NGUYỄN ĐỨC HOÀNG BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - NGUYỄN ĐỨC HỒNG CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG RHODAMINB BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ ỨNG DỤNG PHÂN TÍCH HỐ CHẤT NÀY TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HẢI DƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM KHỐ 2011-2013 Hà Nội – Năm 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC HOÀNG THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG RHODAMINB BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ ỨNG DỤNG PHÂN TÍCH HỐ CHẤT NÀY TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ HẢI DƯƠNG Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : TS VŨ HỒNG SƠN TS TRẦN QUANG CẢNH Hà Nội – Năm 2012 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu hồn thành luận văn tơi nhận giúp đỡ tận tình thầy cơ, anh chị, bạn bè, đồng nghiệp, người thân gia đình quan có liên quan Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn hai thầy hướng dẫn: Tiến sĩ Vũ Hồng Sơn, Tiến sĩ Trần Quang Cảnh tận tình hướng dẫn, động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn nghiên cứu Tôi vô biết ơn Tập thể thầy cô giáo cán nhân viên Viện Công nghệ sinh học & Thực phẩm- trường Đại học Bách Khoa Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu, Labo Xét nghiệm An toàn vệ sinh Thực phẩm, Bộ mơn Xét nghiệm An tồn vệ sinh Thực phẩm- Trường Đại học Kỹ thuật Y tế Hải Dương, cho hội học chuyên sâu xét nghiệm Hố-Độc, giúp đỡ tơi q trình học tập cơng tác để tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Tôi xin bày tỏ biết ơn đến người thân yêu gia đình động viên, giúp đỡ tinh thần vật chất để tơi hồn thành tốt luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn đến bạn bè, đồng nghiệp gần xa, đặc biệt anh chị em khóa, người động viên, khích lệ giúp đỡ tơi mặt để tơi hồn thành tốt nhiệm vụ Lời cảm ơn sâu sắc sau cùng, xin gửi tới Vợ Con gái Những người ln dành cho tơi tình cảm u thương chân thành nhất, người sát cánh, gần gũi, động viên chia sẻ, giúp tơi có đủ nghị lực vượt qua khó khăn sống để tơi làm việc, học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Nguyễn Đức Hồng I LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan, luận văn kết nghiên cứu làm việc tôi, kết quả, số liệu luận văn trung thực, thực tế nơi nghiên cứu Hải Dương, tháng 09 năm 2012 Tác giả luận văn Nguyễn Đức Hoàng Học viên cao học khố học 2011-2013 Chun mơn xét nghiệm Hố-Độc II MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN……………………………………………………………………… I LỜI CAM ĐOAN………………………………………………………………… II MỤC LỤC………………………………………………………………… III DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT VII DANH MỤC CÁC BẢNG………………………………………………………… VIII DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ, ĐỒ THỊ X DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ, HÌNH VẼ XI ĐẶT VẤN ĐỀ…………………………………………………………………… Chương - TỔNG QUAN………………………………………………………… 1.1 Đặc điểm RhodaminB………………………………………………………… 1.2 Độc tính RhodaminB…………………………………………………… 1.3 Giới hạn cho phép RhodaminB thực phẩm, dược phẩm 1.4 Một số kỹ thuật phân tích RhodaminB……………………………………… 1.5.Tổng quan sắc ký lỏng……………………………………………………… 1.5.1.Nguyên tắc chung phương pháp HPLC 1.5.2.Cấu tạo hệ thống HPLC 1.5.3.Quá trình sắc ký 1.5.4.Các yếu tố định trình tách sắc ký 10 1.5.5 Tốc độ di chuyển chất 10 1.5.6.Sự dỗng peaks hình dáng peaks 11 1.5.7 Hiệu lực cột đĩa lý thuyết 12 1.6.Ứng dụng sắc ký (HPLC) phân tích 13 1.6.1 Định tính thử độ tinh khiết 13 1.6.2 Định lượng 14 III Chương - VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ………… 17 2.1.Thời gian địa điểm thực 17 2.2.Đối tượng nghiên cứu………………………………………………………… 17 2.3.Thiết bị dụng cụ 17 2.4.Hoá chất mẫu 18 2.5 Phương pháp nghiên cứu……………………………………………… 21 2.5.1.Phương pháp lấy mẫu xử lý mẫu sơ 21 2.5.2.Phương pháp xác định RhodaminB 23 2.5.3.Cải tiến phương pháp xác định RhodaminB………………………… 23 2.6.Phương pháp thẩm định 25 2.6.1 Lựa chọn thông số tối ưu phương pháp với thiết bị ……………… 25 2.6.2.Khoảng tuyến tính đường chuẩn……………………………………… 27 2.6.3.Xác định độ lặp lại- Độ chụm 29 2.6.4.Xác định độ 30 2.6.5.Xác định giới hạn phát (LOD),giới hạn định lượng (LOQ) 31 2.7.Phương pháp tính tốn xử lý số liệu 33 Chương - KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN………………………………………… 34 3.1 Kết tối ưu hố điều kiện phân tích HPLC……………………… 34 3.1.1 Chọn loại pha tĩnh cột 34 3.1.2 Kết kiểm tra chọn bước sóng tối ưu 34 3.1.3 Kết chọn hệ dung môi tỉ lệ pha động 35 3.1.4.Kết nghiên cứu tính phù hợp hệ thống 39 3.2.Quy trình phân tích …………………………………………… 40 3.3.Kết xử lý mẫu để tìm thời gian nhiệt độ tối ưu 41 3.3.1.Kết thực gia nhiệt, rung siêu âm 60 oC với thời gian 15, 30, 45, IV 42 60 phút 3.3.2 Kết thực gia nhiệt, rung siêu âm 70 oC thời gian 15, 30, 45, 60 phút 44 3.3.3.Kết thực gia nhiệt rung siêu âm 80 oC chế độ thời gian 15, 30, 45 phút 46 3.4.Kết tìm lượng dung môi tối ưu cần dùng để xử lý mẫu…………………… 49 3.5 Quy trình phân tích nghiên cứu………………………………………… 52 3.6.Thẩm định phương pháp cải tiến 54 3.6.1 Xây dựng đường chuẩn 54 3.6.2.Xác định độ lặp lại–độ chụm với loại mẫu hạt dưa, ớt bột, thịt bò khô 55 3.6.3.Xác định độ với loại mẫu hạt dưa, ớt bột, thịt bị khơ 58 3.6.4 Xác định LOD, LOQ 59 3.7 Ứng dụng phân tích RhodaminB số loại Thực phẩm địa bàn thành phố Hải Dương 67 3.7.1.Kết phân tích mẫu hat dưa 67 3.7.2.Kết phân tích mẫu ớt bột 68 3.7.3.Kết phân tích số sản phẩm từ ớt bột (muối ớt) 69 3.7.4.Kết phân tích mẫu thịt bị khơ 69 BÀN LUẬN……………………………………………………………………… 72 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 75 Kết luận 75 Kiến nghị 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO 78 PHỤ LỤC A Phụ lục 1: Lập đường chuẩn với trường hợp A Phụ lục 2: Kết xử lý số liệu đánh giá phù hợp hệ thống C V Phụ lục 3: Bảng kết chi tiết tính độ thu hồi xử lý mẫu chế độ 60oC/15, 30, 45, 60 phút D Phụ lục 4: Bảng tính độ thu hồi xửa lý mẫu chế độ 70oC /15, 30, 45, 60 phút E Phụ lục 5: Bảng tính độ thu hồi xử lý mấu chế độ 80oC/15, 30, 45 phút F Phụ lục 6: Bảng tính kết thực sử dụng 100 mL 50 mL để định mức cuối sau xử lý mẫu G Phụ lục 7: Bảng tính độ chụm tích phân tích mẫu hạt dưa H Phụ lục 8: Bảng tính độ chụm tích phân tích mẫu ớt bột I Phụ lục 9: Bảng tính độ chụm tích phân tích mẫu thịt bị khơ J Phụ lục 10: Bảng tính kết độ thu hồi thẩm định mẫu hạt dưa K Phụ lục 11: Bảng tính kết độ thu hồi thẩm định mẫu ớt bột K Phụ lục 12: Bảng tính kết độ thu hồi thẩm định mẫu thịt bị khơ L Phụ lục 13: Kết đánh giá 15 mẫu hạt dưa M Phụ lục 14: Kết đánh giá tiếp 15 mẫu hạt dưa khu vực TP Hải Dương O Phụ lục 16: Kết đánh giá tiếp 15 mẫu ớt bột khu vực TP Hải Dương R Phụ lục 17: Kết đánh giá 15 mẫu thịt bị khơ khu vực TP Hải Dương S Phụ lục 18: Kết đánh giá tiếp mẫu thịt bò khô khu vực TP Hải Dương U Phụ lục 19: Một số hình ảnh nghiên cứu V Phụ lục 20: Kết xác định hàm lượng RhodaminB hạt dưa hạt điều Labo XNATVSTP VI AA DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN: Acetonitril AOAC: Assosiation of Official Analytical Chemists (Hiệp hội nhà hóa phân tích thức) CRM: Certified reference material (Mẫu chuẩn chứng nhận) DAD: Diode Array Detector (Detector mảng diod) EI: Electron Impact (Va đập điện tử) GC: Gas chromatography (Sắc ký khí) HPLC: High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) R (%): Độ thu hồi (đơn vị %) KPH: Không phát (nhỏ ngưỡng phát phương pháp) MeOH: Methanol MS: Mass spectrometry (Khối phổ) LOD: Limit of Detection (Giới hạn phát hiện) LOQ: Limit of Quantification (Giới hạn định lượng) S/N: Signal to noise ratio (Tỷ lệ tín hiệu nhiễu) SOP: Standard Operation Procedure (Quy trình thao tác chuẩn) ppm: Nồng độ ppm (mg/kg) QC: Quality control (Kiểm tra chất lượng) RM: Reference material (Vật liệu chuẩn / đối chiếu) RSD: Hệ số biến sai USP: United States Phamacopeia (Dược điển Mỹ) USFDA: United States Food and Drug Administration (Cục dược phẩm thực phẩm Mỹ) UV-VIS: Ultraviolet – Visible (Tử ngoại khả kiến) TCVN: Tiêu chuẩn Việt Nam VII DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Độ lặp lại tối đa chấp nhận nồng độ khác (theo AOAC)… 30 Bảng 2.2 Độ thu hồi chấp nhận nồng độ khác theo AOAC………… 31 Bảng 2.3 Quy định độ thu hồi hội đồng châu Âu………………………… 31 Bảng 3.1 Tính chất số loại dung môi dùng làm pha động……… 35 Bảng 3.2 Kết tìm thành phần, tỉ lệ dung mơi pha động 36 Bảng 3.3 Điều kiện chạy sắc ký tối ưu 39 Bảng 3.4 Kết tính toán phù hợp hệ thống 40 Bảng 3.5 Độ thu hồi xử lý mẫu chế độ 60oC/15, 30, 45, 60 phút 43 Bảng 3.6 Độ thu hồi xửa lý mẫu chế độ 70oC /15, 30, 45, 60 phút 45 Bảng 3.7 Độ thu hồi xử lý mấu chế độ 80oC/15, 30, 45 phút 47 Bảng 3.8 Độ thu hồi xử lý mẫu nhiệt độ 60, 70, 80 oC/15, 30, 45, 60 phút 48 Bảng 3.9 Kết sử dụng bình định mức 100 mL 50 mL để định mức sau xử lý mẫu 50 Bảng 3.10 Kết độ chụm thẩm định hạt dưa, ớt bột thịt bị khơ 56 Bảng 3.11 Xác định độ với loại mẫu hạt dưa, ớt bột, thịt bị khơ 58 Bảng 3.12 Xác định LOD hạt dưa 60 Bảng 3.13 Xác định LOD hạt dưa (thực thêm mẫu) 61 Bảng 3.14 Xác định LOD ớt bột 62 Bảng 3.15 Xác định LOD ớt bột (thực thêm mẫu) 63 Bảng 3.16 Xác định LOD thịt bị khơ 64 Bảng 3.17 Xác định LOD thịt bị khơ (thực thêm mẫu) 65 Bảng 3.18 Tổng hợp kết thẩm định 66 Bảng 3.19 Kết phân tích mẫu hat dưa 67 Bảng 3.20.Kết phân tích mẫu ớt bột 68 Bảng 3.21 Kết phân tích số sản phẩm từ ớt bột (muối ớt) VIII 69 Kết thực mẫu thực sau: Kiểm tra lại độ thu hồi Ghi chú: STT Mẫu m-Khối lượng mẫu(g) HD_CH1 0,4986 HD_CH2 0,6976 HD_CL1 0,6989 HD_CL2 0,6723 HD_CL3 0,552 HD_CL4 0,4198 HD_CL5 0,7984 HD_CL6 0,8863 HD_CL7 0,5098 10 HD_CL8 1,0878 11 HD_XL1 0,9642 12 HD_XL2 0,8973 13 HD_XL3 0,9743 14 HD_HD1 0,6878 15 HD_HD2 0,7989 Chuẩn thêm (mg/100g) Mẫu m-Khối lượng mẫu(g) 16,16292 HD_HD2+C 0,6187 S-Diện tích peaks Cc-NĐ theo đường chuẩn(ppm) X-Nồng độ mẫu (mg/100g) Xtb-Nồng độ mẫuTB (mg/100g) Ghi 63324 0,0076 0,0757 65683 0,0081 0,0815 0,0786 có 6879873 1,6736 11,9951 6286787 1,5286 10,9561 11,4756 có 5278216 1,2821 9,1723 5297676 1,2869 9,2063 5468231 1,3285 9,8806 5308983 1,2896 9,5911 4159076 1,0086 9,1356 4107673 0,9960 9,0218 4803433 1,1661 13,8883 4779732 1,1603 13,8193 4318450 1,0475 6,5602 4418982 1,0721 6,7140 4792032 1,1633 6,5625 4768793 1,1576 6,5305 5183527 1,2590 12,3476 5171083 1,2559 12,3177 9438242 2,2988 10,5664 9481863 2,3095 10,6154 4963991 1,2053 6,2503 4948612 1,2015 6,2308 3879421 0,9402 5,2392 3860412 0,9356 5,2133 83840 0,0126 0,0645 80732 0,0118 0,0606 3957342 0,9593 6,9735 3964232 0,9610 6,9857 2254068 0,5430 3,3983 2247186 0,5413 3,3878 S-Diện tích peaks (mAU) Cc-NĐ theo đường chuẩn(ppm) X-Nồng độ mẫu (mg/100g) R(%) 2044068 0,4917 3,9733 93,8 2036787 0,4899 3,9589 91,5 có 9,1893 có 9,7358 có 9,0787 có 13,8538 có 6,6371 có 6,5465 có 12,3326 có 10,5909 có 6,2405 có 5,2263 0,0625 có 6,9796 có 3,3930 KPH – khơng phát RhodaminB nồng độ tính < LOD có: mẫu có RhodaminB (mẫu dương tính) Phụ lục N KPH đạt yêu cầu theo AOAC Phụ lục 14: Kết đánh giá tiếp 15 mẫu hạt dưa khu vực TP Hải Dương: Kết lập đường chuẩn: ST T Nồng độ chuẩn (ppm) Diện tích 0,05 0,15 0,50 1,00 5,00 10,00 48091 495922 1877617 4140545 19894873 41621930 50000000 y = 4E+06x - 212045 R² = 0.9996 40000000 30000000 20000000 10000000 -100000000.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 Biểu đồ biểu thị mối tương quan diện tích nồng độ RhodaminB với hệ số a = 4152770, b = -212045, R = 0,9998 Kết phân tích mẫu thực sau: STT 10 11 12 13 14 15 chuẩn thêm (mg/100g) 3,8745 Ghi chú: mau HD_TH_1 HD_TH_2 HD_TH_3 HD_Lam_1 HD_ Lam_2 HD_ Lam_3 HD_ THD_1 HD_ THD_2 HD_TL_1 HD_TL_2 HD_TL_3 HD_DL _1 HD_DL _2 HD_le_1 HD_le_2 HD_le_2 +chuẩn khối lượng mẫu(g) Diện tích peaks Nồng độ tính theo đường chuẩn(ppm) Nồng độ mg/100g Kết 0,5763 0,6387 0,4877 0,5732 0,6176 0,5732 0,4976 0,3866 0,5653 0,5728 0,4642 0,5783 0,5130 0,4988 0,5108 991172 1988086 2918106 109556 163964 1042164 445819 2512848 0 964342 545278 481838 380276 0,2897 0,5298 0,7538 0,0774 0,0905 0,3020 0,1584 0,6562 0 0,2833 0,1824 0,1671 0,1426 2,5138 4,1475 7,7276 0,6755 0,7330 2,6345 1,5918 8,4863 0 2,4492 1,7774 1,6749 1,3962 có có có có có có có có KPH KPH KPH có có có có khối lượng mẫu(g) Diện tích peaks Nồng độ tính theo đường chuẩn(ppm) Nồng độ mg/100g H(%) 0,5162 1987503 0,5297 5,1304 96,4 KPH – khơng phát RhodaminB nồng độ tính < LOD có: mẫu có RhodaminB (dương tính) Độ thu hồi đạt yêu cầu theo AOAC Phụ lục O Phụ lục 15: Kết đánh giá 15 mẫu ớt bột khu vực TP Hải Dương: Xây dựng đường chuẩn: STT Nồng độ chuẩn (ppm) Diện tích (mAU) 70000000 0,05 151765 0,10 382436 50000000 0,50 2264665 1,00 4604136 5,00 23937692 12,75 60606597 y = 5E+06x - 83569 R² = 60000000 40000000 30000000 20000000 10000000 0.00 Các hệ số: a= 4765397, b= -83569 , R= 5.00 10.00 15.00 Biểu đồ biểu thị mối tương quan nồng độ diện tích RhodaminB khoảng nồng độ từ 0,05 đến 10 ppm đánh giá RhodaminB ớt bột Phụ lục P Kết phân tích mẫu thực sau: STT Mẫu m-Khối lượng mẫu(g) OB_XL1 2,5197 OB_XL2 2,6976 OB_VAN1 2,6989 OB_VAN2 2,6723 OB_VAN3 2,572 OB_VAN4 2,7198 OB_VAN5 2,7984 OB_CL1 2,8863 OB_CL2 2,5098 10 OB_CL3 2,0878 11 OB_NHA1 3,9642 12 OB_NHA2 3,8573 13 OB_NHA3 14 Kiểm tra lại độ thu hồi OB_HD1 3,4743 2,6878 15 OB_HD2 2,7989 Chuẩn thêm (mg/100g) Mẫu m-Khối lượng mẫu(g) 4,5493836 OB_HD2+C 2,1981 Ghi chú: S-Diện tích peaks Cc-NĐ theo đường chuẩn(ppm) X-Nồng độ mẫu (mg/100g) 14038965 2,9636 5,8808 13735455 2,8999 5,7544 14860454 3,1359 5,8125 15070565 3,1800 5,8942 7929884 1,6816 3,1153 7763052 16878080 1,6466 3,5593 3,0505 16844356 3,5523 6,6464 41712 0,0263 0,0511 35017 0,0249 0,0484 40512 0,0260 0,0479 43252 0,0266 0,0489 40779 42871 0,0261 0,0265 0,0466 0,0474 5276980 1,1249 1,9487 5276176 1,1247 1,9484 5870907 1,2495 2,4893 5857589 1,2467 2,4837 8765785 1,8570 4,4473 8736768 1,8509 4,4327 6,6597 Xtb-Nồng độ mẫuTB (mg/100g) Ghi 5,8176 có có 5,8533 có 3,0829 có 6,6531 0,0497 KPH 0,0484 KPH 0,0470 KPH có 1,9485 có 2,4865 có 4,4400 34454 0,0248 0,0312 54545 0,0290 0,0366 87766 0,0360 0,0466 86423 0,0357 0,0462 79642 0,0342 0,0493 76984 0,0337 0,0485 9108970 1,9290 3,5885 9155924 1,9389 3,6068 7687839 1,6308 2,9133 7801653 S-Diện tích peaks (mAU) 1,6547 2,9560 Cc-NĐ theo đường chuẩn(ppm) X-Nồng độ mẫu (mg/100g) H(%) 10482765 2,2173 5,0437 95,9 10506713 2,2223 5,0551 96,5 0,0339 KPH 0,0464 KPH 0,0489 KPH có 3,5976 có 2,9346 KPH – khơng phát RhodaminB nồng độ tính < LOD có: mẫu có RhodaminB (mẫu dương tính) Phụ lục Q đạt yêu cầu theo AOAC Phụ lục 16: Kết đánh giá tiếp 15 mẫu ớt bột khu vực TP Hải Dương: Kết qủa lập đường chuẩn: STT NĐ chuẩn ppm 0,05 0,12 0,49 1,02 5,02 10,04 Dien tích peaks 200284 440832 1931561 4223592 21059551 42336156 60000000 y = 4E+06x - 80182 R² = 40000000 20000000 0 10 15 Biểu đồ biểu thị mối tương quan diện tích nồng độ RhodaminB, với hệ số a = 4221808, b = -80182, R = Kết phân tích mẫu thực sau: STT 10 11 12 13 14 15 10 chuẩn thêm (mg/100g) 0,5466 Ghi chú: mau khối lượng mẫu(g) Diện tích peaks Nồng độ tính theo đường chuẩn(ppm) Nồng độ mg/100g Kết OB_KH_1 3,0732 OB_KH_2 3,3865 OB_KH_3 2,5873 OB_OXBN_1 2,4722 41846 0,0289 0,0585 OB_OXBN_2 2,5895 39763 0,0284 0,0549 OB_TL_1 2,8908 8643 0,0210 0,0364 OB_TL_2 2,9764 8765 0,0211 0,0354 OB_HH_1 3,1434 4788 0,0201 0,0320 OB_HH_2 2,8562 12123 0,0219 0,0383 OB_Xay_BN_1 2,9552 44133 0,0294 0,0498 OB_Xay_BN_2 3,2984 77697 0,0374 0,0567 OB_TT_1 2,6889 9129 0,0212 0,0393 OB_TT_2 3,5875 5936 0,0204 0,0284 OB_TH_1 3,7879 7783 0,0208 0,0275 OB_TH_2 2,8010 13054 0,0221 0,0394 Kết phân tích sơ thêm 10 mẫu sản phẩm từ ớt bột KPH KPH KPH Có Có KPH KPH KPH KPH KPH Có KPH KPH KPH KPH muối ớt hàng hải_1 muối ớt hàng hải_2 muối ớt hàng hải_3 muối trung thành_1 muối trung thành_2 muối trung thành_3 muối ớt hoa_1 muối ớt hoa_2 muối ớt hoa_3 muối ớt_hot 0,0290 0,0208 0,0201 0,0231 - KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH OB_TH_2+chuẩn 4,2350 4,7534 4,7562 4,8634 4,2863 3,6562 4,8675 4,9854 4,5681 4,2578 23468 3463 2346 3253 0 0 0,0246 0,0198 0,0195 0,0198 - khối lượng mẫu(g) Diện tích peaks Nồng độ tính theo đường chuẩn(ppm) Nồng độ mg/100g R(%) 3,6589 1705943 0,4231 0,5781 98,6 KPH – không phát RhodaminB nồng độ tính < LOD có: mẫu có RhodaminB (dương tính) Độ thu hồi đạt u cầu theo AOAC Phụ lục R Phụ lục 17: Kết đánh giá 15 mẫu thịt bị khơ khu vực TP Hải Dương: Xây dựng đường chuẩn: STT Nồng độ chuẩn (ppm) Diện tích 0,05 0,15 0,50 1,00 5,00 10,50 325678 658863 1986357 4107346 18689724 39618345 45000000 40000000 35000000 30000000 25000000 20000000 15000000 10000000 5000000 y = 4E+06x + 142875 R² = 0.9999 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 Biểu đồ biểu thị mối tương quan nồng độ diện tích RhodaminB khoảng nồng độ từ 0,05 đến 10 ppm đánh giá mẫu thịt bị khơ Với hệ số: a= 3751690, b= 142875, R= Phụ lục S Kết phân tích mẫu thực sau: STT Mẫu m-Khối lượng mẫu(g) TB_01 2,0232 TB_02 1,5974 10 11 12 13 Kiểm tra lại độ thu hồi Ghi chú: TB_03 TB_04 TB_05 TB_06 TB_07 TB_08 TB_09 TB_10 TB_11 TB_12 TB_13 S-Diện tích peaks Cc-NĐ theo đường chuẩn(ppm) X-Nồng độ mẫu (mg/100g) 514545 0,0991 0,2448 565546 0,1127 0,2784 433886 0,0776 0,2428 428656 0,0762 0,2384 168454 0,0068 0,0114 166934 0,0064 0,0108 159876 0,0045 0,0104 151325 0,0023 0,0052 242974 0,0267 0,0472 245656 0,0274 0,0485 245634 0,0274 0,0538 240431 0,0260 0,0511 304546 0,0431 0,0789 300454 0,0420 0,0769 146432 0,0009 0,0019 142546 -0,0001 -0,0002 150143 0,0019 0,0037 151201 0,0022 0,0043 150321 0,0020 0,0039 149615 0,0018 0,0035 251056 0,0288 0,0518 250345 0,0286 0,0515 354312 0,0564 0,0757 355342 0,0566 0,0760 147656 0,0013 0,0022 149347 0,0017 0,0029 143678 0,0002 0,0004 150285 0,0020 0,0039 468232 0,0867 0,1690 470793 0,0874 0,1703 S-Diện tích peaks (mAU) Cc-NĐ theo đường chuẩn(ppm) 5132872 5297234 Xtb-Nồng độ mẫuTB (mg/100g) Ghi 0,2616 có 0,2406 có 0,0111 KPH 0,0078 KPH 0,0479 KPH 0,0524 KPH 0,0779 KPH 0,0009 KPH 0,0040 KPH 0,0037 KPH 0,0516 KPH 0,0759 KPH 0,0025 KPH 0,0022 KPH 0,1697 có X-Nồng độ mẫu (mg/100g) R(%) 1,3301 2,5605 92,0 đạt yêu cầu theo AOAC 1,3739 2,6448 95,3 2,9787 2,1862 2,8234 2,5453 2,7323 2,4656 2,5887 2,5676 2,7832 3,7234 2,9545 14 TB_14 2,5293 15 TB_15 2,5656 Chuẩn thêm (mg/100g) Mẫu m-Khối lượng mẫu(g) 3,850152 TB_15+C 2,5973 KPH – khơng phát RhodaminB nồng độ tính < LOD có: mẫu có RhodaminB (mẫu dương tính) Phụ lục T Phụ lục 18: Kết đánh giá tiếp mẫu thịt bị khơ khu vực TP Hải Dương: Kết qủa lập đường chuẩn: STT NĐ chuẩn ppm 0,05 0,10 0,50 1,00 5,00 10,00 Diện tích peaks 184296 438938 1929875 4201737 21198653 41876307 50000000 y = 4E+06x - 15023 R² = 0.9999 40000000 30000000 20000000 10000000 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 Biểu đồ biểu thị mối tương quan diện tích nồng độ RhodaminB đánh giá mẫu thịt bị khơ, với hệ số a = 4199396, b = -15023, R = Kết phân tích mẫu tổng hợp sau: STT mau khối lượng mẫu(g) 10 11 12 13 14 15 TB_VH_1 TB_VH_2 TB_VH_3 TB_VN_1 TB_VN_2 TB_VN_3 TB_CL_1 TB_CL_2 TB_CL_3 TB_TN_1 TB_TN_2 TB_Inti_1 TB_OT_1 TB_OT_2 TB_OT_3 3,2764 3,0754 2,5867 3,5987 2,6984 3,7985 3,8743 3,0165 3,0675 2,9764 3,0752 3,4976 3,0674 3,9865 4,0532 chuẩn thêm (mg/100g) 0,4267 Ghi chú: TB_OT_3 +chuẩn khối lượng mẫu(g) 4,6873 Diện tích peaks Nồng độ tính theo đường chuẩn(ppm) Nồng độ mg/100g Kết 43581 84535 KPH KPH KPH 35650 KPH KPH KPH KPH KPH KPH 222449 45676 84545 0,0140 0,0237 0,0121 0,0565 0,0145 0,0237 0 0 0,0159 0 0 0 0,0922 0,0181 0,0292 KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH có KPH KPH Diện tích peaks Nồng độ tính theo đường chuẩn(ppm) Nồng độ mg/100g R(%) 1735949 0,4170 0,4448 97,4 KPH – không phát RhodaminB nồng độ tính < LOD có: mẫu có RhodaminB (dương tính) Độ thu hồi đạt u cầu theo AOAC Phụ lục U Phụ lục 19: Một số hình ảnh nghiên cứu: Phụ lục V Một số mẫu mẫu phân tích Các mẫu xử lý mẫu bể rung siêu âm có gia nhiệt Các dung dịch có chứa RhodaminB sau chiết khỏi mẫu ớt bột để bơm vào HPLC Phụ lục W Sắc đồ mẫu ớt bột có RhodaminB cao chạy HPLC thời gian lưu khoảng 8,2 phút Sắc đồ mẫu thịt bị khơ có RhodaminB (mẫu dương tính) Sắc đồ mẫu thịt bị khơ khơng có RhodaminB (mẫu âm tính) Phụ lục X Sắc đồ mẫu ớt bột có RhodaminB chạy HPLC , TGL 8,2 phút Sắc đồ mẫu thịt bị khơ có RhodaminB (mẫu dương tính) Sắc đồ mẫu thịt bị khơ khơng có RhodaminB (mẫu âm tính) Phụ lục Y Phổ 3D RhodaminB bước sóng 556nm Giảng Viên, Sinh Viên Nhật Bản tham quan kiến tập làm kỹ thuật P Sắc ký Phụ lục Z Phụ lục 20: Kết xác định hàm lượng RhodaminB hạt dưa hạt điều Labo XNATVSTP KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG RHODAMINB TRONG HẠT DƯA VÀ HẠT ĐIỀU TẠI LABO XNATVSTP Mẫu thực phẩm: Mẫu hạt dưa Mã số 0105837 hạt điều Mã số 0105838 Phương pháp phân tích: Phương pháp sắc kí lỏng hiệu lỏng cao (HPLC) Ngày lấy mẫu: Người thực hiện: Nguyễn Đức Hoàng, Hà Quốc Dương Ngày thực hiện: 01/05/2010 Phương pháp: HPP/05 Tài liệu hướng dẫn: H.HD 5.4/15 6.Kết thẩm định: Xây dựng đường chuẩn: Xây dựng đường chuẩn với nồng độ 0.05, 0.0994, 0.4996, 0,9991, 5.0976, 12.744 ppm kết thu sau: STT chuẩn ppm 0,0500 0,0994 0,4996 0,9991 5,0976 12,744 70000000 Diện tích (mAU) 207337 365111 2164665 4604136 24072151 60106577 y = 5E+06x - 99008 60000000 R2 = 50000000 40000000 30000000 20000000 10000000 0 10 12 14 Nhận xét: Trong khoảng nồng độ 0.05 – 12.744 ppm, diện tích peaks phụ thuộc tuyến tính vào nồng độ chuẩn RhodaminB với hệ số tương quan R = 1, độ số a =4726293, hệ số chặn b = -99008 Xác định độ chụm độ đúng: Thực phân tích mẫu hạt điều hạt dưa mẫu lần để lấy giá trị trung bình kết thu sau: Diện NĐ NĐ NĐ KL mẫu tích ppm (mg/100g) TB(mg/100g) Thêm Thêm chuẩn chuẩn (ppm) (mg/100g) 2,0 2,0 7,8573 7,7637 2,5336 2,7689 2,4346 2,8567 2,3973 2,4457 5656 5834 3574 4566 4325 3035 0,02215 0,02218 0,0217 0,02191 0,02186 0,02159 0,0874 0,0801 0,0892 0,0767 0,0912 0,0883 0,0855 KL mẫu Diện tích NĐ ppm NĐ (mg/100g) độ thu hồi(%) 7,8303 7,1087 98,6 90,5 2,5454 2,5761 9321085 1,99313 8556161 1,83128 Phụ lục AA 2,0 2,0 2,0 9,1479 8,4147 7,2325 2,1863 2,3768 2,7653 9420808 2,01422 8508549 1,82121 9205597 1,96869 9,2129 7,6624 7,1193 99,8 90,0 97,3 Nhận xét độ chụm: Số mgRhodaminB/100 gam mẫu trung bình: 0,0855 Độ lệch chuẩn (S) : 0,0057 Hệ số biến sai (CV/RSD) % : 6,688 Đối chiếu theo AOAC ta thấy độ chụm hay RSD phương pháp đạt yêu cầu theo AOAC Nhận xét độ thu hồi: Theo bảng trên, độ thu H(%) đạt từ 90 đến 99,8% Đối chiếu với Độ thu hồi cho phép AOAC ta thấy H đạt yêu cầu Mẫu hạt dưa: Mẫu Mẫu KL mẫu (gam) 0,6171 0,5873 0,5853 0,6355 0,6274 0,6234 Mẫu +chuẩn (2,4803 mg/100g) 0,5738 Mẫu + chuẩn (2,3666 mg/100g) 0,5985 Diện tích NĐ NĐ (mAU) 2231840 2008795 2254068 2231840 2278216 2293946 2689770 2674642 2737704 2826564 2815798 2785241 (ppm) 0,4932 0,4460 0,4979 0,4932 0,5030 0,5063 0,5901 0,5869 0,6002 0,6190 0,6167 0,6103 (mg/100g) 7,9917 7,5936 8,5062 7,7603 8,0169 8,1217 10,2833 10,2275 10,4601 10,3425 10,3045 10,1964 Nồng độ TB (mg/100g) H (%) 7,9984 92,1 89,9 99,2 99,0 97,4 92,9 Nhận xét độ chụm:  Số mgRhodaminB/100 gam mẫu trung bình : 7,9984 Độ lệch chuẩn (S) : 0,314328 Hệ số biến sai (CV/RSD) % : 3,929891 Đối chiếu theo AOAC ta thấy độ chụm hay RSD phương pháp đạt yêu cầu theo AOAC Nhận xét độ thu hồi: Theo bảng trên, ta thu độ thu H(%) đạt từ 89,9 đến 99% Đối chiếu với Độ thu hồi cho phép AOAC ta thấy H đạt yêu cầu Phụ lục BB ... bàn thành phố Hải Dương “ với mục tiêu: Thẩm định phương pháp xác định hàm lượng RhodaminB mẫu phân tích Ứng dụng quy trình xác định hàm lượng RhodaminB số loại thực phẩm thị trường thành phố Hải. .. chất thực dễ dàng Xuất phát từ vấn đề trên, tiến hành nghiên cứu đề tài ? ?Thẩm định phương pháp xác định hàm lượng RhodaminB phương pháp HPLC ứng dụng phân tích hố chất số loại thực phẩm địa bàn. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC HOÀNG THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG RHODAMINB BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VÀ ỨNG DỤNG PHÂN TÍCH HỐ CHẤT NÀY TRONG