HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ DUNG NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SỬ DỤNG VI KHUẨN Vibrio fischeri ĐỂ TẠO KIT PHÁT HIỆN NHANH ĐỘC TÍNH CẤP CỦA NƯỚC SINH HOẠT Ngành: Khoa học môi trường Mã số : 44 03 01 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Văn Hoàng TS Nguyễn Thị Minh NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Dung i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Văn Hồng TS Nguyễn Thị Minh tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy - cô giáo khoa Môi trường, trường Học viện Nông nghiệp Việt Nam truyền đạt cho tơi nhiều kiến thức q báu Tơi xin gửi lời cảm ơn tới TS.Phạm Kiên Cường, ThS Bùi Thị Thu Hà, phịng Cơng nghệ Hóa sinh, phịng Cơng nghệ sinh học phòng Thực nghiệm chuyển giao công nghệ tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình làm luận văn Cuối tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè người ln bên cạnh ủng hộ tơi suốt q trình học tập Luận văn thực hỗ trợ kinh phí đề tài cấp Quốc phịng “Nghiên cứu chế tạo KIT phát nhanh độc tính nguồn nước cấp cho sinh hoạt, ứng dụng hoạt động dã ngoại đội” Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Dung ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract x Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Giả thuyết khoa học 1.3 Mục tiêu nghiên cứu 1.4 Phạm vi nghiên cứu 1.5 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Độc tính cấp nguồn nước 2.1.1 Khái niệm 2.1.2 Nguyên nhân gây độc tính cấp 2.1.3 Tác động độc tính cấp 2.2 Các phương pháp thiết bị để phát độc tính cấp nguồn nước giới việt nam 18 2.2.1 Một số phương pháp phát độc tính cấp sử dụng máy móc, thiết bị phịng thí nghiệm 18 2.2.2 Phát độc tính dựa cảm biến sinh học 19 2.3 Cơ sở khoa học việc sản xuất KIT xác định độc tính môi trường nước vi khuẩn Vibrio fischeri 23 2.3.1 Đặc tính phát quang Vibrio fischeri ảnh hưởng chất độc đến độ phát quang vi khuẩn 23 2.3.2 Chế tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nguồn nước 29 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 32 iii 3.1 Địa điểm nghiên cứu 32 3.2 Thời gian nghiên cứu 32 3.3 Đối tượng/vật liệu nghiên cứu 32 3.4 Nội dung nghiên cứu 33 3.5 Phương pháp nghiên cứu 33 3.5.1 Phương pháp phân tích xác định kim loại nặng hóa chất bảo vệ thực vật 33 3.5.2 Phương pháp thực nghiệm 34 3.5.3 Phương pháp xử lý số liệu 43 Phần Kết thảo luận 44 4.1 Nghiên cứu xác định điều kiện nuôi cấy tạo vi khuẩn Vibrio fischeri 44 4.1.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến tốc độ sinh trưởng cường độ phát quang 44 4.1.2 Nghiên cứu xác định yếu tố ảnh hưởng đến phát triển phát quang vi khuẩn Vibrio fischeri 47 4.2 Nghiên cứu ức chế số hóa chất độc hại đến phát quang vi khuẩn Vibrio fischeri 51 4.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng số kim loại nặng 51 4.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng số hóa chất bảo vệ thực vật 57 4.2.3 Nghiên cứu nâng cao khả ức chế phát quang số chất độc 59 4.3 Nghiên cứu xác định quy trình sản xuất KIT phát nhanh độc tính cấp nguồn nước 62 4.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện bảo quản 62 4.3.2 Nghiên cứu thành phần phụ trợ 67 4.3.3 Nghiên cứu đề xuất quy trình tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt 68 4.3.4 Nghiên cứu thử nghiệm 70 Phần Kết luận kiến nghị 72 5.1 Kết luận 75 5.2 Kiến nghị 75 Tài liệu tham khảo 76 Phụ lục 85 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Nghĩa tiếng việt DDT dicloro diphenyl tricloroetan QCVN Quy chuẩn Việt Nam TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TCCP Tiêu chuẩn cho phép BTNMT Bộ Tài nguyên Môi trường BYT Bộ Y tế HCBVTV Hóa chất bảo vệ thực vật RLU (Relative Light Units) Đơn vị ánh sáng tương đối OD600 (Optical Density 600 nm) Mật độ quang học bước sóng 600 nm (World Health Organization) Tổ chức y tế giới WHO (Joint Expert Committee of Food Additives) Ủy ban chuyên gia JECFA phụ gia thực phẩm (International Agency for Research on Cancer) Tổ chức ung thư IARC giới (Flame Atomic Absorption Spectrometry) Phương pháp hấp phụ F - AAS nguyên tử lửa (Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry) Phương pháp khối phổ plasma cảm ứng ICP – MS 666 Hexancloxyclohecxan v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Hiện trạng tồn dư HCBVTV kho toàn quốc Bảng 2.2 Biểu lâm sàng triệu chứng nhiễm độc thuốc BVTV 14 Bảng 2.3 Theo dõi thay đổi hành vi cá liên kết với điều kiện stress khác 20 Bảng 3.1 Các thành phần môi trường nuôi cấy 34 Bảng 3.2 Các thành phần môi trường bảo quản lỏng 41 Bảng 3.3 Các thành phần môi trường đông khô 43 Bảng 4.1 Mật độ tế bào vi khuẩn Vibrio fischeri môi trường nuôi cấy 47 Bảng 4.2 Hiệu suất quang học xét nghiệm độc tính As(V), Pb(II), Hg(II), DDT, Lindane, 2,4D (thời gian tiếp xúc 30 phút) 60 Bảng 4.3 Ảnh hưởng thành phần đông khô nhiệt độ bảo quản đến cường độ phát quang vi khuẩn Vibrio ficheri 65 Bảng 4.4 Kết thử nghiệm đánh giá KIT tự tạo KIT hãng ModernWater (Hoa Kỳ) 71 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Thiết bị phát chất độc Microtox 21 Hình 2.2 Thiết bị phát chất độc DeltaTox II 22 Hình 2.3 Toxi-Screening KIT 23 Hình 2.4 Cấu trúc vi khuẩn Vibrio fischeri 24 Hình 2.5 Lồi mực Euprymna scolopes sống cộng sinh với Vibrio fischeri 25 Hình 2.6 Vùng gen qui định khả phát quang Vibrio fischeri (Golnaz, 2011) 27 Hình 2.7 Cơ chế điều hịa phát quang sinh học Vibrio fischeri (Ting, 2016) 27 Hình 2.8 Cơ chế tác động đến khả phát quang Vibrio fischeri gây hai độc chất (Ting, 2016) 28 Hình 4.1 Tương quan tốc độ sinh trưởng (thể qua giá trị OD600) cường độ phát quang (thể qua giá trị photon light, đơn vị RLU) Vibrio fischeri Photobacterium MT K 2% 47 Hình 4.2 Vibrio fischeri ni lỏng MT K 2% (trái), Photobacterium (phải) sau 23h 46 Hình 4.3 Mức độ phát quang Vibrio fischeri môi trường Photobacterium MT K 2%, sau 23h 47 Hình 4.4 Ảnh hưởng pH mơi trường đến phát triển phát quang Vibrio fischeri 48 Hình 4.5 Ảnh hưởng nồng độ NaCl môi trường đến phát triển phát quang Vibrio fischeri 49 Hình 4.6 Ảnh hưởng nhiệt độ mơi trường đến phát triển phát quang Vibrio fischeri 50 Hình 4.7 Sự ảnh hưởng As5+ đến cường độ phát quang Vibrio fischeri 52 Hình 4.8 Sự ảnh hưởng Pb2+ đến cường độ phát quang Vibrio fischeri 54 Hình 4.9 Sự ảnh hưởng Hg2+ đến cường độ phát quang Vibrio fischeri 55 Hình 4.10 Sự ảnh hưởng DDT đến cường độ phát quang Vibrio fischeri 57 Hình 4.11 Sự ảnh hưởng Lindane (666) đến cường độ phát quang Vibrio fischeri 58 Hình 4.12 Sự ảnh hưởng 2,4 D đến cường độ phát quang Vibrio fischeri 59 vii Hình 4.13 Sự ảnh hưởng nồng độ vi khuẩn đến cường độ phát quang vi cầu alginate 61 Hình 4.14 Sự ảnh hưởng thành phần chất bảo quản đến độ phát quang vi khuẩn (5ºC) 63 Hình 4.15 Sự ảnh hưởng nhiệt độ bảo quản với sữa gầy 10% đến độ phát quang vi khuẩn 64 Hình 4.16 Sự ảnh hưởng nhiệt độ bảo quản vi khuẩn đông khô với sữa gầy 10% đến độ phát quang vi khuẩn 66 Hình 4.17 Thành phần KIT phát độc tính cấp nguồn nước 68 Hình 4.18 Quy trình tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt 68 Hình 4.19 Bộ KIT phát độc tính cấp nguồn nước 70 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Dung Tên luận văn: “Nghiên cứu khả sử dụng vi khuẩn Vibrio fischeri để tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt” Ngành: Khoa học môi trường Mã Số: 44 03 01 Tên sở đào tạo: Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Đề tài "Nghiên cứu khả sử dụng vi khuẩn Vibrio fischeri để tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt" tiến hành nhằm mục đích: Xác định tính chất, đặc trưng chủng vi khuẩn Vibrio fischeri làm cở để xây dựng quy trình chế tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt (do ô nhiễm, cố) dựa khả ức chế phát quang vi khuẩn Vibrio fischeri, áp dụng cho điều kiện dã ngoại thực địa vùng sâu, vùng xa, biên giới, hải đảo, Kết nghiên cứu xác định điều kiện nuôi cấy tối ưu bao gồm môi trường nuôi cấy yếu tố ảnh hưởng đến cường độ phát quang vi khuẩn (nhiệt độ, pH, độ muối) Môi trường nuôi cấy Vibrio fischeri phù hợp Photobacterium tốc độ lắc 200 vòng/phút, nhiệt độ 26ºC, pH 6-7, NaCl 2% Vi khuẩn tươi Vibrio fischeri có khả phát độc tính kim loại nặng hóa chất bảo vệ thực vật Tuy nhiên nồng độ phát mức cao so với QCVN (1925.000 lần) Ngưỡng phát Pb 0,003-0,75 mg/l; As 0,8-102,4 mg/l; Hg 0,00120,16mg/l; DDT 40-70mg/l; 2,4 D 15-45 mg/l; Lindane 35-55 mg/l Quá trình bọc vi cầu alginate gia tăng độ nhạy cho vi khuẩn (4-2.470 lần), mật độ vi khuẩn tối ưu cho trình bọc vi cầu alginate khoảng OD600 0,75-0,9 Bảo quản lỏng môi trường sữa gầy 10% kết hợp bọc vi cầu alginate nhiệt độ lưu giữ 5oC nghiên cứu phù hợp cho trình tạo KIT Lượng ánh sáng cịn lại phương pháp sau tháng đạt 8,9.104 RLU/ml Trên sở đó, quy trình tạo KIT đề xuất dựa giống phân lập, sau nhân giống lên men, thu sinh khối, tiến hành bổ sung sữa gầy 10% kết hợp bọc vi cầu alginate, sau bảo quản lạnh 5oC Độ nhạy KIT tạo thành tương đương với KIT bán thị trường hãng Modern Water (Hoa Kỳ), chiếm ưu giá thành điều kiện bảo quản ix 44 Lajoie, C.A.; S.C.Lin, H.Nguyen and C.J.Kelly (2002) A toxicity testing protocol using a bioluminescent reporter bacterium from activated sludge J Microbiol Methods Vol 50 pp 273–282 45 Lei Y., W Chen and A Mulchandani (2006) Microbial biosensors Analytica Chimica Acta Vol 568(1–2) pp 200-210 46 Li B (2009 ) Using Bioluminescent Bacteria to Detec Water Contaminants Water Environment Federation Vol pp 29 - 41 47 Macken A.; W.Giltrap, K.Ryall, B.Foley, E.McGovern, B.McHugh and M A Davoren (2009) Test battery approach to the ecotoxicological evaluation of cadmium and copper employing a battery of marine bioassays Ecotoxicology Vol 18 pp 470–480 48 Malik K.A (1990) A simplified liquid drying method for the preservation of microorganisms sensitive to freezing and freezedrying Journal of Microbiological Methods Vol 12.pp 125–132 49 Maria M D., S J Amalia, D.C Maria, Victor M C (1997) Comparative study of the toxic actions of 2,2 - Bis-p-chlorophenyl; 1,1,1-Trichloroethane and 2,2-bis-pchlorophenyl; 1,1-dicholoroethylene on the growth and respiratory activity of microorganism used as model Applied Enviromental Microbiology pp 99-2240 50 McCloskey J.T., M.C.Newman and S.B.Clark (1996) Predicting the relative toxicity of metal ions using ion characteristics: Microtox bioluminescence assay Environmental Toxicology Chemistry Vol 15 (10) pp 1730–1737 51 McFetters G.A., P.J.Bond, S.B.Olson and Y.T.Tchan (1983) A comparison ofmicrobial bioassays for the detection of aquatic toxicants Water Research Vol 17(12) pp.1757–1762 52 Mia K., H.M.Sik, G.M.Gadd and K.H.Joo (2007) A novel biomonitoring system using microbial fuel cells Journal of Environmental Monitoring Vol 9(12) pp 1323-1328 53 Mijares M A., J M Ramírez, J Pedraza, S Román-López and C Chávez (2013) Determination of heavy metals contamination using a silicon sensor with extended responsive to the UV Journal of Physics: Conference Series Vol 421 012016 54 Morgan CA, N Herman, P.A White and G.Vesey (2006) Preservation of micro-organisms by drying; a review.J Microbiol Methods Vol66 (2) pp 183–193 55 Mowat, F.S.and K.J.Bundy 2002 Experimental and mathematical/ computational assessment of the acute toxicity of chemical mixtures from the Microtox assay Adv Environ Res 6, 547–558 77 56 Nunes-Halldorson V.S and N.L.Duran (2003) Bioluminescent bacteria: lux genes as environmental biosensors Brazilian Journal Microbiology Vol 34 pp 91–96 57 OECD (1992), “Report of the OECD workshop on the extrapolation of laboratory aquatic toxicity data to the real environment”, OECD Environment Monographs 59, OECD, Paris 58 OECD (1995), “Guidance document for aquatic effects assessment”, OECD Environment Monographs 92, OECD, Paris 59 Olesya Z., K Dmitry, B Igor, T Fedor, A Natalia, B.Andrey, R Juan, C.R Mari, L Andrey (2015) Water pollution monitoring by an artificial sensory system performing in terms of Vibrio fischeri bacteria Sensors and Actuators B: Chemical Vol 207, Part B pp 1069-1075 60 Onorati F and M.Mecozzi (2004) Effects of two diluents in the Microtox toxicity bioassay with marine sediments Chemosphere Vol 54(5) pp 679–687 61 Repetto, G., P.Sanz and M.Repetto (1993) In vitro effects of mercuric chloride and methylmercury chloride on neuroblastoma cells Toxicol In vitro Vol (4) pp 353–357 62 Reteuna C., P.Vaseur and R.Cabridenc (1989) Performances of three bacterial assays in toxicity assessment Hydrobiologia Vol 188 pp 149–153 63 Ribo´, J.M., J.E.Yang, P.M.Huang (1989) Luminescent bacteria toxicity assay in the study of mercury speciation Hydrobiologia Vol 188 pp 155–162 64 Ruby E.G and M.J McFall-Ngai (1999) Oxygen-utilizing reactions and symbiotic colonization of the squid light organ by Vibrio fischeri Trends in Microbiology Vol 7.pp 414-420 65 Ruby E.G and K.H Nealson (1976) Symbiotic association of Photobacterium fischeri with the marine luminous fish Monocentris japonica: A model of symbiosis based on bacterial studies Biological Bulletin Vol 151 pp 574-586 66 Ritter L., K R Solomon and J Forget (1996) Persistent Organic Pollutants- an assessment on DDT, Aldrin, Dieldrin - Endrin - Chlordane, Heptachlor Hexachlorobenzen, Miex, Toxaphene, Polychlorinated Biphenyl, Dioxin and Furan Report for the international programe on chemical safety (IPCS) within the framework of the inter-Organization programme for the Sound management of chemical (IOMC) 78 67 Schalie V.D., W.H., T.R.Shedd, P.L.Knechtges, M.W.Widder (2001) Using higher organisms in biological early warning systems for real-time toxicity detection Biosensors and Bioelectronics Vol 16(7–8) pp 457-465 68 Sprague, J.B (1964) Avoidance of copper-zinc solutions by young salmon in the laboratory Journal of the water pollution Control Federation Vol 36 pp 990-1004 69 Sumner, J.; N.M.Westberg, A.K.Stoddard, T.K.Hurst, M.Cremer, R.B.Thompson, C.A.Fierke and R.Kopelman (2006) DsRed a highly sensitive, selective and reversible fluorescence-based biosensor for both Cu+ and Cu2+ ions Biosensors and Bioelectronic Vol 21 pp 1302–1308 70 Svecevicius, G (2001) Avoidance Response of Rainbow Trout Oncorhynchus mykiss to Heavy Metal Model Mixtures: A Comparison with Acute Toxicity Tests Bulletin of Environmental Contamination Toxicology Vol 67 pp 680-687 71 Stein, N.E., H.V.M Hamelers and C.N.J Buisman (2012) The effect of different control mechanisms on the sensitivity and recovery time of a microbial fuel cell based biosensor Sensors and Actuators B: Chemical Vol 171–172(0) pp 816-821 72 Stefan S., S Steudte, O Areitioaurtena, F Pagano, J Thöming , P Stepnowski, A Igartua (2012) Ionic liquids as lubricants or lubrication additives: An ecotoxicity and biodegradability assessment Chemosphere Vol 89(9) pp 1135-1141 73 Stefanie S.G Francisco and L.David (2006) Bioluminescence of Vibrio fischeri in continuous culture: Optimal conditions for stability and intensity of photoemission Journal of Microbiological Methods Vol 67(2) pp 321-329 74 Stevens A.M and E.P Greenberg (1997) Quorum sensing in Vibrio fischeri: Essential elements for activation of the luminescence genes Journal of Bacteriology Vol 179 pp 557-562 75 Jairo R P., C F.Ciemon, Morgan P S (2013) Lethal doses of oxbile, peptones and thiosulfate-citrate-bile-sucrose agar (TCBS) for Acanthaster planci; exploring alternative population control options Marine Pollution Bulletin Vol 75(1–2) pp 133-139 76 Jefferies D J and M C French (1997) Changes induced in the pigeon thyroid by p,p' - DDE and Dieldrin The Journal of Wildlife management pp 24-30 77 Paul W and L.David (1985) Salt, pH and Temperature Dependencies of Growth and Bioluminesence of Three Species of Luminous Bacteria Analysed on Gradient Plates Journal of General Microbiolog Vol 131 pp 2865-2869 79 78 Peiren J., B.Joke, P De Vos & L.Elke, C.Dominique, H.Sylviane, B.Evelyne, B Chantal, P.Javier, A R.María, M M.Carmen and R.A.David (2015) Improving survival and storage stability of bacteria recalcitrant to freeze-drying: a coordinated study by European culture collections Appl Microbiol Biotechnol DOI 10.1007/s00253-015-6476-6 79 Pedersen F., G.I Petersen (1996) Variability of species sensitivity to complex mixtures Water Science and Technology Vol 33(6) pp 109–119 80 Poonam K and Geetanjali K (2007) An assessment of structure and toxicity corellation in organochlorine pesticides Journal of Hazardous Materials Vol 143 pp 102-111.46 81 Prakash O., Y.Nimonkar and Y.S.Shouche (2013) Practice and prospects of microbial preservation FEMS Microbiology Letters Vol 339(1) pp.1–9 82 Ting W., Liu Y., Wang D., Lin Z., An Q., Yin C and Liu Y (2016) The joint effects of sulfonamides and quorum sensing inhibitors on Vibrio fischeri: Differences between the acute and chronic mixed toxicity mechanisms Journal of Hazardous Materials Vol 310 pp 56-67 83 Tarasova A.S., S.L.Kislana1, A.M.Kuznetsov, O.A.Mogilnaya, D.I.Stom and N.S.Kudryasheva (2012) Bioluminescence as a tool for studying detoxification processes in metal salt solutions involving humic substances Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology Vol 117 pp 164-170 84 Thuan - Hieu T., W.J Chang, Y.B.Kim, J.Y.Yoon, Y.M.Koo, E.K.Kim, and J.H.Kim (2007), Long-term preservation of hight initial bioluminescences of lyophilized Photobacterium phosphoreum: Effect of skim milk and saccharose at various temperature Korean Journal of Chemical Engineering Vol 24(6) pp 1053-1057 85 UNEP (2002) Regionally based assessment of persistent toxic subtances Central America and the Caribbean regional report 86 USEPA (2002) Guidance on Cumulative Risk Assessment of Pesticide Chemicals that have a common mechanism of toxicology January 14 87 U.S Environmental & Protection Agency, Drinking Water Contaminants, viewed Dec 20, 2008, 80 88 Villaescusa, I., M Martinez, M Pilar, J.C Murat, C Hosta, 1996 Toxicity of cadmium species on luminescent bacteria Fresenius Journal Analytical Chemistry Vol 354 pp 566–570 89 Villaescusa, I., S Marti, C Matas, M Martinez, J.M Ribo (1997) Chromium (VI) toxicity to luminescent bacteria Environmental Toxicology Chemistry Vol 16 (5) pp 871–874 90 Villaescusa, I., C Matas, C Hosta, M Martinez, J.C Murat (1998) Evaluation of lead(II) and nickel(II) toxicity in NaCl and NaClO4 solutions by using Microtox bioassay Fresenius Journal Analytical Chemistry Vol 361 pp 355–358 91 Visick K.L and M.J McFall-Ngai (2000) An exclusive contract: specificity in the Vibrio fischeri-Euprymna scolopes partnership Journal of Bacteriology Vol 182 pp 1779–1787 92 Xiaoyan Y M., X.C.Wang, H.H.Ngo, W.Guo, M.N.Wu and N Wang (2014) Bioassay based luminescent bacteria: Interferences, improvements, and applications Science of The Total Environment Vol 15 pp 468–469 93 Wang W (1991) Literature review on higher plants for toxicity testing, Water Air Soil Pol Vol 59 pp 381–400 94 Waters P., and D.Lloyd (1985) Salt, pH, and temperature dependencies of growth and bioluminescence of three species of luminous bacteria analysed on gradient plates Journal of General Microbiology Vol 131 pp 2865–2869 95 Weis J.S and Wei P (1974) Schooling Behavior of Menidia medidia in the Presence of the Insecticide Sevin (Carbaryl) Marine biology Vol 28 pp 261-263 96 Welz B., M Sperling (2007), Atomic Absorption Spectrometry (Third Edition, Wiley-VCH Verlag GmbH, Weinheim, Germany) 97 Wiles R., B Cohen, C Campbell, and S Elderkin (1994), “Tap Water Blues: Herbicides in Drinking Water”, Washington D.C.: EWG/PSR Press, Print 98 Zhao G., and G Zhang (2005) effect of protective agents, freezing temperature, rehydration media on viability of maloactic bacteria subjected to freeze-drying Vol 99 pp 333-338 81 PHỤ LỤC KẾT QUẢ PHÂN TÍCH MẪU GỐC TỰ TẠO 82 KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM Tên khách hàng : Phịng Cơng nghệ Hóa sinh Địa chỉ: Số 17 Hoàng Sâm, Cầu Giấy, Hà Nội Loại mẫu: Mẫu nước Ngày lấy mẫu: 05/01/2017 Tổng hợp trả kết quả: 15/01/2017 TT Thông số As mg/L Hg mg/L Pb mg/L DDT(*) mg/L Lindane(* Đơn vị Phương pháp thử nghiệm Kết A1 H1 P1 T1 L1 D1 99,8 - - - - - - 99,9 - - - - - - 99,8 - - - TCVN 6124:1996 - - - 98,4 - - EPA Method 200.8 ) mg/L TCVN 4583:1998 - - - - 98,9 - 2,4 D(*) mg/L TCVN 6134:2009 - - - - - 99,3 Ghi chú: (*): Kết phân tích nhà thầu phụ - Tên mẫu: + A1: Mẫu As5+ pha tạo nồng độ gốc 100mg/L; + H1: Mẫu Hg2+ pha tạo nồng độ gốc 100mg/L; + P1: Mẫu Pb2+ pha tạo nồng độ gốc 100mg/L; + T1: Mẫu DDT pha tạo nồng độ gốc 100mg/L; + L1: Mẫu Lindane pha tạo nồng độ gốc 100mg/L; + D1: Mẫu 2,4 D pha tạo nồng độ gốc 100mg/L; ĐẠI DIỆN TNV KIỂM SOÁT ĐLCL TS Đỗ Bình Minh TS Phạm Hồi Nam 83 THỦ TRƯỞNG ĐƠN VỊ TS Tô Văn Thiệp PHỤ LỤC TỔNG HỢP KẾT QUẢ THEO DÕI CƯỜNG ĐỘ PHÁT QUANG TRONG CÁC PHƯƠNG ÁN, NHIỆT ĐỘ BẢO QUẢN 84 Ảnh hưởng nhiệt độ bảo quản thành phần bảo quản đến độ phát quang vi khuẩn Vibrio fischeri tháng VAL/ RLU -20ºC -5ºC 5ºC 25ºC M4 8,9 105 8,60 105 8,50.105 1,20 105 M5 1,65.106 1,53 106 1,41.106 7,50 105 M6 5,45.103 5,14 103 4,85.103 2,15 103 M7 3,19.103 3,00 103 2,99.103 1,59 103 M8 1,95.103 1,88 103 1,85.103 7,50 102 MS4 1,57.106 1,44 106 1,37.106 8,74 105 MS5 1,86.106 1,79 106 1,67.106 1,10 106 MS6 9,91.105 9,63 105 9,51.105 4,51 105 MS7 3,64.105 3,45 105 3,24.105 1,24 105 MS8 8,00.104 7,90 104 7,70.104 3,30 104 MG2 1,47.106 1,42 106 1,38.106 9,76 105 MG4 1,14.105 9,37 104 8,94.104 5,34 104 MG5 7,96.104 7,91 104 7,88.104 4,88 104 MG6 2,55.104 2,21 104 2,00.104 5,30 103 MG7 2,63.103 2,28 103 2,16.103 8,61 102 MG8 1,54.103 1,38 103 1,21.103 7,31 102 S1 2,88.106 2,74 106 2,67.106 1,88 106 L1 4,84.105 4,72 105 4,56.105 2,26 105 SA1 1,56.106 1,55 106 1,52.106 1,02 106 T1 1,53.103 1,19 103 1,04.103 7,39 102 T2 1,84.103 1,46 103 1,12.103 8,20 102 T3 2,22.103 2,04 103 1,84.103 1,13 103 T4 1,31.104 9,74 103 8,94.103 4,14 103 T5 1,34.104 1,05 104 8,43.103 3,43 103 85 tháng VAL/ RLU -20ºC -5ºC 5ºC 25ºC M4 7,20 105 7,00 105 6,90 105 6,00 104 M5 1,53 106 1,43 106 1,32 106 1,20 105 M6 4,35 103 4,14 103 3,95 103 9,50 102 M7 2,89 103 2,70 103 3,99 103 1,59 103 M8 1,33 103 1,24 103 1,22 103 4,20 102 MS4 1,46 106 1,41 106 1,33 106 7,84 105 MS5 1,77 106 1,75 105 1,65 106 9,39 105 MS6 9,24 105 9,13 105 9,05 105 3,41 105 MS7 3,12 105 3,03 105 2,93 105 9,11 104 MS8 7,20 104 7,00 104 6,90 104 1,20 104 MG2 1,30 106 1,22 106 1,18 106 8,16 105 MG4 9,10 104 8,17 104 7,84 104 2,54 104 MG5 6,86 104 6,51 104 6,18 104 2,18 104 MG6 1,75 104 1,61 104 1,40 104 3,50 103 MG7 2,25 103 2,17 103 2,05 103 7,11 102 MG8 1,23 103 1,11 103 1,01 103 5,31 102 S1 2,76 106 2,68 106 2,61 106 1,02 106 L1 4,16 105 4,08 105 3,96 105 1,66 105 SA1 1,49 106 1,44 106 1,41 106 9,20 105 T1 1,23 103 1,12 103 9,39 102 2,39 102 T2 1,11 103 1,06 103 9,80 102 2,20 102 T3 1,72 103 1,54 103 1,44 103 5,29 102 T4 1,01 104 9,54 103 8,24 103 1,14 103 T5 9,43 103 8,53 103 7,43 103 1,43 103 86 tháng VAL/ RLU -20ºC -5ºC 5ºC 25ºC M4 6,50 105 6,20 105 6,10 105 2,10 104 M5 1,47 106 1,39 106 1,30 106 1,20 105 M6 3,65 103 3,34 103 3,15 103 4,50 102 M7 2,89 103 2,70 103 3,99 103 1,59 103 M8 1,33 103 1,24 103 1,22 103 4,20 102 MS4 1,41 106 1,33 106 1,27 106 6,44 105 MS5 1,66 106 1,59 105 1,56 106 6,29 105 MS6 8,24 105 7,93 105 7,55 105 1,21 105 MS7 2,72 105 2,63 105 2,55 105 1,21 104 MS8 6,70 104 6,50 104 6,40 104 6,00 103 MG2 1,22 106 1,20 106 1,17 106 2,36 105 MG4 7,80 104 7,57 104 7,34 104 8,40 103 MG5 5,82 104 5,11 104 4,78 104 6,83 103 MG6 1,12 104 9,10 103 8,80 103 8,01 102 MG7 1,15 103 8,71 102 7,51 102 9,10 101 MG8 8,33 102 5,13 102 3,13 102 9,50 101 S1 2,63 106 2,54 106 2,48 106 2,13 105 L1 4,16 105 4,08 105 3,96 105 1,66 105 SA1 1,34 106 1,31 106 1,28 106 1,10 105 T1 8,29 102 6,19 102 7,39 102 9,90 101 T2 5,10 102 3,60 102 1,80 102 6,00 101 T3 9,19 102 7,39 102 5,39 102 8,50 101 T4 5,14 103 3,54 103 2,24 103 1,05 102 T5 1,03 103 8,32 102 7,32 102 8,80 101 87 tháng VAL/ RLU 25ºC -20ºC -5ºC 5ºC M4 2,10 104 4,50 105 4,30 105 4,10 105 M5 1,20 105 1,32 106 1,29 106 1,28 106 M6 4,50 102 1,15 103 3,34 103 3,15 103 M7 1,59 103 2,15 103 2,00 103 1,89 103 M8 4,20 102 9,30 102 7,40 102 5,20 102 MS4 6,44 105 1,33 106 1,31 106 1,25 106 MS5 6,29 105 1,59 106 1,53 105 1,52 106 MS6 1,21 105 7,74 105 7,33 105 7,15 105 MS7 1,21 104 1,82 105 1,53 105 1,35 105 MS8 6,00 103 3,60 104 3,20 104 2,90 104 MG2 2,36 105 1,12 106 1,08 106 1,04 106 MG4 8,40 103 1,20 104 9,70 103 7,14 103 MG5 6,83 103 1,12 104 8,81 103 7,75 103 MG6 8,01 102 1,12 104 9,10 103 8,80 103 MG7 9,10 101 3,51 102 1,71 102 1,21 102 MG8 9,50 101 1,33 102 8,30 101 4,30 101 S1 2,13 105 2,13 106 2,02 106 1,95 106 L1 1,66 105 1,26 105 1,08 105 1,02 105 SA1 1,10 105 1,22 106 1,12 106 1,08 106 T1 9,90 101 1,89 102 9,90 101 7,30 101 T2 6,00 101 5,10 102 8,00 101 - T3 8,50 101 9,90 101 8,90 101 5,90 101 T4 1,05 102 3,15 102 1,35 102 1,22 102 T5 8,80 101 3,20 101 - - 88 tháng VAL/ RLU -20ºC -5ºC 5ºC 25ºC M4 1,10 105 9,20 104 8,80 104 6,00 102 M5 1,12 106 9,90 105 8,40 105 1,10 103 M6 2,50 102 1,40 102 1,15 102 7,80 101 M7 1,50 102 1,20 102 1,10 102 6,50 101 M8 7,60 101 5,60 101 5,20 101 - MS4 8,14 105 6,38 105 6,54 105 1,76 103 MS5 8,19 105 7,50 105 9,80 105 2,70 103 MS6 1,24 105 7,33 105 7,15 105 5,90 102 MS7 7,21 104 5,31 104 4,51 104 2,95 102 MS8 7,00 103 6,00 103 5,80 103 9,80 101 MG2 8,16 105 7,76 105 7,36 105 1,98 103 MG4 5,40 103 1,20 103 1,14 103 - MG5 4,23 103 1,81 103 1,25 103 - MG6 5,20 103 1,10 103 9,01 102 - MG7 8,80 101 - - - MG8 - - - - S1 1,63 106 1,46 106 1,40 106 6,00 103 L1 5,97 103 3,97 103 2,97 103 9,60 101 SA1 6,15 105 5,45 105 5,30 105 1,00 103 T1 - - - - T2 - - - - T3 - - - - T4 - - - - T5 - - - - 89 tháng VAL/ RLU -20ºC -5ºC 5ºC 25ºC M4 2,00 104 1,20 103 1,10 104 - M5 2,20 105 1,80.105 1,63 105 3,00 102 M6 5,80 101 - - - M7 - - - - M8 - - - - MS4 3,64 105 3,38 105 3,34 104 6,03 102 MS5 5,19 105 4,88 105 4,72 105 7,90 102 MS6 5,36 103 3,59 103 3,15 103 - MS7 1,40 103 1,10 103 1,05 103 - MS8 9,80 101 5,90 101 5,70 101 - MG2 6,16 105 5,60 104 3,33 105 5,80 102 MG4 6,00 102 1,40 102 1,14 102 - MG5 8,50 101 - - - MG6 - - - - MG7 - - - - MG8 - - - - S1 1,02 106 9,40 105 8,35 105 6,50 102 L1 6,60 101 - - - SA1 1,15 105 9,50 104 8,90 104 7,60 101 T1 - - - - T2 - - - - T3 - - - - T4 - - - - T5 - - - - 90 PHỤ LỤC HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG BỘ KIT 91 ... "Nghiên cứu khả sử dụng vi khuẩn Vibrio fischeri để tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt" nhằm nghiên cứu đặc tính vi khuẩn phát quang Vibrio fischeri để đề xuất quy trình chế tạo KIT. .. tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt 1.2 GIẢ THUYẾT KHOA HỌC Bộ KIT tạo thành từ vi khuẩn Vibrio fischeri có khả phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt 1.3 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU  Mục... định tính chất, đặc trưng chủng vi khuẩn Vibrio fischeri làm cở chế tạo KIT phát độc tính cấp nước sinh hoạt - Xây dựng quy trình chế tạo KIT phát nhanh độc tính cấp nước sinh hoạt dựa khả ức