ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐH KHOA HỌC TỰ NHIÊN ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI - TRƢỜNG ĐH KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ THU HOA Nguyễn Thị Thu Hoa NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG S– ALLYL–L-CYSTEIN (SALC), DIALLY DISULFIDE (DADS) TRONG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG S – ALLYL – L TỎI ĐEN – CYSTEIN (SALC), DIALLY DISULFIDE (DADS) TRONG TỎI ĐEN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2016 Hà Nội - 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐH KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ THU HOA NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG S–ALLYL–L–CYSTEIN (SALC), DIALLY DISULFIDE (DADS) TRONG TỎI ĐEN Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS LÊ THỊ HỒNG HẢO Hà Nội - 2016 Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích LỜI CẢM ƠN Lời cho gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Lê Thị Hồng Hảo tận tình hƣớng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài viết luận văn Tôi xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo Viện Kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh Thực phẩm Quốc gia tạo điều kiện thuận lợi cho đƣợc học tập nghiên cứu Viện Tôi xin chân thành cảm ơn ThS Cao Cơng Khánh, ThS Vũ Thị Kim Oanh tồn thể anh chị khoa Nghiên cứu Thực phẩm, anh chị Viện, nhiệt tình bảo, hƣớng dẫn, động viên tơi suốt q trình làm thực tập Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới Thầy Cơ giảng dạy Khoa Hóa học, đặc biệt thầy Bộ mơn Hóa Phân tích truyền đạt cho kiến thức quý giá, tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu môi trƣờng khoa học, đại Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè anh chị Bộ mơn Hố Phân tích giúp đỡ thời gian thực nghiên cứu Hà Nội, tháng 12, năm 2016 Học viên Nguyễn Thị Thu Hoa Nguyễn Thị Thu Hoa i Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH/ ĐỒ THỊ vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG - TỔNG QUAN .3 1.1 TỔNG QUAN VỀ TỎI ĐEN 1.1.1 Khái quát chung tỏi trắng 1.1.2 Khái quát chung tỏi đen 1.1.3 Quá trình lên men tỏi thành tỏi đen 1.2 TỔNG QUAN VỀ S-ALLYL-L-CYSTEIN VÀ DIALLYL-DISULFIDE .6 1.2.1 Tổng quan S-allyl-L-cystein 1.2.1.1 Cấu trúc tính chất 1.2.1.2 Vai trò SALC sức khỏe ngƣời 1.2.2 Tổng quan diallyl disulfide (DADS) 1.2.2.1 Cấu trúc tính chất 1.2.2.2 Tác dụng DADS sức khỏe ngƣời 10 1.3 TỔNG QUAN VỀ CÁC PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH S-ALLYL-LCYSTEIN VÀ DIALLYL DISULFIDE .11 1.3.1 Các phƣơng pháp xác định SALC 11 1.3.1.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao với detector UV 11 1.3.1.2 Phƣơng pháp sắc ký lỏng với detector huỳnh quang 13 1.3.1.3 Phƣơng pháp sắc ký lỏng với detector khối phổ LC/MS/MS 13 1.3.2 Các phƣơng pháp xác định diallyl disulfide DADS 15 1.3.2.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao với detector UV 15 1.3.2.2 Phƣơng pháp sắc ký lỏng với detector khối phổ (LC/MS/MS) 15 1.3.2.3 Sắc ký khí (GC) .16 CHƢƠNG - ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 Nguyễn Thị Thu Hoa ii Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích 2.1 ĐỐI TƢỢNG, MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .18 2.1.1 Mục tiêu ghiên cứu 18 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.1.3 Đối tƣợng 18 2.2 PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 18 2.2.1 Hóa chất 18 2.2.2 Dụng cụ phân tích 20 2.2.3 Thiết bị phân tích .20 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.3.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 21 2.3.2 Phƣơng pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS) 22 2.4 THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP 23 2.5 PHƢƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 25 2.6 PHƢƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ .25 CHƢƠNG 3- KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG SALC TRONG TỎI ĐEN BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC-PDA .27 3.1.1 Khảo sát điều kiện phƣơng pháp HPLC-PDA để xác định hàm lƣợng S-allyl-L-cystein 27 3.1.1.1 Lựa chọn điều kiện detector 27 3.1.1.2 Lựa chọn điều kiện phân tích S-allyl-L-cystein phƣơng pháp HPLC-PDA 28 3.1.1.3 Khảo sát điều kiện dẫn xuất hóa .28 3.1.1.4 Khảo sát chƣơng trình rửa giải pha động 31 3.1.2 Khảo sát điều kiện chiết mẫu 35 3.1.3 Thẩm định phƣơng pháp phân tích 36 3.1.3.1 Độ đặc hiệu .36 3.1.3.2 Khoảng tuyến tính lập phƣơng trình đƣờng chuẩn 38 Nguyễn Thị Thu Hoa iii Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích 3.1.3.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 39 3.1.3.4 Độ lặp lại 40 3.1.3.5 Độ thu hồi 41 3.1.4 Áp dụng phân tích S-allyl-L-cystein số mẫu thực tế .42 3.2 NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG DADS TRONG TỎI ĐEN BẰNG GC - MS 44 3.2.1 Lựa chọn điều kiện phƣơng pháp GC-MS để xác định hàm lƣợng DADS 44 3.2.1.1 Lựa chọn cột tách 44 3.2.1.2 Lựa chọn chƣơng trình nhiệt độ cột tách 44 3.2.2 Khảo sát điều kiện chiết mẫu 45 3.2.3 Thẩm định phƣơng pháp phân tích 46 3.2.3.1 Độ đặc hiệu .46 3.2.3.2 Xây dựng đƣờng chuẩn .47 3.2.3.3 Giới hạn định lƣợng (LOQ) 48 3.2.3.4 Độ lặp lại 49 3.2.3.5 Độ thu hồi 50 3.2.4 Áp dụng phân tích số mẫu thực tế 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 PHỤ LỤC I Nguyễn Thị Thu Hoa iv Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Độ hòa tan 1g SALC dung môi khác độ pH khác 200C Bảng 3.1 Khảo sát số mM muối borat .29 Bảng 3.2 Khảo sát pH đệm borat .30 Bảng 3.3 Khảo sát thời gian dẫn xuất FMOC 31 Bảng 3.4 Kết khảo sát SALC phân tích chế độ đẳng dòng 32 Bảng 3.5 Các chƣơng trình dung mơi gradient 33 Bảng 3.6 Kết khảo sát tỉ lệ dung môi chiết methanol : nƣớc 36 Bảng 3.7 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ SALC 38 Bảng 3.8 Độ lệch điểm chuẩn SALC dùng xây dựng đƣờng chuẩn 38 Bảng 3.9 Kết đo mẫu tỏi đen hàm lƣợng thấp 39 Bảng 3.10 Kết độ lặp lại phân tích hàm lƣợng SALC mẫu tỏi đen 40 Bảng 3.11 Bảng đối chiếu kết độ lặp lại phƣơng pháp HPLC-PDA để phân tích hàm lƣợng SALC tỏi đen theo AOAC .40 Bảng 3.12 Kết độ thu hồi phân tích hàm lƣợng SALC mẫu tỏi đen mức nồng độ khác 41 Bảng 3.13 Bảng đối chiếu kết độ thu hồi phƣơng pháp HPLC-PDA để phân tích hàm lƣợng SALC tỏi đen theo AOAC 41 Bảng 3.14 Kết phân tích hàm lƣợng SALC số mẫu thực tế .43 Bảng 3.18 Kết khảo sát tỉ lệ dung môi chiết ethanol, acetone methanol 45 Bảng 3.16 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ DADS .47 Bảng 3.17 Độ lệch điểm chuẩn DADS dùng xây dựng đƣờng chuẩn 48 Bảng 3.18 Kết độ lặp lại phân tích hàm lƣợng DADS mẫu tỏi đen 49 Bảng 3.19 Bảng đối chiếu kết độ lặp lại phƣơng pháp GC-MS để phân tích hàm lƣợng DADS tỏi đen theo AOAC 50 Bảng 3.20 Kết độ thu hồi phân tích hàm lƣợng DADS mẫu tỏi đen 50 Bảng 3.21 Kết phân tích hàm lƣợng DADS số mẫu thực tế 52 Nguyễn Thị Thu Hoa v Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích DANH MỤC CÁC HÌNH/ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Hình ảnh củ tỏi trắng Lý Sơn Hình 1.2 Hình ảnh sản phẩm tỏi đen sau lên men .5 Hình 1.3 Quy trình lên men tỏi đen Hình 1.4 Cơng thức hóa học S-allyl-L-cystein Hình 1.5 Q trình chuyển hóa γ-glutamyl-S-allylcystein thành SALC Hình 1.6 Cơng thức hóa học Diallyl disulfide 10 Hình 2.1 Hình ảnh hệ thống phân tích HPLC –PDA hãng Water để xác định hàm lƣợng SALC tỏi đen 21 Hình 2.2 Hình ảnh hệ thống phân tích GC-MS hãng Thermo để xác định hàm lƣợng DADS tỏi đen .22 Hình 3.1 Sắc đồ xác định SALC HPLC – PDA với số mM muối borat 20mM .29 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích pic SALC vào pH đệm borat .30 Hình 3.3 Sắc đồ xác định SALC HPLC-PDA với pH đệm borat 30 Hình 3.4 Sắc đồ xác định SALC khảo sát chế độ đẳng dòng với tỷ lệ dung mơi CH3COONH4:ACN = 40:60, thời gian phân tích 40 phút 32 Hình 3.5 Sắc đồ xác định SALC khảo sát chế độ đẳng dịng với tỷ lệ dung mơi CH3COONH4:ACN = 60:40, thời gian phân tích 40 phút 32 Hình 3.6 Sắc đồ chuẩn SALC 4µg/mL theo chƣơng trình dung mơi gradient .33 Hình 3.7 Sắc đồ chuẩn SALC 4µg/mL theo chƣơng trình dung mơi gradient .33 Hình 3.8 Sắc đồ chuẩn SALC 4µg/mL theo chƣơng trình dung mơi gradient .34 Hình 3.9 Sắc đồ chuẩn SALC 4µg/mL theo chƣơng trình dung mơi gradient .34 Hình 3.10: Sắc đồ xác định hàm lƣợng SALC mẫu tỏi đen phân tích hệ thống HPLC-PDA 35 Hình 3.11 Sắc đồ xác định SALC phƣơng pháp phân tích HPLC-PDA tỷ lệ dung mơi chiết MeOH:H2O = 50:50 36 Hình 3.12 Sắc đồ dung dịch chuẩn SALC 37 Nguyễn Thị Thu Hoa vi Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích Hình 3.13 Sắc đồ dung dịch mẫu trắng .37 Hình 3.14 Sắc đồ dung dịch mẫu trắng thêm chuẩn SALC 37 Hình 3.15 Đƣờng chuẩn SALC 38 Hình 3.16 Quy trình tách xác định hàm lƣợng SALC mẫu tỏi đen 42 Hình 3.17 Sắc đồ dung dịch mẫu TĐ1 phân tích hệ thống HPLC-PDA 43 Hình 3.18 Sắc đồ xác định DADS chiết dung mơi MeOH .45 Hình 3.19 Sắc đồ dung dịch chuẩn DADS 4,0 µg/mL 46 Hình 3.20 Phổ khối dung dịch DADS 4,0 µg/mL phân tích hệ thống GC-MS .46 Hình 3.21 Đƣờng chuẩn DADS xác định phƣơng pháp GC-MS .47 Hình 3.22 Sắc đồ DADS mức dƣới định lƣợng 49 Hình 3.23 Quy trình tách xử lý mẫu tỏi đen để phân tích hàm lƣợng DADS .51 Hình 3.24 Sắc đồ dung dịch mẫu TD3-2996dvc phân tích hệ thống GC-MS .53 Nguyễn Thị Thu Hoa vii Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu viết tắt Tên ABTS 2,2-azino-bis-(3-ethylbenozothiazoline-6-sulfonic acid) ACN Acetone nitrile C Nồng độ dung dịch Cc Lƣợng chuẩn thêm vào theo lý thuyết FLD Detector huỳnh quang FMOC 9-fluorenylmethyl-chloroformate GC Sắc ký khí GC-MS Sắc ký khí khối phổ HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao LOD Giới hạn phát LOQ Giới hạn định lƣợng MeOH Methanol SALC S-allyl-L-cystein SD Độ lệch chuẩn Nguyễn Thị Thu Hoa viii Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích SALC - 6.425 - 641118 0.15 AU 0.10 0.05 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 15.00 20.00 25.00 Minutes SALC - 6.410 - 1256034 0.14 0.12 0.10 AU 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0.00 5.00 10.00 Minutes SALC - 5.830 - 5873 1.8 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng 0.008 AU 0.006 0.004 0.002 4.00 Nguyễn Thị Thu Hoa 5.00 6.00 Minutes X 7.00 8.00 Trường ĐHKH Tự nhiên Chuyên ngành: Hóa phân tích SALC - 5.880 - 6734 Luận văn thạc sĩ 0.008 AU 0.006 0.004 0.002 5.00 6.00 Minutes 4.00 5.00 6.00 Minutes 7.00 8.00 7.00 8.00 SALC - 5.883 - 6684 4.00 0.008 AU 0.006 0.004 5.883 - 6494 0.002 0.008 AU 0.006 0.004 0.002 4.00 Nguyễn Thị Thu Hoa 5.00 6.00 Minutes XI 7.00 8.00 Trường ĐHKH Tự nhiên Chun ngành: Hóa phân tích SALC - 5.947 - 6741 Luận văn thạc sĩ 0.008 AU 0.006 0.004 0.002 5.00 6.00 Minutes 7.00 8.00 7.00 8.00 SALC - 5.943 - 6587 4.00 0.008 AU 0.006 0.004 0.002 4.00 5.00 6.00 Minutes 1.9 Độ lặp lại SALC - 6.506 - 55587 0.15 AU 0.10 0.05 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 Minutes Nguyễn Thị Thu Hoa XII Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích SALC - 6.504 - 50351 0.15 AU 0.10 0.05 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 15.00 20.00 25.00 15.00 20.00 25.00 Minutes SALC - 6.498 - 54257 0.15 AU 0.10 0.05 0.00 0.00 5.00 10.00 Minutes SALC - 6.499 - 58607 0.15 AU 0.10 0.05 0.00 0.00 5.00 10.00 Minutes Nguyễn Thị Thu Hoa XIII Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích SALC - 6.722 - 41361 1.10 Độ thu hồi AU 0.15 0.10 0.05 0.00 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 15.00 20.00 25.00 15.00 20.00 25.00 SALC - 6.715 - 39989 Minutes 0.15 AU 0.10 0.05 0.00 0.00 5.00 10.00 SALC - 6.734 - 59484 Minutes 0.15 AU 0.10 0.05 0.00 0.00 5.00 10.00 Minutes Nguyễn Thị Thu Hoa XIV Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích 1.11 Sắc đồ phân tích số mẫu thực SAC - 6.887 - 125238 0.10 0.08 AU 0.06 0.04 0.02 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 Minutes 0.040 SAC - 6.885 - 38588 AU 0.030 0.020 0.010 0.000 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 Minutes 0.40 0.20 6.915 - 96683 AU 0.30 0.10 0.00 0.00 5.00 Nguyễn Thị Thu Hoa 10.00 15.00 Minutes XV 20.00 25.00 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích Sắc đồ khảo sát điều kiện tối ƣu phƣơng pháp GC-MS 2.1 Khảo sát tỉ lệ dung môi chiết RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.64 MA: 783664 100 NL: 1.78E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-c-3,0681g10ml-EtOH 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 15.78 12.98 12 13.57 14 16.07 16 18.41 19.28 18 Time (min) 20.72 21.68 20 22.49 23.24 22 24 RT: 12.00 - 24.03 100 NL: 3.19E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-b-3,1684g10ml-Acetone 12.37 RT: 12.55 MA: 765788 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 12.89 14.10 12 14 15.76 16.05 16 17.23 18.71 18 Time (min) 19.48 20 20.66 21.82 22.39 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.61 MA: 841006 100 NL: 1.84E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-a-3,1253g10ml-MeOH 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 15.76 12.98 12 13.56 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 16.07 16 18.13 18.80 18 Time (min) XVI 19.80 20 21.76 22.43 22 23.32 24 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích 2.2 Độ đặc hiệu RT: 12.00 - 24.03 NL: 2.16E5 m/z= 38.5039.50+ 78.50-79.50 MS Blank 100 95 90 85 80 75 12.12 70 Relative Abundance 65 60 12.16 55 12.22 50 45 12.28 40 35 12.37 30 12.52 12.58 25 20 12.78 13.74 15 10 13.88 14.39 15.01 15.84 16.78 17.67 18.65 20.02 21.10 21.87 12 14 16 18 Time (min) 20 22.70 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.66 MA: 390577 100 NL: 1.10E5 m/z= 38.5039.50+ 78.5079.50 MS Std-4ppm 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 13.03 12 13.78 14 15.83 16 15.96 18.78 18.26 18 Time (min) 20.46 21.00 20 22.30 23.00 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.66 MA: 212294 100 NL: 5.92E4 m/z= 38.5039.50+ 78.50-79.50 MS Std-3,2ppm 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 12.94 13.72 15.83 12 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 16 17.14 18.35 18.78 18 Time (min) XVII 21.02 20 21.86 22.48 22 23.32 24 Trường ĐHKH Tự nhiên Relative Abundance Relative Abundance Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích Blank-spk #138 RT: 12.67 AV: T: + c Full ms [30.00-120.00] 31.81 100 NL: 6.65E3 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 38.85 60 55 50 45 40 35 40.85 30 25 20 43.86 15 10 36.81 44.83 47.84 54.92 63.85 68.89 30 40 50 60 78.94 70 80 84.88 112.80 97.08 90 100 110 120 m/z 2.3 Khoảng tuyến tính lập phƣơng trình đƣờng chuẩn RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.66 MA: 213346 100 NL: 5.92E4 m/z= 38.5039.50+ 78.5079.50 MS Std-3,2ppm 90 80 70 60 50 40 30 20 10 12.94 13.72 15.83 12 14 17.14 16 18.78 18 Time (min) 20.91 21.86 20 22.48 23.32 22 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.66 MA: 390577 100 24 NL: 1.10E5 m/z= 38.5039.50+ 78.5079.50 MS Std-4ppm 90 80 70 60 50 40 30 20 10 13.03 12 13.78 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 15.83 16 15.96 18.26 18.78 18 Time (min) XVIII 20.46 20 21.00 22.30 23.00 22 24 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.65 MA: 461390 100 NL: 1.20E5 m/z= 38.5039.50+ 78.5079.50 MS Std-5,3ppm 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 12.98 13.64 12 14 15.82 16.83 16 17.93 18.78 18 Time (min) 20.15 20 21.20 22.47 23.09 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.65 MA: 826174 100 NL: 2.74E5 m/z= 38.5039.50+ 78.5079.50 MS Std-8ppm 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 13.04 14.04 12 14 15.81 16.00 16 17.55 18.76 18 Time (min) 20.44 20 22.46 22.98 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.63 MA: 1520324 100 NL: 4.87E5 m/z= 38.5039.50+ 78.5079.50 MS Std-16ppm 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 12.97 12 13.64 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 15.80 15.96 16 17.59 18.75 18 Time (min) XIX 20.45 20 21.74 22.47 22 22.98 24 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.59 MA: 3141195 100 NL: 1.24E6 m/z= 38.5039.50+ 78.5079.50 MS Std-32ppm 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 15.79 13.09 12 15.25 14 15.96 16 17.67 18.74 18 Time (min) 20.12 20 21.78 22.45 22.96 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.63 MA: 7928251 100 NL: 2.78E6 m/z= 38.5039.50+ 78.5079.50 MS Std-80ppm 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 20 10 15.79 13.50 12 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 15.21 16.28 16 18.25 18.73 18 Time (min) XX 19.79 20 21.68 22.44 22 23.28 24 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chun ngành: Hóa phân tích 2.4 Giới hạn định lƣợng (LOQ) RT: 12.00 - 24.03 NL: 8.17E3 m/z= 38.5039.50+ 78.50-79.50 MS Blank-spk 18.75 100 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 19.04 RT: 12.68 MA: 17575 55 50 45 20.46 40 35 20.14 14.67 30 12.87 13.00 25 14.73 20 15.56 15 16.40 17.25 21.13 19.10 21.31 10 23.37 12 14 16 18 Time (min) 20 22 24 2.5 Độ lặp lại RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.68 MA: 2110954 100 NL: 9.13E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-b-3,1002g10ml 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 14.12 15 10 17.41 13.86 14.82 16.64 17.14 18.16 12 14 16 18 Time (min) 19.50 20.50 20.67 20 22.89 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.68 MA: 2287235 100 NL: 9.13E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-b-3,1702g10ml 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 14.12 15 10 17.41 13.86 14.82 16.64 12 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 16 17.14 18.16 18 Time (min) XXI 19.50 20.50 20 20.67 22.89 22 24 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.71 MA: 1929060 100 NL: 7.51E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-e-3,0655g10ml 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 14.11 20 15 13.86 12.95 10 17.40 14.81 16.64 17.15 18.67 20.38 12 14 16 18 Time (min) 20.92 20 21.85 23.10 22 24 2.6 Độ thu hồi RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.67 MA: 1973391 100 NL: 7.03E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-1a-2,9564g10ml-2 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 14.10 17.40 15 13.85 10 14.80 16.63 17.13 18.13 12 14 16 18.31 18 Time (min) 20.50 20 20.66 22.35 22.90 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.68 MA: 2039493 100 NL: 8.55E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-1b-3,0567g10ml-2 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 14.11 15 13.85 12.92 10 14.79 17.40 16.63 12 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 16 17.12 18.14 18.30 18 Time (min) XXII 20.50 20 21.31 22 22.80 24 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.69 MA: 2033317 100 NL: 8.44E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-1c-2,9831g10ml-2 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 17.40 14.11 15 13.85 10 14.79 16.63 17.13 18.66 20.49 12 14 16 18 Time (min) 20.90 20 21.84 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.69 MA: 3513214 100 NL: 1.26E6 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-2a-2,9917g10ml-2 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 14.12 20 17.41 15 13.87 10 14.83 16.66 18.68 12 14 16 18 Time (min) 20.51 20 20.68 23.28 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.61 MA: 6487290 100 NL: 6.74E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS M-3b-3,1235g10ml-2 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 12.85 30 25 20 12.98 13.07 13.30 14.27 15 10 15.28 19.09 17.11 17.73 19.17 20.92 22.17 22.10 22.72 22.96 12 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 16 18 Time (min) XXIII 20 22 24 Trường ĐHKH Tự nhiên Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Hóa phân tích 2.7 Sắc đồ phân tích số mẫu thực RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.87 MA: 7905091 100 NL: 3.78E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS 2996DVc_2,4 805g_10ml01 90 80 12.97 Relative Abundance 70 13.06 60 50 40 30 20 13.59 14.24 10 16.46 14.41 14.99 16.64 17.07 17.68 18.86 20.57 21.10 21.89 12 14 16 18 Time (min) 20 22 24 RT: 12.00 - 24.03 RT: 12.97 MA: 7574938 100 NL: 3.50E5 m/z= 38.50-39.50+ 78.50-79.50 MS 2996DVd_2,5 295g_10ml01 90 80 Relative Abundance 70 60 50 40 30 13.37 13.57 20 14.16 14.43 14.76 10 16.37 16.48 16.76 16.97 17.57 20.25 20.45 21.84 22.92 12 14 Nguyễn Thị Thu Hoa 16 18 Time (min) XXIV 20 22 24 Trường ĐHKH Tự nhiên ... xác định hàm lƣợng S-allyl-L-cystein (SALC), Diallyl disulfide (DADS) tỏi đen? ?? với hai mục tiêu nhƣ sau: Xây dựng quy trình định lƣợng S-allyl-L-cystein (SALC) tỏi đen HPLC-PDA Xây dựng quy trình. .. có nghiên cứu cụ thể để phân tích hàm lƣợng DADS tỏi đen Do đó, vấn đề đặt tìm quy trình nghiên cứu để xác định hàm lƣợng SALC DADS tỏi đen Từ lý trên, chọn đề tài ? ?Nghiên cứu xây dựng quy trình. .. luận văn là: Xây dựng quy trình định lƣợng S-allyl-L-cystein (SALC) tỏi đen HPLC-PDA Xây dựng quy trình định lƣợng Diallyl disulfide (DADS) tỏi đen GC-MS 2.1.2 Nội dung nghiên cứu Để đạt đƣợc