HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ MỸ DUYÊN NGHIÊN CỨU SỬ DỤNG VI SINH VẬT NỘI SINH ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM DINH DƯỠNG VI SINH ĐA CHỨC NĂNG TỪ PHẾ THẢI CHĂN NUÔI DẠNG LỎNG Chuyên ngành: Khoa học Môi trường Mã số: 60 44 03 01 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Minh NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Mỹ Duyên i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Thị Minh tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy - cô giáo khoa Môi trường, trường Học viện Nông nghiệp Việt Nam truyền đạt cho nhiều kiến thức quý báu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới phịng thí nghiệm Jica, khoa Quản lý đất đai, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình làm luận văn Cuối tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè người bên cạnh ủng hộ suốt trình học tập Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Mỹ Duyên ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Danh mục chữ viết tắt viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Giả thuyết khoa học 1.3 Mục tiêu nghiên cứu 1.4 Phạm vi nghiên cứu 1.5 Những đóng góp mới, ý nghĩa khoa học thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tình hình phát triển chăn nuôi, trạng phế thải chăn nuôi giới Việt Nam 2.1.1 Tình hình phát triển chăn ni Thế Giới Việt Nam 2.1.2 Hiện trạng chất thải chăn nuôi tác động chúng đến môi trường 2.1.3 Các biện pháp xử lý phế thải chăn nuôi 10 2.2 Cơ sở khoa học việc sử dụng vi sinh vật nội sinh để sản xuất chế phẩm sinh học 15 2.2.1 Khả phân giải hợp chất hữu vi sinh vật 15 2.2.2 Khả phân giải chuyển hóa lân vi sinh vật 16 2.2.3 Khả cố định Nitơ vi sinh vật 18 2.2.4 Khả tổng hợp IAA vi sinh vật 18 2.2.5 Khả kháng bệnh hại trồng 19 2.3 Tổng quan vi sinh vật nội sinh chế phẩm sinh học 20 2.3.1 Tổng quan vi sinh vật nội sinh 20 2.3.2 Tổng quan chế phẩm sinh học 24 iii 2.4 Tình hình nghiên cứu sử dụng vi sinh vật nội sinh chế phẩm sinh học giới Việt Nam 26 2.4.1 Tình hình nghiên cứu sử dụng VSV nội sinh chế phẩm sinh học Thế giới 26 2.4.2 Tình hình nghiên cứu sử dụng VSV nội sinh chế phẩm sinh học Việt Nam 27 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 31 3.1 Địa điểm nghiên cứu 31 3.2 Thời gian nghiên cứu 31 3.3 Đối tượng/vật liệu nghiên cứu 31 3.4 Nội dung nghiên cứu 31 3.5 Phương pháp nghiên cứu 31 3.5.1 Tuyển chọn giống vi sinh vật theo phương pháp đánh giá trực tiếp đặc tính sinh học chủng vi sinh vật mơi trường chun tính điều kiện khác 31 3.5.2 Xác định điều kiện nhân giống thích hợp cho chủng VSV nội sinh tuyển chọn 34 3.5.3 Xác định chất lượng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh từ phế thải chăn nuôi, tính chất đất thí nghiệm 35 3.5.4 Giống vi sinh vật dịch dinh dưỡng sau xử lý phế thải chăn nuôi phối trộn theo phương pháp phối trộn chất mang khơng trùng 35 3.5.5 Thí nghiệm chậu vại 35 3.5.6 Phương pháp xử lý số liệu 36 Phần Kết thảo luận 37 4.1 Tuyển chọn giống vi sinh vật nội sinh có hoạt tính sinh học cao 37 4.1.1 Đánh giá khả tổng hợp IAA, phân giải lân, phân giải xenlulo, phân giải tinh bột chủng vi sinh vật nội sinh 37 4.1.2 Đánh giá khả chịu nhiệt thích ứng pH chủng vi sinh vật 43 4.1.3 Đánh giá tính đối kháng chủng vi sinh vật 48 4.1.4 Đánh giá khả kháng bệnh chủng vi sinh vật tuyển chọn 49 4.2 Xác định điều kiện nhân sinh khối tối ưu cho giống vsv tuyển chọn 51 4.2.1 Ảnh hưởng pH môi trường 51 iv 4.2.2 Ảnh hưởng nhiệt độ 52 4.2.3 Ảnh hưởng tốc độ lắc 54 4.2.4 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy 55 4.2.5 Ảnh hưởng nồng độ muối 57 4.3 Chất lượng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức từ vsv nội sinh đa chức phế thải chăn nuôi dạng lỏng 58 4.4 Đánh giá hiệu chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức 59 4.4.1 Hiệu chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức tới sinh trưởng phát triển trồng 59 4.4.2 Hiệu chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức tới việc cải tạo đất 60 Phần Kết luận kiến nghị 62 5.1 Kết luận 62 5.2 Kiến nghị 63 Tài liệu tham khảo 64 v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Số lượng gia súc gia cầm năm 2013-2016 Bảng 2.2 Định hướng phát triển đàn gia súc, gia cầm đến năm 2020 Bảng 2.3 Ước tính lượng chất thải rắn chăn nuôi phát sinh từ năm 2015-2016 Bảng 4.2 Kết khả phân giải lân VSV nội sinh 40 Bảng 4.3 Kết khả phân giải xenlulozơ VSV nội sinh 41 Bảng 4.4 Kết phân giải vòng tinh bột VSV nội sinh 42 Bảng 4.5 Khả chịu nhiệt chủng vi sinh vật 45 Bảng 4.6 Khả thích ứng pH chủng vi sinh vật 47 Bảng 4.7 Khả kháng bệnh chủng vi sinh vật tuyển chọn 49 Bảng 4.8 Đặc tính sinh học chủng vi sinh vật nội sinh tuyển chọn 50 Bảng 4.9 Ảnh hưởng pH đến số lượng vi khuẩn 51 Bảng 4.10 Ảnh hưởng nhiệt độ đến số lượng vi khuẩn 52 Bảng 4.11 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến số lượng vi khuẩn 54 Bảng 4.12 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến số lượng vi khuẩn 56 Bảng 4.13 Ảnh hưởng nồng độ muối đến số lượng vi khuẩn 57 Bảng 4.14 Chất lượng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức 59 Bảng 4.15 Một số tiêu sinh trưởng trồng sau thí nghiệm 60 Bảng 4.16 Tính chất đất trước sau thí nghiệm 60 vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ chuyển hố hợp chất lân hữu thành muối H3PO4 16 Hình 4.1 Khả thích ứng với nhiệt độ số chủng VSV 44 Hình 4.2 Khả thích ứng pH chủng 6RN2 (pH=5) chủng 6RN1(pH=6) 46 Hình 4.3 Chủng vi sinh vật nội sinh tuyển chọn 48 Hình 4.4 Tính đối kháng của chủng vi sinh vật tuyển chọn 48 Hình 4.5 Vịng kháng bệnh nấm chủng 6TCCH1 Ecoli chủng 3RMT 49 Hình 4.6 Ảnh hưởng pH môi trường đến hàm lượng IAA 52 Hình 4.7 Ảnh hưởng pH mơi trường đến hàm lượng IAA 53 Hình 4.8 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến hàm lượng IAA 55 Hình 4.9 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến hàm lượng IAA 56 Hình 4.10 Ảnh hưởng nồng độ muối đến hàm lượng IAA 58 vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Nghĩa tiếng việt BTNMT Bộ Tài nguyên Môi trường BNNPTNT Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn BVTV Bảo vệ thực vật CTR Chất thải rắn CT Cơng thức IAA Kích thích tố Auxin QCVN Quy chuẩn Việt Nam TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam VSDCN Vi sinh đa chức VSV Vi sinh vật viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Mỹ Duyên Tên luận văn: Nghiên cứu sử dụng vi sinh vật nội sinh để sản xuất chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức từ phế thải chăn nuôi dạng lỏng Ngành: Khoa học Môi trường Mã số: 60 44 03 01 Tên sở đào tạo: Học Viện Nơng Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Tuyển chọn giống vi sinh vật nội sinh có hoạt tính sinh học cao (có khả kích thích sinh trưởng phát triển trồng, phân giải chuyển hóa lân chất hữu cơ, kháng bệnh hại, ) từ vùng sinh thái trồng khác Xác định điều kiện nhân sinh khối tối ưu cho giống VSV tuyển chọn Sản xuất chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức từ VSV nội sinh phế thải chăn nuôi dạng lỏng Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu thực tuyển chọn giống vi sinh vật nội sinh có hoạt tính sinh học cao (khả sinh IAA, chuyển hóa lân, ) từ vi sinh vật nội sinh phân lập từ vùng có điều kiện sinh thái khác Sau tuyển chọn vi sinh vật có hoạt tính sinh học cao, tiến hành xác định điều kiện nhân sinh khối tối ưu cho giống VSV tuyển chọn Việc đánh giá chất lượng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức từ VSV nội sinh phế thải chăn nuôi dạng lỏng thực đối tượng mồng tơi Nghiên cứu sử dụng phương pháp: Tuyển chọn giống vi sinh vật theo phương pháp đánh giá trực tiếp đặc tính sinh học chủng vi sinh vật môi trường chuyên tính điều kiện khác nhau; Xác định chất lượng chế phẩm dinh dưỡng vi sinh từ phế thải chăn ni, tính chất đất thí nghiệm theo TCVN hàm lượng chất hữu cơ, hàm lượng chất dinh dưỡng chính, độ ẩm, pH ; Giống vi sinh vật dịch dinh dưỡng sau xử lý phế thải chăn nuôi phối trộn theo phương pháp phối trộn chất mang khơng trùng; Thí nghiệm chậu vại theo phương pháp Vicent (1976) gồm công thức với lần nhắc lại: Công thức 0: Đối chứng (bón theo thâm canh địa phương), Cơng thức 1: Bón dịch dinh dưỡng từ phế thải chăn ni, Cơng thức 2: Bón chế phẩm dinh dưỡng VSDCN Theo dõi tiêu: Số lá, Chiều cao cây, Diện tích lá, Năng suất Các số liệu thu thập xử lý phần mềm IRRISTAT Kết nghiên cứu kết luận: Nghiên cứu tìm 08 chủng vi sinh vật nội sinh có hoạt tính sinh học cao: 3RMT, 3TMT2, 6TCCH1, 6TCCH2, 6RCC2, 7TCCH, 8TCCH 8RCCH2 Các ix PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ 40 chủng vi sinh vật nội sinh phân lập, tuyển chọn từ vùng sinh thái khác Nghiên cứu tiến hành đánh giá khả tổng hợp IAA, phân giải lân, tinh bột, xenlullo chọn 08 chủng VSV nội sinh có hoạt tính tốt gồm: 3RMT, 3TMT2, 6TCCH1, 6TCCH2, 6RCC2, 7TCCH, 8TCCH 8RCCH2 Các chủng VSV nội sinh khơng đối kháng có khả kháng loại bệnh ( Nấm Fusarium, Salmonella, E.coli) Thí nghiệm xác định điều kiện nhân sinh khối VSV: pH, nhiệt độ, tốc độ lắc, thời gian nuôi cấy, nồng độ muối Kết cho thấy hầu hết VSV nội sinh sinh trưởng, phát triển tốt khả sinh tổng hợp IAA mơi trường pH trung tính kiềm nhẹ; Các VSV nội sinh có ngưỡng phát triển rộng nhiệt độ từ 20-40oC, đặc biệt chúng hoạt động tốt khoảng nhiệt từ 25 - 30oC; Số lượng tế bào, sinh tổng hợp IAA tăng theo tốc độ lắc, đạt cao 200 vòng/phút; Thời gian nuôi cấy: phần lớn VSV đạt số lượng tế bào lớn sau 48 nuôi cấy đồng thời khoảng thời gian lượng IAA tổng hợp đạt giá trị lớn Đối với yếu tố nồng độ muối chủng VSV có khả chịu mặn tương đối tốt với nồng đô 4-5%, Tuy nhiên, nồng độ muối thấp khả tổng hợp IAA cao Chế phẩm tạo thành cách phối trộn VSV với dịch dinh dưỡng từ phế thải chăn nuôi xử lý với tỉ lệ 1/3 Qua phân tích hàm lượng chất dinh dưỡng, tỉ lệ vi sinh vật chế phẩm đạt theo nghị định 108/2017/NĐ – CP quản lý phân bón Qua thí nghiệm đánh giá hiệu chế phẩm mồng tơi, kết cho thấy chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức có tác dụng thúc đẩy sinh trưởng phát triển trồng Các tiêu theo dõi: chiều cao cây, số lá, diện tích lá, suất trồng bón chế phẩm cao nhiều so với trồng không sử dụng chế phẩm mức sai số có ý nghĩa LSD5% Ngồi ra, chế phẩm cịn có tác dụng tích cực đất trồng, cung cấp hàm lượng lớn vi sinh vật hữu ích cho đất, vi sinh vật có khả chuyển hóa lân khó tiêu, chất hữu tạo thành chất dinh dưỡng dễ tiêu giúp trồng hấp thụ 62 5.2 KIẾN NGHỊ Do thời gian thực đề tài có hạn nên chưa thể sâu nghiên cứu kỹ chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức năng, kiến nghị: - Cần mở rộng thử nghiệm quy mơ lớn ngồi đồng ruộng, loại trồng khác thời vụ vùng sinh thái khác để có đánh giá tổng thể hiệu chế phẩm - Đánh giá sâu hiệu vi sinh vật nội sinh, khả xâm nhập chúng vào trồng 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt: Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn (2015) Đẩy nhanh tái cấu phát triển ngành chăn nuôi Bùi Thị Hiền, Phân hữu sản xuất nông nghiệp bền vững Việt Nam.http://iasvn.org/upload/files/ZS0UBQV8ZNBH%20HienPhan%20huu%20 co.pdf Thứ 2, 16/01/2017 Cao Ngọc Điệp Nguyễn Ái Chi (2009) Phân lập đặc tính vi khuẩn nội sinh Khóm trồng đất phèn huyện Bến Lức, tỉnh Long An, Việt Nam Tuyển tập cơng trình nghiên cứu hội nghị Công nghệ sinh học năm 2009 tổ chức thành phố Hồ Chí Minh, 23-24, tháng 10 năm 2009 Hà Thanh Toàn, Mai Thu Thảo, Nguyễn Thu Phướng, TRần Lê Kim Ngân, Bùi Thế Vinh Cao Ngọc Điệp (2008) Phân lập vi khuẩn phân giải cellulose, tinh bột protein nước rỉ rác thành phố Cần Thơ Tạp chí Khoa học 2008:10 195-202 Minh Long, STINFO Số 11 (2012), Nông nghiệp bền vững với chế phẩm sinh học http://www.cesti.gov.vn/khong-gian-cong-nghe/nong-nghiep-ben-vung-voiche-pham-sinh-hoc.html Thứ 2, 16/1/2017 Nguyễn Thi Thu Hà, Hà Thanh Toàn Cao Ngoc Điệp (2009) Phân lập đặc tính dòng vi khuẩn nội sinh số cỏ chăn ni Tạp chí Cơng nghệ sinh học 7(2), 241-250 Nguyễn Hữu Hiệp Nguyễn Thị Hải Lý (2012) Phân lập dịng vi khuẩn có khả phân hủy tinh bột Tạp chí Khoa học 2012:21a 37-44 Nguyễn Thị Minh (2005) Phân lập tuyển chọn nấm rễ Arbuscular Mycorrhizae để xử lý cho trồng Tạp chí Khoa học đất Việt Nam, (23) tr 46-51 Nguyễn Lân Dũng, Bùi Thị Việt Hà (2009) Sinh trưởng phát triển Vi sinh vật http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/vsv14.htm Thứ 4, ngày 21/2/2017 10 Trần Minh Hiền, Trần Thị Kim Cúc, Mai Thanh Trúc, Ngơ Thị Bích Ngọc, Đỗ Trung Bình (2013) Ứng dụng công nghệ vi sinh sản xuât chế phẩm vi sinh phân hữu vi sinh 64 11 Phạm Văn Toản Phạm Bích Hiên (2014), Nghiên cứu sử dụng vi sinh vật phân giải lân Việt Nam http://iasvn.org/upload/files/S63W5SP9H4su%20dung%20vi%20sinh%20vat%2 0phan%20giai.pdf Thứ 3, 17/01/2017 12 Dairy Việt Nam (2010) Tình hình chăn ni giới khu vực Http://www.dairyvietnam.com/vn/Sua-The-gioi/Tinh-hinh-chan-nuoi-the-gioiva-khu-vuc.html Thứ 7, ngày 18/2/2017 13 Lưu Nguyễn Thành Cơng (2014) Thực trạng sử dụng hóa chất bảo vệ thực vật vấn đề ô nhiễm chế phẩm hóa học sử dụng Nơng nghiệp Việt Nam 1-2 14 Lương Thị Hồng Hiệp, Cao Ngọc Điệp (2011) Phân lập nhận diện vi khuẩn nội sinh cúc xuyến chi 15 Lương Đức Phẩm (2011) Giáo trình Sản xuất sử dụng chế phẩm sinh học nông nghiệp NXB Giáo dục Việt Nam 16 Mai Thế Hào (2016) Chất thải chăn nuôi số biện pháp xử lý Http://safa.com.vn/vi/view-1098-chat-thai-trong-chan-nuoi-va-mot-so-bienphap-xu-ly Thứ 6, ngày 17/2/2017 17 Nguyễn Thị Huỳnh Như, Nguyễn Hữu Hiệp, Nguyễn Minh Đời, Trần Nguyễn Nhật Khoa, Thái Trần Phương Minh (2013) Phân lập dịng vi khuẩn nội sinh có khả tổng hợp IAA cố định đạm chuối 18 Nguyễn Văn Minh, Mai Hữu Phúc, Võ Ngọc Yến Nhi, Dương Nhật Linh, Nguyễn Anh Nghĩa (2014) Sàng lọc vi sinh vật nội sinh cao su có khả kiểm soát sinh học vi nấm Corynespora cassiicola 19 Phúc Văn (2013) Chất thải chăn nuôi gây sức ép đến môi trường http://www.donre.hochiminhcity.gov.vn/tintuc/Lists/Posts/Post.aspx?List=f73ce bc3-9669-400e-b5fd-9e63a89949f0&ID=3511 Thứ 7, ngày 04/2/2017 20 Tổng cục thống kê (2017) Tổng đàn gia súc gia cầm tính đến 01/10/2016 https://www.gso.gov.vn/default.aspx?tabid=71 Thứ 5, ngày 26/1/2017 21 Trần Thị Xuân Phương (2016) Nghiên cứu sử dụng số chế phẩm sinh học sản xuất lúa an toàn theo tiêu chuẩn VietGap tỉnh Thừa Thiên Huế 65 Tài liệu tiếng Anh: 22 Bergey (2009) Bergay manual’s of systermatic Bacteriology Second edition William B Whitman Springer, USA, pp 19-21 23 Barbieri, P., T Zanelli, E Galli and G Zanetti, (1986) Wheat inoculation with Azospirillum brazilance Sp6 and some mutants altered in nitrogen fixation and indole-3-acetic acid production FEMS Microbiology Letters 36,87-90 24 Benhamou, N., Kloepper, JW., Quadt-Hallman, A., Tuzon, S., (1996) Induction of defense-related ultrastructural modification in pea root tissues inoculated with endophytic bacteria Plant Physiol 112, 919-929 25 Boddey, R M , O C De Oliveira, S Urquiaga, V M Reis, F L Olivares, V L D Baldani and J Döbereiner (1995) Biological nitrogen fixation associated with sugar cane and rice: contributions and prospects for improvement Plant Soil 174: 195 – 209 26 Campbell I (1971) Comparison of Serological and Physiological Classification of the Genus Saccharomyces Journal of General Microbiology 3, p 189-198 27 Costacurta, A., V Keijers and J Vanderleyden, (1994) Molecular cloning and sequence analysis of an Azospirillum brasilense indole-3-pyruvate decarboxylase gene Mol Gen Genet, 243: 463-472 28 Döbereiner, J., (1974) Nitrogen-fixing bacteria in the rhizosphere In The biology of nitrogen fixation, ed A Quispel, Amsterdam, The netherlands: North Holland Publishing Company: 86-120 29 Harari, A., J Kigel and Y Okon, (1988) Involvement of IAA in the interaction between Azospirillum brasilense and Panicum miliaceum roots Plant and Soil 110, 275–282 30 Glickmann, E., L Gardan, S Jacquet and Y Desseaux, (1998) Auxin Production is a common feature of most pathovars of Pseudomonas syringae Molecular Plant-of mineral phosphates: historical perspective and future prospects Microbe Interaction, 11: 156-162 31 Hallmann, J (2001) Plant Interactions with Endophytic Bacteria In: Jeger, M.J and N.J Spence (Eds.) Biotic Interactions in Plant-Pathogen Associations CAB International, USA., pp: 87 - 119 66 32 Hwangbo, H., D.R Park, W.Y Kim, S.Y Rim, H.K Park, H.T Kim, S.J Suh and Y K Kim, (2003) 2-ketogluconic acid production and phosphate solubilization by Enterobacter intermedium, Cur Microbiol, 47: 87-92 33 Khan, Z and L.S Doty, (2009) Characterization of bacterial endophytes of sweet potato plants Plant Soil DOI 10.1007 34 Kloepper, J.W., R Lifshitz and M.R Zablotowicz, (1989) Free-living bacterial inocula for enhancing crop productivity Trends Biotechnology, 7: 39-43 35 Madhaiyan, M., S.V Saravannan, S.D Jovi, H Lee, R Thenmozhi, K Hair and T Sa, (2004) Occurrence of Gluconacetobacter diazotrophicus in tropical and subtropical plants of Western Ghats, India, Microbiological research, 159: 233-243 36 Pillay, V.K and J Norwak, (1997) Inoculum density, temperature, and genotype effects on in vitro growth promotion and epiphytic and endophytic colonization of tomato (Lycospersicon esculentum L.) seedlings inoculated with a Pseudomonas bacterium Can J Microbiol, 43: 354-361 37 Sergeeva, E., A Liaimer and B Bergman, (2002) Evidence for production of the phytohormone indole-3-acetic acid by cyanobacteria Planta, 215: 229-238 38 Seshadri, S., R Muthurumarasimha, C Laksminarasimha and S Ignacirunthu, (2000) Solubilization of inorganic by Azospirillum halopraeferans, Current science, 79: 565-567 39 Koga, J., T Adachi, H Hidaka (1991) Molecular cloning of the gene for indolepyruvate decarboxylase from Enterobacter cloacae Mol Gen Genet, 226(1-2): 10 - 40 Rosenblueth M and E Martínez-Romero, (2006) Bacterial endophytes and their interactions with hosts Am Phytopathol Soc 19, 827-837 41 Van, T.V., P Mavingui, O Berge and T Heulin, (1994) Promotion de croissance du riz incocule par une bacteria fixatrice dazote, Burkhoderia vietnamensis, isolated in soil acid Viet Nam, Agronomie, 14: 697-707 42 Zinniel, D K., P Lambrecht, N B Harris, Z Feng, D Kuezmarski, P Highley, C Ishimaru, A Arunakumari, G R Barletta and A K Vidaver, (2002) Isolation and characterization of endophytic colonizing bacteria from agronomic crops and prairie plants Appl Environ Microbiol 59, 2198-2208 67 PHỤ LỤC Phụ lục Xử lý số liệu phần mềm IRRISTAT tiêu Chiều cao BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE CCC 13/ 9/17 22:50 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI CHIEU CAO CAY VARIATE V003 CCC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 184.465 92.2327 124.51 0.000 NL 2.44580 611449 0.83 0.546 * RESIDUAL 5.92618 740773 * TOTAL (CORRECTED) 14 192.837 13.7741 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CCC 13/ 9/17 22:50 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI CHIEU CAO CAY MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 5 CCC 16.4200 20.0800 24.9800 SE(N= 5) 0.384908 5%LSD 8DF 1.25515 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 3 3 3 CCC 20.6733 19.7133 20.5100 20.8300 20.7400 SE(N= 3) 0.496915 5%LSD 8DF 1.62039 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CCC 13/ 9/17 22:50 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI CHIEU CAO CAY F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO OBS CCC 15 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 20.493 3.7113 68 0.86068 |NL | | | 4.2 0.0000 | | | | 0.5457 Phụ lục Xử lý số liệu phần mềm IRRISTAT tiêu Số BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLA FILE SLA 13/ 9/17 22:59 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI SO LA VARIATE V003 SLA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 14.0440 7.02200 95.62 0.000 NL 390733 976832E-01 1.33 0.338 * RESIDUAL 587467 734333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 15.0222 1.07301 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SLA 13/ 9/17 22:59 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI SO LA MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 5 SLA 7.18000 7.92000 9.50000 SE(N= 5) 0.121189 5%LSD 8DF 0.395184 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 3 3 SLA 8.05333 8.00000 8.42333 8.33667 8.18667 SE(N= 3) 0.156454 5%LSD 8DF 0.510180 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SLA 13/ 9/17 22:59 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI SO LA F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SLA GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 8.2000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0359 0.27099 3.3 0.0000 69 |NL | | | 0.3380 | | | | Phụ lục Xử lý số liệu phần mềm IRRISTAT tiêu Diện tích BALANCED ANOVA FOR VARIATE DTLA FILE DTLA 13/ 9/17 23:54 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI DIEN TICH LA VARIATE V003 DTLA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 803.562 401.781 484.01 0.000 NL 2.72850 682125 0.82 0.548 * RESIDUAL 6.64080 830100 * TOTAL (CORRECTED) 14 812.931 58.0665 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DTLA 13/ 9/17 23:54 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI DIEN TICH LA MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 5 DTLA 22.1700 30.2800 40.0720 SE(N= 5) 0.407456 5%LSD 8DF 1.32867 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 3 3 DTLA 30.1433 31.1233 30.6600 31.3967 30.8800 SE(N= 3) 0.526023 5%LSD 8DF 1.71531 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DTLA 13/ 9/17 23:54 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI DIEN TICH LA F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DTLA GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 30.841 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 7.6201 0.91110 3.0 0.0000 70 |NL | | | 0.5476 | | | | Phụ lục Xử lý số liệu phần mềm IRRISTAT tiêu Năng suất BALANCED ANOVA FOR VARIATE NS FILE NSUAT 13/ 9/17 23:30 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI NANG SUAT VARIATE V003 NS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3430.43 1715.22 952.76 0.000 NL 41.6719 10.4180 5.79 0.018 * RESIDUAL 14.4020 1.80025 * TOTAL (CORRECTED) 14 3486.51 249.036 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NSUAT 13/ 9/17 23:30 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI NANG SUAT MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 5 NS 39.7400 55.8700 76.6840 SE(N= 5) 0.600042 5%LSD 8DF 1.95668 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 3 3 NS 57.6833 55.4433 57.2367 56.4000 60.3933 SE(N= 3) 0.774651 5%LSD 8DF 2.52606 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NSUAT 13/ 9/17 23:30 :PAGE PHAN TICH PHUONG SAI NANG SUAT F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE NS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 57.431 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 15.781 1.3417 2.3 0.0000 71 |NL | | | 0.0177 | | | | Phụ lục Chất lượng phế thải chăn nuôi dạng lỏng sau xử lý STT Chỉ tiêu pH Kết TCVN 6168:2002 7,6 6-8 OM% 9,41 - N% 1,76 - P2O5% 0,04 - K2O% 4,14 - Salmonella (CFU/ml) 72 - Phụ lục Nguồn gốc 40 chủng VSV nội sinh phân lập tuyển chọn sơ từ vùng sinh thái khác Môi STT Ký hiệu trường phân Thời gian Nguồn gốc Đặc điểm khuẩn lạc mọc lập (h) 1TX TSA Thân Cỏ Hôi 24 Trắng đục, viền trơn, không nhầy, lồi 3LDC LB Lá Diếp Cá 48 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi, tròn 3LMT2 LB Lá Mồng Tơi 48 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi, tròn 3RDC2 LB Rễ Diếp Cá 24 Vàng đục, viền trơn, nhầy, lồi, tròn 3RMT LB Rễ Ngô 24 Vàng, viền trơn, nhầy, lồi, trịn 3RN2 LB Rễ Ngơ 24 Trắng đục, viền trơn, khơ, trịn 3TCC LB Thân Cải Cúc 24 3TCCH1 LB 3TCCH2 LB 10 3TMT2 LB 11 3TN1 LB Thân Ngô 24 12 6LDC2 NA Lá Diếp Cá 24 13 6LDC3 NA Lá Diếp Cá 24 14 6LMT NA Lá Mồng Tơi 24 Hồng nhạt, viền trơn, nhầy, lồi, trịn 15 6LN2 NA Lá Ngơ 24 Cam nhạt, viền trơn, nhầy, lồi, tròn 16 6RCC2 NA Rễ Cải Cúc 24 Vàng cam, viền trơn, nhầy, lồi 17 6RCCH NA Rễ Cải Chíp 24 18 6RN1 NA Rễ Ngô 24 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi 19 6RN2 NA Rễ Ngô 24 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi, trịn 20 6RN3 NA Rễ Ngơ 24 Trắng đục, viền trơn, khơng nhầy, lồi Thân Cải Chíp Thân Cải Chíp Thân Mồng Tơi 73 Trắng đục, viền trơn, nhầy, không lồi, tròn 24 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi 24 Vàng cam, viền trơn, nhầy, tròn 24 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi, trịn Trắng đục, viền trơn, khơng nhầy, lồi, tròn Trắng, viền trơn, nhầy, lồi, tròn Da cam, viền trơn, khơng nhầy, lồi, trịn Trắng đục, viền trơn, không nhầy, không lồi 21 6RN4 NA 22 6TCCH1 NA 23 6TCCH2 NA 24 6TDC1 NA 25 6TDC2 NA 26 6TDC3 NA 27 6TN1 NA Thân Ngô 24 Trắng, viền trơn, nhầy, khơng lồi 7LCCH2 Hansen Lá Cải chíp 24 Vàng, viền trơn, nhầy, lồi 29 7LDC3 Hansen Lá Diếp Cá 24 30 7RCC3 Hansen Rễ Cải Cúc 24 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi 31 7RCCH Hansen Rễ Cải chíp 24 Trắng đục, viền trơn, khơng nhầy, lồi 32 7RN1 Hansen Rễ Ngô 24 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi 33 7RX Hansen Rễ Cỏ Hôi 24 Trắng, viền trơn, nhầy, lồi 34 7TCC1 Hansen Thân Cải Cúc 24 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi 7TCCH Hansen 24 Trắng, viền trơn, nhầy, không lồi 36 8LCCH LGI Lá Cải chíp 24 Vàng nhạt, viền trơn, nhầy, lồi 37 8RCCH1 LGI Rễ Cải chíp 24 Vàng nhạt, viền trơn, nhầy, lồi 38 8RCCH2 LGI Rễ Cải chíp 24 vàng, viền trơn, nhầy, lồi 39 8TCCH LGI 24 Vàng nhạt, viền trơn, nhầy, lồi 40 10NS8 YMA 36 Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi 28 35 Rễ Ngô 24 Thân Cải 24 chíp Thân Cải 24 chíp Thân Diếp Cá Thân Diếp Cá Thân Diếp Thân Cải chíp Thân Cải chíp Nốt sần Lạc 74 Vàng, viền trơn, không nhầy, không lồi Vàng cam, viền trơn, không nhầy, không lồi 24 Trắng đục, viền trơn, nhầy, không lồi 24 Vàng, viền trơn, nhầy, không lồi 24 Cá Trắng đục, viền trơn, nhầy, lồi Trắng đục, viền trơn, không nhầy, không lồi Vàng nhạt, viền trơn, nhầy, không lồi Phụ lục 7: Hình ảnh Hình 4.1: Các chủng vi sinh vật có khả sinh IAA làm đổi màu thuốc thử Hình 4.2 Khả phân giải lân chủng 6TCCH1 2TDC1 Hình 4.3 Vịng phân giải xenlulo chủng 3TCCH 6TDC2 75 Hình 4.4: Khả phân giải tinh bột chủng 6LN2 3LDC Hình 4.5: Hình ảnh bố trí thí nghiệm trồng rau mồng tơi 76 ... hữu từ phế thải chăn nuôi khả vi sinh vật nội sinh, thực đề tài: ? ?Nghiên cứu sử dụng vi sinh vật nội sinh để sản xuất chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức từ phế thải chăn nuôi dạng lỏng? ?? 1.2 GIẢ... xuất chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức từ VSV nội sinh phế thải chăn nuôi dạng lỏng 1.4 PHẠM VI NGHIÊN CỨU - Đối tượng nghiên cứu: Chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức - Vật liệu nghiên cứu: ... chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức từ VSV nội sinh phế thải chăn nuôi dạng lỏng - Đánh giá hiệu chế phẩm dinh dưỡng vi sinh đa chức trồng 3.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.5.1 Tuyển chọn giống vi