LỜI CẢM ƠN Khóa trọng, em xin Đại học Sư phạm Hà Bằng tất lịng kính luận tốt nghiệpđược bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Đinh Thị Nội Kim Nhung tận tình hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ em suốt q trình hồn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy Nguyễn Khắc Thanh, thầy Phương Phú Công truyền đạt kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập thực đề tài môn Em cảm ơn chân thành tới bạn nhóm đề tài mơn vi sinh, trường Đại học sư phạm Hà Nội giúp đỡ nhiệt tình tạo điều kiện thuận lợi q trình hồn thành đề tài nghiên cứu Cuối em xin cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè quan tâm, động viên, giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Sinh viên thực Nguyễn Ngọc Mai LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan viết luận văn thật Đây kết nghiên cứu riêng Tất số liệu thu thập từ thực nghiệm, qua xử lý thống kê, khơng có số liệu chép hay bịa đặt, không trùng với kết công bố Trong tài liệu có sử dụng số tài liệu số tác giả, xin phép tác giả để bổ sung cho luận văn Nếu sai tơi hồn tồn chịu trách nhiệm Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Sinh viên Nguyễn Ngọc Mai Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội DANH MUC CÁC TỪ VIÉT TẮT BC PMG Khóa luận tốt nghiệp cellulose : Bacterial Dai hoc Su pham Hà Nôi : Phosphoglucomutase UGP : Glucose-1-phosphate uridylytransferase 1PFK : Fructose-1-phosphate kinase Pru-6-P : Fructose-6-phosphate Glc-1-P : Glucose-1-phosphate UDPGlc : Uridine diphospho glucose GK : Glucokinase FBP : Fructose-1,6-biphosphate phosphatase G6PDH : Glucose-6-phosphate dehydrrogenase PGI : Phosphoglucoisomerase PTS : Hê thông Phosphotransferase Fru-bi-P : Fructose-1,6-bi-phosphate Glc-6-P : Glucose-6-phosphate PGA : Phosphogluconic acid FK : Fructokinase es : Cellulose synthate CFU : Clony Forming Unit uv : Ultra Violet vsv : Vi sinh vât Cs : Công su MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày công nghệ sinh học dần trở thành ngành kĩ thuật chủ đạo nhiều quốc gia giới Gắn liền với cơng nghệ vi sinh với thành tựu lớn có ý nghĩa đời sống, ngành công nghiệp, y học Vi khuẩn Gluconacetobacter thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm hiếu khí bắt buộc, hố Khóa luận tốt nghiệp Dai hoc Su pham Hà Nôi dưỡng thuộc chi Acetobacter, họ Acetobacteraceae Khi nuôi cấy vi khuẩn môi trường dịch lỏng, chúng hình thành bề mặt lớp màng BC, tập hợp tế bào vi khuẩn liên kết với phân tử cellulose Màng BC cấu tạo chuỗi polimer-P-1,4 glucopyranose không phân nhánh tổng hợp từ số loài vi khuẩn nuôi cấy chúng môi trường dịch lỏng Màng BC Gluconacetobacter tạo có cấu trúc hóa học đặc tính học giống với cellulose thực vật có thêm số tính chất hóa lý đặc biệt như: độ bền học, đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, tính đàn hồi lớn, khả thấm hút nước nhanh, khả polymer hóa lớn Vì BC ứng dụng rộng rãi giới nhiều lĩnh vực công nghệ Trên giới màng BC ứng dụng nhiều lĩnh vực công nghệ khác nhau: dùng làm màng phân tách cho q trình xử lí nước, chất mang đặc biệt cho pin lượng cho tế bào,dùng làm chất biến đổi độ nhớt sản xuất sợi truyền quang, làm môi trường chất sinh học, thực phẩm hay thay thực phẩm Đặc biệt lĩnh vực y học, màng BC ứng dụng làm da tạm thời thay da trình điều trị bỏng, loét da, làm mạch máu nhân tạo điếu trị bệnh tim mạch; làm mặt nạ dưỡng da cho người Ở Việt Nam, việc nghiên cứu ứng dụng màng BC mức độ khiêm tốn, nghiên cứu ứng dụng dừng lại bước đầu nghiên cứu Các kết ứng dụng màng BC dừng lại điều kiện thí nghiệm Trong năm gần phịng thí nghiệm Vi sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội phân lập tuyển chọn chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC nghiên cứu bước đầu cho thấy màng BC từ chủng Gluconacetobacter có khả ứng dụng cho trị bỏng cho thỏ sở để tạo màng trị bỏng cho người Màng BC hồn tồn sản xuất nước phương pháp lên men tĩnh vi khuẩn Gluconacetobacter môi trường lỏng Tuy nhiên vấn đề gặp phải chủng Gluconacetobacter dễ bị thối hóa Vì việc khơng ngừng nâng cao hoạt tính sinh tổng hợp cellulose cần thiết Chính lý đó, với mong muốn tuyển chọn chủng có khả tạo màng BC thời gian nhanh hơn, dai chủng Khóa luận tốt nghiệp Dai hoc Su pham Hà Nôi Gluconacetobacter tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu khả tạo màng BC từ chủng Gluconacetobacter tác dụng tác nhân gây đột biến tia uv ” Mục tiêu đề tài Tuyển chọn chủng đột biến từ chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC thời gian ngắn Nội dung đề tài 3.1 Xác định thời gian đột biến tác nhân đột biến tia uv 3.2 Gây đột biến tuyển chọn chủng đột biến 3.3 Xác định thay đổi hình dạng tế bào, hình thái khuẩn lạc chủng trước sau đột biến Ý nghĩa khoa học Chọn chủng sau đột biến tò chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC thời gian ngắn Ý nghĩa thực tiễn Tạo màng BC thời gian ngắn tốt có triển vọng ứng dụng vào số lĩnh vực sống, đặc biệt lĩnh vực y học Điểm Chọn chủng sau đột biến từ chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC thời gian ngắn, dai chủng gốc NÔI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vị trí đặc điểm phân loại Gluconacetobacter sinh giới 1.1.1 Vị trí phân loạỉ Gluconacetobacter sinh giới Theo hệ thống phân loại nhà khoa học Bergey Gluconacetobacter thuộc giống Acetobacter, họ Pseudomonadaceae, Pseudomonadales, lớp Schizommycetes Việc phân loại vi khuẩn cịn nhiều tranh cãi, có số tác giả coi Gluconacetobacter loài phụ A aceti [17] 1.1.2 Đặc điểm phân loại 1.1.2.1 Đặc điểm hình thái, tể bào học Khóa luận tốt nghiệp Dai hoc Su pham Hà Nơi Gluconacetobacter có dạng hình que, thẳng hay cong, kích thước khoảng 2|xm, tế bào đứng riêng lẻ xếp thành chuỗi, khơng có khả di động, không sinh bào tử Các tế bào bao bọc chất nhày tạo váng nhăn dày Váng có chứa hemicellulose nên gặp H2SO4 thuốc nhuộm iôt bắt màu xanh (do phản ứng hemicellulose), chúng tích luỹ 4,5% acid acetic môi trường Khi nồng độ acid acetic cao vượt giới hạn cho phép, ức chế hoạt động vi khuẩn [13] Vi khuẩn Gluconacetobacter thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm, hiếu khí bắt buộc, hố dị dưỡng Tế bào chúng thường tìm thấy giấm, dịch rượu, nước ép hoa quả, đất Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội Hình 1.1 Vi khuẩn Gluconacetobacter 1.2.2.2 Đặc điểm ni cấy Trên mơi trường thạch đĩa, vi khuẩn Gluconacetobacter hình thành khuẩn lạc nhẵn xù xì, rìa mép khuẩn lạc phẳng hay gợn sóng, màu trắng suốt, khuẩn lạc phẳng lồi lên dễ tách khỏi môi trường Vi khuẩn Gluconacetobacter nuôi cấy mơi trường lỏng điều kiện tĩnh, chúng hình thành bề mặt môi trường lớp màng BC Ngược lại điều kiện ni lắc, cellulose hình thành dạng hạt nhỏ với kích thước khơng phân tán môi trường dinh dưỡng tạo đặc tính hình thái khác hẳn cellulose điều kiện ni cấy tĩnh 1.1.2.3 Đặc điểm sinh lý, sinh hố Đặc điểm sinh lý: Vi khuẩn Gluconacetobacter phát triển nhiệt độ 25 - 35°c, pH: 4-6 Nhiệt độ pH tối ưu tuỳ thuộc vào giống Ở 37°c, tế bào suy thối hồn tồn mơi trường tối ưu Tuy nhiên ý kiến khác Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội nhiều tranh cãi điều kiện nhiệt độ, pH tối thích cho chủng vi khuẩn Gluconacetobacter sinh trưởng tạo màng Gluconacetobacter có khả chịu pH thấp, thường bổ sung thêm acid acetic vào môi trường nuôi cấy để hạn chế nhiễm khuẩn lạ Đặc điểm sinh hoá: Năm 1950, Frateur [20] thức đưa khóa phân loại vào tiêu chuẩn: Khả oxy hóa acid acetic thành CƠ2 H2O; hoạt tính catalase; khả sinh trưởng môi trường Hoyer [20] Theo quan điểm Gluconacetobacter chủng thuộc chi Acetobacter, họ Pseudomonadaceae, Pseudomonadales, lớp Schizomycetes Đặc điểm phân biệt với chủng khác chi trình bày bảng 1.1 [20] : Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hoá chủng vi khuẩn Glucoĩlũcetobũcter theo Frateur (1950) STT Đặc điểm Hiện tượng Oxy hố ethanol thành Chun hố mơi trường chứa Bromphenol acid acetic Blue 0,04% từ màu xanh sang màu vàng Hoạt tính catalase Hiện tượng sủi bọt khí Sinh trưởng mơi Sinh khối khơng phát triển trường Hoyer Chuyển hố glycerol Tạo kết tủa đỏ gạch dịch sau lên men thành dihydroxyaceton Chun hố glucose Vịng sáng xt xung quanh khuân lạc thành acid môi trường chứa CaC0 Kiểm tra khả Khơng hình thành sắc tố nâu sinh sắc tố nâu Kiểm tra khả Váng vi khuẩn xuất màu lam tổng hợp cellulose 1.1.3 Nhu cầu dinh dưỡng vi khuẩn Gluconacetobacter 1.1.3.1 Ảnh hưởng nguồn cacbon Kết + + + + + Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội Để vi khuẩn sinh trưởng phát triển tốt cần cung cấp nguồn cacbon phù hợp Tuỳ nhóm vi sinh vật mà nguồn cacbon cung cấp vô hay hữu Giá trị dinh dưỡng khả hấp thụ cacbon phụ thuộc vào hai yếu tố: thành phần hoá học tính chất sinh lý nguồn thức ăn, đặc điểm sinh lý loại vi sinh vật Người ta sử dụng đường làm thức ăn nuôi cấy phần lớn vi sinh vật dị dưỡng Đường đơn nhiệt độ cao bị chuyển hố thành loại hợp chất có màu tối khó hấp thụ Trong mơi trường kiềm sau khử trùng, đường cịn dễ bị chuyển hố làm biến đổi pH mơi trường Để tránh tượng khử trùng mơi trường có chứa đường người ta thường hấp áp lực 0,5atm 110° 30 phút Từ loại đường đơn tốt nên sử dụng phương pháp hấp gián đoạn (phương pháp Tyndal) Để nuôi cấy loại vi sinh vật khác người ta sử dụng nồng độ đường không giống nhau, với vi khuẩn thường dùng 0,5-0,2% đường Hầu hết vi sinh vật đồng hoá loại đường dạng đồng phân D [1] Các hợp chất hữu chứa cacbon nitơ (pepton, nước thịt, nước chiết ngô, nước chiết nấm men, nước chiết đại mạch, ) vừa sử dụng làm nguồn cacbon, vừa sử dụng làm nguồn nitơ vi sinh vật [1] 1.1.3.2 Nhu cầu nitơ vi sinh vật Nguồn nitơ vô dễ hấp thu vi sinh vật NH3 NĨỈ4 + Tuy nhiên, nuôi cấy vi khuẩn môi trường có sử dụng NĨĨ4 + sau chúng đồng hóa NĨỈ4 + mơi trường tích lũy anion vô ( SO4 2", Cl" ) làm hạ thấp nhiều trị số pH môi trường Muối anion axit hữu làm chua mơi trường có lúc sử dụng nhiều (mặc dù đắt hơn) Muối nitrat nguồn thức ăn nitơ thích hợp với nhiều loại tảo, nấm sợi, xạ khuẩn lại thích hợp với vi khuẩn, sau vi khuẩn sử dụng hết NC>3"cac ion kim loại cịn lại kiềm hóa mơi trường [1] Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội Vi sinh vật có khả đồng hóa tốt nitơ chứa thức ăn hữu Các thức ăn vừa nguồn cacbon vừa nguồn cung cấp nitơ cho vi sinh vật Vi sinh vật khả hấp thụ trực tiếp protein cao phân tị, có polypeptid khơng chứa q gốc axit amin di chuyển trực tiếp qua màng tế bào chất vi sinh vật [1] 1.1.3.3 Hàm lượng ethanol dung dịch lên men Ethanol sử dụng chất Hàm lượng ethanol thay đổi từ 210% V Hàm lượng cao làm giảm suất lên men Theo Hong Joo Son lại cơng bố hàm lượng ethanol thay đổi từ 0,2-1% tốt 0,6% Theo Nodes, lượng ethanol trì mơi trường ln giữ 3-3,5% Các tác giả Ebner Heừich, cho lượng ethanol dùng từ 7-10% V Để tránh tượng oxy hố hồn tồn acid acetic cần có lượng ethanol sót sản phẩm từ 0,2-0,5% để ức chế tự tổng hợp enzyme oxy hoá acid acetic muối acetate [1], [23] Ngồi việc oxy hố ethanol, vi khuẩn acetic cịn có khả oxy hố rượu khác thành acid tương ứng 1.2 Lược sử nghiên cứu vi khuẩn A xylỉnum giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình nghiên cứu Ả xylỉnum giới Hiện nay, vi khuẩn A xylinum ứng dụng quan tâm nhiều nhà khoa học giới Tập trung theo hai hướng bản: Hướng thứ nhất: Chủ yếu phân lập tuyển chọn, nghiên cứu đặc tính sinh học A xylinum từ xác định vị trí phân loại chúng sinh giới Tiêu biểu nghiên cứu Beijerinck, Frateur [20] Trên sở nghiên cứu đặc tính hình thái, ni cấy, sinh lý - sinh hóa tác giả xác định nguồn gốc, đặc điểm phân loại A xylinum Các nghiên cứu số nhà khoa học Nhật Bản Kumiko Nanda cs, p M Kutima; T.T Kadere cs [25] Các tác giả phân lập tuyển chọn nghiên cứu đặc tính sinh học A xylinum, số chủng vi khuẩn acetic cần nghiên cứu so sánh đặc điểm sinh lý, sinh hóa đặc điểm sinh học phân tò chủng đột biến chủng gốc để có tiêu cụ thể biến đổi KẾT LUÂN VÀ KIẾN NGHI • • Kết luận 1.1 Đã xác định thời gian đột biến thích hợp phút với khoảng cách Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội 15cm lựa chọn phương pháp đột biến phù hợp đột biến qua thạch đĩa petri với bước sóng 253,7nm 1.2 Qua đột biến tạo 10 chủng có chủng có khả tạo màng Trong chủng đó, chủng ĐB6 có khả tạo màng ổn định thời gian ngắn chủng gốc BHN2- 1.3 Hình dạng tế bào hình thái khuẩn lạc chủng BHN2 chủng đột biến ĐB6 có khác biệt khơng đáng kể Kiến nghị Do thời gian có hạn nên nghiên cứu ảnh hưởng tia uv tới khả sống sót chủng Gluconacetobacter BHN2 gây đột biến lần đầu Để có kết xác cần gây đột biến số lần - Nên nghiên cứu điều kiện ảnh hưởng môi trường tới khả tạo màng chủng đột biến - Nên xác định rõ chất việc đột biến phương pháp phân tử - Nên nghiên cứu so sánh đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng đột biến chủng gốc để có tiêu cụ thể biến đổi TÀI LIỆU THAM KHẢO A TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (1998) Vì sinh vật Nguyễn Ngọc Mai 34 K35C Khoa Sỉnh-KTNN học Nxb Giáo dục, tr.149-150 Nguyễn Thành Đạt (1999) Cơ sở vi sinh vật học Tập 1, Nxb Đại học Sư phạm Hà Nội, tr 52-55, 62-102, 185-309 Nguyễn Thành Đạt (2005) Cơ sở vi sinh vật học, tập 2, Nxb Đại học Sư phạm, 7-9, 37-61,169-171 Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo, Vương Trọng Hào (1990) Thực hành vi sinh vật Nxb Giáo dục, ữ 17-34, 63-74, 89-92 Vũ Thị Minh Đức (2001) Thực tập vỉ sinh vật Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội, tr 1-50 Nguyễn Thúy Hương (2006) Chọn lọc dùng Acetobacter xylỉnum thích hợp cho loại môi trường dùng sản xuất cellulose vi khuẩn với quy mô lớn Luận án tiến sỹ khoa học sinh học, trường Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Trương Thị Ngọc Hoa, Trương Nguyễn Quỳnh Hương (2005) Đa dạng hóa mơi trường sản xuất Natadecoco từ vi khuẩn Acetobacter xylinum số 2, Tạp khoa học kỹ thuật Nông Lâm nghiệp Phạm Thành Hổ (2006) Di truyền học, Nxb Giáo dục, ữ 238-258 Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006) Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng, Tạp chí dược học, số 361 Nguyễn Thị Mỹ Lan, Huỳnh Thị Phương Linh, Lê Thị Mỹ Phước, Nguyễn Quốc Hiển (2009) Bước đầu nghiên cứu hiệu ứng làm lành vết thương hỗn hợp Chitosan tan nước, Bacterial cellulose, Nano bạc Tạp Phát triển KH & CN, tập 12, số 09 10 Chu Văn Man (2003) ứng dụng tin học sinh học Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 11 Phan Cự Nhân, Nguyễn Minh Công, Đặng Hữu Lanh (2006) Di truyền học, tập 1, Nhà xuất Đại học Sư phạm, tr 99-137 12 Đinh Thị Kim Nhung (1996) Nghiên cứu số đặc điểm vi khuẩn Acetobacter ứng dụng lên men acetic theo phương pháp chìm Luận án PTS Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội khoa học Sinh học Đại học Sư phạm Hà Nội 13 Đinh Thị Kim Nhung, Trần Như Quỳnh, Nguyễn Thị Thuỳ Vân (2009) Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum tạo màng bacterial celulose ứng dụng điều trị bỏng Báo cáo khoa học 14 Đặng Hùng Thắng (1999) Thống kê ứng dụng Nxb Giáo dục, tr 214- 267 15 Nguyễn Thị Thùy Vân (2009) Nghiên cứu đặc tính sinh học khả tạo màng Bacterial cellulose vi khuẩn Acetobacter xylinum phân lập từ số nguồn nguyên liệu Việt Nam Luận văn Thạc sỹ khoa học Sinh học, trường Đại học Sư phạm Hà Nội B TÀI LIỆU TIẾNG ANH 16 Bergey H, John G Holt Bergey’s manual of dererminativa bacteriology Wolters Kluwer health, 1992, p.71-84 17 Brown R.M., K.Zaar (1999) Cellulose structure and biosynthesis Pure Appl Chem Vol, 71, pp 765-775 18 Canon, R.E., and Anderson, S.M (1991) Biogenesis of Bacterial cellulose Critical Reviews in Microbiology Vol, 17, pp 435-447 19 Frateur J (1950) Essaisur la systesmatique des Acetobacter La cellule Vol 53, pp 278-398 20 Forng E.r., Anderson S.M., Canon R.E (1989) Synthetic medium for Acetobacter xylinum that can be used for isolation of auxotrophic mutants and study cellulose Biosynthesis Applied and Enviromene microbiology, pp 13171319 21 Hong Joo Son, Moon Su Heo, Young Gyun Kim, Sang Joon Lee (2001) Optimization of fermentation conditions for the production of bacterial Khóa luận tốt nghiệp cellulose by a newly isolated Acetobacter sp A9 in shaking cultures Đại học Sư phạm Hà Nội Biotechnol Appl Bichem Vol 33, pp 1-5 22 Hong Joo Son, Hee Goo Kim, Keun Ki Kim, Han soo Kim, young Gyun Kim, Sang Joo Lee (2002) Inceased production of bacterial cellulose by Acetobacter sp V6 in synthetic media under shaking culture conditions Bioresorse technology Vol 86, pp 215-219 23 Jonas, R & Frarad, L.F (1998) Production and application of microbial cellulose Polymer Degradation and Stability Vol 59, pp 101 - 106 24 Kumiko Nanda, Kadere T.T, Kutima P.M, Njoroge M.S (2008) “Isolation and identification of the genera Acetobacter and gluconobacter in coconut toddy (mnazi)” African Journal of biotechnology Vol 7, No 16, pp 2963-2971 25 Trygve Brautaset, Rune Sandal, Espen Fjarvik, Svein Valla (1994) Nucleotide sequence and epression analysis of Acetobacter xylinum phosphoglucomutase gene Microbilogy Vol 140, pp 1183-1188 26 Tomonori N., Naoto I., Teruko K., Yukiko K., Takayasu T., Fumihiro Y., Fukumi S., Takahis H (1999) Enhancement of cellulose production by expression of sucrose synthase in Acetobacter xylinum Applied Biological sciences Vol 96, pp 14-18 27 Wan, WK & Millon E (2005) Poly — bacterial cellulose nanocomposite V S Pat Appl Publ US 2005037082 Al, 16 28 http://www.cesti.gov.vn/kh-cn-trong-n-c/m-t-s-ng-d-ng-c-a-cellulose-vi bacterial-cellulose-bc-trong-l-nh-v-c-th-c-ph-m.html khu-n- 29 http://www.dostbinhdinh.org.vn/MagazineNewsPage.asp7TinTS ID=568 &TS ID=51 Khóa luận tốt nghiệp Đại học Sư phạm Hà Nội ... chọn chủng đột biến từ chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC thời gian ngắn Nội dung đề tài 3.1 Xác định thời gian đột biến tác nhân đột biến tia uv 3.2 Gây đột biến tuyển chọn chủng đột biến. .. chống chịu khác tia tử ngoại 3.2 Tuyển chọn chủng sau đột biến từ chủng Gluconacetobacter BHN2 có khả tạo màng BC Bảng 3.2 Khả tạo màng BC chủng sau đột biến tia uv từ chủng Gluconacetobacter. .. dai chủng Khóa luận tốt nghiệp Dai hoc Su pham Hà Nôi Gluconacetobacter tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu khả tạo màng BC từ chủng Gluconacetobacter tác dụng tác nhân gây đột biến tia uv