MÁU 14/KHCN ị Ban hành kèm theo Oưyết định s ổ /Q Đ -Đ ỉQCÌHN ngùy 24 tháng 10 nám 20Ì4 cua (ìiả m d ố c Đ i h ọ c Q uốc giư I ỉà Nội) _ « Ạ Ỉ HỌC Q Ư Ĩ C GIA HÀ NỘI BÁO CÁO TONG KÉT K Ế T QUÀ T H Ự C HIỆN ĐẺ TÀI KH&CN CẤP ĐẠI H Ọ C QUỐC GIA T en d ề tài: Sàng lọc nghiên u enzym phytasc có kliíi thùy phân hồn lồn gơc photphat từ nấm men nhàm ứng dụng chăn nuôi M ã số đ ề tài: QG 12.23 C hủ nhiệm đ ề tài: T h S Trần T hị Lệ Quyên H N ộ i, Iiăm 20 ĩ M ẨU 14/K H CN (Ban hành kèm theo Quyết định số 3839 /QĐ-ĐHQCiHN ngày 24 th n g io năm 2014 Giám đôc Đ ại học Quốc gia H Nội) ĐẠI H Ọ C Q U Ó C G IA HÀ NỘI BÁO CÁO TỎNG KẾT K É T Q U Ả T H Ụ C H IỆ N Đ Ề TÀ I K H & C N CẤP Đ Ậ ĩ h ọ c q u ố c g ia T ên đê tài: Sàng lọc nghiên cứu enzym phytase có khả thủy phân hoàn toàn gốc photphat từ nấm men nhằm ứng dụng chăn nuôi M ã số đề tài: QG 12.23 C hủ nhiệm đề tài: T hS Trần Thị Lệ Quyên Hà N ội, năm 2014 PHẢN I THÔNG TIN CHUNG 1.1 Tên đề tài: Sàng lọc nghiên cứu enzym phytase có khả thủy phân hồn toàn gốc photphat từ nấm men nhằm ứng dụng chăn nuôi 1.2 Mã số: QG 12.23 1.3 Danh sách chủ trì, thành viên tham gia thực đề tài TT Chức danh, học vị, họ tên Đo n vị cơng tác Vai trị thuc hiên đề tài NCS Trần Thị Lệ Quyên Viện Vi sinh vật CNSH Chủ trì đề tài ThS Trịnh Thị Vân Anh Viện Vi sinh vật CNSH Thành viên tham gia CN Hà Thị Hằng Viện Vi sinh vật CNSH Thành viên tham gia N c s' Trịnh Thành Truna Viện Vi sinh vật CNSH Thành viên tham gia 1.4 Đon vị chủ trì: Viện Vi sinh vật Công nghệ sinh học, Đại học Quốc Gia Hà Nội 1.5 Thòi gian thực hiện: 1.5.1 Theo họp đồng: từ tháng 10 năm 2012 đến tháng 10 năm 2014 1.5.2 Gia hạn (nếu có): Khơng 1.5.3 Thực thực tế: từ tháng 10 năm 2012 đến tháng 11 năm 2014 1.6 Những thay đối so vói thuyết minh ban đầu (nếu có): khơng (Ve mục tiêu, nội dung, phương pháp, kết nghiên cứu tô chức thực hiện; Nguyên nhân; Ỷ kiến Cơ quan quản lý) 1.7 Tổng kinh phí phê duyệt đề tài: 180 triệu đồng PHẦN II TỔNG QUAN KÉT QUẢ NGHIÊN c ứ u Đ ặt vấn đề Phytases enzyme xúc tác cho phản ns thủy phân axit phytic (Ins p 6) thành photphat vô tự (Pi), tạo thành este myo-inositol photphat bậc thấp (Ins p đến Ins P]), trone, m ột sổ trường hợp tạo thành myo-inositol Hầu hết phytase biết thủy phân axit phytic giải phóne Pi tạo thành /wjỡ-inositol ’-monophotphat sản phẩm cuối Hiện có ba nhóm tác eiả cơns bổ phytase có khả thủy phân gôc photphat tạo thành myo-inositol từ axit phytic (Segueilha cs., 1992; Raaon cs., 2008; Asano cs., 2009) Việc tìm kiếm phytase có khả năns cất có ý nghĩa, chúne aốc photphat Óp phần giải hai yêu cầu ứns dụng công nghệ sinh học vào sống: ( ) hiệu sử dụns enzvme đạt tối đa ( ) tạo sản phẩm cuối cùnơ m^o-inositol có nhiều ứng dụns trone y học (Rason cs 2008) Việc sử dụns phytase neày càns nhiều trona ứns dụn côna nehệ sinh học thúc đay nhiều hướng nghiên cứu phytase như: ( ) phân lập chủna, vi sinh vật sinh phytase có hoạt lực cao có tính mới, (2 ) tìm kiếm phytase có tính năn , giải phóng nhiều photphat dễ tiêu hóa đường ruột, (3) chọn lọc phytase có thê trì hoạt tính trons q trình chế biến bảo quản, với giá thành sản phẩm thấp (Raẹon cs., 2008) Tuy phytase sản sinh nhiều loài sinh vật thực vật, động vật đặc biệt nấm sợi chi Aspergillus (Gibson, 1987; Dvorakova, 1997; Fujita, 2003; Gareova, 2006) vi khuẩn chi Baciiỉus (Gulati, 2007; Kim 1998), chi Pseudomonas (Cho, 2003) m ột sô nâm men Schwanniomyces castelii (Segueiha, 1992), Saccharomyces cerevisiae (Zyla 1994, Turk 2000), Arxula adeninivorans (Sano, 1999), Pichia spartinae p rhodanensis (Nakamura, 2000), Candida krusei (Quan, 2001) Nhưnơ trone số nhóm tác eiả phát phytase mang đặc tính q thủy phân hồn toàn gốc photphat đối tượna, nấm men: Debaryomyces castellii CBS 2923 (RaRơn cs., 2008) Schwanniomyces castelii CBS 2863 (Seeueiha cs., 1992) Ở Việt Nam, chưa có báo cáo nehiên cứu sản xuất phytase từ nấm men cũne chưa có báo cáo phytase man^ đặc tính thủy phân hồn tồn gốc photphat, có số tác eiả nghiên cứu sản xuất phytase từ vi sinh vật nhằm phần đáp ứng nhu cầu nước, thay dần sản phẩm nhập ngoại, PGS.TS Vũ Nguyên Thành (Viện Cône nghiệp Thực phẩm, 2009) nghiên cứu sản xuất phytase tái tổ họp từ nấm sợi Aspergillus niger Trần Thị Thủy (Đại học Sư phạm Hà nội, 2010) nghiên cứu nhân dòng biếu gen phytase chịu nhiệt Bacilỉus sp.MD2 E cơ// Tuy nhiên phytase tác ả thủy phân 10 mm), chủng cho hoạt tính phytase cao (U/ml>0,l) mơi trường lên men dịch thê chủng sinh phytase cao (Ư/ml>l) môi trường lên men xốp - Ket họp đặc điểm hình thái so sánh trình tự đoạn D1/D2 rDNA 26S, chủna 180, LM17, BS9 thuộc loài Candida blankii, Wickerhamomyces anomalus, Cơndida tropicalis; hai chủng 102 81 cùne thuộc lồi Saccharomycopsis fìbuligera - Có chủng nấm men sinh enzyme phytase thủy phân hoàn toàn gốc phosphate có ký hiệu L M 17, 180, BS9 - LM17 180 sinh trưởng tốt môi trường dịch thể Hansen không bị ảnh hưởne nhiều muối mật Chủng 180 có khả chịu axit kiềm tốt chủng LM17 - Phytase chủna 180 LM17 có kích thước khoảng 61 kDa 75 kDa; hoạt động tốt khoảng 45-50°C; pH từ 4-5,5; phytase chủng LM17 giữ 60% hoạt tính sau 30 phút xử lý 50°C; phytase chủng 180 giữ trcn 90% hoạt tính ° c sau 30 phút xử lý; phytase chủng LM17 cịn 90% hoạt tính pH3-4; với chủng 180 sau 10 phút xử lý pH 60% - Ion Na+ EDTA làm tăng nhẹ hoạt tính phytase chủng LM17 180; K+, Ca2+, Cu +,Zn2+, M e 2+ M n 2+, B a 2+ làm eiảm phần hoạt tính phytase chủng LM 17 180; phytase chủng LM17 cịn 20% hoạt tính sau 30 phút ủ với enzyme tiêu hóa pepsin (0,2 mg/inl) pH trypsin (0,2 mg/ml) pH 180 ủ với pepsin mg/ml sau 30 phút ủ phytase với trypsin mg/ml 2 ; phytase chủng Ĩữ 70% hoạt tính, % - Phytase chủng 180 đạt cao môi trường neô vỡ độ ẩm 50%, 5-7% giống khởi động 24 28°c, 140 vịng/phút mơi trườns Hansen, neuồn c glucose, sucrose, nguồn N N a N 3, N a N cao thịt, vào neàv nuôi cấy thứ 4, đạt gần 4.3 U/e, chất - Nước máy có khả năns chiết phvtase tốt từ mơi trường lên men xốp, với hoạt tính enzyme đạt 4.93 u / e Duns môi cồn aceton nồne độ tủa cuối cùns theo thứ tự 70% 80% cho hoạt tính phytase cao hiệu suất thu hồi đạt sấp xỉ 90-92% 83 TÀI LIỆU THAM K H Ả O TIẾNG VIỆT Lê Đình Lương, Phan Cự Nhân (2000), Cơ sở di Iruvền học NXB Giáo Dục, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Mượu Nguyễn Phùnơ Tiến Đặng Đức Trạch Phạm Văn Ty, Một so phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học Tập 1, 2, 3, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội n Ế N G ANH Bitar K, Reinhold JG (1972) Phytase and alkaline phosphatase activities in intestinal mucose of rat, chicken, calf and man Biochỉm Biophys Acta, 268, pp 442-452 Blank GE, Pletcher J, Sax M (1971) The structure of myo-inositol hexaphosphate, dodecasodium salt octama-contahydrate: a single crystal x-ray analysis Biochem Biophys Res Commun, 44, pp 319-325 Brian AD (2004) DNA sequencing and eenomics The D esk Encyclopedia o f Microbiolog}’, ed by Moselio Schaechter, Elsevier Academic Press, pp 371-380 Chadha BS, Harmeet G, Mandeep M, Saini HS, Singh N (2004) Phytase production by thethermophilic íuneus Rhizomucos pusillus World J M icrobiol Bioteclmol, 20, pp 105-109 Chen QC, Li BW (2003) Separation o f phytic acid and other related inositol phosphates by hÌ£h-performance ion chromatoeraphy and its applications Journaỉ o f Chromatography A, 1018, pp 41-52 Cheng c , Lim BL (2005) Beta-propeller phytases in the aquatic environment: characterization of a novel phytase from Shewanella oneidensis MR-1 In inositol Phosphates in the Soil-Plant-Animal Svstem: Linking Agriculture and Environment Proceedings o f the Bouyoucos Conference to Address the Biogeochemical Interaction o f Inositol Phosphates in the Environment; Turner BL Richardson AE, Mullaney EJ, Eds; Sun Valley, Idaho, USA, pp 55-56 Cheryan M (1980) Phytic acid interactions in food systems CRC Crit Rev Food Sci Nutr, 13, pp 297-335 10 Chi H, Tiller GE, Dasouki MJ Romano PR Wane J 0'keefe RJ, Puzas JE, Rosier RN, Reynolds PR (1999) Multiple inositol polyphosphate phosphatase: evolution as a distinct sroup within the histidine phosphatase family and chromosomal localization of the human and mouse senes to chromosomes 10q23 and 19 Genomics, 56 pp 324-336 84 11 Chu IIM Guo RT, Lin TW, Chou c c Lai H L, Tang TY, Cheng KJ, Selinger BL, Wana AHJ (2004) Structures o f Selenomonas rumỉnantium phytase in complex with persulfated phytate: DSP phytase fold and mechanism for sequential substrate hydrolysis Structure 12, pp 20152024 12.Copper JR, Goxving HS (1983) Mammalian small intestine phytase Br J Nutr, 50 pp 673-678 Davies NT (1982) Effects o f phytic acid on mineral availability In Dietary Fiber in Health and Disease Vahoung GV and Kritchevsky D, Eds, Plenum Press, New York 14 Denu JM Dixon JE (1998) Protein tyrosine phosphatase: mechanism 13 o f catalysis and regulation Cur Opinion Chem B ioỊ 2, pp 633-641 15.Deshpanđe s s , Cheryan M (1984) Effect o f phytic acid, divalent cations, and their interactions on alpha-amylase activity J Food Sci, 49, pp 516-524 16 Dhanasekaran D, Lawanya s, Saha s, Thajuddin N, Vam AP (2011) Production of sin£>le cell protein from pineapple waste usins yeast lnnovative Romanian Food Biotechnology, , pp 26-32 17-Dvorakova J (1998) Phytase: Sources, preparation and exploitation Folia Microbiol, 43, pp 323-338 18.Ellestad LE, Angel R, Soares Jr JH (2002) Intestinal phytase II: A comparison o f activity and in vivo phytate hydrolysis in three teleost species with differing digestive strategies Fish Physiol Biochem, 26, pp 259-273 19.Farhat A, Chouayekh H, Mounira B, Bouchaala K, Bẹịar s (2008) Gene clonins and characterization of a thermostable phytasefrom Bacillus subtilis US417 and assessment o f its potentialas a feed additive in comparison with a commercial enzyme Molecular Biotechnology 40(2), pp 127-135 20 Fersuson IB, Bollard EG (1976) The movement o f calcium in germinating pea Seeds Ann Bot (London), 40, pp 1047-1051 21 Femández RDE, León RJA, de Carvalho JC, Karp SG, Sturm w , Parada JL, Soccol CR (2012) Iníluence o f airflow intensity on phytase production by solid-state íermentation Bioresource Technology 118, pp 603-606 22.Freund WD, Mayr GW, Tietz c , Schultz JE (1992) Metaboỉism of inositol phosphates in the protozoan Paramecỉum Eur J Biochem, 207 pp 359-367 23.G raf E, Empson K Eaton JW (1987) Phytic acid A natural antioxidant J Biol Chem 262, pp 11647-11651 24.Greaves M p, Anderson G, Webley D M (1967) The hydrolysis of inositol phosphates by Aerobacter aerogenes Bỉochem Biophys Acta, 132, pp 412-418 85 25.Greiner R, Haller E, Konietzny u , Jany KD (1997) Purification and characterization o f a phytase from Klebsiella terrìgena Arch Biochem Biophys, 341 pp 201-206 26.Greiner R Konietzny u Jany KD (1993) Puritìcation and characterization o f two phytases from Escherichia coli Arch Biochem Biophvs, 303, pp 107113 27.Gulati HK Chadha BS, Saini HS (2007) Production and characterization of thermostable alkaline phytase from Bacillus laevolactìcus isolated from rhizosphere soil J I n d Microbiol Biotechnol 34, pp.91-98 28 Ha NC, Oh BC, Shin s, Kim HJ, Oh TK, Kim YO, Choi KY, Oh BH (2000) Crystal structures o f a novel, thermostable phytase in partially and fully calcium-loaded states Nature Struct Biol, 7, pp 147-153 29 Haas LOC, Creeg JM and Gleeson MAG (1990) Development of an integrative DNA transformation system for the yeast Candìda tropicaỉis Journaỉ o f Bacteriologyn pp 4571-4577 30 Hampichamchai p, Somlake w Tanẹ K, Eunvilaichitr L, Tanapongpipat s (2010) Cell-suríầce phytase on Pichia pastorỉs cell wall offers areat potential as a feed supplement FEM S M icrobiol Lett 302, pp 8-14 H a ro s M , Bielecka M, Sanz Y (2005) Phytase activity as a novel metabolic feature in Bifidobacterium FEM S Microbiol Lett, 247, pp 23 1239 32 Hussin MSA, Farouk EA, Cireiner R, Salleh MH, Ismail AF (2007) Phytate- deerading enzyme production by bacteria isolated from Malaysian soil World J M icrobiol Biotechnol 23, pp 1653-1660 33.1gbasan FA, Mãnner K, Miksch G, Borriss R, Farouk ASO (2000) Comparative studies on the in vitro properties o f phytases from various microbial origins Archives o f Animal Nutrition 53(4), pp 353-373 34 Inasaw aJ, Kiyosavva I, Naẹasawa T (1987) Effect o f phytic acid on the hydrolysis of lactose with beta-galactosidase Agric Bioỉ Chem 51, pp 3027-3032 International Trainine-Workshop on (1999) M icrobial Identifìcation and Culture collection Tecìmiques Biotech-UPLB-College-Laguna- Philippines 36.1rving GCJ, Cosgrove DJ (1971) Inositol phosphate phosphatase o f microbial origin, observations on the nature o f the active center o f a bacterial (Pseudomonas sp.) phytase Austral J Bioỉ Sci, 24, pp 1559-1564 37.IƯPAC-IUB (Commission on Biochemical Nomenclature) (1977) Nomenclature o f phosphorus containins compounds of biochemical importance Eur J Biochem, 79 pp 1-9 86 38 Jog SP Garchoxv BG, Mehta BD, Murthy PPN (2005) Alkaline phytase from lily pollen: Investigation of biochemical properties Arch Biochem Biophys, 440, pp 133-140 39.Johnson L, Tate M (1969) The structure o f myo-inositol pentaphosphates Ann A N Acacì Sci 165, pp 526-535 40.Jorqueral MA, Crovvley DE, Marschner p, Greiner R, Fernandez MT, Romero D, Blackburn DM, Mora M de la L (2010) Identi^cation o f ị3propeller phytase-encodina aenes in culturable Paenibơcillus and Bacillus spp from the rhizosphere o f pasture plants on volcanic soils FEM S Microbiol Ecol 75 pp 163-172 41 Kaur p, Singh B, Bốer E, Straube N Piontek M Satyanarayana T, Kunze G (2010) PphyA cell-bound phytase from the yeast Pichia anomala: Molecular cloning o f the sene PPHY and characterization of the recombinant enzyme Journal o f Biotechnology, 149, pp 8-15 42.Kerovuo J, Lauraeus M, Nurminen p, Kalkkinen N, Apajalahti J (1998) Isolation characterization, molecular gene cloning and sequencing of novel phytase from Bacillus subtillis Appl Environ Microbiol 64, pp 2079-2085 Kim Y, Kim HK, Bae KS, Yu JH Oh TK (1998) Puriíication and properties o f a thermostable phytase from Baciỉlus sp DS11 Em ym e and Microbial Technology 22, pp 2-7 44 Kim YO, Lee JK, Kim HK, Yu JH, Oh TK (1998) Cloning o f the thermostable phytase gene (phy) from Bacillus sp DS11 and its overexpression in Escherỉchỉa coli FEM S M icrobioỉ Lett, 162, pp 185-191 45.Kimura M (1980) A simple method for estimating evolutionary rate o f base substitutions through comparative studies o f nucleotide sequence J Mol Evol., 16, pp 111-120 46.Kostrewa D, Wyss M, D"Arcy A, van Loon APGM (1999) Crystal structure o f Aspergillus niger pH 2.5 acid phosphatase at 2.4 a resolution J Moỉ B io Ị 288, pp 965-974 47.Kothavade RJ, Kura MM Valand AG and Panthaki MH (2010) Candida tropicalis' its prevalence, pathogenicity and increasing resistance to fluconazole Journal ofM edical M icrobiology (59), pp 873-880 48.Kurtzman CP, Blanz PA (1998) Ribosomal RNA/DNA sequence comparisons for assessins phylosenetic relationships The Yeasts, a Taxanomic Study, 4th ed., ed by Kurtzman CP, Fell JW, Elsevier Science Publ Amsterdam pp 69-71 49.Kurtzman CP, Robnnet CJ (1998) Identiílcation and phyloseny of ascomycetous yeasts from analysis of nuclear larse subunit (26S) ribosomal DNA partial sequences Antonie van L e e m v e n h o e k 67 pp 151-171 87 Lambrechts c Boze H Seeueilha L, Moulin G and Galzy p (1993) Intluence o f culture conditions on the biosynthesis o f Sdnvanniomyces castellii phvtase Biotecìmology Lters 15 pp 399- 404 51.Lansing MP John PH Donald AK (2002) “ Microbial T axonom ỳ\ M icrobiologỵ, 5l ed., International Edition - Mc Graw Hill, pp 422-446 52.Manitis T, Fritsch EF, Sambrook J (1982) "Molecuỉar cloning: a Iaboraíory manual Cold Spring Harbor ỉaboratory: Cold Spring Hcirbor ”, New York Ư.S.A pp 187-209 Marasatham c and Panneerselvam A (2011) Production o f sinele cell protein írom yeast using papaya extract mediuin Advances in Applied Science Research, (2), pp 14-18 54.Meyer PS, Du Preez JC, Kilian SG (1992) Chemostat cultivation of Candida blankii on susar cane basasse hemicellulose hydrolysate Biecìmoỉ Bioeng 40(3), pp 353-8 55.Mochizuki D, Takahashi H (1999) Method for producine phytase, Patent application EP 0931837-A pp 327 - 3 56.Moushree PR, Madhumita p, Kamal KS and Shilpi G (2012) Purifícation, characterization and properties o f phytase from Shigella sp CD2 India jo u rn a l Biochemistry & Biophysics 49, pp 266-271 57 Mullaney EJ, Ullah AHJ (2005) Conservation o f cysteine residues in íuneal histidine acid phytases Biochem Biophys Res Commun, 328, pp 404-408 58.Mullaney EJ, Daly CB, ưllah AHJ ( 0 ) Advances in phytase research Adv Appl Microbiol, 47, pp 157-199 59.Nakamura Y, Fukuhara H, Sano K (2000) Secreted phytase activities of yeast Biosci.Biotechnol.Biochem 64 (4), pp 841-844 60-Nakase T, Takashima M, Itoh M, Fungsin B, Potacharoen w , Atthasampunna p, Komagata K (2001) Ballistoconidium-íbrmins yeasts found in the phyllosphere o f Thailand Mỉcrobiol Cult Coll., 17, pp 23-33 61 Nayini NR and Markakis p (1984) The phytase o f yeast Food Sci Technol, 17, pp 126-132 62.Nuobariene L, Hansen AS, Jespersen L and Amebore N (2011) Phytaseactive yeasts from erain-based M icrobiology 110, pp 1370-1380 food and beer Journaỉ o f Applied 3.Oh BC, Choi w ậ Park s, Kim YO, Oh TK (2004) Biochemical properties and substrate specificities o f alkaline and histidine acid phosphatase Appl Microb Biotechnol 63 pp 362-372 64.01czak M Morawiecha B, Watorek w (2003) Plant purple acid phosphatasesoenes, structures and biolo Ĩcal function Acta Biochim Pol, 50, pp 1245-1256 88 65.01storpe M, Schnurer J and Passoth V (2009) Screening o f ycast strains for phytase activity FEMS Yeast Res pp 478—488 6 Pallauf J, Rimbach G (1996) Nutritional sieniíicance of phytic acid and phytase Arch Anim Nutr, 50, pp 301-319 67 Passoth V Fredlund E, Druveíors UA and Schnurer J (2006) Biotechnolosy, physiology and genetics of the yeast Pichia anomaỉa FEMS Yeast Research , pp 3-13 .Pavlova K Gar°ova s, Hristozova T, and Tankova z (2008) Phytase 1'rom antarctic yeast strain Cryptococcus ỉaurentii AL27 Folia Mirrobiol S3(I), pp.29— 34 69 Phillippy BQ (1999) Susceptibility o f wheat and Aspergillus niger phytases to inactivation by eastrointestinal enzymes Journal o f Agricuỉture and Food Chemistry 47(4), pp 1385-8 70 Phillippy BQ, Wyatt CJ (2001) Degradation o f phytate in foods by phytases in truits and vesetable extracts J F o o d S c i, 6 , pp 535-539 71.Powar VK, Jagannathan V (1982) Purilìcation and properties of phvtatespeciíìc phosphatase from Bacillus subtilis J Bacteriol, 151, pp 1102-1108 72 Quan c s , Difan s, Zhang LH, Wang YJ and Ohta Y (2002) Puriíĩcation and properties o f a phytase from Candida krusei WZ-001 Journal o f Bioscience and Bioenginering 94(5), pp 419-425 73.Ragon M, Aumelas A, Chemardin p, Galvez s, Moulin G, Boze H (2008) Complete hyđrolysis of myo-inositol hexakisphosphate by a novel phytase from Debaryomyces castellii CBS 2923 Appl M icrobiol Bỉotechnol 78, pp 47-53 74.Reddy NR, Pierson MD, Sathe SK, Salunkhe DK (1989) Phytates are cereals and legumes CRC Press, Inc, Boca Raton, Fla, pp 218-227 5.Rezaei F, Joh LD, Kashima H , Reddv AP, VanderGhevnst JS (2011) Selection o f conditions for cellulase and xylanase extraction from switchgrass colonized by Acidothermus celỉulolyticus Applied Biochemical Biotecìmology 164(6) pp 793-803 76.Ries EF and Macedo GA (2011) Improvement o f phytase activity by a new Saccharomyces cerevisioe strain using stalistical opíimization Enzyme Research Vol 2011, ópaaes 77.Rimbach G, Pallauf J (1992) The effect o f a supplement o f microbial phytase on zinc availability z Ernahrungswiss, 31 pp 269-277 78 Saitou N and Nei M (1987) The neÌ hbor-joinin method: a new method for reconstructina phylogenetic trees Mol Bioỉ Evol., pp 406-425 79.Sajidan A, Farouk A, Greiner R, Junsblut p, Muller EC, Borriss R (2004) Molecular and phvsiolosical characterization of a 3-phvtase from 89 soil bacterium Klebsiella sp ASR1 Appl M icrobiol BiotechnoL 65, pp 110— 118 80 Sakharkar KR and Sakharkar MK (2009) Yeast Acid Phosphatases and Phytases: Production, Characterization and Commercial Prospects In Yeast Biotechnology: Diversity and Applications edit by Parvinder Kaur and T Satyanarayana Springer Science + Business Media B.v pp 693-714 81-Sano K, Fukuhara H and Nakamura Y (1999) Phytase of the yeast Arxula adeninivorans Biotechnoìogy Letters 21pp 33-38 82 Schenk G, Guddat LW, Ge Y, Carrington LE, Hume DA, Hamilton J, de Jersey J (2000) Identifícation of mammalian-like purple acid phosphatases in a wide ranee o f plants Gene 250 pp 117-125 83.Sequeilha L, Lambrechts c , Boze H, Moulin G, Galzy p (1992) Puriíìcation and properties o f the phytase from Schwanniomvces castelii J Ferment Bioeng, 74, pp 7-11 84 Shah V, Parekh LJ (1990) Phytase from Klebsiella sp No PG-2: Purification and properties Indian J Biochem Biophys, 27, pp 98-102 85.Shieh TR, Ware JH (1968) Survey o f microorganisms for the production o f extracellular phytase Appl Microbiol, 16, pp 1348-1351 Shimizu M (1992) Puriíĩcation and characterization o f phytase from Bacillus subtilis (natto) N-77 Biosci Biotechnol Biochem, 56, pp 12661269 87.Singh M, Krikorian AD (1982) ĩnhibiton o f trypsin activity in vivo by phytate J Agr Food Chem, 30, pp 799-805 88 Skoglund E, Carlsson NG, Sandbers AS (1998) High-performance chromatographic separation o f inositol phosphate isomers on strong anion exchanee columns J Agric Food C hem A6, pp.l 877-1882 89 Staden VJ, Haan DR, Willem H van z, Botha A & Bloom VM (2007) Phytase activity in C ryptococcm laurentii ABO 510 FEM S Yeast Res 7, pp 442-448 90.Sueita T, Nishikawa A, Ikeda R, Shinoda T (1999) Identiĩication of medically relevant Trichosporon species based on sequences of intemal transcribed spacer regions and construction o f a database for Trichosporon identiíìcation J Clin M icrobiol, 37 pp 1985-1993 91.Tamang JP and Fleet GH (2010) Yeasts diversity in íermented foods and beveraees In Yeast Bioteclmog}’: Diversity and Applications edit by Satyanarayana T, Kunze G Sprinaer Science + Business Media B.v pp 170-193 92 Thomson JD Higgins DG Gibson TJ (1994) CLƯSTAL W: improvine the sensivity o f Progressive multiple sequence aliơment through sequence 90 \veight, position-speciíìc eap penalties and weight matrix choice Nuclic A cidR es., 22, pp 4673-4680 93.Tsana KWP (2011) Differential phytate utilization in Candida species Mycopathologia 172, pp.473-479 94.Tũrk M, Sandberg AS, Carlsson N, Andlid T (2000) Inositol hexaphosphate hydrolysis from baker"s yeast Capacity, kinetics, and đegradation products J Agr Food Chem 48 pp 100-104 95 Ullah AHJ (1988) Aspergillus ficuum phytase: partial primary structure substrate selectivitv and kinetic characterization Pre Biochem, 18 pp 459-471 96 Van Etten R L, Davidson R Stevis p E, MacArthur H Moore DL (1991) Covalent structure disulíìde bonding, and identiíĩcation of reactive surtầce and active site residues of human prostatic acid phosphatase J Biol Chem, 266, pp 2313-2319 97 Viveros A, Centeno c , Brenes A, Canales R, Lozano A (2000) Phytase and acid phosphatase activities in plant feedstuffs J Agr Food Chem, 48, pp 4009-4013 98.Vohra A, Satyanarayana T (2001) Phytase production by the yeast, Pichia anomala Biotechnol Lett, 23, pp 551-554 99.Vohra A, Satyanarayana V (2003) Phytase: microbial sources, production, puritìcation, and potential biotechnological applications Crit Rev in Biotechnol , 3(1), pp 9-60 100 Vohra A, Kaur p, Satyanarayana T (2011) Production, characteristics and applications o f the cell-bound phytase o f Pichio anomala Antonie van Leeuwenhoek 99, pp.51-55 101 Wang xueying (2003) Phytase studies: producer screening, em ym e purifìcẳon and characterization and gene cloning PhD thesis, Faculty o f sraduate studies Mahidol University 102 Williams PJ, Taylor TG (1985) A comparative study of phytate hydrolysis in the sastrointestinal track of the solden hamster (Mesocricetus auratus) and the laboratory rat Br J Nutr, 54 pp 429-435 103 Wodzinski RJ, ưllah AHJ (1996) Phytase, Adv Appl Microbiol, 42, pp 263-302 104 Wyss M, B russer R Kronenberaer A, Rémy R, Fimbel R, Oesterhelt G, Lehmann M, Van Loon APGM (1999) Biochemical characterization of íunsal phytase (myo-Inositol hexakisphosphate phosphohydrolases): Catalytic properties Appl Environ M icrob, 65(2), pp 367 - 373 105 Xin GL, Jesus MP, Echvard JM, Henrik BP (2007) Phytase: source structure and application IndE nzym es, pp 505-529 91 106 Yang WJ Matsuda Y, Inomata M, Nakagawa (1991) Developmental and dietary induction of 90 kDa subunit o f rat intestinal phytase Biochim Biophys A cta,\075, pp 83-87 107 Yarrow D (1998) Methods íor isolation, maintenance and identiiìcation o f yeasts In The Yeasts, a Taxonomic Study, 4th ed ed by Kurztman CP and Fell J w , Elsevier Science Publ., Amsterdain, pp 77-100 108 Yoon SJ, Choi YJ, Ki MH, Kwang CK, Wook KJ, Cheol LC, Hoo JY (1996) Isolation and identification o f phytase producina bacterium, Enterobacterium sp and, enzymatic properties of phytase enzyme Enzyme Microbiaỉ Technology 18(6): 449-454 109 Zhu w , Qiao D, Huang M, Yang G, Xu H, Cao Y (2010) Modifying thermostability o f appA from Escherỉchỉa coỉi Curr Microbioỉ 61,pp 26 7273 110 Zinin NV, Serkina AV, Gelfand MS, Shevelev AB Sinepky SP (2004) Gene cloning, expression and characterization o f novel phytase Obesumbacterium proteus FEM S M icrobiol Lett, 236, pp 283-291 WEBSITE 111 WW'W.scribd.com /doc/1983583 l/E nzym e-H oc 92 from ... N CẤP Đ Ậ ĩ h ọ c q u ố c g ia T ên đê tài: Sàng lọc nghiên cứu enzym phytase có khả thủy phân hoàn toàn gốc photphat từ nấm men nhằm ứng dụng chăn nuôi M ã số đề tài: QG 12.23 C hủ nhiệm đề tài:... Curr M icrobiol 61 : 267 -273 Lịi cảm 0'n *Cơng trình hỗ trợ kinh phí từ đề tài: ? ?Sàng lọc nghiên cứu enzym phytase có khả thủy phân hồn tồn gốc photphat từ nấm men nham ứng dụng chăn nuôi' "- QG 12.23... chủng nấm men có phytase có khả thủy phân gốc photphat Có ba chủng nấm men sinh enzyme phytase thủy phân hoàn tồn C phosphate có ký hiệ!uL M 17,B S9 180 4.51 Khả sình trưởng chủng nấm men lựa chọn