrophoresis Điện di mao quản vùng HP--CD Hydroxypropyl--cyclodextrin M--CD Methyl--cyclodextrin MC--CD Methoxycarbonyl--cyclodextrin Rs Resolution Độ phân giải RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn TB Trung bình tM Migration time Thời gian di chuyển DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Chất đối chiếu dùng nghiên cứu Bảng 3.2 Dung mơi hóa chất sử dụng Bảng 4.1 Kết tính phù hợp hệ thống 13 Bảng 4.2 Kết tính đặc hiệu 15 Bảng 4.3 Kết khảo sát tƣơng quan tỉ số nồng độ đồng phân/ epedrin tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa .17 Bảng 4.4 Kết xử lý thống kê 18 Bảng 4.5 Kết độ lặp lại 20 Bảng 4.6 Kết khảo sát độ đồng phân (-) tramadol .21 Bảng 4.7 Kết khảo sát độ đồng phân (+) tramadol 22 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cơng thức cấu tạo tramadol hydroclorid Hình 4.1 Đồ thị biểu biễn phụ thuộc độ phân giải theo pH dung dịch điện ly 11 Hình 4.2 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc độ phân giải theo nồng độ dung dịch điện ly 12 Hình 4.3 Điện di đồ tramadol với tác nhân đối quang khác 12 Hình 4.4 Đồ thị biểu diễn độ phân giải theo nồng độ CM-β-CD 13 Hình 4.5 Điện di đồ mẫu trắng, chuẩn, thử thử thêm chuẩn 15 Hình 4.6 Điện di đồ mẫu đối chiếu .16 Hình 4.7 Đồ thị biểu diễn tƣơng quan tỉ số nồng độ đồng phân (-) tramadol/ ephedrin tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa 17 Hình 4.8 Đồ thị biểu diễn mối tƣơng quang tỉ số nồng độ đồng phân(+) Tramadol/ ephedrin tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa 18 THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG Thơng tin chung: - Tên đề tài: Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học tramadol phƣơng pháp điện di mao quản - Mã số: - Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Minh Phƣơng Điện thoại: 0909810668 Email: minhphuongvn80@yahoo.com - Đơn vị quản lý chuyên môn (Khoa, Tổ môn): Bộ môn PT-KN, khoa Dƣợc - Đồng chủ nhiệm đề tài: Trần Quốc Thanh Điện thoại: 0903389214 Email: tranquocthanhdhyd@yahoo.com - Đơn vị quản lý chuyên môn (Khoa, Tổ môn): Bộ môn Bào chế, khoa Dƣợc - Thời gian thực hiện: 10/2017 – 10/2018 Mục tiêu: Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học tramadol phƣơng pháp điện di mao quản Nội dung chính: - Xây dựng quy trình ứng dụng tác nhân đối quang tổng hợp để tách đồng phân quang học tramadol kỹ thuật điện di mao quản - Khảo sát điều kiện tách đồng phân quang học tramadol kỹ thuật điện di mao quản - Đánh giá quy trình phân tách đồng phân quang học tramadol Kết đạt đƣợc (khoa học, đào tạo, kinh tế-xã hội, ứng dụng, ) - Quy trình phân tách đồng phân tramadol phƣơng pháp điện di mao quản đƣợc xây dựng, sử dụng hệ điện ly phosphat – tris 50 mM pH 3; tác nhân đối quang carboxymethyl-β-CD mg/ ml; điện 25 kV; nhiệt độ cột 25 oC; áp suất bơm mẫu 50 mbar; thời gian bơm mẫu 5s; nội chuẩn ephedrin 50 µg/ ml Kết thẩm định cho thấy quy trình phân tách có tính đặc hiệu; khoảng tuyến tính 2,5 – 125 µg/ml cho đồng phân với hệ số tƣơng quan cao (R > 0,995); độ lặp lại đạt (RSD < %) độ với tỷ lệ phục hồi 98 - 106% - Bài báo cáo poster hội nghị ASEAN PharmNET 2017 Malaysia MỞ ĐẦU Beta-cyclodextrin (-CD) dẫn chất chúng đƣợc sử dụng phổ biến phƣơng pháp sắc ký khí (GC), sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), điện di mao quản (CE), làm tác nhân đối quang tách đồng phân quang học (1, 3, 4, 5, 6, 7), đặc biệt đƣợc ứng dụng kiểm nghiệm thuốc chứa hoạt chất có tính quang hoạt Để phân tách dƣợc chất quang hoạt cần tác nhân đối quang phù hợp với tính chất dƣợc chất, để phân tách đƣợc dạng đồng phân chất cần phải phối hợp nhiều tác nhân quang hoạt với Các thuốc có hoạt chất dạng đồng phân riêng lẻ xuất ngày nhiều thị trƣờng dƣợc phẩm ngồi nƣớc có hoạt tính mạnh tác dụng phụ dạng racemic chúng nhƣ: Samlodipin, levofloxacin, levocetirizin, esomeprazol, .So với số lƣợng lớn dƣợc chất quang hoạt đa dạng cấu trúc tính chất có mặt thị trƣờng số lƣợng tác nhân quang hoạt đƣợc thƣơng mại hóa cịn ít, giá thành cao Chính vậy, xu hƣớng nhà nghiên cứu nƣớc tổng hợp nhiều tác nhân tách đồng phân chun biệt có tính chọn lọc cao có giá trị kinh tế (4,6) Gần nhóm nghiên cứu tổng hợp đƣợc dẫn chất methyl--CD (M--CD), methoxycarbonyl--CD (MC--CD) carboxymethyl-CD (CM--CD) Với mong muốn chứng minh hiệu sản phẩm vai trò làm tác nhân đối quang để phân tách đồng phân quang học CE, đề tài: “Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học tramadol phƣơng pháp điện di mao quản” đƣợc thực với mục tiêu xây dựng thẩm định quy trình phân tách đồng phân quang học tramadol phƣơng pháp điện di mao quản dùng tác nhân đối quang tự tổng hợp với mục tiêu sau: - Ứng dụng tác nhân đối quang tổng hợp đƣợc để phân tách đồng phân quang học tramadol phƣơng pháp điện di mao quản - Khảo sát điều kiện điện di nhƣ dung dịch điện ly nền, pH, tác nhân đối quang, dung môi hữu thêm vào dung dịch điện ly 3.2.4.4 Xác định khoảng tuyến tính Bơm dung dịch chuẩn có nồng độ tramadol tƣơng ứng µg/ ml, 10 µg/ ml, 20 µg/ ml, 50 µg/ ml, 100 µg/ ml, 250 µg/ ml nồng độ ephedrin dung dịch 50 µg/ ml Mỗi dung dịch bơm lần Ghi nhận giá trị diện tích đỉnh chuẩn hóa tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa đồng phân so với ephedrin mẫu Dùng phần mềm Excel để vẽ đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính tỉ số nồng độ đồng phân so với chuẩn nội ephedrin tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa đồng phân so với ephedrin Thiết lập phƣơng trình hồi quy thể mối tƣơng quan tuyến tính cho đồng phân Dùng trắc nghiệm F (Fisher) trắc nghiệm t (Student) kiểm tra tính tƣơng thích phƣơng trình hồi quy ý nghĩa các hệ số phƣơng trình, tính giá trị R2 Từ đánh giá tính tuyến tính với yêu cầu R2 ≥ 0,995 3.2.4.5 Khảo sát độ Khảo sát độ đƣợc tiến hành theo phƣơng pháp mẫu thử thêm chuẩn Thêm chất đối chiếu tƣơng ứng với mức nồng độ 80%, 100%, 120 % so với nồng độ đo đƣợc mẫu thử Tiến hành đo nồng độ mẫu thử thêm chuẩn, nồng độ đo lần Xác định tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa, tính hàm lƣợng tổng cộng tìm thấy, suy hàm lƣợng chất đối chiếu tìm thấy, từ tính tỷ lệ phục hồi Tỷ lệ phục hồi mức nồng độ phải đáp ứng mức giới hạn cho phép 10 KẾT QUẢ 4.1 KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CỦA TRAMADOL 4.1.1 Khảo sát pH Kết cho thấy đồng phân tramadol tách tốt khoảng pH 2,0 – 4,0 không phân tách với pH lớn 4,0 Tiến hành điện di khảo sát ảnh hƣởng pH khoảng 2,0 – 4,0 với khoảng cách pH 0,5 cho kết pH 3,0 cho thấy độ phân giải tốt (Rs = 3,21) so với pH 2,0 (Rs = 2,30); pH 2,5 (Rs = 2, 78) pH 4,0 (Rs = 2,06) Chọn dung dịch điện ly phosphat – tris pH làm điều kiện điện di để tách đồng phân tramadol Hình 4.1 Đồ thị biểu biễn phụ thuộc độ phân giải theo pH dung dịch điện ly 4.1.2 Khảo sát nồng độ dung dịch điện ly Kết khảo sát cho thấy, độ phân giải tăng lên khoảng nồng độ dung dịch điện ly từ 20 – 50 mM giảm nhẹ khoảng 50 – 60 mM Độ phân giải nồng độ dung dịch điện ly 50 mM cao nhất.Chọn dung dịch điện ly phosphat- tris 50 mM pH làm điều kiện phân tách đồng phân tramadol 11 Nồng độ BGE Hình 4.2 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc độ phân giải theo nồng độ dung dịch điện ly 4.1.3 Khảo sát tác nhân đối quang Dung dịch đối chiếu dung dịch điện ly đƣợc chuẩn bị nhƣ mục 3.2.1 Các điều kiện điện di khác nhƣ pH, dung dịch đệm, điện thế, nhiệt độ cột mao quản đƣợc cố định Khảo sát khả tách đồng phân tramadol loại tác nhân đối quang M-β-CD, HP-β-CD, MC-β-CD, CM-β-CD nồng độ khảo sát mg/ ml Kết khảo sát đƣợc thể hình 4.3 M-β- MC-β-CD CM-β-CD HP-β- CD CD Hình 4.3 Điện di đồ tramadol với tác nhân đối quang khác Nhận xét: Kết khảo sát cho thấy loại tác nhân đối quang có CM-β-CD có khả tách đồng phân tramadol Kết luận: Tiếp tục khảo sát nồng độ CM-β-CD lân cận mg/ ml 12 4.1.3.1 Khảo sát nồng độ tác nhân đối quang Khảo sát độ phân giải đồng phân tramadol dung dịch điện ly phosphat – tris 50 mM pH chứa nồng độ CM-β-CD mg/ ml, mg/ ml, mg/ ml, 10 mg/ ml Hình 4.4 Đồ thị biểu diễn độ phân giải theo nồng độ CM-β-CD Nhận xét: Với nồng đồ mg/ ml, độ phân giải nhỏ 1,5 Ở nồng độ 5, 7, 10 mg/ ml, độ phân giải đạt 1,5 Tuy nhiên nồng độ mg/ ml có độ phân giải cao (2,69) Khi nồng độ CM-β-CD tăng lên, tƣợng kéo đuôi pic nhiều Kết luận: Chọn nồng độ CM-β-CD mg/ ml làm điều kiện tách đồng phân 4.2 ĐÁNH GIÁ QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CỦA TRAMADOL 4.2.1 Tính phù hợp hệ thống Bảng 4.1 Kết tính phù hợp hệ thống Lần Tỉ số thời gian lƣu Tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa (tS/ tIS) (CorrAreaS/ CorrAreaIS) tiêm mẫu Rs (-) Tramadol (+) Tramadol (-) Tramadol (+) Tramadol 1,478506 1,539865 1,068634 1,061697 2,93 1,475024 1,531895 1,067125 1,057475 2,86 13 1,467339 1,520194 1,078854 1,075316 2,78 1,473094 1,524557 1,098236 1,072721 2,69 1,466749 1,514740 1,045925 1,024552 2,63 1,462799 1,508687 1,083778 1,084972 2,51 TB 1,470585 1,523323 1,073759 1,062789 2,73 SD 0,005909 0,011369 0,017723 0,021162 0,401843 0,746352 1,650538 1,991186 RSD (%) Nhận xét: Sau lần tiêm, mẫu chuẩn tramadol có RSD tỉ số thời gian lƣu (tS/ tIS) RSD tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa (CorrAreaS/ CorrAreaIS) ≤ 2,0 %, độ phân giải pic đồng phân lớn 1,5 nên quy trình phân tích đạt tính phù hợp hệ thống 4.2.2 Tính đặc hiệu Tiến hành điện di mẫu trắng, mẫu chuẩn, mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn với điều kiện khảo sát Kết đƣợc thể hình 4.5 14 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Hình 4.5 Điện di đồ mẫu trắng, chuẩn, thử thử thêm chuẩn Bảng 4.2 Kết tính đặc hiệu Chuẩn nội (-) Tramadol Ephedrin (+) Tramadol Mẫu T1 Tm1 Trắng - - - - - Chuẩn 16.683 24.750 1,484 25.811 1,547 Thử 16.306 24.189 1,483 25.142 1,542 15.660 23.070 1,473 23.983 1,531 (Tm1/ TmIS) Tm2 T2 TmIS (Tm2/ TmIS) Thử thêm chuẩn Nhận xét: Kết cho thấy điều kiện phân tích: Tỉ số thời gian lƣu đỉnh mẫu thử so với chuẩn nội Ephedrin tƣơng đƣơng với tỉ số thời gian lƣu đỉnh mẫu chuẩn so với chuẩn nội Ephedrin 15 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Điện di đồ mẫu trắng khơng có đỉnh trùng với đỉnh mẫu đối chiếu Diện tích đỉnh chuẩn hóa, chiều cao đỉnh dung dịch thử thêm chất đối chiếu tăng lên so với mẫu thử Kết luận: Vậy quy trình có tính đặc hiệu Do khơng có chuẩn đồng phân, nên dựa vào tài liệu tham khảo tác giả Jean Luc Veuthey Serge Rudaz, Claudia Desiderio, Salvatore Fanali, (1998) (3) có điều kiện tiến hành điện di tƣơng tự để xác định đỉnh đồng phân tramadol điện di đồ (-) (+) tramadol tramadol Hình 4.6 Điện di đồ mẫu đối chiếu 4.2.3 Tính tuyến tính Tiến hành điện di với mẫu dung dịch đối chiếu tramadol hydroclorid có nồng độ µg/ ml, 10 µg/ ml, 20 µg/ ml, 50 µg/ ml, 100 µg/ ml, 250 µg/ ml nồng độ ephedrin dung dịch 50 µg/ ml Với điều kiện điện di chọn, ghi nhận giá trị CorrArea mẫu dung dịch đối chiếu Kết đƣợc xử lý phần mềm MS- Excel trắc nghiệm thống kê (trắc nghiệm Fisher trắc nghiệm Student), kết khảo sát đƣợc thể bảng 4.3 16 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Bảng 4.3 Kết khảo sát tƣơng quan tỉ số nồng độ đồng phân/ epedrin tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa Tỉ số nồng độ đồng phân tramadol/ ephedrin Tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa (CorrAreaS/ CorrAreaIS) (-) Tramadol (+) Tramadol 0,05 0,112882 0,116735 0,1 0,229149 0,201702 0,2 0,427527 0,425620 0,5 1,090028 1,059882 2,064668 2,084043 2,5 5,169466 5,180750 Hình 4.7 Đồ thị biểu diễn tƣơng quan tỉ số nồng độ đồng phân (-) tramadol/ ephedrin tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa 17 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Hình 4.8 Đồ thị biểu diễn mối tƣơng quang tỉ số nồng độ đồng phân(+) Tramadol/ ephedrin tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa Bảng 4.4 Kết xử lý thống kê (-) Tramadol (+) Tramadol Hệ số R2 0,9999 Hệ số B 2,0584 2,0693 Giá trị t hệ số B 196,4431 389,1056 Hệ số Bo 0,0233 0,0112 Giá trị t hệ số Bo 1,979136 1,884115 Giá trị F 38589,90225 151403,1604 Giá trị F0,05 7,708647 7,708647 Giá trị t0,05 2,776445 2,776445 Phƣơng trình hồi quy Y = 2,0584X Y = 2,0693X Nhận xét: Biện luận kết dựa vào giả thuyết thống kê: Trắc nghiệm F (trắc nghiệm tính tƣơng thích phƣơng trình) 18 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh H0: phƣơng trình hồi quy khơng tƣơng thích Giả thuyết: HA: phƣơng trình hồi quy tƣơng thích Phân tích thống kê: Giá trị thống kê Giá trị tới hạn F0,05 = FINV(0,05; γ1 = 1; γ2 = n-2) Biện luận: Nếu F > F0,05 → bác bỏ giả thuyết H0, tức phƣơng trình hồi quy tƣơng thích Nếu F < F0,05 → chấp nhận giả thuyết H0, tức phƣơng trình hồi quy khơng tƣơng thích Trắc nghiệm t (trắc nghiệm ý nghĩa hệ số B0) H0: hệ số B0 khơng có ý nghĩa Giả thuyết: HA: hệ số B0 có ý nghĩa Giá trị thống kê: Giá trị tới hạn t0,05 = TINV(0,05; γ = n-2) Biện luận: Nếu t > t0,05 → bác bỏ giả thuyết H0, tức hệ số hồi quy B0 có ý nghĩa Nếu t < t0,05 → chấp nhận giả thuyết H0, tức hệ số hồi quy B0 khơng có ý nghĩa 19 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh R2 phƣơng trình hồi quy > 0,995 Nhƣ có tƣơng quan tuyến tính tỉ số nồng độ đồng phân so với chuẩn nội tỉ số diện tích đỉnh chuẩn hóa đồng phân so với chuẩn nội 4.2.4 Độ lặp lại Chuẩn bị dung dịch mẫu thử nhƣ mục 3.2.1 tiến hành điện di với mẫu thử, mẫu bơm lần Kết độ lặp lại dƣợc thể bảng 4.5 Bảng 4.5 Kết độ lặp lại (-) tramadol Khối lƣợng (+) tramadol Hàm lƣợng/ cân (g) 0,4039 1,014355 24,61 1,007863 24,34 0,4047 1,019645 24,69 1,016620 24,50 0,4036 1,007975 24,48 1,016177 24,56 0,4045 1,005310 24,36 1,000272 24,12 0,404 1,003413 24,34 1,001752 24,18 0,4043 1,000330 24,25 0,995430 24,01 TB 1,008505 24,46 1,006353 24,29 SD 0,007233 0,17 0,008737 0,22 0,71 0,70 0,86 0,89 RSD (%) viên (mg) Tỉ số CorrArea Hàm lƣợng/ Tỉ số CorrArea viên (mg) Nhận xét: Sau tiêm mẫu thử tramadol hydroclorid, độ lệch chuẩn tƣơng đối hàm lƣợng đồng phân tìm đƣợc nhỏ 2% Kết luận: Quy trình đạt độ lặp lại 20 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 4.2.5 Độ Độ đƣợc khảo sát phƣơng pháp thêm chuẩn, tiến hành mẫu với hàm lƣợng chất chuẩn đƣợc thêm vào 80%, 100%, 120% so với hàm lƣợng hoạt chất có mẫu Kết khảo sát độ đƣợc thể bảng 4.6 4.7 Bảng 4.6 Kết khảo sát độ đồng phân (-) tramadol Tỷ lệ chất đối chiếu thêm vào (%) 80 100 120 Lƣợng (-) Thể tích Lƣợng tramadol dung dịch chất đối đối chiếu chiếu mẫu ban gốc thêm thêm vào đầu vào (ml) (mg) 24,34 0,8 24,34 Tổng Hàm lƣợng tìm lƣợng lại đƣợc phục hồi (mg) (mg) 20,03 44,30 11,95 99,6 0,8 20,03 44,91 20,57 102,7 9,954324 0,8 20,03 44,52 20,18 100,7 24,34 0,8 25,04 49,72 25,38 101,4 24,34 0,8 25,04 50,87 26,53 106,0 24,34 0,8 25,04 50,38 26,04 104,0 24,34 0,8 30,05 55,13 30,79 102,5 24,34 0,8 30,05 55,99 31,64 105,3 24,34 0,8 30,05 56,11 31,77 105,7 Tỷ lệ phục hồi (%) 21 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Bảng 4.7 Kết khảo sát độ đồng phân (+) tramadol Lƣợng (+) Thể tích Lƣợng dung dịch chất đối đối chiếu chiếu gốc thêm thêm vào vào (ml) (mg) 24,18 0,8 24,18 Tỷ lệ chất tramadol đối chiếu thêm vào mẫu ban (%) đầu Tổng Hàm lƣợng tìm lƣợng lại đƣợc phục hồi (mg) (mg) 20,03 44,34 20,16 100,6 0,8 20,03 45,13 20,94 104,6 24,18 0,8 20,03 44,53 20,34 101,6 24,18 1,0 25,04 48,82 24,64 98,4 24,18 1,0 25,04 50,33 26,14 104,4 24,18 1,0 25,04 51,49 27,31 109,1 24,18 1,2 30,05 54,63 30,44 101,3 24,18 1,2 30,05 56,03 31,84 106,0 24,18 1,2 30,05 53,96 29,78 99,1 Tỷ lệ phục hồi (%) (mg) 80 100 120 Nhận xét: quy trình phân tích đồng phân có tỷ lệ phục hồi nằm khoảng 98106% 22 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 23 KẾT LUẬN Sau thời gian thực đề tài, thu thập đƣợc kết sau: - Quy trình phân tách đồng phân tramadol phƣơng pháp điện di mao quản đƣợc xây dựng, sử dụng hệ điện ly phosphat – tris 50 mM pH 3; tác nhân đối quang carboxymethyl-β-CD mg/ ml; điện 25 kV; nhiệt độ cột 25 oC; áp suất bơm mẫu 50 mbar; thời gian bơm mẫu 5s; nội chuẩn ephedrin 50 µg/ ml Kết thẩm định cho thấy quy trình phân tách có tính đặc hiệu; khoảng tuyến tính 2,5 – 125 µg/ml cho đồng phân với hệ số tƣơng quan cao (R > 0,995); độ lặp lại đạt (RSD < %) độ với tỷ lệ phục hồi 98 - 106% Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Alireza Shafaati Majid Zandkarimi, Seyed Mohsen Foroutan, Nahid Hassani Oliaee, Ameneh Eslamparast, (2005), "Separation of tramadol enantiomers by capillary electrophoresis using highly sulfated cyclodextrins", DARU Journal of pharmaceutical science 13(4), tr 143 - 147 ICH Harmonised Tripartie guideline, Validation of analytical procedures: Text and Methology, (2005), Q2 (R1), pp.6-13 Jean Luc Veuthey Serge Rudaz, Claudia Desiderio, Salvatore Fanali, (1998), "", Electrophoresis, 19, pp 2883 - 2889 József Szejtli (2004), “Past, present, and future of cyclodextrin research”, Pure and Applied Chemistry, 76, pp.1829-1830 Julianna Szemh, Katalin Ganzler (1994), “Use of cyclodextrins and cyclodextrin derivatives in high- performance liquid chromatography and capillary electrophoresis”, Journal of Chromatography A, 668, pp.509-517 Manoj M Nitalikar, Dinesh M Sakarkar, Parag V Jain (2012), “The Cyclodextrins: A Review”, Journal of Current Pharmaceutical Research, pp.1-6 Valverde I., Blanco M., (2003), "Choice of chiral selector for enantioseparation by capillary electrophoresis", Trends in Analytical Chemistry, 22(7-8), pp 428-439 ... tiêu: Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học tramadol phƣơng pháp điện di mao quản Nội dung chính: - Xây dựng quy trình ứng dụng tác nhân đối quang tổng hợp để tách đồng phân quang học tramadol. .. đối quang để phân tách đồng phân quang học CE, đề tài: ? ?Xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học tramadol phƣơng pháp điện di mao quản? ?? đƣợc thực với mục tiêu xây dựng thẩm định quy trình. .. kỹ thuật điện di mao quản - Khảo sát điều kiện tách đồng phân quang học tramadol kỹ thuật điện di mao quản - Đánh giá quy trình phân tách đồng phân quang học tramadol Kết đạt đƣợc (khoa học, đào