Nhóm 3 ứng dụng real time pcr trong chẩn đoán vi khuẩn gây bệnh phong

Trang 1 ỨNG DỤNG REAL TIME PCR TRONG CHẨN ĐỐN VI KHUẨN GÂY BỆNH PHONGHướng dẫn khố học : TS.. Trương Quang Toản Sinh viên thực hiện : Ngơ Hồng Mai 21126405 Lê Thị Ngọc Loan 21136394 Nguy

ỨNG DỤNG REAL TIME PCR TRONG CHẨN ĐOÁN

VI KHUẨN GÂY BỆNH PHONG

Hướng dẫn khoá học : TS Huỳnh Văn Biết

ThS Trương Quang Toản

Sinh viên thực hiện : Ngô Hoàng Mai 21126405

Lê Thị Ngọc Loan 21136394 Nguyễn Minh Khôi 20126271

BÁO CÁO MÔN HỌC

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

GIỚI THIỆU CHUNG

VỀ BỆNH PHONG

Thời kỳ ủ bệnh của bệnh phong rất lâu, trung bình 3-5

năm hoặc có trường hợp có thể 5 năm,10 năm.

Tỉ lệ mắc bệnh ở Việt Nam

2000

Tỉ lệ mắc bệnh phong tính chung cả nước < 10/10.000

2010

42 tỉnh thành đã hoàn thành mục tiêu loại trừ hoàn toàn bệnh phong

Vi khuẩn Mycobacterium leprae

01

1.1 Phân loại khoa học

- Giới (regnum) : Bacteria

- Họ (familia) : Mycobacteriaceae

- Chi (genus) : Mycobacterium

- Loài (species) : Mycobacterium leprae Hình 1.1 Mycobacterium leprae

- Mycobacterium leprae một trực khuẩn hiếu khí, kháng axit

- Dưới kính hiển vi quang học xếp thành cụm, khối tròn và dài từ

1 - 8 µm và đường kính 0,2 - 0,5 µm

Ứng dụng qPCR để phát hiện bệnh phong

02

Một xét nghiệm qPCR đã được phát triển với các primer và probe phát huỳnh quang để phát hiện các vùng từ gen RLEP và 16S rRNA

của M.leprae, và gen 18S rRNA của người.

2.1 Phương pháp Real time PCR

Bảng 2.1 Trình tự, nồng độ và fluorophores của oligonucleotide có trong xét nghiệm

multiplex qPCR.

Bước Nhiệt độ ( o C) Thời gian Số chu kỳ Mục đích

Tiền biến tính 95 10 phút 1 Làm biến tính toàn bộ DNA trong mẫu. Biến tính 95 15 giây 45 Tách các sợi DNA mạch kép thành các sợi DNA mạch đơn.

Các primer bắt cặp bổ sung với các vùng đầu cuối của DNA mục tiêu.

enzyme DNA polymerase chịu kéo dài các sợi DNA mới từ các mồi.

Hậu kéo dài 72 10 phút 1 Kéo dài toàn bộ DNA chưa được kéo dài hết.

- Không có phản ứng chéo tác dụng với các vi khuẩn gây bệnh da khác

hoặc các loài mycobacteria khác

2.2 Kết quả

Độ đặc hiệu phân tích

Hình 2.1 Độ đặc hiệu phân tích đối với các phản ứng

→ Phương pháp có độ nhạy 91%

và độ đặc hiệu 100%

→ Giá trị tiên lượng dương tính và

âm tính (PPV và NPV) lần lượt

là 100% và 90%

Hiệu suất chẩn đoán

Phương pháp duy trì được

hiệu suất trong ít nhất năm

tháng

Sự ổn định

Hình 2.5 Độ ổn định của các phản ứng trong 5 tháng sử dụng DNA

tổng hợp làm mẫu.

2022 www.slidesgo.es Case report

2.3 Thảo luận

Nghiên cứu này đã giải quyết những hạn chế trong chẩn đoán PCR

bệnh phong

Các dấu hiệu được sử dụng phổ biến nhất là RLEP và 16S rRNA, với giá trị độ nhạy PCR lên tới 80% Tuy nhiên, độ nhạy mục tiêu khác nhau tùy theo loại mẫu, bối cảnh lâm sàng và nghiên cứu

Sử dụng nhiều điểm đánh dấu ở định dạng ghép kênh sẽ mang lại kết quả PCR dương tính cao hơn

2022

RT-PCR là một kỹ thuật đáng tin cậy để chẩn đoán

lâm sàng và thường được sử dụng cho các bệnh nhiệt

đới, đặc biệt là bệnh phong

2.4 Kết luận

THANK YOU FOR

LISTENING!!!